专利名称：西藏胡黄连在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及西藏胡黄连的新用途，特别涉及西藏胡黄连在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用。
背景技术：
在我国，动脉粥样硬化的人群日益增多，已成为最为常见的疾病。因此，加强上述疾病的防治是我国乃至全球性亟待解决的问题。但是，迄今为止，尚缺乏有效的针对上述疾病的防治手段和药物。
胡黄连是原产于印度的一种玄参科植物，其根茎可入药。作为中药材始见于《唐本草》，具有清热凉血、燥湿消疳作用，用于小儿惊痫、疳积、泻痢、骨蒸痨热、自汗、盗汗、吐血等症。在20世纪70年代以前，我国的胡黄连一直依赖进口主产于印度的胡黄连(Picrorhiza kurrooa Royle ex Benth)。1965年在西藏东南部及云南西北部发现了与印度胡黄连同属植物，其生药形态、组织及性味等方面与前者非常相似，可以代替印度胡黄连用药，命名为西藏胡黄连(Picrorhiza scrophulariifora Pennell)。目前《中国药典》收载的胡黄连即西藏胡黄连。国内关于西藏胡黄连的研究报道以及专利文献均集中于其保肝作用、抗糖尿病活性等，未有对该中药在动脉粥样硬化方面的用途进行研究。
发明内容
本发明的目的在于提供西藏胡黄连在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用，开辟了西藏胡黄连作为中药的一种新用途，也为动脉粥样硬化的治疗提供了一种新的途径。
本发明所述的西藏胡黄连的新应用，是将西藏胡黄连作为原料药用于制备治疗动脉粥样硬化的药物。主要采用西藏胡黄连的根茎，也可采用西藏胡黄连植物的其他有效部位。
优选的是采用西藏胡黄连的根茎的醇提取物。或者采用其他有机溶剂提取，具有类似的药效。
优选的生产方法是将西藏胡黄连的根茎风干后粉碎成颗粒状粉末，浸泡于50-95％乙醇或甲醇中，室温过夜提纯，过滤，蒸馏，经冷冻干燥制成西藏胡黄连提取物。
所述西藏胡黄提取物的密度范围为1.0005～1.0269g/ml。
本发明将西藏胡黄连用于制备治疗动脉粥样硬化药物时，药物的剂型为药剂学上允许的口服剂型。具体是将西藏胡黄连提取物经过常规生产工艺，添加常规的口服剂型的辅料，制成片剂、胶囊、颗粒剂、散剂、口服液等各种剂型。使用方法成人0.5～2g(以原料计)，2～3次/日，口服。儿童减半。
本发明所述的西藏胡黄连还可以与目前已知的其他治疗动脉粥样硬化的药，如他汀类调脂药等制成复方制剂，用于治疗动脉粥样硬化。
本发明通过各种动物模型及实验证明，西藏胡黄连对动脉粥样硬化具有确切的疗效。由于西藏胡黄连来源方便、广泛，提取物的制备方法简单，不需要贵重仪器设备和试剂，因此本发明提供了一种简便、价廉、高效的治疗动脉粥样硬化的药物。
具体实施例方式
实施例一西藏胡黄连提取物的制备本发明所述的西藏胡黄连提取物是通过以下方法制备的取西藏胡黄连(生药)的根茎，风干后机械粉碎成颗粒状粉末(颗粒大小适中，约20mm3左右)。350g原料浸泡于50-95％乙醇2000ml中，渗漉过夜提纯，负压过滤，蒸馏至少两次，最后经冷冻干燥制成胡黄连提取物醇提取物，密闭干燥保存。1g醇提取物相当于3.5g生药。提取物的密度范围为1.0005～1.0269g/ml。浸泡提取过程中所采用的有机溶剂也可采用其他醇类，如甲醇等。
