专利名称：：形成自聚集体的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及形成自聚集体的胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物及其制备方法，并且更具体而言，涉及由疏水性胆留烷酸和亲水性脱乙酰壳多糖组成的并且在水体系中形成自聚集体的胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物，并且涉及制备所述胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物的方法。
背景技术：
：当发现氨甲蝶呤完全治愈绒膜癌时，抗癌的化学治疗开始发展。约五十种抗癌药物是当前可用的，并且当施用以治疗绒膜癌、白血病、肾胚胎瘤、尤因瘤、横纹肌肉瘤、视网膜母细胞瘤、淋巴瘤、蕈样肉芽肿病、和睾丸癌时显示良好治疗功效。随着关于肿瘤细胞致癌作用和特征知识中的最新进展，许多研究已经集中在新式抗癌药物的开发上。抗癌药物多数通过抑制核酸合成显示抗癌作用，所述核酸合成是细胞遗传材料的基础构件，或直接结合至核酸，阻止核酸的功能。然而，因为这些抗癌药物损害正常细胞以及肿瘤细胞，特别是，活性分裂的组织细胞，它们具有包括削弱骨髓功能、损害胃肠道黏膜、和脱发的副作用。由于抗癌药物的副作用，所以癌症的化学治疗具有非常限制的适用性。如上所述，因为由于抗癌药物的毒性除影响肿瘤细胞之外还影响正常细胞而产生副作用，所以已经进行了多种研究以便减少这样的副作用。用于减少这样副作用的典型方法涉及以与聚合物连接的形式利用抗癌药物并采用微团或微球体作为抗癌药物的载体。第一种方法涉及将抗癌药物与聚合物连接以提供抗癌药物-聚合物复合物。抗癌药物具有副作用是因为它们对于肿瘤组织具有不足的选择性，并因而不仅损害肿瘤细胞而且损害正常细胞。因而，许多研究已经集中在开发仅将抗癌药物有效递送至肿瘤组织的方法，以便减少这样的抗癌药物副作用。典型方法采用聚合物载体。该方法具有下列优势抗癌药物-聚合物复合物的体内分布取决于聚合物载体的属性而变化；所述抗癌药物具有延长的血清半寿期；并且可以通过调节抗癌药物和载体之间的化学键合的属性来控制抗癌药物的释放。第二种方法采用微团或微球体作为抗癌药物的载体。用该方法，可以通过将抗癌药物胶囊化在微团或微球体中而使抗癌治疗的副作用最小化，因而能够缓释所述药物。该方法用于通过长时期维持抗癌药物从微团或微球体的释放，抑制当大量抗癌药物释放并在短时间内起作用而发生的副作用[Pharm.Res"1983,15，1844]。最近，已经设计了多种多样的聚合物并将其用作抗癌药物的聚合物载体，并且将数个有机反应用于将抗癌药物引入到聚合物载体中。在这方面，已经研究了许多聚合物，并且这样的聚合物实例包括聚(N-2-(羟丙基)甲基丙烯酰胺)、聚(乙烯醚-共-顺丁烯二酸酐)、聚(苯乙烯-共-顺丁烯二酸酐)、葡聚糖、聚(乙二醇)、聚(L-谷氨酸)、聚(天冬氨酸)、和聚(L-赖氨酸)。基于抗癌药物-聚合物复合物的方法可以利用不同于正常组织的肿瘤组织的病理生理性质选择性治疗肿瘤细胞。一般地，与正常组织相比，在所述肿瘤组织中形成较大数量的血管，其要求更大的营养供应。这样的肿瘤脉管是扩大的和泄漏的。肿瘤脉管系统的泄漏使大分子渗出到肿瘤组织中，优先于其它组织或器官。连同增加的脉管渗透性，相对于正常组织的不良淋巴排出使大分子被截留并积累在肿瘤组织中。该现象已知为增强的渗透性和保留(EPR)效应[Adv.DrugDeliv.Rev.，2000,65，271]。作为利用这样的抗癌药物-聚合物复合物的尝试，N-(羟丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)-抗癌药物复合物目前在II期临床试验中[美国专利号5,037,883(1991)]。另外，韩国专利登记号507968，题为"AntkancerDrug-ChitosanComplexFormingSelf-AggregatesandPreparationMethodThereof',描述了用于形成包含疏水性抗癌药物和亲水性脱乙酰壳多糖的复合物的技术。然而，在该专利中，可用的抗癌药物具体局限于能与胺基起反应的那些，并且抗癌药物与胺基的反应具有降低抗癌药物活性的可能。作为脱乙酰壳多糖的前体，壳多糖是甲壳类、昆虫类及其它无脊椎动物的外壳，真菌的细胞壁，及其它组织的主要成分，并且是N-乙酰基-D-葡糖胺重复单元通过(1—4)-(3-糖苷键结合在一起的直链聚合物。脱乙酰壳多糖是通过N-脱乙酰作用获得的碱性多糖，当用浓缩的碱处理壳多糖时产生。近年来，与其它合成聚合物相比，已经己知脱乙酰壳多糖具有包括生物粘附性、生物相容性、可生物降解性、和可配制性(formulability)的良好性质。在这方面，出于克服常规抗癌药物用的载体的副作用的目的，本发明的发明人将胆甾烷酸引入到亲水性聚合物以形成自聚集体，并且将疏水性抗癌药物物理结合到自聚集体中以提供具有数个微团优势的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物。本发明的发明人发现，所述复合物截留高浓度的疏水性抗癌药物，而且连同改善的药物装填容量一起，通过胆甾烷酸和脱乙酰壳多糖之间化学键合性质的调整控制抗癌药物的释放将对于肿瘤组织的高选择性赋予所述装载药物的复合物
