专利名称：TNFα抑制剂治疗腐蚀性多关节炎的用途的制作方法
TNFoc抑制剂治疗腐蚀性多关节炎的用途
相关申请
本申请要求2005年5月16日提交的美国临时申请60/681645的优先权。
本申请涉及美国专利No.6,090,382、 6,258,562和6,509，015。本申请还涉及2001年3月7日提交的美国专利申请系列号09/801 ，185; 2002年6月5日提交的美国专利申请系列号10/16367;和2002年4月26日提交的美国专利申请系列号10/422287; 2002年8月16日提交的美国专利申请系列号10/525292; 2003年10月24日提交的美国专利申请系列号10/693233; 2003年7月18日提交的美国专利申请系列号10/622932;2003年7月18日提交的美国专利申请系列号10/623039; 2003年7月18日提交的美国专利申请系列号10/623076; 2003年7月18日提交的美国专利申请系列号10/623065; 2003年7月18日提交的美国专利申请系列号10/622928; 2003年7月18日提交的美国专利申请系列号10/623075;2003年7月18日提交的美国专利申请系列号10/623035; 2003年7月18日提交的美国专利申请系列号10/622683; 2003年7月18日提交的美国专利申请系列号10/622205; 2003年7月18日提交的美国专利申请系列号10/6222 10 ;和2003年7月18日提交的美国专利申请系列号10/623318。本申请还涉及2005年4月11日提交的PCT/USO5/12007(WO 05/110452)，和2005年10月6日提交的美国申请11/245，254。这些专利和专利申请的全部内容引入本文作为参考。
背景技术：
多关节炎可为腐蚀性或非腐蚀性的。在腐蚀性形式中，基本疾病
9过程腐蚀软骨；在非腐蚀性形式中，软骨不受影响。腐蚀性多关节炎 为关节炎性疾病，其导致受影响关节内组织毁坏和腐蚀。腐蚀性多关 节炎发生于许多患有包括牛皮癣性关节炎、脊推关节炎症(例如强直 性脊柱炎和幼年型类风湿性关节炎)炎性病症的患者中。表达为腐蚀 性多关节炎的病症的许多当前治疗未能集中于减少关节疾病的放射Z 照相进展。
发明内容
需要采用安全有效的方式治疗腐蚀性多关节炎。尽管例如施用
DMARD的腐蚀性多关节炎的传统治疗可延緩疾病进展，然而传统治 疗见效緩慢，可随时间失去功效，且可与潜在严重毒性作用相关。本 发明提供一种安全有效的治疗腐蚀性多关节炎及减緩关节疾病进展 的方法。
本发明包括治疗腐蚀性多关节炎的方法，其包括施用TNF抑制剂。 本发明也提供一种治疗患有腐蚀性多关节炎的人类受试者的方法，其 包括将抗TNFot抗体施用于该受试者从而治疗腐蚀性多关节炎。本发 明也包括包含TNFa抑制剂的试剂盒和制造物品。
在一个实施方案中，TNFa抑制剂选自抗TNFa抗体或其抗原结 合部分、TNF融合蛋白或重组TNF结合蛋白。在一个实施方案中，该 TNF融合蛋白为依那西普(etanercept)。在另一实施方案中，该抗TNFa 抗体或其抗原结合部分选自人源化抗体、嵌合抗体及多价抗体。在一
个实施方案中，该抗TNFa抗体或其抗原结合部分为英利昔单抗 (infliximab)、格里木单抗(golimumab)或阿达木单抗(adalimumab)。在 另一实施方案中，该抗TNFa抗体或其抗原结合部分为人类抗体。
本发明提供一种治疗患有腐蚀性多关节炎的人类受试者的方法， 其包括将TNFoc抗体或其抗原结合部分施用于该受试者从而治疗腐蚀 性多关节炎。
在一个实施方案中，该TNFa抗体或其抗原结合部分选自人源化 抗体、嵌合抗体和多价抗体的抗体。在另一实施方案中，该TNFa抗
10体或其抗原结合部分为英利昔单抗或格里木单抗。
在一个实施方案中，该TNFa抗体或其抗原结合部分为人类抗体。 在一个实施方案中，该人类抗体或其抗原结合部分以通过表面等离振 子共振测定的lx10—8 M或更低的Kd和lx10—3 s"或更低的K。ff速率常数 与人类TNFa解离，并在标准体外L929分析中以lxlO:M或更低的IC50 中和人类TNFa细胞毒性。在另一实施方案中，该人类抗体或其抗原 结合部分具有以下特征
a) 以如通过表面等离振子共振测定的1 x 10-3 s-1或更低的K。ff速率 常数与人类TNFot解离；
b) 具有一个轻链CDR3域，其包含SEQIDNO: 3的氨基酸序列或通 过位置l、 4、 5、 7或8处的单一丙氨酸置换或通过位置1、 3、 4、 6、 7、 8和/或9处的l至5个保守氨基酸置换而由SEQ ID NO: 3修饰的氨基酸 序列；
c) 具有一个重链CDR3域，其包含SEQIDNO: 4的氨基酸序列或通 过位置2、 3、 4、 5、 6、 8、 9、 10或11处的单一丙氨酸置换或通过位 置2、 3、 4、 5、 6、 8、 9、 10、 1 l和/或12处的l至5个保守氨基酸置换 而由SEQIDNO: 4修饰的氨基酸序列。在另一实施方案中，该人类抗 体或其抗原结合部分包含一个轻链可变区(LCVR),其具有一个包含 SEQ ID NO: 3的氨基酸序列或通过位置1、 4、 5、 7或8处的单一丙氨 酸置换而由SEQ ID NO: 3修饰的氨基酸序列的CDR3域；且包含一个 重链可变区(HCVR),其具有一个包含SEQ ID NO: 4的氨基酸序列或 通过位置2、 3、 4、 5、 6、 8、 9、 10或1 l处的单一丙氨酸置换而由SEQ ID NO: 4修饰的氨基酸序列的CDR3域。在另一实施方案中，该人类 抗体或其抗原结合部分包含一个包含SEQ ID NO: l的氨基酸序列的 轻链可变区(LCVR)及一个包含SEQ ID NO: 2的氨基酸序列的重链可 变区(HCVR)。在一个实施方案中，该人类抗体或其抗原结合部分为 阿达木单抗。
