专利名称：：积雪草苷在抗肺纤维化方面的新应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及积雪草苷的药物用途，特别涉及一种积雪草苷在抗肺纤维化方面的新应用、即在制备抗放射性肺纤维化的药物中的应用。
背景技术：
：肺纤维化是一类临床上现通常称为间质性肺病或肺间质性肺病共有的一种最终的严重病理特征。间质性肺病可包括原发于肺的、伴随系统性风湿病发生的、药物或放射等治疗引起的、伴随环境或职业发生的、伴随肺血管发生的、肺泡淤积性疾病和遗传性疾病等七大类。不同病因引起肺纤维化的具体机理尚不清楚，其具有共同的特性是起先由各种原因所致的炎症损伤正常的肺泡结构，即产生肺泡炎；代之以胶原疤痕组织累积修复该损伤，即产生纤维化而使肺组织逐渐丧失正常呼吸功能，产生呼吸困难、缺氧等临床症状，最终至呼吸衰竭。目前认为，肺泡炎可能自限或经治疗而好转或痊愈，但组织纤维化却无法逆转，甚至继续发展。故而延缓或阻止纤维化的发展，是治疗肺纤维化的重点。然而，由于肺纤维化是个复杂的病理过程，不同病因所致的肺纤维化的发病机理也可能有差异，从而治疗也可能存在不同。目前临床上使用糖皮质激素、免疫抑制剂等对一些病因引起的肺间质性疾病治疗有一定的效果，但主要针对急性肺泡炎期，而对于慢性期、特别是纤维增生期则疗效不明显，且这些药物副作用大，不宜长时期用药。而对于药物或放射线治疗引起的肺纤维化，现通常认为应及时停止相应治疗，如发展至纤维化则难以逆转。另一方面，近年来，由于肺癌、食道癌等胸部肿瘤发病率较高，诸如钴60(Co6Q)、电子束等放射治疗是这些肿瘤疾病的重要治疗手段。然而，放射线可以引起放射性肺炎，乃至肺纤维化。因此大大制约了肺癌、食道癌等的放射治疗剂量及疗程，影响了抗肿瘤效果；而一旦出现放射性肺纤维化，则目前尚无明确疗效的药物治疗，反而使肿瘤病人产生新的疾病，甚至成为其死因。积雪草苷(Asiaticoside)，又称亚细亚皂苷、积雪苷、积雪草甙等，其是从中草药积雪草[Centellaasiatica(L.)Urb.]中提取的一种皂苷类化合物，分子式为C48H78019。本申请人公开号为CN1439376A的专利申请中公开了积雪草苷在制备抗药物(博莱霉素)性肺纤维化药物中的应用，显示在肺纤维化大鼠前4周有一定疗效。但未揭示其具体抗纤维化机理。因此，尚需进一步试验证明其是否也适用于放射性肺纤维化的治疗。
发明内容本发明要解决的技术问题即是上述课题，提供一种积雪草苷在抗肺纤维化方面的新应用、即在制备抗放射性肺纤维化的药物中的应用。本发明所说的积雪草苷(Asiaticoside)，其提取方法可参见现有技术，如上述本申请人的专利申请文件，也可商业购得。本发明采用积雪草苷粉口服(ig)3个月对钴60辐照所致肺纤维化的大鼠进行治疗试验，结果显示经积雪草苷粉治疗后，肺重量指数比有所下降，积雪草苷粉36mg/kg组与模型组比较有明显减轻;积雪草苷粉4、12、36mg/kg三种剂量均能明显降低上述大鼠肺纤维化时肺组织羟脯氨酸的含量，与糖皮质激素阳性药(地塞米松)组结果相似，但各剂量组之间无明显差异。另外，目前研究发现在组织纤维化过程中，有许多细胞因子参与其中，如转化生长因子-e(TGF-e)、肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、成纤维细胞生长因子(FGF)、内皮素-l(ET-l)，白介素(IL)族等。其中TGF-P为重要的促纤维化因子，其可以促进纤维细胞合成细胞外基质(ECM)成分显著增加，如胶原、层粘蛋白(LN)、透明质酸(HA)等。因此，本发明还观察进行上述积雪草苷治疗后，对大鼠肺纤维化时血清ECM成份及细胞因子的影响。其中，对于血清ECM成份，试验结果显示积雪草苷粉高剂量组36mg/kg，能明显降低钴60照射致动物肺纤维化时血清中III型胶原含量，与地塞米松组相似；也能降低血清中IV型胶原、LN含量，其中，中、低剂量组统计不明显但与地塞米松组相似，而高剂量组与模型组比较有明显降低，统计学上有意义；而积雪草苷粉高、中、低剂量组与模型组比较HA含量有明显降低，与地塞米松组相似，但各剂量组之间无差异。而对于细胞因子，试验结果显示积雪草苷粉高剂量组能明显降低TNF-a、TGF-P含量，与模型组比较有显著差异，且与地塞米松组相似；而经积雪草苷粉用药后，血中ET-1含量下降，且趋势与地塞米松相似，但无显著性差异。上述试验结果均提示积雪草苷对大鼠放射性肺纤维化有一定的防治作用。更有说服力的是肺组织CT造影及组织病理分析结果显示用药组大鼠肺组织内的炎症和纤维化病变均与模型组有差异，表现在病变过程和范围减轻。