发明内容技术问题本发明的一个目的是提供形成自聚集体的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖菱n柳o本发明的另一个目的是提供制备胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物的方法。技术方案为了实现上述目的，本发明提供形成自聚集体的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物，其允许药物长时期持续释放，对于肿瘤组织具有增强的选择性，并且具有大大改善的药物装填容量，因此具有供抗癌化学治疗用的潜力，并且提供制备所述复合物的方法。形成自聚集体的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖还可以包括抗癌药物。有益效果本发明的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物形成自聚集体，与必须限制药物结合(incorporation)的化学键合相比，当药物结合到所述自聚集体中时，所述自聚集体延长药物释放时期，增强所述复合物对于肿瘤组织的选择性，并且大大增加药物装填容量。因而，所述胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物对于抗癌化学治疗有用。附图简述图1是显示根据本发明实施方案的5-(3-胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物在水溶液中的粒子大小和分布的曲线图，其中利用光散射测量所述粒子大小和分布；图2是根据本发明实施方案的5-(3-胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物的透射电子显微镜(TEM)图像；图3是显示结合到根据本发明实施方案的5-P-胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物中的抗癌药物紫杉醇累积释放的曲线图4是显示小鼠肿瘤体积改变的曲线图，将根据本发明实施方案的含有紫杉醇作为抗癌药物的5-(3-胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物施用至所述小鼠；和图5是显示小鼠体重改变的曲线图，将根据本发明实施方案的含有紫杉醇作为抗癌药物的5-(3-胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物施用至所述小鼠。最佳方式以下，将详细描述本发明。本发明提供形成自聚集体的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物。适合在这里使用的抗癌药物载体包括分子量在103至106Da范围内的全部类型的脱乙酰壳多糖。优选的载体是水溶性脱乙酰壳多糖，其是具有优异生物降解性和生物相容性的天然聚合物。更优选的是由于乙二醇基团引入其中而具有增强水溶性的乙二醇脱乙酰壳多糖(glycolchitosan)。另外，全部胆甾烷酸在本发明的胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物的制备中是有用的。优选的是下面由式l表示的5-(3-胆甾烷酸。<式1>本发明的胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物能在水环境中形成微团状球形自聚集体，原因在于它的具有胆甾垸酸的疏水性基团和脱乙酰壳多糖的亲水性基团的两亲性质。本发明的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物的大小优选在1nm至2,000nm的范围内，并且更优选10nm至800nm。胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物的大小取决于胆甾烷酸的含量而确定，并且可以以1至70重量份的量包含胆甾烷酸。另外，本发明的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物还可以包括抗癌药物。因为胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物的内部由疏水性胆甾烷酸组成，并且胆甾垸酸的亲水性部分结合到脱乙酰壳多糖，所以本发明的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物的内部是高度疏水性的。由于该结构性质，胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物促进疏水性抗癌药物结合到其中。因而，可以在胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物内物理结合抗癌药物。因为结合的抗癌药物具有疏水性，其是类似于胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物内部组分的性质，所以与将限制强加于药物结合的化学键合相比，胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物可以大大增加药物装填容量，并且该增强的药物装填容量更优于其它载体的装填容量。能物理结合在本发明的胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物内的抗癌药物可以包括全部类型的疏水性抗癌药物，将其例举为阿霉素、紫杉醇、顺铂、丝裂霉素-C、道诺霉素、和5-氟尿嘧啶。根据本发明的具有截留抗癌药物的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物的大小优选在1nm至2,000nm的范围内，并且更优选在10nm至800nm的范围内。一般地，自聚集体是当具有亲水性和疏水性基团的两亲分子在水溶液中自发组装时形成的球形聚集体。在这样的自组装中，亲水性基团在外表面上在一起，并且疏水性基团在内核[Adv.Drug.Rev.