专利名称：一种四环素标记磷灰石纳米粒子及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种四环素标记磷灰石纳米粒子及其制备方法和应用。
背景技术：
磷灰石是骨和牙齿的主要无机成分，具有良好的生物活性和生物相容性，已在临床上得到广泛应用。由于纳米材料的独特性能，磷灰石纳米粒子也成为研究的重点，特别是磷灰石纳米粒子作为药物或基因载体材料以及它本身与细胞的相互作用已引起人们广泛关注。但是，不论是作为药物或基因载体材料，还是与细胞的相互作用，都需要对磷灰石纳米粒子本身进行检测和研究，使其带上荧光信号利用荧光显微镜进行检测是一种简便的方法，这样可以研究磷灰石纳米粒子与细胞的结合状态、在细胞内的分布情况以及在体内的代谢情况。目前，已有采用荧光蛋白或掺杂稀土元素使磷灰石纳米粒子带上荧光信号，但是荧光蛋白的高价格以及获得稀土掺杂磷灰石纳米粒子的复杂工艺势必会影响它们的应用。因此，有必要探寻一种价格低廉、制备工艺简单的方法来对磷灰石纳米粒子进行荧光标记。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种四环素标记磷灰石纳米粒子及其制备方法和应用。所述四环素标记磷灰石纳米粒子具有成本低廉，其作为一种荧光探针可以应用于研究磷灰石纳米粒子与细胞的结合状态、在细胞内的分布情况和在体内的代谢情况以及细胞检测。所述四环素标记磷灰石纳米粒子的制备方法工艺简单，易于推广。
本发明解决其技术问题采用以下的技术方案本发明提供的四环素标记磷灰石纳米粒子，四环素浓度在0.15625×10-5mol/L至20.0×10-5mol/L之间，当四环素浓度在上述区间变化时其粒径分布在22.9～307.9nm之间，光强度平均粒径在78.6nm至84.9nm之间变化，在385nm处激发时，最大发射峰在484nm至531nm之间，在荧光显微镜下可看到明显的黄绿色荧光。
上述的四环素标记磷灰石纳米粒子，其制备方法是采用超声波辅助沉淀法，并添加荧光试剂四环素及稳定剂，然后采用冷冻干燥法干燥获得粉体，保存备用。
上述的四环素标记磷灰石纳米粒子，其在研究磷灰石纳米粒子与细胞的结合状态、在细胞内的分布情况和在体内的代谢情况中的应用，以及作为一种荧光探针在细胞检测中的应用。
本发明与现有技术相比具有以下的主要优点其一.采用超声波辅助沉淀法，可以使磷灰石纳米粒子达到均匀分散，防止团聚；稳定剂可以使磷灰石纳米粒子表面电位值增加处于稳定状态。两者结合可以保证获得稳定的荧光标记磷灰石纳米粒子体系，四环素结合到磷灰石纳米粒子表面使其具有荧光信号。
其二.冷冻干燥法是在真空条件下，使水升华，达到干燥目的，可以防止粒子团聚。
其三.本标记方法，其过程简单易控，安全无污染，原材料价格低廉、易得。
其四.本方法所制得的荧光标记磷灰石纳米粒子，四环素浓度在0.15625×10-5mol/L至20.0×10-5mol/L之间，当四环素浓度在上述区间变化时其粒径分布在22.9～307.9nm之间，光强度平均粒径在78.6nm至84.9nm之间变化，在385nm处激发时，最大发射峰在484nm至531nm之间，在荧光显微镜下可看到明显的黄绿色荧光。
其五.应用广作为一种荧光探针，可以应用于研究磷灰石纳米粒子与细胞的结合状态、在细胞内的分布情况和在体内的代谢情况以及细胞检测。
总之，本发明制备工艺简单，成本低廉，应用广，易于推广。
图1四环素浓度为5×10-5mol/L时四环素标记磷灰石纳米粒子的粒度分布曲线。
图2四环素浓度为5×10-5mol/L时四环素标记磷灰石纳米粒子的荧光显微镜照片。
具体实施例方式
本发明提供的四环素标记磷灰石纳米粒子，四环素浓度在0.15625×10-5mol/L至20.0×10-5mol/L之间，当四环素浓度在上述区间变化时其粒径分布在22.9～307.9nm之间，光强度平均粒径在78.6nm至84.9nm之间变化，在385nm处激发时，最大发射峰在484nm至531nm之间，在荧光显微镜下可看到明显的黄绿色荧光。
本发明提供的上述四环素标记磷灰石纳米粒子，其制备方法是通过超声波辅助沉淀法，并添加荧光试剂四环素及稳定剂，然后采用冷冻干燥法干燥获得，保存备用。
本发明提供的上述四环素标记磷灰石纳米粒子，其在研究磷灰石纳米粒子与细胞的结合状态、在细胞内的分布情况和在体内的代谢情况中的应用，以及作为一种荧光探针在细胞检测中的应用。
下面结合具体实例和附图对本发明的制备方法作进一步说明。
实施例1按Ca/P摩尔比为1.67将Ca(OH)2饱和溶液加入到8.97mmol/L的Ca(H2PO4)2溶液中，在80～90℃下搅拌反应15min，然后常温搅拌30min得白色胶状沉淀，将该沉淀陈化1h后，向该体系中加入四环素，四环素浓度为0.15625×10-5mol/L，搅拌1h，加入稳定剂粘多糖(浓度为3～5mg/ml)后超声波分散30min，形成稳定的纳米粒子分散体系，再经冷冻干燥得到四环素标记的磷灰石纳米粒子，保存备用。其粒径分布在22.9nm-295.0nm之间，光强度平均粒径为78.6nm；在385nm处激发时，最大发射峰在484nm，在荧光显微镜下发出黄绿色荧光。