在一个实施方案中，该TNFoc抗体或其抗原结合部分以两周一次 的给药方案施用于受试者。在一个实施方案中，该受试者患有TNFa活性为有害的病症。在 一个实施方案中，该TNFa活性为有害的病症选自牛皮癣性关节炎、 强直性脊柱炎及幼年型类风湿性关节炎。在另一实施方案中，该TNFa 活性为有害的病症为牛皮癣性关节炎。在另一实施方案中，该TNFoc 活性为有害的病症为类风湿性关节炎。
在一个实施方案中，本发明包括进一步包含将其他治疗剂施用于 受试者。在一个实施方案中，该其他治疗剂为氨曱喋呤。在另一实施 方案中，该其他治疗剂为緩解疾病的抗类风湿药物(DMARD)或非甾 体抗炎药(NSAID)或类固醇或其任意组合。
本发明包括一种测试TNFa抗体或其抗原结合部分降低与腐蚀性 多关节炎相关的关节疾病的放射照相进展的功效的方法。在一个实施 方案中，测试TNFot抗体或其抗原结合部分的功效的方法包括使用 患有与腐蚀性多关节炎相关的关节疾病的患者群体的改良总Sharp评 分(modified Total Sharp Score)(mTSS)和施用TNFoc抗体或其抗原结合 部分之后患者群体的mTSS来测定TNFoc抗体或其抗原结合部分的功 效，其中mTSS不变或降低表示TNFoc抗体或其抗原结合部分有效降低 与腐蚀性多关节炎相关的关节疾病的放射照相进展。在一个实施方案 中，mTSS降低约-0.2。
在一个实施方案中，该患者群体也患有TNFa活性为有害的病症。 在一个实施方案中，该TNFot活性为有害的病症选自牛皮癣性关节炎、 强直性脊柱炎及幼年型类风湿性关节炎。
在一个实施方案中，该TNFa抗体或其抗原结合部分选自人源化 抗体、嵌合抗体及多价抗体。在一个实施方案中，该TNFoc抗体或其 抗原结合部分为英利昔单抗或格里木单抗。在另一实施方案中，该 TNFa抗体或其抗原结合部分为人类抗体。在一个实施方案中，该人 类抗体或其抗原结合部分以通过表面等离振子共振测定的lxl(T8 M或 更低的Ko与lxl(T3 s"或更低的K。ff速率常数与人类TNFa解离，并在标 准体外L929分析中以lxl(T7 M或更低的ICso中和人类TNFa细胞毒性。
在另 一 实施方案中，该人类抗体或其抗原结合部分具有以下特征
a) 以如通过表面等离振子共振测定的lxl(T3 s"或更低的K。ff速率 常数与人类TNFa解离；
b) 具有一个轻链CDR3域，其包含SEQ ID NO: 3的氨基酸序列或通 过位置l、 4、 5、 7或8处的单一丙氨酸置换或通过位置1、 3、 4、 6、 7、 8和/或9处的l至5个保守氨基酸置换而由SEQ ID NO: 3修饰的氨基酸 序列；
c) 具有一个重链CDR3域，其包含SEQ ID NO: 4的氨基酸序列或通 过位置2、 3、 4、 5、 6、 8、 9、 10或11处的单一丙氨酸置换或通过位 置2、 3、 4、 5、 6、 8、 9、 10、 11和/或12处的1至5个保守氨基酸置换 而由SEQIDNO:4修饰的氨基酸序列。在另一实施方案中，该人类抗 体或其抗原结合部分包含一个轻链可变区(LCVR),其具有一个包含 SEQ ID NO: 3的氨基酸序列或通过位置1、 4、 5、 7或8处的单一丙氨 酸置换而由SEQ ID NO: 3修饰的氨基酸序列的CDR3域；且包含一个 重链可变区(HCVR)，其具有一个包含SEQ ID NO: 4的氨基酸序列或 通过位置2、 3、 4、 5、 6、 8、 9、 10或1 l处的单一丙氨酸置换而由SEQ ID NO: 4修饰的氨基酸序列的CDR3域。
在另一实施方案中，该人类抗体或其抗原结合部分包含一个包含 SEQ ID NO: 1的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)及一个包含SEQ ID NO: 2的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)。在本发明的另 一 实施方案 中，该人类抗体或其抗原结合部分为阿达木单抗。
在本发明的一个实施方案中，该TNFa抗体或其抗原结合部分以 两周一次的给药方案施用于受试者。在一个实施方案中，该抗体或其 抗原结合部分与包括(例如)氨曱喋呤的其他治疗剂组合给药。
本发明描述 一 种监测TNF a抗体或其抗原结合部分治疗人类受试 者的腐蚀性多关节炎的有效性的方法，其包括使用患有腐蚀性多关节 炎的患者群体的改良总Sharp评分(mTSS)基线及施用TNFa抗体或其 抗原结合部分之后患者群体的mTSS来确定TNFa抗体或其抗原结合 部分的有效性，其中选自约9-27。/。的患者群体mTSS减少；约65-73%的患者群体mTSS不变；及约9-28%的患者群体mTSS增加的结果表明， 该TNFa抗体或其抗原结合部分在治疗腐蚀性多关节炎中有效。
在本发明的一个实施方案中，该TNFa抗体或其抗原结合部分选 自人源化抗体、嵌合抗体及多价抗体。在一个实施方案中，该TNFa 抗体或其抗原结合部分为英利昔单抗或格里木单抗。在另一实施方案 中，该TNFa抗体或其抗原结合部分为人类抗体。
