专利名称：一种抗辐射蕨麻多糖的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种天然多糖的制备方法，尤其是涉及一种抗辐射蕨麻多糖的制备方法。
背景技术：
辐射是指能量以电磁波形式由发射源发射到空间的现象，或解释为能量以电磁波形式在空间传播，电磁辐射由电磁发射引起的。辐射的来源有天然辐射和人工辐射。天然辐射是指辐射来自于地球的热辐射、太阳热辐射、宇宙射线、雷电等发出的射线。人工辐射是指辐射来自于广播、电视、雷达、通信基站及电磁能等在工业、科学、医疗和生活中的应用设备发出的射线队。现在发达的现代化城市中，越来越多的射线在辐射着人类，由于辐射引起的疾病也在不断地增长，严重危害着人体的健康。放射性物质可通过呼吸吸入，皮肤伤口及消化道吸收进入体内，引起内辐射，辐射可穿透一定距离被机体吸收，使人员受到外照射伤害。内外照射形成放射病的症状有疲劳、头昏、失眠、皮肤发红、溃疡、出血、脱发、白血病、呕吐、腹泻等。有时还会增加癌症、畸变、遗传性病变发生率，影响几代人的健康。一般来说，身体接受的辐射能量越多，其放射病症状越严重，致癌、致畸风险越大。
在我国的中药宝库中，蕨麻具有益胃，生津，止渴，益气补血，滋阴养肾，提高免疫力，抗疲劳，耐缺氧和止泻的作用。能治肿瘤，病后贫血，营养不良，肾虚气亏等症。
根据蕨麻的特性和入药所具有的功能，制备的一种天然的、能显著增强动物抗辐射能力的多糖成为有益选择。
现在人们通常使用的提取蕨麻多糖的方法是用水和/或乙醇提取蕨麻多糖，但按现有的方法，其收率低、工艺复杂。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种收率高、工艺简单的抗辐射蕨麻多糖制备方法。该方法以蕨麻为原料，经过提取、脱蛋白、分离等步骤，制得一种天然、能显著增强动物抗辐射能力的多糖。
为解决上述技术问题，本发明一种抗辐射蕨麻多糖的制备方法包括以下步骤1)将蕨麻粉碎后过30～50目筛，加入到95％乙醇中，所述蕨麻与95％乙醇的配比关系是1千克蕨麻加入到8～15升95％乙醇中；在75～85℃下搅拌提取2～4小时，进行脱脂；过滤，将残渣在70～90℃烘干得脱脂的蕨麻粉末；将已脱脂的蕨麻，在80～100℃温度下，加入到4～5倍体积的水中水浴提取2～4小时，重复2～4次，合并提取液；在转速为2000～4000转/分的条件下，离心8～15分钟，留取上清液，得到物质A；2)在温度为70～80℃，压力0.06～0.1MPa的条件下，将物质A置于旋转蒸发仪中减压浓缩至原体积的1/4～1/2；在转速3500～4500转/分的条件下，离心2～5分钟；在得到的上清液中加入3～5倍体积的无水乙醇，放置5～7小时；然后在转速3500～4500转/分的条件下，离心4～6分钟，弃去上清液，留取沉淀物，得到物质B；3)将物质B加入到12～20倍重量的水中溶解，在转速3000～5000转/分的条件下，离心2～4分钟，弃去不溶物；所得上清液中加入3～5倍体积的无水乙醇，放置5～7小时；在转速3500～4500转/分的条件下，离心4～6分钟，弃去上清液，留取沉淀物，重复本步骤的过程，直至沉淀物中检测不出淀粉为止；在温度为30～50℃，压力0.06～0.1MPa的条件下，将沉淀物真空干燥，制得物质C；经过1、2、3步骤后物质C得率可达13.