专利名称：抗球虫微生物制剂及制作方法
技术领域：
本发明涉及一种抗球虫微生物制剂及制作方法，可通过调节家禽肠道内的微 生物平衡，使机体处于一个良性、健康的状态，从而提高了机体免疫力，有效地 减少了球虫病的发生率，属于农业生物制品技术领域。
技术背景目前，对球虫病的控制主要采用化学药物和生物免疫法，且以化学药物为主， 尽管抗球虫药为家禽业的快速增长提供了基础。然而，由于当前鸡对抗球虫药抗 药性的逐渐增强，迫使人们研究控制球虫病的新方法，如鸡抗球虫基因的选择和 用日粮调控减少球虫病等。而采用微生物技术对鸡球虫的防治，目前还未见报道。 发明内容本发明的目的是发明一种影响母猪的繁殖机能和状态，达到提髙排卵质量、 胚胎早期着床率和胚胎成活率等因素，从而显著提高了产活仔数的抗球虫微生 物制剂及制作方法。为实现以上目的，本发明的技术方案是提供一种抗球虫微生物制剂，其特征在于，由下述重量百分比的原料配制菌种培养液3-11、复合培养基5-18、 水70-91，所述的菌种培养液分别由枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌菌种的培养液 组成，其重量百分配比为地衣芽孢杆菌45-65、枯草芽孢杆菌35-55。所述的复合培养基为豆饼粉、蛋白胨、尿素、蛋白粉、酵母粉、玉米粉、玉 米淀粉、碳酸钠、磷酸镁、硫酸锰、无菌水中至少三种，其重量百分配比为豆 粕2-6、蛋白胨0-0.4、尿素0-1、酵母粉0-3、玉米浆0-1.5、玉米粉3-10、玉 米淀粉0-3、碳酸钠0-1、磷酸镁0-1、硫酸锰0-1、无菌水84.6-95。抗球虫微生物制剂的制作方法，其特征在于，采用的菌种均通过筛选优化而 来，同时采用复合深层液体发酵工艺，其步骤为第一步.将保存的地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌同时接入权力要求2所述的培养 基中，培养24小时以后对培养液进行划线分离，选育出培养基中透明圈
次，最后分别得到具有较强活力且能相互共生的地衣芽孢杆菌和枯草芽 孢杆菌菌种；第二步.将菌种分别转接入装有营养琼脂作培养基的茄子瓶中，在35—40'C温度 下培养30—50小时，然后放入2—6t:的冰箱中进行保存；第三步.将地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌按比例分别接种于发酵罐内经过蒸汽灭 菌的培养基中，搅拌转速为200r/min—240r/min,培养温度为35—40'C， 通气量l: 0.6，发酵时间为22-26小时；第四步.将地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的培养液按照地衣芽孢杆菌45-65%、 枯草芽孢杆菌35-55%的比例混合，然后按菌种培养液3-12%、复合培养 基6-18%、水70-91%比例放入搅拌机中，搅拌转速为200r/min—240 r/min,培养温度为35—40'C，通气量l: 0.6,发酵时间为24—30小时；第五步.将发酵液的温度冷却到25度,然后在发酵液中按0.12%的比例加入沉淀 剂，混合均匀后静置12小时；第六步.将发酵液通过转速为2800r/min—3200r/min的螺旋沉降离心机和转速为 6800r/min—7200r/min的碟式离心机进行分离，收集离出物，此过程重 复两次；第七步.将离出物按照l: 3.5的比例加入载体中，混合均匀后置入30—40度的培养箱内进行干燥培养，将水分控制在12%以内； 第八步.将干燥后的产物，粉碎后通过不锈钢振动筛分筛，即得到粉末状的抗球 虫微生物制剂成品。 所述的沉淀剂为壳聚糖；所述的载体由米糠粉、碳酸钙组成，其重量百分配 比为米糠粉3045、碳酸钙55-70。本发明的抗球虫饲料添加剂所采用的菌种为地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌等 菌种；根据最终代谢产物的特性，选用了专用培养基，并采用了深层液体复合发 酵工艺。在工艺过程中，培养基中的营养物质首先被其中的部分菌种所利用，然后通 过菌体代谢产生的酶对培养基中的部分有机物质进行分解，最后通过后期浓縮工 艺，得到目的产物。产品中最终包含了有益微生物、多种维生素、二级代谢抗生