在另一实施方案中，该人类抗体或其抗原结合部分以通过表面等 离振子共振测定的lx10—8 M或更低的Kd与lx10—3 s—!或更低的K。ff速率 常数从人类TNFa解离，并在标准体外L929分析中以lxl(T7 M或更低的 ICso中和人类TNFa细胞毒性。在另一实施方案中，该人类抗体或其抗 原结合部分为阿达木单抗。
本发明也包括一种测试TNFa抗体或其抗原结合部分治疗与牛皮 癣性关节炎相关的腐蚀性多关节炎的功效的方法，其包括使用患有腐 蚀性多关节炎的患者群体的改良总Sharp评分(mTSS)基线及牛皮癣面 积及严重度指数(PASI)评分基线或ACR评分基线与施用TNFoc抗体或 其抗原结合部分之后患者群体的mTSS及PASI或ACR评分相比较来确 定TNFoc抗体或其抗原结合部分的功效，其中mTSS不变或降低及在至 少约57%的患者群体中获得ACR20反应或在至少约75%的患者群体中 获得PASI 50应答表明该TNFoc抗体或其抗原结合部分在治疗与牛皮 癣性关节炎相关的腐蚀性多关节炎中有效。在一个实施方案中， ACR50反应在至少约39。/。的患者群体中获得。在另 一实施方案中， ACR70反应在至少约23%的患者群体中获得。在另 一 实施方案中， PASI75应答在至少约59y。的患者群体中获得。在另一实施方案中， PASI90应答在至少约42。/。的患者群体中获得。在一个实施方案中，该 TNFot抗体或其抗原结合部分为阿达木单抗。
本发明描述一种治疗腐蚀性多关节炎的方法，其包括以两周一次 的给药方案将阿达木单抗施用于患有腐蚀性多关节炎的受试者。在一 个实施方案中，阿达木单抗的剂量为约40mg。
本发明也包括一种试剂盒，其包含含TNFoc抗体或其抗原结合部
14分及药学上可接受的载体的药物组合物和用于施用用于治疗腐蚀性 多关节炎的药物组合物的说明。在一个实施方案中，该药物组合物包
含TNFot抗体或其抗原结合部分阿达木单抗。在一个实施方案中，药 物组合物包含约40 mg阿达木单抗。在另一实施方案中，该试剂盒进 一步包含其他治疗剂。在一个实施方案中，该其他治疗剂为氨甲喋呤。
本发明描述一种制造物品，其包含包装材料、TNFa抗体或其抗 原结合部分及包装材料内所含的说明该TNFa抗体或其抗原结合部分 可用于治疗腐蚀性多关节炎的标签或包装插页。
本发明也包括一种制造物品，其包含包装材料、TNFa抗体或其 抗原结合部分及包装材料内所含的说明该TNFa抗体或其抗原结合部 分可用于抑制关节疾病的放射线进展的标签或包装插页。
在一个实施方案中，该制造物品包含选自人源化抗体、嵌合抗体 及多价抗体的抗体。
在一个实施方案中，该TNFa抗体或其抗原结合部分为英利昔单 抗或格里木单抗。在另一实施方案中，该TNFa抗体或其抗原结合部 分为人类抗体。在一个实施方案中，该人类抗体或其抗原结合部分以 通过表面等离振子共振测定的lx10—8 M或更低的Kd与lxl(T3 s"或更低 的K。ff速率常数与人类TNFa解离，并在标准体外L929分析中以lx10-7 M或更低的IC5。中和人类TNFa细胞毒性。在另一实施方案中，该人类 抗体或其抗原结合部分为阿达木单抗。
图1 a及1 b显示改良总Sharp评分(mTSS)图(图1 a)和与PsA相关的放 射线照相结果(图lb)。
图2显示改良总Sharp评分(mTSS)的累积分布函数图。该图采用基 线与第24周的放射线相片显示受试者的基线至第24周的变化。
图3a及3b显示采用氨曱喋呤(mtx)(图3a)及不采用氨曱喋呤 (mtx)(图3 b)的受试者的mTS S的累积分布函数图。
图4显示在第48周mTSS的平均变化图。发明详述
I.定义
为了可以更容易地理解本发明，首先定义某些术语。
本文使用的术语"人类TNFa"(本文中缩写为hTNFoc或简写为 hTNF)指以17 kD分泌形式及26 kD膜相关形式存在的人类细胞因子， 其生物活性形式由非共价结合的17 kD分子的三聚体组成。hTNFa的 结构进一步描述于(例如)Pennica， D.等人(1984) Atow" 312:724-729; Davis， J.M.等人(1987)肠c/z簡勿26:1322-1326;及Jones， E.Y.等人 (1989) A^/wre 338:225-228中。术语人类TNFot包括重组人类TNFa (rhTNFa),其可由标准重组表达方法制备或购买得到(R&D Systems, 目录第210-TA号，Minneapolis,MN)。 TNFoc也称作TNF。