，1996,21,107]。因而，两亲物质已经广泛用作有效递送多种具有疏水性特征的抗癌药物的体系。利用两亲聚合物形成这样的自聚集体的药物递送系统对于耙细胞提供充分的选择性，因此大大减少对于正常细胞的毒性，并且能够实现长时期的药物缓释。因而，该技术提供严重疾病诸如癌症的治疗中潜在有效的新方法。因而，本发明的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物对于肿瘤组织具有更高的选择性，原因在于比一般低分子量抗癌药物增强的渗透性和保留(EPR)效应，并且因而以更高的量在肿瘤组织中积累。由于该性质，胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物显示有效的抗癌活性。同样，因为胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物在水溶液中自发形成微团状的球形自聚集体，原因在于它由亲水性主链脱乙酰壳多糖和结合到那里的疏水性胆甾垸酸提供的双重疏水性/亲水性特征，所以它用作能够以靶-特异性方式缓释药物并因而具有高抗癌活性的抗癌药物载体。因此，胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物对于治疗包括癌症的疾病有用。另外，本发明提供制备胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物的方法，由方案1表示如下，所述方法包含下列步骤(a)将亲水性脱乙酰壳多糖溶解在水溶性溶剂中以提供脱乙酰壳多糖溶液；(b)将疏水性胆甾烷酸溶解在有机溶剂中以提供胆甾烷酸溶液；(C)将所述胆甾烷酸溶液以微滴形式加入到所述脱乙酰壳多糖溶液，并搅拌得到的反应溶液；和(d)渗析搅拌的反应溶液以除去未反应的胆甾垸酸。<方案1>在步骤(a)，将亲水性脱乙酰壳多糖溶解在水溶性溶剂中以提供脱乙酰壳多糖溶液。用作抗癌药物载体的亲水性脱乙酰壳多糖可以是分子量在103至106Da范围内的任何脱乙酰壳多糖，优选水溶性脱乙酰壳多糖，它是具有优异的生物降解性和生物相容性的天然聚合物，并且更优选由于引入到其中的乙二醇基团而具有增强水溶性的乙二醇脱乙酰壳多糖。水溶性溶剂可以是能溶解亲水性脱乙酰壳多糖的任何水溶性溶剂。水是优选的。优选以830至840mg/100ml水溶性溶剂的量加入亲水性脱乙酰壳多糖。在步骤(b)，将疏水性胆甾烷酸溶解在有机溶剂中以提供胆留烷酸溶液。所述疏水性胆甾烷酸可以是任何胆甾垸酸，并且优选由式1表示的5-(3-胆甾烷酸。所述有机溶剂可以是能溶解疏水性胆甾垸酸的任何有机溶剂。甲醇是优选的。优选以20至260mg/100ml有机溶剂的量加入所述疏水性胆甾烷酸。在步骤(c)，将步骤(b)中制备的胆甾烷酸溶液以微滴形式加入到步骤(a)中制备的脱乙酰壳多糖溶液，并搅拌得到的反应溶液。如果需要，可以使用催化剂用于结合胆甾烷酸和脱乙酰壳多糖。所述催化剂是从l-乙基-3-(3-二甲基-氨基丙基)碳二亚胺(EDC)和N-氢琥珀乙壳脔糖脱酰多甾酸胆烷酰亚胺(NHS)之中选择的一种或多种。当EDC用作催化剂时，优选以对步骤(b)所用的胆甾烷酸的重量比为0.9至1.1使用它。优选以对EDC的重量比为1.4至1.6使用NHS。在催化剂加入到所述反应溶液后，可以将反应溶液搅拌5至50小时。如果所述反应进行更短或更长的时期，则不能有效实现胆甾垸酸和脱乙酰壳多糖的键合。本发明的制备方法还可以包括，在步骤(c)后，以微滴形式将抗癌药物溶液加入到步骤(c)制备的反应溶液的步骤，以便将抗癌药物物理结合在根据本发明的形成自聚集体的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物之内。截留在胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物之内的抗癌药物可以是任何疏水性抗癌药物，将其例举为阿霉素、紫杉醇、顺铂、丝裂霉素-C、道诺霉素、和5-氟尿嘧啶。用于溶解抗癌药物的适合溶剂包括能溶解所述抗癌药物的全部溶剂。乙醇是优选的。将抗癌药物物理结合在胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物之内的本方法提供最大药物装填效率为40%或更大，与提供最大装填效率约为10%的化学键合相比，这是大大增强的，因此克服了化学键合的限制，产生大大增加的药物装填容量。在步骤(d)，将搅拌的反应溶液渗析以除去未反应的胆甾烷酸，因此产生本发明的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物。可以通过常规方法进行渗析。在除去未反应的胆甾烷酸后，所述反应溶液还可以经历冷冻干燥以产生本发明的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物。发明实施方式通过为了说明而陈述的下列实例，可以更好地了解本发明，所述实例不应当解释成本发明的限制。实施例1:胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物的制备1将500mg的乙二醇脱乙酰壳多糖溶解在60ml水中，并用90ml甲醇混合以提供乙二醇脱乙酰壳多糖溶液。将260mg的5-(3-胆甾烷酸溶解在100ml甲醇中，并以微滴形式缓慢加入到乙二醇脱乙酰壳多糖溶液。然后，将280mg的l-乙基-3-(3-二甲基-氨基丙基)碳二亚胺(EDC)和420mg的N-氢琥珀酰亚胺(NHS)溶解在50ml甲醇中，加入到所述反应溶液，并在室温下搅拌24小时。将得到的反应溶液渗析2天以除去未反应的5-(3-胆甾烷酸，并冷冻干燥，因此产生根据本发明的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物。