专利名称：亚甲蓝冻干制剂及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及血液或血液成分在进行光化学病原体灭活时使用的灭活剂及其制备方法技术领域。
背景技术：
全血是一种由血浆和各种血细胞构成的广义的结缔组织，用物理方法可将全血分离成红细胞、血小板、粒细胞、血浆和冷沉淀等血液成分，将血液成分分别用于不同疾病治疗的输血方法称为成分输血。由于与全血输注相比较，成分输血具有临床效果显著、不良反应发生率低、易于保存和节约血液资源等优点，因而被广泛采用，成为临床输血的主要形式。本发明专利所涉及的亚甲蓝冻干制剂是一种在全血或血液成分中添加的病原体灭活光敏剂，添加病原体灭活剂的全血或血液成分经光照射后，再滤除光敏剂，制备成安全的全血或血液成分。
利用光化学方法灭活血液或血液成份中包括病毒在内的病原体的研究是近年来输血医学领域中被广泛关注的研究方向，其原理为在血液成分中加入亚甲蓝、核黄素、补骨酯或其衍生物等可与血液中致病微生物核酸或包膜结合的光敏剂，经光照射后，光敏剂吸收光能，可发生电子转移或激发产生单态分子氧，在核酸特定区域形成共价加成化合物或破坏核酸的骨架结构以达到病原体灭活的效果。该病原体灭活方法已在全国较大范围内推广使用。
目前国内外加入亚甲蓝的方法是直接加入低浓度亚甲蓝溶液或亚甲蓝片或栓，亚甲蓝溶液在低浓度时会很快降解而失去病原体灭活作用，亚甲蓝片或栓所用辅料及制备过程难以保证最终成品的无菌、细菌内毒素和不溶性微粒、可见异物符合静脉注射剂要求。
发明内容
本发明的目的在于提供一种既可以保持亚甲蓝病毒灭活剂2年内稳定、又可以使亚甲蓝加入剂量准确、符合静脉滴注使用要求的亚甲蓝冻干制剂。
本发明的另一个目的是提供上述这种亚甲蓝冻干制剂的制备方法。
为达上述目的，本发明采取的技术方案是一种亚甲蓝冻干制剂，其单支制剂包含有亚甲蓝灭活剂和PH调节剂，且水分含量低于20％。
上述的亚甲蓝冻干制剂，其单支制剂所含的亚甲蓝(折算为无水物)为5-2000ug，优选为10ug-500ug，最优选为20ug-200ug。
上述的亚甲蓝冻干制剂，其中酸碱调节剂为盐酸、枸橼酸、硫酸、马来酸、乳酸、磷酸、醋酸、氢氧化钠、碳酸氢钠、枸橼酸钠、磷酸盐、醋酸钠，最优选为盐酸、枸橼酸、氢氧化钠、枸橼酸钠。
上述的亚甲蓝冻干制剂，还可添加静脉输注的辅料，其单支制剂所含注射级辅料为0-5g，优选为0.5-50mg，最优选为5-20mg。所述的注射级辅料为甘露醇、葡萄糖、右旋糖酐、木糖醇、羟乙基淀粉、果糖、麦芽糖、转化糖、乳糖登中的一种或几种的混合物，优选为甘露醇、葡萄糖、右旋糖酐中的一种或几种的混合物，最优选为甘露醇、葡萄糖或其混合物。
亚甲蓝冻干制剂经过无菌过滤、百级生产条件下分装或罐装，能确保产品无菌、细菌内毒素、不溶性微粒、可见异物合格。单支制剂可采用洁净无毒的塑料管包装，可耐高温蒸汽灭菌、耐挤压、便于运输，可工业化大生产，利于推广使用。塑料管的材质可选用洁净无毒的PP、PE、PET、PT、BOPP、BOPA、VMCPP、VMPET CPP、BOPR、BOPET材料中的一种或多种材料的复合物。
本发明所述的亚甲蓝冻干制剂的制备方法，其步骤如下将上述处方量的亚甲蓝和注射用辅料溶于无菌注射用水中，用酸碱调节剂调整pH值至5.0-8.0，经微孔滤膜过滤后，测定细菌内毒素和澄明度，合格后冷冻干燥至水分低于20％后无菌分装，然后密封即可。