综上所述，积雪草苷具有抗放射性肺纤维化的作用，可以用于制备抗放射性肺纤维化的药物。具体实施方式实施例1积雪草苷的制备(根据上述专利文献CN1439376A中实施例1的方法)将积雪草总苷500g加水溶解，过滤，沉淀干燥，加丙酮回流，过滤，残渣挥去丙酮，加乙酸乙酯、水混合液回流，过滤，残渣7(TC干燥，粉碎即得积雪草苷粉。上述积雪草总苷为常规市售产品。试验实施例1积雪草苷粉对钴60照射诱导大鼠肺纤维化的治疗作用1、实验方法钴60致大鼠肺纤维化模型的建立SD大鼠，3X速可眠麻醉大鼠0.1mg/100g，固定于特制木架上，将特制有孔铅砖的孔对准大鼠右侧肺中下叶，并用铅砖遮挡不需照射部位。放入钴60照射区，照射剂量为15GY，照射五分钟后取出。待大鼠清醒后随机分组，每组10只，次日起每天给药igX3个月，即积雪草苷粉4、12、36mg/kg(低、中、高剂量用药组)，地塞米松0.6mg/kg(阳性对照组)，及模型对照组和空白对照组。模型对照组给予生理盐水(NS)。给药结束后用3%速可眠麻醉，作CT造影。造影结束后立即将大鼠处死，取全血分离血清测定血清中细胞因子含量及ECM含量，取出每只大鼠肺脏(右肺)称重，分别对各组大鼠进行肺重量比、羟脯氨酸含量测定，其余部分用3%福尔马林固定做病理切片，观察肺脏病理变化。2、结果2.1积雪草苷粉对钴60照射致大鼠肺纤维化时肺部重量指数的影响(表1)肺重量指数(％)，即肺组织重量比=(肺重量/体重)X100%表1:积雪草苷粉对钴60照射致大鼠肺纤维化时给药3个月肺部重量比(？士SD)的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>P<0.05与模型组比较AP<0.05与正常组比较结果表明，经钴60照射后大鼠肺形成肺纤维化，使肺组织重量比(％)比正常对照组大。但经积雪草苷粉治疗后，肺重量指数比有所下降，积雪草苷粉36mg/kg组与模型组比较有明显减轻(P0.05)，模型组与正常组比较有显著差异(P<0.05)。2.2.积雪草苷粉对钴60照射致大鼠肺纤维化时组织羟脯氨酸含量的影响(表2)表2:积雪草苷粉对钴60照射致大鼠肺纤维化时给药3个月大鼠肺组织羟脯氨酸含量(3f士SD)的影响组别剂量(mg/kg)N羟脯氨酸含量(mg/g)开始/结束x±SD正常组生理盐水10/828.56士3.93'模型组生理盐水10/840.88±9.77A地塞米松0.610/436.42±2.74'积雪草苷粉410/834.18±6.24*积雪草苷粉1232.78土4.37'■积雪草苷粉3631.38土4.75'10/8'与模型组比较PO.05"与正常组比较PO.05结果表明，与模型组比较，积雪草苷粉三种剂量均能明显降低钴60照射致大鼠肺纤维化时肺组织羟脯氨酸的含量(PO.05),与阳性药(地塞米松)组结果相似，但各剂量组之间无明显差异；模型组与正常组比较有显著差异(P<0.05)。2.3积雪草苷粉对钴60照射致大鼠肺纤维化时血清ECM成份的影响(表3-表6)表3:积雪草苷粉对钴60照射致大鼠肺纤维化时各组III型胶原含量的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>*与模型组比较P0.05A与正常组比较P0.05结果表明，积雪草苷粉高剂量组36mg/kg，能明显降低钴60照射致动物肺纤维化时血清中III型胶原含量与地塞米松组相似(P<0.05)。低、中剂量组能降低血清中III型胶原含量，但统计不明显。模型组与正常组比较有显著差异(P<0.05)。表4:积雪草苷粉对钴60照射致大鼠肺纤维化时各组IV型胶原含量的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>*与模型组比较P<0.05A与正常组比较P<0.05结果表明，造模后血清中IV型胶原含量增高，用药后能降低模型组大鼠血清中IV型胶原含量。但中、低剂量组统计不明显但与地塞米松组相似。高剂量组与模型组比较有明显降低(P<0.05)。模型组与正常组比较有显著差异(P<0.05)。表5:积雪草苷粉对钴60照射致大鼠肺纤维化时各组LN含量的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>*与模型组比较P<0.05A与正常组比较P<0.05结果表明，造模后模型组的LN含量有显著升高。积雪草苷粉高剂量组与模型组比较有明显降低(P<0.05)。积雪草苷粉中、低剂量组虽有降低，但无明显差异，但与地塞米松组相似。