物质及多种微量元素的金属衍生物。球虫是一种局部寄生的原虫，致病作用主要是对肠粘膜细胞和领近组织机械 破坏，球虫病不产生毒素，也不会在肠道以外的器官或组织产生原发性损伤。鸡 感染球虫病强弱与其感染的卵囊数量有着非常密切的关系，因为球虫病是一种自 限性疾病，如果没有新的感染，理论上一般24代裂殖生殖后，子代卵囊就会被 排除体外。研究表明，柔软嫩艾美耳球虫致病力最强，也是鸡最重要的球虫；其次是布 氏艾美耳球虫，有明显的致病力；巨型和堆型艾美耳球虫的致病力属轻度和中等, 其毒力的强弱取决于虫株。和缓艾美耳球虫致病力轻微，早熟艾美耳球虫基本没 有致病力。目前采用的抗生素主要包括两大类， 一种是聚醚类离子载体抗生素，比如盐 霉素、莫能菌素、拉沙霉素等，其特性是具有促进离子通过细胞膜的能力，使细 胞内外形成较大的渗透压差，水分大量进入，虫体细胞膨胀破裂而死；另一类是 化学合成的抗球虫药，包括磺胺类、酰胺类、吡啶类等药物，其防治机理有的在 于影响球虫发育过程，有的则影响球虫线粒体功能等。但经过多年来的实践表明， 所有的抗球虫药物在使用一段时间后，都会引起虫体的耐药性，甚至产生耐药的 虫株，最大的隐患是会导致药物在动物体内的残留，严重影啤了食品安全。在对于球虫的免疫学控制方面，由于鸡球虫引起的免疫反应具有虫种的特异 性，虫种之间无交叉免疫性，而且如果没有得到球虫的重复感染，鸡获得性免疫 维持时间会很短，这使得球虫病免疫预防的研究及虫疫苗生产和应用相当复杂和 困难，若要进行生产实践，仍然有大量的研究工作还要做。而本项目发明的新型抗球虫微生物制剂其作用方式和机理方面与普通的抗 球虫药截然不同，其不同于传统化学药物对病原体生理代谢的某一环节进行干扰 或阻断的作用方式，因而不会产生抗药性，更不会存在不良残留的隐患。用其防 治鸡球虫病，可充分发挥免疫激活作用，调节微生态平衡，提高机体非特异性抗 感染能力，达到了真正意义上的防、治兼备功效。所有的鸡球虫均寄生于鸡的肠道，每种球虫有较为严格的寄生部位和细胞特 异性，球虫只有在其特异性寄生部位才能生长发育，其致病力也是最强的，否则其致病性就会下降乃至消失。其特定的寄生部位主要取决于子孢子与肠道特定细 胞的分子识别和相互作用，裂殖生殖和配子生殖过程能否建立也主要取决于这种 作用。通过产品中有益微生物的作用，在鸡的肠道内形成良性的微生态环境，对 肠道内的球虫寄生部位有一定的保护作用，使球虫在肠道内的识别和寄生行为受 到影响，阻止其在肠道内的裂殖，在即使球虫进入体内时，也能降低受感染的机会o蛋白质是动物机体的主要结构物质，同时，它还是重要的功能物质和能源物 质。在鸡感染球虫病时，蛋白质和氨基酸的消化及利用效率均将下降。饲料中抗 营养因子，如酶抑制剂、单宁酸、植酸、棉酚、植物凝集素等，可导致鸡群对球 虫的易感性增强。这些物质易与肠壁粘膜结合，致肠壁损伤，妨碍蛋白质、维生 素等的吸收和利用，成为球虫病流行的可能诱发因素。而本发明的抗球虫微生物制剂可以消除饲料中的抗营养因子，促进营养物质 的消化吸收，并通过调节肠道内的微生物平衡，使机体处于一个良性、健康的状 态，提高了机体免疫力，有效地减少了球虫病的发生率。球虫卵囊的活力和致病力受许多环境因素的影响。环境中的温度、湿度以及 其中的微生态环境的变化都会影响到球虫卵囊的存活率。