实施例二西藏胡黄连提取物对新西兰白兔动脉粥样硬化的治疗作用1.1体外制备AGE(晚期糖基化终产物)及AOPP(晚期蛋白质氧化产物)修饰的兔血清白蛋白高纯度无内毒素兔血清白蛋白(RSA)由美国Sigma公司提供。无内毒素蒸馏水由美国Endos公司提供。实验中所有玻璃器皿均经250℃烘烤4小时处理。按文献方法(ou FF，Chertow GM，Kay J，et al.Interaction between bet 2-micreoglobulin and advancedglycation end products in the development of dialysis related-amyloidosis.Kidney Int，1997，51(5)1541-9)，用葡萄糖孵育法制备AGE修饰的兔血清白蛋白(AGE-RSA)。简言之，1.75mg/ml RSA同100mmol/L D-葡萄糖、400mmol/L磷酸缓冲液在37℃孵育8周，以经过同样处理但未加葡萄糖孵育的RSA作为对照。按文献方法(Witko-Sarsat V，Friedlander M，Nguyen Khoa T，et al.Advanced oxidation protein products as novelmarker of oxidative stress in uremia.Kidney Int，1996，49(5)1304-13)制备AOPP修饰的兔血清白蛋白(AOPP-RSA)。简言之，将RSA与次氯酸(HOCl)按照1∶60(摩尔比)混合，室温孵育30min，用PBS缓冲液，4℃透析过夜，以碘试法检测直至透析液中无HOCl。体外制备的AGE-RSA经荧光分光光度法鉴定，AGE含量为85.2U/mg蛋白质。对照样本AGE含量不超过0.9U/mg蛋白质。所有样品均经TCL试剂盒(Endos公司，美国)检测，其内毒素含量均低于0.25EU/ml。
1.2动物模型70只12周龄雄性新西兰白兔(南方医科大学实验动物中心提供)在恒温清洁环境饲养，经一周饲养后随机分为7组。分别为①注射AGE组，用含0.5％(质量分数)胆固醇(Yakult公司，日本)饲料喂饲，经耳缘静脉注射AGE修饰的RSA(5mg/kg，1次/隔日)；②注射AOPP组，饲养方法同上，经耳缘静脉注射AOPP修饰的RSA(5mg/kg，1次/隔日)；③注射正常RSA组，饲养方法同上，经耳缘静脉注射正常RSA(5mg/kg，1次/隔日)；④AGE+西藏胡黄连提取物组，处理与①同，并予灌服西藏胡黄连提取物(40mg/kg，1次/隔日)；⑤AOPP+西藏胡黄连提取物组，处理与②同，并予灌服西藏胡黄连提取物(40mg/kg，1次/隔日)；⑥cho+西藏胡黄连提取物组，处理与③同，并予灌服西藏胡黄连提取物(40mg/kg，1次/隔日)；⑦正常饲料对照组(normal组)，用普通饲料喂养。于10周时处死，采血，分离血清贮存于-70℃冰箱以备各血清学指标检测；分离主动脉全段，4％(体积分数)甲醛(pH7.4)固定。
1.3动脉粥样硬化斑块相对面积测定将主动脉以苏丹IV染色，在PHOTOSHOP软件下以“魔棒”工具选择红色的粥样斑块，利用“容差”进行调节直至恰好所有的红色斑块区域都被选中，计算粥样斑块的面积。再以类似方法计算内膜总面积。粥样斑块大小以相对面积(粥样斑块的面积/内膜总面积)表示。
1.4血清指标检测用Olympus NU800自动生化分析仪检测血清总胆固醇、甘油三酯水平；ELISA法检测血清氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平，荧光比色法检测硫代巴比妥酸反应物质(TBARS)，按文献方法(Flohe L，Gunzler WAAssays ofglutathione peroxidase.Methods Enzymol.1984，105114-120)检测血浆谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)活性。
1.5组织学和免疫组织化学检测动脉组织标本用10％甲醛溶液固定，石蜡包埋，连续切片，常规脱蜡、脱水。部分切片行油红染色，其余切片行免疫组化学检测，第一抗体分别为抗Ox-LDL单克隆抗体，抗巨嗜细胞单克隆抗体RAM-11，抗平滑肌α-actin单克隆抗体(均购自丹麦DAKO公司)。用Evision试剂盒(丹麦DAKO公司)检测ox-LDL、巨嗜细胞和平滑肌细胞，苏木素复染，脱水，封片。Macintosh图像分析系统(Adobe Photoshop 5.10)测定ox-LDL面积，结果以μm2表示，采用目镜网格测微尺计数RAM-11和α-actin阳性细胞数目，结果以个/0.01mm2表示。