67％；4)将物质C加入到7～10倍重量的水中溶解，在溶解液中加入木瓜蛋白酶进行脱蛋白；所述物质C溶解液与木瓜蛋白酶的配比关系是100毫升物质C溶解液中加入5～7个活力单位木瓜蛋白酶；在45～55℃，放置8～15小时，离心除去部分蛋白；用体积比为4∶1的氯仿与正丁醇混合液萃取上清液，所述上清液与萃取液的体积比为3～5∶1，脱去残留蛋白，收集水层溶液，得到物质D；5)在60℃的条件下，物质D中加入20％的H2O2，所述物质D与H2O2体积比为80～130∶1，振荡脱色，至溶液颜色为乳白色为止，得到物质E；6)将物质E放入透析袋中透析30～40小时，所述透析袋截留分子量超过12000的分子；往透析袋中加入乙醇使乙醇体积含量达到75～85％，静置8～12小时，在3000～5000转/分转速下，离心4～6分钟，收集沉淀；35～45℃真空干燥得纯天然蕨麻多糖。
用苯酚一硫酸法测定蕨麻多糖含量，经过步骤1～6后蕨麻多糖收率可达6.32％。
使用不同浓度乙醇沉淀的多糖，在20℃时具有不同的旋光度，表明该多糖非均一组分。
蕨麻多糖抗辐射实验如下机体受到辐射后，射线作用于骨髓造血干细胞，使骨髓幼稚造血细胞受损，细胞增殖功能受到抑制。白细胞会明显下降。因此，白细胞是反映辐射损伤的经典指标。本次实验结果表明经X-射线直线加速器照射后，多糖实验组除高剂量外，中、低剂量组的白细胞明显高于辐射对照组，同时从一定程度上抑制了辐射损伤引起的体重的下降。促进了机体的生长发育。
实验用小白鼠小鼠适应喂养7天后，随机分组，每组8只，分别为正常对照组，辐射对照组，多糖组(高，中，低三个剂量)和多糖对照组。正常对照组和辐射对照组以蒸馏水灌胃，多糖组和多糖对照组以蕨麻多糖灌胃，均为中午灌胃，每日一次，每次0.5ml，低、中、高剂量分别为50、100和200mg/kg。各组连续灌胃7天后，进行x-射线直线加速器照射(正常对照组和多糖对照组不辐射)，总吸收量为3.0Gy，照射距离为98cm，剂量率为1.0Gy/min，照射后继续灌胃5天，辐射后第2天灌胃后1小时后剪尾尖采血20微毫升左右，用白细胞稀释液稀释后，放置血细胞计数器上，测定白细胞数目。蕨麻多糖对辐射小鼠外周血白细胞数目的影响。见下表蕨麻多糖对辐射小鼠外周血白细胞数目的影响
由实验结果可以看出，小鼠辐射后第2天白细胞严重受损(表1)，数量急剧下降，辐射对照组照后第2天外周血白细胞数量下降为正常对照组的20.8％。蕨麻多糖高、中、低3个剂量的白细胞数目也有所下降，除高剂量组外，中、低剂量组均高于辐射对照组，其中中剂量组的效果最为明显。(表3)中剂量组小鼠的白细胞较辐射对照组升高了18.9％。低剂量组较辐射对照组白细胞数升高了10.8％。表明蕨麻多糖对辐射引发的白细胞数目减少有防护作用。
体重变化高、中、低剂量三个组的小鼠体重在辐射后第5天明显下降，但下降程度均低于辐射对照组(高、中、低多糖组小鼠体重下降百分比分别为5.51％、7.31％、2.29％，辐射对照组小鼠体重下降百分比为8.14％)。在第7天小鼠的体重有所回升。(高、中、低多糖组小鼠第7天体重比第5天小鼠体重回升百分比分别为4％、1.97％、5.84％。辐射对照组小鼠体重回升百分比为4.1％)。实验结果表明，蕨麻多糖从一定程度上抑制了辐射损伤引起的体重的下降，并能促进机体的生长发育。实验结果见下表蕨麻多糖对小鼠体重的影响