抗球虫微生物制剂还含有大量的生理活性物质，能有效促进各种环境中各种 有害有机物质的分解转化，乳酸菌群及酵母菌群等其他有益微生物群属在环境中 时，即与所到之处的良性微生物结合，迅速占据主导地位，协同作用、共生互利， 推动系统快速向良性生态发展。其可清除腐败、抑制病原菌、改善有机物的分解 途径，阻断其腐败发酵的过程。同时对于环境中的球虫卵囊也具有一定的分解作 用，可使球虫在机体外环境中的传播这一环节得到控制，防止了球虫在鸡只之间 的交叉污染。通过抗球虫微生物制剂的使用，可在鸡的内外环境中都形成一个良性的微生 态环境，使球虫的正常发育和繁殖受到抑制，同时通过产品对于肠道内壁的保护 和生理代谢产物的共同作用，以及提高肉鸡机体的免疫力，大幅度减小了球虫的 感染率，最终达到了防治球虫病的效果。本发明的优点是1. 通过使用，在肉鸡的内外环境中都形成一个良性的微生态环境，使 球虫的正常发育和繁殖受到抑制，同时通过产品对于肠道内壁的保 护和生理代谢产物的共同作用，以及提高肉鸡机体的免疫力，大幅 度减小了球虫的感染率，最终达到了防治球虫病的效果。2. 调节家禽肠道内的微生态平衡，提高机体免疫力，减少球虫卵囊在 肠道内壁的附着、定植几率。3. 显著提高家禽的存活率，促进其生长。4. 替代球虫防治中抗生素的使用，消除由于药物残留对禽产品的污染， 同时其还通过微生物在动物体内的分解转化作用，减轻畜禽排泄物 中的各种有害物质的含量，降低了养殖场对环境的污染，更有利于 畜禽粪便等废弃物的进一步资源化利用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细说明 实施例l抗球虫微生物制剂的制备方法采用的菌种均通过筛选优化而来，同时采用复 合深层液体发酵工艺，它包括下列步骤第一步.将保存的地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌同时接入复合培养基中，培养24 小时以后对培养液进行划线分离，选育出培养基中透明圈直径与菌落直 径的比值大于0.8的菌落进行保存，然后重复以上步骤3次，最后得到 具有较强活力且能相互共生的地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌菌种；第二步.将菌种转接入装有营养琼脂作培养基的茄子瓶中，在37'C温度下培养 48小时，然后放入4'C的冰箱中进行保存； 营养琼脂培养基牛肉裔3g、蛋白胨10g、 NaC15g、琼脂15—20g、水 1000ml、 pH7， 0-7.2。 12rC灭菌20min;第三步.将地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌分别接种于发酵罐内经过蒸汽灭菌的培 养基中，搅拌转速为220r/min,培养温度为37'C，通气量l: 0.6,发酵 时间为26小时；第四步.将地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的培养液按照地衣芽孢杆菌60%、枯草芽孢杆菌40%的比例混合，然后按菌种培养液7%、复合培养基9%、水84%的比例接种入经过蒸汽灭菌的培养基中，搅拌转速为220r/min，培养温度为37'C,通气量l: 0.6,发酵时间为30小时步骤1和步骤4的培养基按下述重量百分比配制豆粕3、蛋白胨O.l、尿素0.07、酵母粉1、玉米粉5、碳酸钠0.1、磷酸镁0.3、硫酸锰0.1、无菌水90.33。 第五步.将发酵液的温度冷却到25度，然后在发酵液中按0.12%比例加入壳聚糖，混合均匀后静置12小时； 第六步.将发酵液通过转速为2800r/min—3200r/min的螺旋沉降离心机和转速为6800r/min—7200r/min的碟式离心机进行分离，收集离出物，此过程重复两次；第七步.