2结果如下表 结果显示(1)所有高胆固醇饲料喂饲的动物，其主动脉内膜均可见明显的动脉粥样硬化斑块形成，斑块中ox-LDL沉积，斑块周围区域巨嗜细胞和平滑肌细胞明显增多；血清中胆固醇、ox-LDL(氧化型低密度脂蛋白)、MDA(丙二醛)和TNF-α水平明显增高，SeGSHPx(硒谷胱甘肽过氧化物酶)降低。
(2)静脉注射AGE或AOPP修饰的RSA可显著增强上述病理和血清学改变。
(3)灌服西藏胡黄连提取物的④、⑤、⑥三组动物分别与接受同样处理但未灌服西藏胡黄连提取物的①、②、③三组比较，其主动脉壁上粥样斑块的相对面积、斑块中ox-LDL沉积、斑块周围炎症细胞浸润和平滑肌细胞迁移及血清中胆固醇、ox-LDL、MDA和TNF-α水平均明显降低，而SeGSHPx增高。
结论西藏胡黄连提取物可显著缓解高胆固醇和糖化氧化蛋白产物所致的动脉粥样硬化，其机制可能同西藏胡黄连提取物抗氧化、抗炎、降胆固醇作用相关。以上结果提示西藏胡黄连可能对动脉粥样硬化具有防治作用。
实施例三以西藏胡黄连配制的口服剂型本发明所述的西藏胡黄连可以配制成片剂、胶囊、颗粒剂、散剂、口服液等口服剂型。
(一)制成片剂将西藏胡黄连经醇提后的提取物，加入适量润滑剂制成软材，用10目筛制粒，干燥，干粒加入硬脂酸镁，混匀，压片机压片成片剂，薄膜包衣，分装，即得包衣片剂。
(二)制成胶囊剂将西藏胡黄连经醇提后的提取物，喷雾干燥制成粉末，过100-120目左右筛，与辅料混合均匀，装胶囊，分装，即得胶囊剂。
(三)制成颗粒剂将西藏胡黄连经醇提后的提取物，加入赋形剂，制粒，干燥，过8-10目筛，分装，制成颗粒剂。
(四)制成散剂将西藏胡黄连粉碎，加入适量赋形剂后混匀，分装，制成散剂。
(五)制成口服液将西藏胡黄连经醇提后的提取物，加水溶解，加入矫味剂，加水调节容量，制成口服液。
(六)使用方法成人0.5～2g(以原料计)，2～3次/日，口服。儿童减半。
权利要求
1.西藏胡黄连在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于采用西藏胡黄连的根茎的醇提取物。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于采用将西藏胡黄连的根茎风干后粉碎成颗粒状粉末，浸泡于50-95％乙醇或甲醇中，室温过夜提纯，过滤，蒸馏，经冷冻干燥制成的西藏胡黄连提取物。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于所述西藏胡黄连提取物的密度范围为1.0005～1.0269g/ml。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于药物的剂型为药剂学上允许的口服剂型。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于所述的口服剂型包括片剂、胶囊、颗粒剂、口服液、散剂。
7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于采用西藏胡黄连与其他治疗动脉粥样硬化的药制成复方制剂。
全文摘要
本发明涉及西藏胡黄连的新用途，具体是西藏胡黄连在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用。采用西藏胡黄连的根茎的醇提取物。药物的剂型为药剂学上允许的口服剂型。本发明通过各种动物模型及实验证明，西藏胡黄连对动脉粥样硬化具有确切的疗效。由于西藏胡黄连来源方便、广泛，提取物的制备方法简单，不需要贵重仪器设备和试剂，因此本发明提供了一种简便、价廉、高效的治疗动脉粥样硬化的药物。
文档编号A61P9/00GK1927305SQ20061003718
公开日2007年3月14日 申请日期2006年8月24日 优先权日2006年8月24日
发明者刘尚喜, 侯凡凡, 梁敏 申请人:南方医科大学