术语"TNFa抑制剂"指干扰TNFa活性的药剂。该术语也包括本文 中所述的各抗TNFa人类抗体及抗体部分以及美国专利第6,090,382 号、第6，258,562号、第6,509,015号及美国专利申请序号09/801185及 10/302356中所述的那些抗TNFa人类抗体及抗体部分。在一个实施方 案中，用于本发明的TNFa抑制剂为抗TNFa抗体或其片段，其包括英 利昔单4元(Remicade , Johnson and Johnson ; 4苗述于美国专矛J第 5,656,272号中，该专利引入本文作为参考)、CDP571(人源化单抹抗 TNFa IgG4抗体)、CDP 870(人源化单林抗TNFa抗体片段)、抗TNF dAb(Peptech)、 CNTO 148(格里木单抗；Medarex and Centocor,参见 WO 02/12502)及阿达木单抗(Humira⑧Abbott Laboratories,人类抗TNF mAb，在美国6,090，382中描述为D2E7)。其它的可用于本发明的抗体 描述于美国专利6,593,458; 6,498,237，; 6，451,983;和6，448,380,其中每 一个专利在此引入作为参考。在另一实施方案中，该TNFoc抑制剂为 TNF融合蛋白，例如依那西普(Enbref， Amgen;描述于WO 91/03553 及WO 09/406476中，引入本文作为参考)。在另一实施方案中，该TNFoc 抑制剂为重组TNF结合蛋白(r-TBP-I)(Serono)。
本文使用的术语"抗体"指包含4条多肽链(由二硫键相互连接的2 条重(H)链及2条轻(L)链)的免疫球蛋白分子。各重链包含一个重链可
16变区(本文中缩写为HCVR或VH)及一个重链恒定区。该重链恒定区包 含3个域(CH1、 CH2及CH3)。各轻链包含一个轻链可变区(本文中缩写 为LCVR或VL)及一个轻链恒定区。该轻链恒定区包含1个域CL。 VH 及VL区可进一步再分为高变区，称作互补决定区(CDR)，其中散布有 更保守的区，称作构架区(FR)。 VH及VL各包含3个CDR及4个FR,按 以下顺序从氨基末端至羧基末端排列FR1、 CDR1、 FR2、 CDR2、 FR3、 CDR3、 FR4。本发明的抗体进一 步详细描述于美国专利第 6,090,382号、第6,258，562号及第6，509，015号中，均全文均引入本文作 为参考。
本文使用的术语抗体的"抗原结合部分"(或简称为"抗体部分")指 保持特异性结合抗原(例如hTNFoc)的能力的抗体的 一 个或多个片段。 已显示抗体的抗原结合功能可由全长抗体的片段执行。术语抗体的" 抗原结合部分"内包含的结合片段的实施例包括(i)Fab片段，由VL 、 VH、 CL及CH1域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，包含在4交链区由 二硫桥连接的2个Fab片段的二价片段；(iii)由VH及CHl域组成的Fd片 段；(iv)由抗体的单臂VL域及VH域组成的Fv片段，(v)dAb片段(Ward 等人(1989) A^ wre 341:544-546),其由VH域组成；及(vi)分离的互补 决定区(CDR)。此外，尽管Fv片段的2个域(VL及VH)由各自基因编码， 但是其可使用重组方法由能使其成为单一蛋白链的合成连接体连接， 其中VL及VH区配对以形成单价分子(称为单链Fv(scFv);参见例如 Bird等人(1988) 5We"ce 242:423-426;及Huston等人(1988)尸rac. A^/. ^c"d OS^ 85:5879-5883)。该单链抗体也包括于术语抗体的"抗原 结合部分"中。也包括单链抗体的其它形式，例如双抗体。双抗体为 二价、双特异性抗体，其中VH及VL域表达于单一多肽链上，但使用
与另一^4的互补域配对并形成两个抗原结合位点(参见例如Holliger等 人(1993)尸rac. Ato/. 5W. "&4 90:6444-6448; Poljak等人(1994)
5Vra"w" 2:1121-1123)。本发明的抗体部分进一步详细描述于美国专 利第6,090，382号、第6,258,562号、第6,509,015号中，均全文引入本文
17作为参考。
结合片段由重组DNA技术或由完整免疫球蛋白的酶或化学裂解 而产生。结合片段包括Fab、 Fab'、 F(ab')2、 Fabc、 Fv、单链及单链抗 体。除了"双特异性"或"双功能"免疫球蛋白或抗体之外，应理解免疫 球蛋白或抗体具有相同的各结合位点。"双特异性"或"双功能"抗体为 具有2对不同重/轻链对及2个不同结合位点的人工杂合抗体。双特异性 抗体可由包括融合杂交瘤或连接F a b'片段的多种方法而产生。参见(例 ^口)Songsivilai禾口Lachmann, C7/".五x/ . /wmwwo/. 79:315-321 (1990); Kostelny等人,J. /w附圃/. 148， 1547-1553 (1992)。
本文使用的"保守氨基酸置换"为一个氨基酸残基被具有类似侧链 的另一氨基酸残基置换。具有类似侧链的氨基酸残基家族已在现有技 术中定义，所述侧链包括碱性侧链(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、 酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电的极性侧链(例如甘氨酸、 天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极 性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨 酸、曱疏氨酸、色氨酸)、P-分枝侧链(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨 酸)及芳族侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。