实施例2按Ca/P摩尔比为1.67将Ca(OH)2饱和溶液加入到8.97mmol/L的Ca(H2PO4)2溶液中，在80～90℃下搅拌反应15min，然后常温搅拌30min得白色胶状沉淀，将该沉淀陈化1h后，向该体系中加入四环素，四环素浓度为1.25×10-5mol/L，搅拌1h，加入稳定剂粘多糖(浓度为3～5mg/ml)后超声波分散30min，形成稳定的纳米粒子分散体系，再经冷冻干燥得到四环素标记的磷灰石纳米粒子，保存备用。其粒径分布在23.8nm-307.9nm之间，光强度平均粒径为81.9nm；在385nm处激发时，最大发射峰在516nm，在荧光显微镜下发出黄绿色荧光。
实施例3按Ca/P摩尔比为1.67将Ca(OH)2饱和溶液加入到8.97mmol/L的Ca(H2PO4)2溶液中，在80～90℃下搅拌反应15min，然后常温搅拌30min得白色胶状沉淀，将该沉淀陈化1h后，向该体系中加入四环素，四环素浓度为5×10-5mol/L，搅拌1h，加入稳定剂粘多糖(浓度为3～5mg/ml)后超声波分散30min，形成稳定的纳米粒子分散体系，再经冷冻干燥得到四环素标记的磷灰石纳米粒子，保存备用。其粒径分布在25.2nm-304.6nm之间，光强度平均粒径为83.9nm，粒度分布曲线如图1所示；在385nm处激发时，最大发射峰在530nm，在荧光显微镜下发出黄绿色荧光，荧光显微镜照片如图3所示。
实施例4按Ca/P摩尔比为1.67将Ca(OH)2饱和溶液加入到8.97mmol/L的Ca(H2PO4)2溶液中，在80～90℃下搅拌反应15min，然后常温搅拌30min得白色胶状沉淀，将该沉淀陈化1h后，向该体系中加入四环素，四环素浓度为10.0×10-5mol/L，搅拌1h，加入稳定剂粘多糖(浓度为3～5mg/ml)后超声波分散30min，形成稳定的纳米粒子分散体系，再经冷冻干燥得到四环素标记的磷灰石纳米粒子，保存备用。其粒径分布在27nm-284.1nm之间，光强度平均粒径为84.2nm；在385nm处激发时，最大发射峰在530nm，在荧光显微镜下发出黄绿色荧光。
实施例5按Ca/P摩尔比为1.67将Ca(OH)2饱和溶液加入到8.97mmol/L的Ca(H2PO4)2溶液中，在80～90℃下搅拌反应15min，然后常温搅拌30min得白色胶状沉淀，将该沉淀陈化1h后，向该体系中加入四环素，四环素浓度为20.0×10-5mol/L，搅拌1h，加入稳定剂粘多糖(浓度为3～5mg/ml)后超声波分散30min，形成稳定的纳米粒子分散体系，再经冷冻干燥得到四环素标记的磷灰石纳米粒子，保存备用。其粒径分布在28.3nm-275nm之间，光强度平均粒径为84.9nm；在385nm处激发时，最大发射峰在531nm，在荧光显微镜下发出黄绿色荧光。
权利要求
1.一种四环素标记磷灰石纳米粒子，其特征在于所述四环素标记磷灰石纳米粒子，四环素浓度在0.15625×10-5mol/L至20.0×10-5mol/L之间，当四环素浓度在上述区间变化时其粒径分布在22.9～307.9nm之间，光强度平均粒径在78.6nm至84.9nm之间变化，在385nm处激发时，最大发射峰在484nm至531nm之间，在荧光显微镜下可看到明显的黄绿色荧光。
2.一种四环素标记磷灰石纳米粒子的制备方法，其特征在于采用超声波辅助沉淀法，并添加荧光试剂四环素及稳定剂，然后采用冷冻干燥法干燥，获得权利要求1所述的荧光标记的磷灰石纳米粒子，保存备用。
3.根据权利要求2所述的四环素标记磷灰石纳米粒子的方法，其特征在于按Ca/P摩尔比为1.67将Ca(OH)2饱和溶液加入到8.97mmol/L的Ca(H2PO4)2溶液中，在80～90℃下搅拌反应15min，然后常温搅拌30min得白色胶状沉淀，将该沉淀陈化1h后，向该体系中加入四环素，四环素浓度在0.15625×10-5mol/L至20.0×10-5mol/L之间，搅拌1h，加入稳定剂粘多糖后超声波分散30min，形成稳定的纳米粒子分散体系，再经冷冻干燥得到四环素标记的磷灰石纳米粒子，保存备用。
4.根据权利要求3所述的四环素标记磷灰石纳米粒子的方法，其特征在于稳定剂粘多糖的浓度为3～5mg/ml。
5.权利要求1所述的四环素标记磷灰石纳米粒子，其在研究磷灰石纳米粒子与细胞的结合状态、在细胞内的分布情况和在体内的代谢情况中的应用，以及作为一种荧光探针在细胞检测中的应用。
全文摘要
本发明涉及四环素标记磷灰石纳米粒子及其制备方法和应用。这种四环素荧光标记的磷灰石纳米粒子，四环素浓度为0.15625×10
文档编号A61L27/50GK1927412SQ200610124640
公开日2007年3月14日 申请日期2006年9月28日 优先权日2006年9月28日
发明者韩颖超, 马雄华, 李世普, 刘静霆, 王欣宇, 戴红莲, 陈晓明, 袁琳 申请人:武汉理工大学