光散射分析(图l)和透射电子显微镜图像(图2)导致发现，成功制备了胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物。如图1和2所示，制备的胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物的直径为200至800腿。实施例2:胆留垸酸-脱乙酰壳多糖复合物的制备2根据如实施例1中相同的程序制备根据本发明的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物，不同之处在于以不同的量使用5-卩-胆甾垸酸和催化剂。即，将108.5mg的5-{3-胆甾烷酸溶解在100m甲醇中，并以微滴形式缓慢加入到具有如实施例1中相同浓度的乙二醇脱乙酰壳多糖溶液。将100mg的EDC和175mg的NHS溶解在50ml甲醇中并加入到所述反应溶液。实施例3:5-P-胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物的制备3根据如实施例1中相同的程序制备根据本发明的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物，不同之处在于以不同的量使用5-(3-胆甾烷酸和催化剂。即，将21.7mg的5-|3-胆甾烷酸溶解在100ml甲醇中，并以微滴形式缓慢加入到具有如实施例1中相同浓度的乙二醇脱乙酰壳多糖溶液。将20mg的EDC和35mg的NHS溶解在50ml甲醇中并加入到所述反应溶液。在下面测试例1中检验了实施例1至3中用多种量的胆甾烷酸制备的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物的胆甾烷酸含量的改变。实施例4:5-卩-胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物的制备4根据如实施例1中相同的程序制备根据本发明的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物，不同之处在于将5-p-胆甾垸酸和脱乙酰壳多糖反应6小时。实施例5:5-(3-胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物的制备5根据如实施例1中相同的程序制备根据本发明的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物，不同之处在于将5-p-胆甾垸酸和脱乙酰壳多糖反应12小时。实施例6:5-P-胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物的制备6根据如实施例1中相同的程序制备根据本发明的胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物，不同之处在于将5-p-胆甾烷酸和脱乙酰壳多糖反应18小时。实施例7:5-P-胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物的制备7根据如实施例1中相同的程序制备根据本发明的胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物，不同之处在于将5-(3-胆甾垸酸和脱乙酰壳多糖反应48小时。在下面测试例1中检验实施例4至7中胆甾烷酸和脱乙酰壳多糖的多种反应时间制备的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物的胆甾垸酸含量的改变。实施例8至12:物理结合紫杉醇的5-(3-胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物的制备根据本发明的截留紫杉醇的胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物制备如下。将紫杉醇以1%、3%、5%、10。/。和20%的浓度溶解在乙醇中。将5mg根据本发明的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物溶解在水和乙醇体积比为1:1的混合物中，并且将得到的溶液以微滴形式缓慢加入到紫杉醇溶液，接着轻轻搅拌24小时。然后，将得到的反应溶液利用截留分子量(MWCO)为3,500的渗析管渗析2天，以便除去乙醇和没有结合到胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物中的紫杉醇。将渗析溶液冷冻干燥，因此产生根据本发明的截留紫杉醇的胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物。实验实施例1:根据制备条件的本发明的胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物的胆甾烷酸含量的评价将实施例1至7中通过多种量的胆甾烷酸或胆甾烷酸和脱乙酰壳多糖的反应时间制备的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物的胆甾烷酸含量的改变检验如下。将5mg的5-(3-胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物溶解在10ml的2%乙酸中，并且向其加入20^的0.1%的甲苯胺蓝，并搅拌。在搅拌过程中，滴加N/400聚乙烯硫酸钾(PVSK)，并且当溶液颜色改变时终止其加入。通过胶体滴定计算加入的PVSK的量而确定胆甾垸酸含量。结果给出在下面的表1中。