本文使用的术语"人类抗体"包括具有由人类种系免疫球蛋白序列 衍生的可变区及恒定区的抗体。例如在CDR中，尤其在CDR3中，本 发明的人类抗体可包括并非由人类种系免疫球蛋白序列编码的氨基 酸残基(例如通过体外随机或特定位点突变或通过体内体细胞突变引 起的突变)。然而，本文使用的术语"人类抗体"并非包括其中由例如小 鼠的另 一 哺乳物种的种系衍生的CDR序列已被移植于人类构架序列 上的抗体。
本文使用的术语"重组人类抗体"包括由重组方式制备、表达、产 生或分离的所有人类抗体，例如使用转染至宿主细胞(以下进一步描 述)内的重组表达载体表达的抗体；自重组、组合人类抗体库(以下进 一步描述)分离的抗体；从对于人类免疫球蛋白基因而言为转基因的 动物(例如小鼠)分离的抗体(参见例如Taylor等人(1992) A^c/. ^4c油
187 " 20:6287);或由包含将人类免疫球蛋白基因序列剪接为其它DNA 序列的任意其它方式制备、表达、产生或分离的抗体。这些重组人类 抗体具有从人类种系免疫球蛋白序列衍生的可变区及恒定区。然而，
在某些实施方案中，这些重组人类抗体经受体外突变(或当使用对于 人类Ig序列而言为转基因的动物时的体内体细胞突变)，并且因此重组 抗体的VH及VL区的氨基酸序列为当衍生自人类种系VH及VL序列且 与人类种系VH及VL序列相关时可能并非体内天然存在于人类抗体种 系所有组成部分内的序列。
本文使用的"分离的抗体"指基本上不含具有不同抗原特异性的其 它抗体的抗体(例如特异性结合hTNFot的分离的抗体基本上不含特异 性结合除hTNFa之外的抗原的抗体)。然而，特异性结合hTNFa的分 离的抗体可对例如来自其它物种(以下进一步详细描述)的TNFa分子 的其它抗原具有交叉反应性。此外，分离的抗体可基本上不含其它细 胞物质和/或化学物质。
本文使用的"中和抗体"(或"中和hTNFa活性的抗体")是指其与 hTNFa结合导致hTNFa的生物活性受抑制的抗体。此hTNFa的生物活 性的抑制可通过测定 一种或多种hTNFa生物活性指标(例如hTNFod秀 导的细胞毒性(体外或体内)、hTNFa诱导的细胞活化及hTNFa对 hTNFa受体的结合)而评估。这些hTNFa生物活性指标可通过一种或 多种现有技术中已知的若干体外或体内标准分析进行评估(参见美国 专利第6,090,382号)。优选地，抗体中和hTNFa活性的能力通过抑制 hTNFa诱导的L929细胞的细胞毒性而评估。作为hTNFa活性的其他或 替代性参数，可评估作为hTNFa诱导的细胞活化的测量值的抗体抑制 hTNFa诱导的ELAM-1在HUVEC上表达的能力。
本文使用的术语"表面等离振子共振"是指例如使用BIAcore系统 (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden and Piscataway， NJ)由检测
用的光学现象。进一步描述参见美国专利第6，258,562号的实施例1及 J6nsson等人(1993)爿朋.B/o/. C//". 51:19; J6nsson等人(1991)历她c/7m々w" 11:620-627; Johnsson等人(1995) /, Mo/. 7 ecogm7. 8:125 及Joh腿on等人(1991) 肠c/z艮198:268。
本文使用的术语"K。ff"是指抗体从抗体/抗原复合物上解离的解离
速率常数。
本文使用的术语"Kd"是指特异性抗体-抗原相互作用的解离常数。
本文使用的术语"IC5。"是指抑制目的生物终点(例如中和细胞毒性 活性)所需要的抑制剂的浓度。
本文使用的术语"核酸分子"包括DNA分子及RNA分子。核酸分子 可为单链或双链，但优选为双链DNA。
如本文关于编码结合hTNFa的抗体或抗体部分(例如VH、 VL、 CDR3)的核酸使用的术语"分离的核酸分子"是指以下核酸分子，其中 编码抗体或抗体部分的核苷酸序列不含编码结合除hTNFa之外的抗 原的抗体或抗体部分的其它核苷酸序列，其它序列可以天然地位于人 类基因组DNA中核酸的侧翼。因此，例如，编码抗hTNFa抗体的VH 区的本发明的分离的核酸不含编码结合除hTNFa之外的抗原的其它 VH区的其它序列。
本文使用的术语"载体"是指能转运另一个已连接的核酸的核酸分 子。 一种类型的载体为"质粒"，其指其他DNA片段可连接至其中的环 状双链DNA环。另一类载体为病毒载体，其中其他DNA片段可连接至 病毒基因组内。某些载体能在其导入的宿主细胞内自主复制(例如具 有细菌复制起点的细菌载体及游离型哺乳动物载体)。其它载体(例如 非游离型哺乳动物载体)可在导入宿主细胞中时而整合到宿主细胞的 基因组内，且因此随宿主基因组一起复制。此外，某些载体能将基因 表达定位于其有效连接之处。在本文中这些载体被称作"重组表达载 体"(或简称"表达载体")。 一般而言，用于重组DNA技术中的表达载体 经常以质粒形式存在。在本说明书中，"质粒"与"载体"可互换使用， 因为质粒为载体的最常用形式。然而，本发明包括表达载体的这些其 它形式，例如起等同作用的病毒载体(例如复制缺陷型反转录病毒、 腺病毒及腺伴随病毒)。本文使用的术语"重组宿主细胞"(或简称为"宿主细胞")是指已将 重组表达载体导入其中的细胞。应理解这些术语不仅是指特定受试者 细胞而且指该细胞的子代。由于在后代中因突变作用或环境影响可发 生某些改变，因此事实上该子代可能不同于亲代细胞，但仍包括于本 文中所使用的术语"宿主细胞"的范围内。