模型组与正常组比较有显著差异(P<0.05)。表6:积雪草苷粉对钴60照射致大鼠肺纤维化时各组HA含量的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>'与模型组比较PO.05A与正常组比较P0.05结果表明，积雪草苷粉高、中、低剂量组与模型组比较HA含量有明显降低，与地塞米松组相似。但各剂量组之间无差异。模型组与正常组比较有显著差异(P<0.05)。2.4积雪草苷粉对钴60照射致大鼠肺纤维化时某些细胞因子的影响(表7-表9)表7:积雪草苷粉对钴60照射致大鼠肺纤维化时各自，-a含量的影响组别剂量Nx±SD(mg/kg)开始/结束(ng/ml)正常组生理盐水聰4.93士1.0r模型组生理盐水腦6.84±1.99A地塞米松0.610/44.46±0.76*积雪草苷粉4薩5.66±1.04积雪草苷粉1210/86.03±0.64积雪草苷粉3610/85.00±0.51*承与模型组比较P0.05▲与正常组比较P0.05结果表明，积雪草苷粉高剂量组能明显降低TNF-a含量，与模型组比较有显著差异，且与地塞米松组相似。积雪草苷粉中、低剂量组TNF-a含量降低不明显。模型组与正常组比较有显著差异(P<0.05)。表8:积雪草苷粉对钴60照射致大鼠肺纤维化时各组TGF-卩含量的影响组别剂量(mg/kg)Nx±SD开始/结束(ng/ml)正常组生理盐水■0.057土0.011'模型组生理盐水10/80.082±0.012A地塞米松0.610/40.060±0.010*积雪草苷粉410/80.070±0.011积雪草苷粉1210/80.073±0.010积雪草苷粉3610/80.068±0.007**与模型组比较PO.05"与正常组比较PO.05结果表明，积雪草苷粉高剂量组及地塞米松组均能降低TGF-P含量与模型组比较有显著性差异。但中、低剂量组不明显。模型组与正常组比较有显著差异(P<0.05)。表9:积雪草苷粉对钴60照射致大鼠肺纤维化时各组ET-1含量的影响组别剂量(mg/kg)Nx±SD开始/结束(ng/ml)正常组生理盐水10/8212.93±40.62模型组生理盐水10/8253.59±54.70地塞米松0.6鹏236.74±37.09积雪草苷粉410/8239.50±69.57积雪草苷粉12謂226.71±57.95积雪草苷粉36画214.91±48.76结果表明，造模后大鼠ET-1含量增高，经积雪草苷粉用药后，血中ET-1含量下降，且趋势与地塞米松相似。但无显著性差异。2.5积雪草苷粉对钴60照射致大鼠肺纤维化时肺组织CT造影的结果(表IO)表10:积雪草苷粉给药后3个月各组CT造影结果正常对照组两肺未见明显活动性病变。<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>2.6积雪草苷粉对钴60照射致大鼠肺纤维化时组织病理分析正常对照组8只动物未见肺淤血或水肿，肺组织亦无炎细胞浸润及纤维化。肺纤维化模型组:8只动物的肺组织各切片散在局灶性中度肺泡膈增厚，其中见有以淋巴细胞为主炎细胞浸润；并见纤维母细胞或成纤维细胞增生，部份成纤维细胞伸入肺泡内，并见肺泡内脱落变性肺泡上皮细胞及炎细胞。未见肺泡透明膜形成。切片内均见不同程度肺不张或代偿性肺气肿。呼吸性细支气管壁见纤维化。伴有轻度小血管壁透明变性，偶见毛细血管微血管血栓形成。积雪草苷粉药物组每组各8只。未见肺淤血或肺水肿，肺泡膈轻度炎细胞浸润或有成纤维细胞增生，未见成纤维细胞伸入肺泡腔内亦未见有肺泡透明膜形成。未见呼吸性支气管纤维化；亦未见弥漫性间质纤维化。但见轻度小血管透明变性，偶见毛细血管血栓形成。各切片均见轻度肺部张或代偿性肺气肿。阳性对照组4只动物肺组织切片病理变化与药物组相同。3、结论3.1本试验经钴60照射所形成的放射性肺纤维化模型是成立的。3.2根据本试验各项指标结果证明，大鼠肺组织内的炎症和纤维化病变均与模型组有差异，表现在病变过程和范围减轻。3.3积雪草苷粉各剂量组的病理形态变化与地塞米松效果相似，但积雪草苷粉各剂量组之间无明显组间差异。根据以上结果可以得出以下结论积雪草苷粉对放射性肺纤维化有一定的防治作用。权利要求1、积雪草苷在制备抗放射性肺纤维化的药物中的应用。全文摘要本发明公开了积雪草苷在制备抗放射性肺纤维化的药物中的新应用。文档编号A61K31/7028GK101164545SQ20061011723公开日2008年4月23日申请日期2006年10月18日优先权日2006年10月18日发明者英刘,刘全海,刘珉宇,沈龙海,王小晨,燕秦,璘肖申请人:上海医药工业研究院