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>如表1所示，当通过实施例1至3中多种量的胆甾烷酸制备胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物时，当使用的胆甾垸酸的量增加时则它的胆留烷酸含量增加。同样，当通过实施例4至7中胆甾烷酸和脱乙酰壳多糖的多种反应时间制备胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物时，没有观察到胆甾垸酸含量的改变，表明延长的反应时间不影响胆甾垸酸含量。实验实施例2:本发明的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物的药物结合速率的评价根据本发明的药物物理结合到其中的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物，对于它们的药物装填效率评价如下。对于实施例8至12中制备的5-(3-胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物，通过检验使用的紫杉醇的量和实际装填的紫杉醇的量，测量药物装填效率。利用普遍使用的光散射方法测量截留紫杉醇的5-{3-胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物的直径。结果给出在下面的表2中。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>如表2所示，当根据本发明的制备方法制备5-p-胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物时，当使用的紫杉醇的量增加时，结合到所述复合物中的紫杉醇增加。本物理方法提供药物装填效率为90%或更大，这比由化学键合实现的药物装填效率更高。另外，5-p-胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物的直径随着递增的紫杉醇结合而增加。实验实施例3:截留在5-(3-胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物中的紫杉醇的释放模式的评价将实施例11中制备的截留紫杉醇的胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物以2mg/ml的浓度分散在水中。将500pl的分散体放在纤维素渗析管(截留分子量12,000-14,000)内部、密封、在37。C渍浸在水中，在150rpm搅拌。在给定的时点收集所述水并利用HPLC评价释放的紫杉醇的量。在图3中给出结果。如图3所示，紫杉醇的累积释放随时间增加，表明紫杉醇的释放是持续的。实验实施例4:截留紫杉醇的胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物的抗癌效应的评价利用患有黑素瘤的C57BL/6小鼠，将实施例11中制备的截留紫杉醇的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物对于它的抗癌效果进行评价如下。以20mg/kg或50mg/kg的剂量，将根据本发明的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物或含有紫杉醇的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物对于植入有B16F10鼠科黑素瘤细胞的小鼠施用21天的周期。然后，将实验动物称重，测量从所述动物切除的肿瘤体积。将含有紫杉醇的CremophorEL(聚乙氧基化的蓖麻油衍生物，BASF)用作比较组，并且将生理盐水用作阴性对照。在图4和5中给出结果。如图4所示，发现仅接受生理盐水的阴性对照小鼠的肿瘤随着时间体积增加。在接受根据本发明的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物或截留紫杉醇的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物、或含有紫杉醇的CremophorEL的小鼠中，在第9天后肿瘤大小很少改变。同样，当截留紫杉醇的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物以更高剂量施用时，观察到肿瘤尺寸的较小增加。如图5中所示，当称重所述动物时，获得类似于图4中所示结果的结果。合起来，这些结果表明，根据本发明的截留紫杉醇的胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物能够缓慢释放紫杉醇，并因而可以长时期发挥抗癌效果。工业适用性如上所述，本发明的胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物形成自聚集体，与限制药物结合的化学键合相比，当药物结合到所述自聚集体中时，所述自聚集体延长药物释放时期，增强所述复合物对于肿瘤组织的选择性，并且大大增加药物装填容量。因而，所述胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物对于抗癌化学治疗有用。权利要求1.一种胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物，所述胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物由疏水性胆甾烷酸和亲水性脱乙酰壳多糖组成并且在水溶液中形成自聚集体。