本文使用的术语''剂量"是指施用于受试者的TNF a抑制剂的量。
术语"多可变剂量"包括为治疗目的施用于受试者的TNFa抑制剂 的不同剂量。"多可变剂量方案"或"多可变剂量治疗"描述基于在整个 治疗过程中不同时间点施用不同量的TNFa抑制剂的治疗方案。在一 个实施方案中，本发明描述一种治疗腐蚀性多关节炎的多可变剂量的 方法，其包含诱导阶段及治疗阶段，其中在诱导阶段采用比治疗阶段 高的剂量施用TNFa抑制剂。多可变剂量疗法描述于PCT申请第 PCT/US05/12007号中。
本文使用的术语"给药"是指施用物质(例如抗TNFa抗体)以获得 治疗目的(例如治疗腐蚀性多关节炎)。
本文使用的术语"两周一次给药方案"、"两周一次给药"及"两周一 次施用"是指施用物质(例如抗TNFa抗体)于受试者以获得治疗目的 (例如治疗腐蚀性多关节炎)的时间进程。两周 一 次给药方案并不包括 每周一次给药方案。优选每隔9-19天、更优选每隔11-17天、甚至更优 选每隔13-15天及最优选每隔14天施用该物质。
短语"与第二药剂联合的第 一药剂"中的术语"联合"包括共同施用 第 一 药剂及第二药剂，例如其可溶解于或混合于相同的药学上可接受 的载体中，或施用第一药剂随后施用第二药剂，或施用第二药剂随后 施用第一药剂。因此，本发明包括联合治疗的方法及联合药物组合物。 在一个实施方案中，本发明提供一种用于治疗腐蚀性多关节炎的联合 疗法，其包含施用抗TNF抗体。
短语"伴随治疗"中的术语"伴随"包括在第二药剂存在下施用药 剂。伴随治疗方法包括共同施用第一、第二、第三或其他药剂的方法。 伴随治疗方法也包括在第二或其他药剂存在下施用第一或其他药剂的方法，其中该第二或其他药剂(例如)可以预先施用。伴随治疗方法 可由不同参与者逐步执行。例如， 一名参与者可将第一药剂施用于受 试者且第二参与者可将第二药剂施用于该受试者，且给药步骤可同时 或几乎同时或在不同时间进行，只要该第 一 药剂(及其他药剂)在该第 二药剂(及其他药剂)存在之后施用即可。参与者与受试者可为相同实 体(例如人)。
本文使用的术语"联合疗法"是指施用两种或两种以上的治疗物
质，例如抗TNFoc抗体及另一药物。该其它药物可在抗TNFoc抗体之前 或之后或同时施用。
本文使用的术语"试剂盒"是指包含成分的包装产品或制造物品。 该试剂盒优选包含装有试剂盒成分的盒或容器。该盒或容器附有标签 或食品药品管理局(Food and Drug Administratio)批准的协议。该盒或 容器装有优选包含于塑料、聚乙烯、聚丙烯、乙烯或丙烯容器内的本 发明的成分。这些容器可为带盖的管或瓶。试剂盒也可包括施用TNFoc 抗体或其抗原结合部分的说明。在一个实施方案中，本发明的试剂盒 包括包含人类抗体D2E7的制剂，如PCT/IB03/04502及美国申请第 10/222140号中所述。
本发明的各方面在本文中进一步详细描述。
II. TNFoc4中制齐寸
本发明提供一种治疗腐蚀性多关节炎的方法，其中施用TNFa抑 制剂例如TNFa抗体或其抗原结合部分是有益的。在一个实施方案中， 这些方法包括施用以高亲和力及低解离速率结合至人类TNFa并具有 高中和能力的分离的人类抗体或其抗原结合部分。优选地，本发明的 人类抗体为重组、中和性的人类抗hTNFa抗体。
在一个实施方案中，本发明中使用的TNFa抑制剂为抗TNFa抗体 或其片段，包括英利昔单抗(1^111化3(^@， Johnson and Johnson;描述于 美国专利第5,656，272号中，引入本文作为参考)、CDP571(人源化单抹 抗TNFotlgG4抗体)、CDP 870(人源化单株抗TNFoc抗体片段)、抗TNF
22dAb(Peptech)、 CNTO 148(格里木单抗；Medarex and Centocor，参见 WO 02/12502)及阿达木单抗(Humira⑧Abbott Laboratories,人类抗TNF mAb, US 6，090,382中描述为D2E7)。其它的可用于本发明的抗体描述 于美国专利6,593,458; 6,498,237，; 6,451,983;和6，448，380,其中每一个 专利在此引入作为参考。
本发明中使用的最优选的重组、中和抗体在本文中称作D2E7，也 称作HUMIRA⑧及阿达木单抗(D2E7 VL区的氨基酸序列显示于SEQ ID NO: l中；D2E7 VH区的氨基酸序列显示于SEQ ID NO: 2中)。 D2E7(HUMIRA⑧)的性质已描述于Salfeld等人，美国专利第6,090,382 号、第6,258，562号及第6，509,015号中，均引入本文作为参考。TNFa 抑制剂的其它实施例包括已进行治疗类风湿性关节炎的临床试验的 嵌合及人源化鼠抗hTNFa抗体(参见例如Elliott等人(1994)丄tmcW 344:1125-1 127; Elliot等人(1994)丄朋cW 344:1105-1110; Rankin等人 (1995) J. T^ewma/o/. 34:334-342)。在另一实施方案中，该抗TNFa 抗体为多价抗体。