将离出物按照l: 3.5的比例加入载体中，混合均匀后置入40度低温培 养箱内进行干燥培养，将水分控制在12%以内； 载体由米糠粉、碳酸钙组成，按下列重量百分配比配制 米糠粉35、碳酸钙65;第八步.将干燥后的产物，粉碎后通过不锈钢振动筛分筛，即得到粉末状的抗球 虫微生物制剂成品。实施例2:第一步.将保存的地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌同时接入培养基中，培养24小 时以后对培养液进行划线分离，挑选出菌落特征明显、菌种活力强且生 长繁殖快的菌种进行保存，然后重复以上步骤3次，最后得到具有较强 活力且能相互共生的地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌菌种；第二步.将菌种分别转接入装有营养琼脂作培养基的茄子瓶中，在40C温度下培 养30小时，然后放入4'C的冰箱中进行保存； 营养琼脂培养基牛肉裔3g、蛋白胨10g、 NaC15g、琼脂15—20g、水 1000ml、 pH7.0-7.2。 121'C灭菌20min;第三步.将地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌分别接种于发酵罐内经过蒸汽灭菌的培 养基中，搅拌转速为240r/min,培养温度为40'C,通气量l: 0.6，发酵时间为22小时；第四步.将地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的培养液按照地衣芽孢杆菌50%、枯草 芽孢杆菌50%的比例混合，然后按菌种培养液10%、复合培养基12%、 水78%的比例接种入经过蒸汽灭菌的培养基中，搅拌转速为220r/min, 培养温度为40'C，通气量l: 0.6,发酵时间为24小时； 步骤1和步骤4的培养基按下述重量百分比配制 豆粕2.5、蛋白胨0.3、酵母粉1.5、玉米浆0.5、玉米粉3.5、玉米淀粉 1、碳酸钠0.2、磷酸镁0.06、硫酸锰0.1、无菌水卯.34;第五步.将发酵液的温度冷却到25度，然后在发酵液中按0.12%比例加入沉淀剂 -壳聚糖，混合均匀后静置12小时；第六步.将发酵液通过转速为2800r/min—3200r/min的螺旋沉降离心机和转速为 6800r/min—7200r/min的碟式离心机进行分离，收集离出物，此过程重 复两次；第七步.将离出物按照l: 3.5的比例加入载体中，混合均匀后置入40度培养箱 内进行干燥培养，将水分控制在12%以内； 载体由米糠粉、碳酸药组成，按下列重量百分配比 米糠粉40、碳酸钙60。 第八步.将干燥后的产物，粉碎后通过不锈钢振动筛分筛，即得到粉末状的抗球 虫微生物制剂成品。 使用方法将本产品按照0.2%的比例加入鸡饲料中，混合搅拌均匀即可。 一般在 前期添加，从鸡场进鸡后即开始添加饲喂，在28日龄后可以不添加。 使用效果1、 显著减小了球虫的感染率，最终达到了防治球虫病的效果。2、 调节家禽肠道内的微生态平衡，提高机体免疫力，减少球虫卵囊在肠道 内壁的附着、定植几率。3、 显著提高家禽的存活率，促进其生长。4、 替代球虫防治中抗生素的使用，消除由于药物残留对禽产品的污染。
权利要求
1. 一种抗球虫微生物制剂，其特征在于，由下述重量百分比的原料配制菌种培养液3-11、复合培养基5-18、水70-91，所述的菌种培养液分别由枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌菌种的培养液组成，其重量百分配比为地衣芽孢杆菌45-65、枯草芽孢杆菌35-55。