2.根据权利要求1的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物，其中所述疏水性胆甾烷酸是5-(3-胆甾烷酸。3.根据权利要求1的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物，其中以1至70重量份的量包含所述疏水性胆甾垸酸。4.根据权利要求1的胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物，其中所述亲水性脱乙酰壳多糖是乙二醇脱乙酰壳多糖。5.根据权利要求1的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物，其中所述亲水性脱乙酰壳多糖具有103至106Da的平均分子量。6.根据权利要求1的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物，胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物的直径为10nm至800nm。7.根据权利要求1至6任何一项的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物，所述胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物还包含结合其中的疏水性抗癌药物。8.根据权利要求7的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物，其中所述结合的疏水性抗癌药物选自由阿霉素、紫杉醇、顺铂、丝裂霉素-C、道诺霉素、和5-氟尿嘧啶组成的组。9.制备胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物的方法，所述方法包含下列步骤(a)将亲水性脱乙酰壳多糖溶解在水溶性溶剂中以提供脱乙酰壳多糖溶液；(b)将疏水性胆甾烷酸溶解在有机溶剂中以提供胆甾垸酸溶液；(C)将所述胆甾烷酸溶液以微滴形式加入到所述脱乙酰壳多糖溶液，并搅拌得到的反应溶液；和(d)渗析搅拌的反应溶液以除去未反应的胆甾烷酸。10.根据权利要求9的制备所述胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物的方法，其中步骤(a)的亲水性脱乙酰壳多糖是乙二醇脱乙酰壳多糖。11.根据权利要求9的制备所述胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物的方法，其中步骤(a)的亲水性脱乙酰壳多糖具有103至1(^Da的分子量。12.根据权利要求9的制备所述胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物的方法，其中步骤(a)的水溶性溶剂是水。13.根据权利要求9的制备所述胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物的方法，其中以830至840mg/100ml水溶性溶剂的量加入步骤(a)的亲水性脱乙酰壳多糖。14.根据权利要求9的制备所述胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物的方法，其中步骤(b)的疏水性胆甾烷酸是5-(3-胆甾烷酸。15.根据权利要求9的制备所述胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物的方法，其中步骤(b)的有机溶剂是甲醇。16.根据权利要求9制备所述胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物的方法，其中以20至260mg/100ml有机溶剂的量加入步骤(b)的疏水性胆甾烷酸。17.根据权利要求9至16任何一项的制备所述胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物的方法，所述方法还包含将疏水性抗癌药物结合在所述胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物之内的步骤。18.根据权利要求17制备所述胆甾垸酸-脱乙酰壳多糖复合物的方法，其中所述结合的疏水性抗癌药物选自由阿霉素、紫杉醇、顺铂、丝裂霉素-C、道诺霉素、和5-氟尿嘧啶组成的组。全文摘要本发明公开了形成自聚集体的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物及其制备方法，并且更具体而言，公开了由疏水性胆甾烷酸和亲水性脱乙酰壳多糖组成的并且在水环境中形成自聚集体的胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物，并且公开了制备所述胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物的方法。所述胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物形成自聚集体，与限制药物结合的化学键合相比，当药物结合到所述自聚集体中时，所述自聚集体延长药物释放时期，增强所述复合物对于肿瘤组织的选择性，并且大大增加药物装填容量。因而，所述胆甾烷酸-脱乙酰壳多糖复合物对于抗癌化学治疗有用。文档编号A61K9/00GK101106974SQ200680002437公开日2008年1月16日申请日期2006年1月12日优先权日2005年1月14日发明者徐详奉,朴宰亨,权胜利,权诩赞,郑曙荣,郑蕙婵,金仁山,金光明,金宗澔申请人:韩国科学技术研究院