上述的制备过程，经测定细菌内毒素、澄明度合格后，可先灌装于塑料管中，冷冻干燥至水分低于20％后，密封塑料管；也可将测定细菌内毒素、澄明度合格后的滤液放入洁净无菌的冻干盘中，冷冻干燥至水分低于20％后无菌分装入塑料管中，然后密封。
冷冻干燥步骤的具体操作是将中间体在-50℃-30℃预冻4-10小时，抽真空，保持真空度在0～30Pa，缓慢升温至-25℃--10℃，保持6-10小时；再缓慢升温至10-40℃，保持3-8小时，测定水分低于20％后，密封，灯检合格后包装，入库。
本发明的有益效果本发明制备的亚甲蓝冻干制剂，其灭活剂稳定性好，可保存2年以上，其含量降低不超过3％；剂量准确，可达到标示量的95-105％；对病原体灭活剂及其相关辅料采用了针用活性碳吸附、无菌过滤的制备工艺，冻干制剂无菌、细菌内毒素、不溶性微粒、可见异物合格，达到可静脉注射用的要求。本品与血液或血液成份病原体灭活装置组合后可耐高温蒸汽灭菌、耐挤压、便于运输，可工业化大生产，从而解决了目前血液或血液成分进行光化学病原体灭活的亚甲蓝病毒灭活剂的工业化制备和质量问题。
具体实施例方式
以下各实施例所用原辅料均为注射级标准、所用易折塑料管材质为药用级，符合中国2005版药典及行业标准要求。
各实施例的操作步骤如下a、分别取塑料管的上、下管等均按注射剂常规要求清洗、灭菌处理；b、在配液容器中加入80％的注射用水，加入准确称量处方量的亚甲蓝(纯度要求达到94.0％以上)或处方量的注射用辅料，搅拌使完全溶解，调节pH值5.0～8.0，并补加注射用水至全量，加热至40-80℃，然后加入0.02-0.5％(W/V)的药用炭，搅拌20分钟，砂滤棒粗滤脱炭，取样；c、测中间体亚甲蓝含量及溶液pH值合格后，用＜0.22um孔径的微孔滤膜无菌过滤，分装于易折塑料下管中，或将无菌滤液放入洁净冷冻干燥盘中；d、中间体在-50℃--30℃预冻4-10小时，抽真空，保持真空度在0～30Pa，缓慢升温至-25℃--10℃，保持约6-10小时；再缓慢升温至10-40℃，保持3-8小时，测定水分低于20％后，盖易折塑料上管，用超声波或无毒有机溶剂封接口，灯检合格后包装，入库；或将冻干盘中的中间体无菌分装入易折塑料下管中，盖易折塑料上管，用超声波或无毒有机溶剂封接口，灯检合格后包装，入库e、取样全检，检验合格后亚甲蓝冻干制剂可与血液或血液成份病原体灭活装置(中国专利号为“98121328.6”)进行组合使用。
说明在百级洁净区域下进行易折塑料上下管精洗、烘干、中间体分装、冻干、封口。
实施例1处方见表一表一
制备方法将处方量的亚甲蓝加入到80ml注射用水中，充分溶解，用0.1M盐酸调节PH至6.0-7.0，加热至60℃，加注射用水定溶至100ml，向溶液中加入经活化的针用活性炭50mg，保温搅拌20分钟，用沙滤棒或钛棒粗滤脱碳，无菌过滤，过滤用微孔滤膜的孔径0.22um，滤液分装于易折塑料下管中，每管装量0.1ml。样品在-30℃预冻5小时；抽真空，保持真空度在15～20Pa，缓慢升温至-10℃，保持约6小时；再缓慢升温至20℃，保持3小时，测定水分低于20％后，盖易折塑料上管，用超声波或无毒有机溶剂封接口，灯检合格后与病原体灭活装置组合。