本发明的特点是本发明在国内外众多的抗辐射制剂中，另辟蹊径，以蕨麻为原料，经过提取、脱蛋白、分离等制备的一种天然、能显著增强动物抗辐射能力的多糖，与其它抗辐射制剂相比抗辐射效果好、无毒副作用。
其次，原料充足，本制备方法提高了蕨麻的附加值，为蕨麻商业化动作开拓了一条新的渠道。
本发明具有收率高、工艺简单等优点。
图1为蕨麻多糖对小鼠外周血白细胞的影响；其中，横坐标为时间(天)；纵坐标为白细胞数目；A为正常对照组，B为高剂量多糖组，C为中剂量多糖组，D为低剂量多糖组，E为辐射对照组。
图2为各组外周血白细胞数目的变化的比较；
其中，横坐标为组别1为正常对照组，2为高剂量多糖组，3为中剂量多糖组，4为低剂量多糖组，5为辐射对照组；每个组中从左至右的三个长方体分别代表辐射后第2天；辐射后第5天；辐射后第7天；纵坐标为白细胞数目。
图3为蕨麻多糖对小鼠体重的影响；其中，横坐标为时间，a为辐射前，b为辐射后第5天，c为辐射后第7天。；纵坐标为体重(克)。
具体实施例方式
实施例1本发明一种抗辐射蕨麻多糖的制备方法包括以下步骤1)将蕨麻粉碎后过30目筛，加入到95％乙醇中，所述蕨麻与95％乙醇的配比关系是1千克蕨麻加入到8升95％乙醇中；在75℃下搅拌提取2小时，进行脱脂；过滤，将残渣在70℃烘干得脱脂的蕨麻粉末；将已脱脂的蕨麻，在80℃温度下，加入到4倍体积的水中水浴提取2小时，重复2次，合并提取液；在转速为2000转/分的条件下，离心8分钟，留取上清液，得到物质A；2)在温度为70℃，压力0.06MPa的条件下，将物质A置于旋转蒸发仪中减压浓缩至原体积的1/4；在转速3500转/分的条件下，离心2分钟；在得到的上清液中加入3倍体积的无水乙醇，放置5小时；然后在转速3500转/分的条件下，离心4分钟，弃去上清液，留取沉淀物，得到物质B；3)将物质B加入到12倍重量的水中溶解，在转速3000转/分的条件下，离心2分钟，弃去不溶物；所得上清液中加入3倍体积的无水乙醇，放置5小时；在转速3500转/分的条件下，离心4分钟，弃去上清液，留取沉淀物，重复本步骤的过程，直至沉淀物中检测不出淀粉为止；在温度为30℃，压力0.06MPa的条件下，将沉淀物真空干燥，制得物质C；4)将物质C加入到7倍重量的水中溶解，在溶解液中加入木瓜蛋白酶进行脱蛋白；所述物质C溶解液与木瓜蛋白酶的配比关系是100毫升物质C溶解液中加入5个活力单位木瓜蛋白酶；在45℃的条件下，放置8小时，离心除去部分蛋白；用体积比为4∶1的氯仿与正丁醇混合液萃取上清液，所述上清液与萃取液的体积比为3∶1，脱去残留蛋白，收集水层溶液，得到物质D；5)在60℃的条件下，物质D中加入20％的H2O2，所述物质D与H2O2体积比为80∶1，振荡脱色，至溶液颜色为乳白色为止，得到物质E；6)将物质E放入透析袋中透析30小时，所述透析袋截留分子量超过12000的分子；往透析袋中加入乙醇使乙醇体积含量达到75％，静置8小时，在3000转/分转速下，离心4分钟，收集沉淀；35℃真空干燥得纯天然蕨麻多糖。