在 一 个实施方案中，本发明的治疗腐蚀性多关节炎的方法包括施 用D2E7抗体及抗体部分、与D2E7相关的抗体及抗体部分及具有与 D2E7等同性质(例如以低解离动力学结合hTNFa的高亲和力及高中和 能力)的其它人类抗体及抗体部分。在一个实施方案中，本发明提供 一种以分离的人类抗体或其抗原结合部分治疗腐蚀性多关节炎的方 法，该分离的人类抗体或其抗原结合部分以通过表面等离振子共振测 定的lxl0—8 M或更低的Kd与lx10—3 s—i或更低的K。ff速率常数与人类 TNFa解离，并在标准体外L929分析中以lxl(T7 M或更低的ICso中和人 类TNFa细胞毒性。更优选地，该分离的人类抗体或其抗原结合部分 以5xl(T4 s"或更低的K。ff，或甚至更优选以lxl(T4 s"或更低的K。ff自人 类TNFa解离。更优选地，该分离的人类抗体或其抗原结合部分在标 准体外L929分析中以lx10—8 M或更低的IC5。，甚至更优选以lxl(T9 M 或更低的ICs。及仍更优选以lxl(T1Q M或更低的IC5。中和人类TNFa细 胞毒性。在一优选实施方案中，该抗体为分离的人类重组抗体或其抗
23原结合部分。
本领域公知抗体重链及轻链CDR3域在抗体对抗原的结合特异性/
亲和力中起重要作用。因此，在另一方面，本发明涉及施用具有与
hTNFoc相关的低解离动力学且具有结构上与D2E7相同或相关的轻链 及重链CDR3域的人类抗体治疗腐蚀性多关节炎的方法。D2E7 VL CDR3的位置9可由Ala或Thr占据而不会显著影响K。ff。因此，D2E7 VL CDR3的共同基序包含氨基酸序列Q-R-Y-N-R-A-P-Y-(T/A)(SEQ ID NO: 3)。另夕卜，D2E7 VH CDR3的位置12可由Tyr或Asn占据而不会显 著影响K。ff。因此，D2E7 VH CDR3的共同基序包含氨基酸序列 V-S-Y-L-S-T-A-S-S-L-D-(Y/N)(SEQ ID NO: 4)。此外，如美国专利第 6,090,382号的实施例2中所阐述，D2E7重链及轻链的CDR3域适合以 单一丙氨酸残基(在VL CDR3内的位置1、 4、 5、 7或8或在VH CDR3 内的位置2、 3、 4、 5、 6、 8、 9、 10或1 l)置换而不会显著影响K。仔。 另夕卜，熟练技术人员应当理解，如果D2E7 VL及VHCDR3域适合经丙 氨酸置换，则CDR3域内其它氨基酸的置换可以是可能的，同时仍保 持抗体的低解离速率常数，尤其为通过保守氨基酸置换。优选地，在 D2E7 VL和/或VH CDR3域内进行不超过1至5个保守氨基酸置换。更 优选地，在D2E7 VL和/或VH CDR3域内进行不超过1至3个保守氨基 酸置换。另外，保守氨基酸置换不应在对结合hTNFoc而言关键的氨基 酸位置上进行。D2E7 VL CDR3的位置2和5和D2E7 VH CDR3的位置1 和7看来对于与hTNFot的相互作用是关的，并且因此优选地不在这 些位置上进行保守氨基酸置换(尽管如上所述在D2E7 VL CDR3的位 置5上进行丙氨酸置换是可接受的)(参见美国专利第6,090，382号)。
因此，在另一实施方案中，本发明提供由施用分离的人类抗体或 其抗原结合部分治疗腐蚀性多关节炎的方法。该抗体或其抗原结合部 分优选地具有以下特征
a) 以如通过表面等离振子共振测定的lxl(T3 s-'或更低的K。ff速率 常数从人类TNFoc上解离；
b) 具有一个轻链CDR3域，其包含SEQ ID NO: 3的氨基酸序列或通过位置l、 4、 5、 7或8处的单一丙氨酸置换或通过位置1、 3、 4、 6、 7、 8和/或9处的l至5个保守氨基酸置换而由SEQ ID NO: 3修饰的氨基酸 序列；
c)具有一个重链CDR3域，其包含SEQIDNO: 4的氨基酸序列或通 过位置2、 3、 4、 5、 6、 8、 9、 10或1 l处的单一丙氨酸置换或通过位 置2、 3、 4、 5、 6、 8、 9、 10、 11和/或12处的1至5个保守氨基酸置换 而由SEQ ID NO: 4修饰的氨基酸序列。
更优选地，该抗体或其抗原结合部分以5 x 10—4 s—或更低的K。ff从人 类TNFot上解离。甚至更优选地，该抗体或其抗原结合部分以^10-、-1 或更低的K。ff从人类TNFoc上解离。
在另一实施方案中，本发明提供一种通过施用分离的人类抗体或 其抗原结合部分治疗腐蚀性多关节炎的方法。该抗体或其抗原结合部 分优选含有一个轻链可变区(LCVR)，其具有一个包含SEQ ID NO: 3 的氨基酸序列或通过位置l、 4、 5、 7或8处的单一丙氨酸置换而由SEQ ID NO: 3修饰的氨基酸序列的CDR3域；且含有一个重链可变区 (HCVR),其具有一个包含SEQIDNO: 4的氨基酸序列或通过位置2、 3、 4、 5、 6、 8、 9、 10或11处的单一丙氨酸置换而由SEQIDNO: 4修 饰的氨基酸序列的CDR3域。优选地，该LCVR进一步具有一个包含 SEQ ID NO: 5的氨基酸序列的CDR2域(即D2E7 VL CDR2),并且该 HCVR进一步具有一个包含SEQ ID NO: 6的氨基酸序列的CDR2域(即 D2E7 VH CDR2)。甚至更优选地，该LCVR进一步具有包含SEQ ID NO: 7的氨基酸序列的CDR1域(即D2E7 VL CDR1),并且该HCVR具有 包含SEQ ID NO: 8的氨基酸序列的CDR1域(即D2E7 VH CDR1)。 VL 的构架区优选来自VJ人类种系家族，更优选来自A20人类种系Vk基 因，且最优选来自美国专利第6，090,382号的图1 A及1B中所示的D2E7 VL构架序列。VH的构架区优选来自VH3人类种系家族，更优选来自 DP-31人类种系VH基因，且最优选来自美国专利第6,090,382号的图2A 及2B中所示的D2E7 VH构架序列。