该实施例制备的亚甲蓝冻干制剂的含量经检测为18.2ug/支，无菌(按中国药典2005年版二部附录XIH检验)、细菌内毒素检测合格(按中国药典2005年版二部附录XI E检验)，不溶性微粒检测(按中国药典2005年二部药典附录IXC检验)、可见异物(按中国药典2005年二部药典附录IXH检验)，均符合注射剂要求。
该实施例制备的亚甲蓝冻干制剂的病原体灭活验证效果详见下表二表二
实施例2处方见表三表三
制备方法将处方量的亚甲蓝加入到80ml注射用水中，充分溶解，用0.1M盐酸调节PH至6.0-7.0，加热至65℃，加注射用水定溶至100ml，向溶液中加入经活化的针用活性炭150mg，保温搅拌20分钟，用钛棒粗滤脱碳，无菌过滤，过滤用微孔滤膜的孔径0.15um，滤液分装于易折塑料下管中，每管装量0.1ml。样品在-40℃预冻3小时；抽真空，保持真空度在10～15Pa，缓慢升温至-15℃，保持约7小时；再缓慢升温至25℃，保持3小时，测定水分低于20％后，盖易折塑料上管，用超声波或无毒有机溶剂封接口，灯检合格后与病原体灭活装置组合。
该实施例制备的亚甲蓝冻干制剂的含量经检测为38.1ug/支，无菌(按中国药典2005年版二部附录XIH检验)、细菌内毒素检测合格(按中国药典2005年版二部附录XI E检验)，不溶性微粒检测(按中国药典2005年二部药典附录IXC检验)、可见异物(按中国药典2005年二部药典附录IXH检验)，均符合注射剂要求。
该实施例制备的亚甲蓝冻干制剂的病原体灭活验证效果详见下表四表四
实施例3处方见表五表五
制备方法同实施例2该实施例制备的亚甲蓝冻干制剂的含量经检测为78.2ug/支，无菌(按中国药典2005年版二部附录XIH检验)、细菌内毒素检测合格(按中国药典2005年版二部附录XI E检验)，不溶性微粒检测(按中国药典2005年二部药典附录IXC检验)、可见异物(按中国药典2005年二部药典附录IXH检验)，均符合注射剂要求。
该实施例制备的亚甲蓝的病原体灭活验证效果详见下表六表六
实施例4处方见表七表七
制备方法将处方量的亚甲蓝加入到400ml注射用水中，充分溶解，用0.1M氢氧化钠调节PH至6.0-7.0，加热至60℃，加注射用水定溶至500ml，向溶液中加入经活化的针用活性炭0.8g，保温搅拌20分钟，用钛棒粗滤脱碳，无菌过滤，过滤用微孔滤膜的孔径0.15um，滤液放入洁净无菌的冷冻盘中，样品在-45℃预冻4小时；抽真空，保持真空度在10～15Pa，缓慢升温至-15℃，保持约8小时；再缓慢升温至30℃，保持5小时，测定水分低于20％后，将无菌中间体粉末无菌分装于易折塑料下管中，每管分装量50.1mg，盖易折塑料上管，用超声波或无毒有机溶剂封接口，灯检合格后与病原体灭活装置组合。
该实施例制备的亚甲蓝冻干制剂的含量经检测为195ug/支，无菌(按中国药典2005年版二部附录XIH检验)、细菌内毒素检测合格(按中国药典2005年版二部附录XI E检验)，不溶性微粒检测(按中国药典2005年二部药典附录IXC检验)、可见异物(按中国药典2005年二部药典附录IXH检验)，均符合注射剂要求。
该实施例制备的亚甲蓝冻干制剂的病原体灭活验证效果详见下表八表八
实施例5处方见表九
表九