实施例2本发明一种抗辐射蕨麻多糖的制备方法包括以下步骤1)将蕨麻粉碎后过50目筛，加入到95％乙醇中，所述蕨麻与95％乙醇的配比关系是1千克蕨麻加入到15升95％乙醇中；在85℃下搅拌提取4小时，进行脱脂；过滤，将残渣在90℃烘干得脱脂的蕨麻粉末；将已脱脂的蕨麻，在100℃温度下，加入到5倍体积的水中水浴提取4小时，重复4次，合并提取液；在转速为4000转/分的条件下，离心15分钟，留取上清液，得到物质A；2)在温度为80℃，压力0.1MPa的条件下，将物质A置于旋转蒸发仪中减压浓缩至原体积的1/2；在转速4500转/分的条件下，离心5分钟；在得到的上清液中加入5倍体积的无水乙醇，放置7小时；然后在转速4500转/分的条件下，离心6分钟，弃去上清液，留取沉淀物，得到物质B；
3)将物质B加入到20倍重量的水中溶解，在转速5000转/分的条件下，离心4分钟，弃去不溶物；所得上清液中加入5倍体积的无水乙醇，放置7小时；在转速4500转/分的条件下，离心6分钟，弃去上清液，留取沉淀物，重复本步骤的过程，直至沉淀物中检测不出淀粉为止；在温度为50℃，压力0.1MPa的条件下，将沉淀物真空干燥，制得物质C；4)将物质C加入到10倍重量的水中溶解，在溶解液中加入木瓜蛋白酶进行脱蛋白；所述物质C溶解液与木瓜蛋白酶的配比关系是100毫升物质C溶解液中加入7个活力单位木瓜蛋白酶；在55℃，放置15小时，离心除去部分蛋白；用体积比为4∶1的氯仿与正丁醇混合液萃取上清液，所述上清液与萃取液的体积比为5∶1，脱去残留蛋白，收集水层溶液，得到物质D；5)在60℃的条件下，物质D中加入20％的H2O2，所述物质D与H2O2体积比为130∶1，振荡脱色，至溶液颜色为乳白色为止，得到物质E；6)将物质E放入透析袋中透析40小时，所述透析袋截留分子量超过12000的分子；往透析袋中加入乙醇使乙醇体积含量达到85％，静置12小时，在5000转/分转速下，离心6分钟，收集沉淀；45℃真空干燥得纯天然蕨麻多糖。
实施例3本发明一种抗辐射蕨麻多糖的制备方法包括以下步骤1)将蕨麻粉碎后过40目筛，加入到95％乙醇中，所述蕨麻与95％乙醇的配比关系是1千克蕨麻加入到10升95％乙醇中；在80℃下搅拌提取3小时，进行脱脂；过滤，将残渣在80℃烘干得脱脂的蕨麻粉末；将已脱脂的蕨麻，在90℃温度下，加入到4.5倍体积的水中水浴提取3小时，重复3次，合并提取液；在转速为3000转/分的条件下，离心10分钟，留取上清液，得到物质A；2)在温度为75℃，压力0.08MPa的条件下，将物质A置于旋转蒸发仪中减压浓缩至原体积的1/3；在转速4000转/分的条件下，离心3.5分钟；在得到的上清液中加入4倍体积的无水乙醇，放置6小时；然后在转速4000转/分的条件下，离心5分钟，弃去上清液，留取沉淀物，得到物质B；3)将物质B加入到15倍重量的水中溶解，在转速4000转/分的条件下，离心3分钟，弃去不溶物；所得上清液中加入4倍体积的无水乙醇，放置6小时；在转速4000转/分的条件下，离心5分钟，弃去上清液，留取沉淀物，重复本步骤的过程，直至沉淀物中检测不出淀粉为止；在温度为40℃，压力0.08MPa的条件下，将沉淀物真空干燥，制得物质C；4)将物质C加入到8.5倍重量的水中溶解，在溶解液中加入木瓜蛋白酶进行脱蛋白；所述物质C溶解液与木瓜蛋白酶的配比关系是100毫升物质C溶解液中加入6个活力单位木瓜蛋白酶；在50℃，放置10小时，离心除去部分蛋白；用体积比为4∶1的氯仿与正丁醇混合液萃取上清液，所述上清液与萃取液的体积比为4∶1，脱去残留蛋白，收集水层溶液，得到物质D；5)在60℃的条件下，物质D中加入20％的H2O2，所述物质D与H2O2体积比为100∶1，振荡脱色，至溶液颜色为乳白色为止，得到物质E；6)将物质E放入透析袋中透析36小时，所述透析袋截留分子量超过12000的分子；往透析袋中加入乙醇使乙醇体积含量达到80％，静置10小时，在4000转/分转速下，离心5分钟，收集沉淀；40℃真空干燥得纯天然蕨麻多糖。