2. 根据权利要求1所述的抗球虫微生物制剂，其特征在于，所述的复合培养基 为豆饼粉、蛋白胨、尿素、蛋白粉、酵母粉、玉米粉、玉米淀粉、碳酸钠、 磷酸镁、硫酸锰、无菌水中至少三种，其重量百分配比为豆粕2-6、蛋白胨 0-0.4、尿素0-1、酵母粉0-3、玉米浆0-1.5、玉米粉3-10、玉米淀粉0-3、 碳酸钠0-1、磷酸镁0-1、硫酸锰0-1、无菌水84.6-95。
3. 根据权利要求1所述的抗球虫微生物制剂的制作方法，其特征在于，采用的 菌种均通过筛选优化而来，同时采用复合深层液体发酵工艺，其步骤为第一步.将保存的地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌同时接入权力要求2所述的培养 基中，培养24小时以后对培养液进行划线分离，选育出培养基中透明圈 直径与菌落直径的比值大于0.8的菌落进行保存，然后重复以上步骤2-3 次，最后分别得到具有较强活力且能相互共生的地衣芽孢杆菌和枯草芽 孢杆菌菌种；第二步.将菌种分别转接入装有营养琼脂作培养基的茄子瓶中，在35—40'C温度 下培养30—50小时，然后放入2—6r的冰箱中进行保存；第三步.将地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌按接种于发酵罐内经过蒸汽灭菌的培养 基中，搅拌转速为200r/min-240 r/min,培养温度为35—40'C，通气量 1: 0.6，发酵时间为22—26小时；第四步.将地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的培养液按照地衣芽孢杆菌45-65%、 枯草芽孢杆菌35-55%的比例混合，然后按菌种培养液3-12%、复合培养 基6-18%、水70-91%比例放入搅拌机中，搅拌转速为200r/min—240 r/min,培养温度为35—4(TC,通气量l: 0.6,发酵时间为24—30小时；第五步.将发酵液的温度冷却到25度，然后在发酵液中按0.12%的比例加入沉淀剂，混合均匀后静置12小时；第六步.将发酵液通过转速为2800r/min—3200r/min的螺旋沉降离心机和转速为 6800r/min—7200r/min的碟式离心机进行分离，收集离出物，此过程重 复两次；第七步.将离出物按照l: 3.5的比例加入载体中，混合均匀后置入30—40度的培养箱内进行干燥培养，将水分控制在12%以内； 第八步.将千燥后的产物，粉碎后通过不锈钢振动筛分筛，即得到粉末状的抗球 虫微生物制剂成品。
4. 根据权利要求3所述的抗球虫微生物制剂的制作方法，其特征在于，所述的 沉淀剂为壳聚糖。
5. 根据权利要求3所述的抗球虫微生物制剂的制作方法，其特征在于，所述的 载体由米糠粉、碳酸钙组成，其重量百分配比为米糠粉3045、碳酸钙 55-70。
全文摘要
本发明涉及一种抗球虫微生物制剂及制作方法，该产品对地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌进行复合培养发酵，加入生物沉淀剂对发酵液进行沉淀，然后进行高速离心，再将离出物与碳酸钙、米糠等载体在高速混合制粒机内混合制粒，最后经沸腾干燥机进行低温快速干燥，过筛后即得到颗粒状成品；本发明采用的深层液体发酵方法使发酵液中的活性代谢产物含量最大化，同时通过絮凝和离心工艺，使产品中含有大量的微生物和丰富的活性生理代谢物质。这些物质可通过调节肠道内的微生物平衡，使机体处于一个良性、健康的状态，提高了机体免疫力，有效地减少了球虫病的发生，显著促进动物的生长。
文档编号A61P33/02GK101120952SQ20061002987
公开日2008年2月13日 申请日期2006年8月10日 优先权日2006年8月10日
发明者瀚 江 申请人:上海创博生态工程有限公司