制备方法将处方量的亚甲蓝加入到800ml注射用水中，充分溶解，用0.1M氢氧化钠调节PH至6.0-7.0，加热至60℃，加注射用水定溶至1000ml，向溶液中加入经活化的针用活性炭3.0g，保温搅拌20分钟，用钛棒粗滤脱碳，无菌过滤，过滤用微孔滤膜的孔径0.22um，滤液放入洁净无菌的冷冻盘中，样品在-50℃预冻5小时；抽真空，保持真空度在10～15Pa，缓慢升温至-20℃，保持约10小时；再缓慢升温至35℃，保持6小时，测定水分低于20％后，将无菌中间体粉末无菌分装于易折塑料下管中，每管分装量201mg，盖易折塑料上管，用超声波或无毒有机溶剂封接口，灯检合格后与病原体灭活装置组合。
该实施例制备的亚甲蓝冻干制剂的含量经检测为486ug/支，无菌(按中国药典2005年版二部附录XIH检验)、细菌内毒素检测合格(按中国药典2005年版二部附录XI E检验)，不溶性微粒检测(按中国药典2005年二部药典附录IXC检验)、可见异物(按中国药典2005年二部药典附录IXH检验)，均符合注射剂要求。
该实施例制备的亚甲蓝冻干制剂的病原体灭活验证效果详见下表十表十
实施例6处方见表十一表十一
制备方法将处方量的亚甲蓝加入到4000ml注射用水中，充分溶解，用0.1M氢氧化钠调节PH至6.5-7.0，加热至60℃，加注射用水定溶至5000ml，向溶液中加入经活化的针用活性炭10.0g，保温搅拌20分钟，用钛棒粗滤脱碳，无菌过滤，过滤用微孔滤膜的孔径0.15um，滤液放入洁净无菌的冷冻盘中，样品在-50℃预冻8小时；抽真空，保持真空度在10～15Pa，缓慢升温至-25℃，保持约10小时；再缓慢升温至35℃，保持8小时，测定水分低于20％后，将无菌中间体粉末无菌分装于易折塑料下管中，每管分装量1002mg，盖易折塑料上管，用超声波或无毒有机溶剂封接口，灯检合格后与病原体灭活装置组合。
该实施例制备的亚甲蓝冻干制剂的含量经检测为1960ug/支，无菌(按中国药典2005年版二部附录XIH检验)、细菌内毒素检测合格(按中国药典2005年版二部附录XI E检验)，不溶性微粒检测(按中国药典2005年二部药典附录IXC检验)、可见异物(按中国药典2005年二部药典附录IXH检验)，均符合注射剂要求。
该实施例制备的亚甲蓝冻干制剂的病原体灭活验证效果详见下表十二表十二
以上6个实施例制备的样品经过6个月加速实验和18个月室温留样试验，其病原体灭活剂主成分含量均在标示量的95％-105％之间，无菌(按中国药典2005年版二部附录XIH检验)、细菌内毒素检测合格(按中国药典2005年版二部附录XI E检验)，不溶性微粒检测(按中国药典2005年二部药典附录IXC检验)、可见异物(按中国药典2005年二部药典附录IXH检验)，均符合注射剂要求。经检测分析、病毒验证和实际应用，其病原体灭活检测达到中国国家药品监督管理局(国药监注2002-160号)<血液制品去除/灭活病毒技术方法及验证指导原则>，在使用中溶解迅速，操作使用方便，运输安全。其灭活剂稳定性也好，可保存2年以上，其含量降低不超过3％。
权利要求
1.一种亚甲蓝冻干制剂，其单支制剂包含有亚甲蓝灭活剂和PH调节剂，且水分含量低于20％。
2.如权利要求1所述的亚甲蓝冻干制剂，其特征在于还含有可静脉输注的辅料。
3.如权利要求1或2所述的亚甲蓝冻干制剂，其特征在于单支制剂所含的亚甲蓝(折算为无水物)为5-2000ug。
4.如权利要求3所述的亚甲蓝冻干制剂，其特征在于单支制剂所含的亚甲蓝(折算为无水物)为10ug一500ug。