用苯酚-硫酸法测定蕨麻多糖含量，经过步骤1～6后蕨麻多糖收率可达6.32％。
权利要求
1.一种抗辐射蕨麻多糖的制备方法，其特征在于包括如下步骤1)将蕨麻粉碎后过30～50目筛，加入到95％乙醇中，所述蕨麻与95％乙醇的配比关系是1千克蕨麻加入到8～15升95％乙醇中；在75～85℃下搅拌提取2～4小时，进行脱脂；过滤，将残渣在70～90℃烘干得脱脂的蕨麻粉末；将已脱脂的蕨麻，在80～100℃温度下，加入到4～5倍体积的水中水浴提取2～4小时，重复2～4次，合并提取液；在转速为2000～4000转/分的条件下，离心8～15分钟，留取上清液，得到物质A；2)在温度为70～80℃，压力0.06～0.1MPa的条件下，将物质A置于旋转蒸发仪中减压浓缩至原体积的1/4～1/2；在转速3500～4500转/分的条件下，离心2～5分钟；在得到的上清液中加入3～5倍体积的无水乙醇，放置5～7小时；然后在转速3500～4500转/分的条件下，离心4～6分钟，弃去上清液，留取沉淀物，得到物质B；3)将物质B加入到12～20倍重量的水中溶解，在转速3000～5000转/分的条件下，离心2～4分钟，弃去不溶物；所得上清液中加入3～5倍体积的无水乙醇，放置5～7小时；在转速3500～4500转/分的条件下，离心4～6分钟，弃去上清液，留取沉淀物，重复本步骤的过程，直至沉淀物中检测不出淀粉为止；在温度为30～50℃，压力0.06～0.1MPa的条件下，将沉淀物真空干燥，制得物质C；经过1、2、3步骤后物质C得率可达13.67％；4)将物质C加入到7～10倍重量的水中溶解，在溶解液中加入木瓜蛋白酶进行脱蛋白；所述物质C溶解液与木瓜蛋白酶的配比关系是100毫升物质C溶解液中加入5～7个活力单位木瓜蛋白酶；在45～55℃，放置8～15小时，离心除去部分蛋白；用体积比为4∶1的氯仿与正丁醇混合液萃取上清液，所述上清液与萃取液的体积比为3～5∶1，脱去残留蛋白，收集水层溶液，得到物质D；5)在60℃的条件下，物质D中加入20％的H2O2，所述物质D与H2O2体积比为80～130∶1，振荡脱色，至溶液颜色为乳白色为止，得到物质E；6)将物质E放入透析袋中透析30～40小时，所述透析袋截留分子量超过12000的分子；往透析袋中加入乙醇使乙醇体积含量达到75～85％，静置8～12小时，在3000～5000转/分转速下，离心4～6分钟，收集沉淀；35～45℃真空干燥，得纯天然蕨麻多糖。
全文摘要
一种抗辐射蕨麻多糖的制备方法，该方法以蕨麻为原料，经过提取、脱蛋白、分离等步骤，制得一种天然、能显著增强动物抗辐射能力的多糖；本发明具有收率高、工艺简单等优点。
文档编号A61K31/715GK1872883SQ20061009009
公开日2006年12月6日 申请日期2006年6月27日 优先权日2006年6月27日
发明者王君义, 魏婕, 吴依茜, 罗恩, 丁学义, 王莹, 张继, 侯天德, 程昉 申请人:西北师范大学