5.如权利要求4所述的亚甲蓝冻干制剂，其特征在于单支制剂所含的亚甲蓝(折算为无水物)为20ug一200ug。
6.如权利要求1或2所述的亚甲蓝冻干制剂，其特征在于亚甲蓝的纯度大于94.0％。
7.如权利要求1或2所述的亚甲蓝冻干制剂，其特征在于PH调节剂为盐酸、枸橼酸、硫酸、马来酸、乳酸、磷酸、醋酸、氢氧化钠、碳酸氢钠、枸橼酸钠、磷酸盐或醋酸钠。
8.如权利要求7所述的亚甲蓝冻干制剂，其特征在于PH调节剂为盐酸、枸橼酸、氢氧化钠或枸橼酸钠。
9.如权利要求2所述的亚甲蓝冻干制剂，其特征在于单支制剂所含可静脉输注的辅料为0-5g。
10.如权利要求9所述的亚甲蓝冻干制剂，其特征在于单支制剂所含可静脉输注的辅料为0.5-50mg。
11.如权利要求10所述的亚甲蓝冻干制剂，其特征在于单支制剂所含可静脉输注的辅料为5-20mg。
12.如权利要求2所述的亚甲蓝冻干制剂，其特征在于可静脉输注的辅料为甘露醇、葡萄糖、右旋糖酐、木糖醇、羟乙基淀粉、果糖、麦芽糖、转化糖、乳糖登中的一种或几种的混合物。
13.如权利要求12所述的亚甲蓝冻干制剂，其特征在于可静脉输注的辅料为甘露醇、葡萄糖、右旋糖酐中的一种或几种的混合物。
14.如权利要求13所述的亚甲蓝冻干制剂，其特征在于可静脉输注的辅料为甘露醇、葡萄糖或其混合物。
15.权利要求1～14所述的任一亚甲蓝冻干制剂的制备方法，该方法是将规定量的亚甲蓝和注射用辅料溶于无菌注射用水中，用PH调节剂调整pH值至5.0-8.0，经微孔滤膜过滤后，测定细菌内毒素和澄明度，合格后冷冻干燥至水分低于20％后无菌分装，然后密封即可。
16.如权利要求15所述的亚甲蓝冻干制剂的制备方法，其特征在于冷冻干燥步骤的具体操作是将检测合格后的中间体溶液在-50℃-30℃预冻4-10小时，抽真空，保持真空度在0～30Pa，缓慢升温至-25℃--10℃，保持6-10小时；再缓慢升温至10-40℃，保持3-8小时，测定水分低于20％后，密封，灯检合格后包装，入库。
17.如权利要求16所述的亚甲蓝冻干制剂的制备方法，其特征在于用PH调节剂调整溶液pH值至5.0-8.0后，加热至40-80℃，加入0.02-0.5％(W/V)的针用活性炭炭，搅拌，用沙滤棒或钛棒粗滤脱碳。
18.权利要求1～14所述的任一亚甲蓝冻干制剂用作血液或血液成分进行光化学病原体灭活时的灭活剂。
全文摘要
本发明公开了一种血液或血液成分在进行光化学病原体灭活时使用的灭活剂及其制备方法。本发明所述的亚甲蓝冻干制剂，其单支制剂包含有亚甲蓝灭活剂和pH调节剂，且水分含量低于20％。本发明制备的亚甲蓝冻干制剂，其灭活剂稳定性好，可保存2年以上，其含量降低不超过3％；剂量准确，可达到标示量的95－105％；对病原体灭活剂及其相关辅料采用了针用活性碳吸附、无菌过滤的制备工艺，达到可静脉注射用的要求。本品与血液或血液成分病原体灭活装置组合后可耐高温蒸汽灭菌、耐挤压、便于运输，可工业化大生产，从而解决了目前血液或血液成分进行光化学病原体灭活的亚甲蓝病毒灭活剂的工业化制备和质量问题。
文档编号A61P43/00GK1935122SQ20061011718
公开日2007年3月28日 申请日期2006年10月16日 优先权日2006年10月16日
发明者黄宇闻, 莫琴, 谢如锋, 钱开诚, 李萍, 戴荣娟 申请人:上海市血液中心, 南京逐陆医药科技有限公司