因此，在另一实施方案中，本发明提供一种通过施用分离的人类抗体或其抗原结合部分治疗腐蚀性多关节炎的方法。该抗体或其抗原
结合部分优选地含有一个包含SEQ ID NO: l的氨基酸序列的轻链可 变区(LCVR)(即D2E7 VL)及一个包含SEQ ID NO: 2的氨基酸序列的重 链可变区(HCVR)(即D2E7 VH)。在某些实施方案中，该抗体包含一个 重链恒定区，例如IgGl、 IgG2、 IgG3、 IgG4、 IgA、 IgE、 IgM或IgD 恒定区。优选地，该重链恒定区为IgGl重链恒定区或IgG4重链恒定区。 此外，该抗体可包含一个轻链恒定区，K轻链恒定区或X轻链恒定区。 优选地，该抗体包含一个K轻《连恒定区。或者，该抗体部分可为(例 如)Fab片段或单链Fv片段。
在其它实施方案中，本发明描述一种通过施用抗TNFa抗体治疗 腐蚀性多关节炎的方法，其中该抗体为分离的人类抗体或其抗原结合
CDR3域，例如抗体或其抗原结合部分具有一个轻链可变区(LCVR), 该LCVR具有包含选自SEQ ID NO: 3、 SEQ ID NO: 11 、 SEQ ID NO: 12、 SEQ ID NO: 13、 SEQ ID NO: 14、 SEQ ID NO: 15、 SEQ ID NO: 16、 SEQ ID NO: 17、 SEQ ID NO: 18、 SEQ ID NO: 19、 SEQ ID NO: 20、 SF々IDNO:21、 SEQ ID NO: 22、 SEQ ID NO: 23、 SEQ ID NO: 24、 SEQ ID NO: 25和SEQ ID NO: 26的氨基酸序列的CDR3域；或具有一 个重链可变区(HCVR),该HCVR具有包含选自SEQIDNO:4、 SEQ ID NO: 27、 SEQ ID NO: 28、 SEQ ID NO: 29、 SEQ ID NO: 30、 SEQ ID NO: 31、 SEQ ID NO: 32、 SEQ ID NO: 33、 SEQ ID NO: 34和SEQ ID NO: 35 的氨基酸序列的CDR3域。
本发明中使用的TNFa抗体也可以是修饰的。在一些实施方案中， 该TNFa抗体或其抗原结合片段被化学修饰以提供所需的效应。例如， 本发明的抗体及抗体片段的聚乙二醇化作用可由本领域中已知的任 意聚乙二醇化反应进行，如(例如)以下参考文献中所述Focw Grow// Factor 3:4-10 (1992); EP 0 154 316;及EP 0 401 384(均全文 引入本文作为参考)。优选地，使用反应性聚乙二醇分子(或类似的反 应性水溶性聚合物)通过酰化反应或烷基化反应进行聚乙二醇化作
26用。用于本发明的抗体及抗体片段的聚乙二醇化作用的优选的水溶性 聚合物为聚乙二醇(PEG)。如本文中使用的"聚乙二醇"包括已经用来
衍生化其它蛋白质的任意形式的PEG,例如单(Cl-C10)烷氧基聚乙二
醇或芳氧基聚乙二醇。
制备本发明的聚乙二醇化抗体及抗体片段的方法通常应包括以
下步骤(a)在由此使抗体或抗体片段连接于一个或多个PEG基团的条 件下使抗体或抗体片段与例如PEG的反应性酯或醛衍生物的聚乙二 醇反应，及(b)获得反应产物。本领域技术人员应当清楚地基于已知参 数及所需结果选择最佳反应条件或酰化反应。
聚乙二醇化抗体及抗体片段通常可以用来通过施用本文中所述 的TNFa抗体及抗体片段来治疗腐蚀性多关节炎及本发明的与TNFa 相关的病症。通常与未聚乙二醇化抗体及抗体片段相比，聚乙二醇化 抗体及抗体片段的半衰期延长。聚乙二醇化抗体及抗体片段可单独使 用、 一起使用或与其它药物组合物联合使用。
在本发明的另一实施方案中，TNFa抗体或其片段可以被改变， 其中该抗体的恒定区被修饰以相对于未修饰的抗体减少至少 一种恒
定区调节的生物效应功能。为了修饰本发明的抗体从而使其显示出对 Fc受体降低的结合，可使抗体的免疫球蛋白恒定区片段在对Fc受体 (FcR)相互作用所必需的特定区突变(参见例如Canfield and Morrison (1991) J. ￡xp. M^/. 173:1483-1491;和Lund等人(1991) J. q/7mmw"o/. 147:2657-2662)。降低抗体的FcR结合力也可减少依赖于FcR相互作用 的其它效应功能，例如调理作用及吞噬作用及抗原依赖性细胞毒性。 本发明的抗体或抗体部分可以衍生化或连接于另 一功能分子(例 如另一个肽或蛋白质)。因此，本发明的抗体及抗体部分包括本文中 所述的人类抗hTNFoc抗体的衍生化及其它修饰形式，包括免疫粘附分 子。例如，本发明的抗体或抗体部分可(通过化学偶耳关、基因融合、 非共价结合或其它方式)功能性连接于一种或多种其它分子实体上， 例如另一抗体(例如双特异性抗体或双抗体)、可检测剂、细胞毒性剂、 药剂和/或可调节抗体或抗体部分与另一分子(例如《连霉抗生物素核心区或聚组氨酸标记)结合的蛋白质或肽。
一种类型的衍生化抗体通过使两种或多种(相同种类或不同种类 的)抗体交联而产生(例如产生双特异性抗体)。适当的交联剂包括具有 由适当间隔基分开的两种不同反应性基团的异双功能交联剂(例如间-马来酰亚胺基苯曱酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯)或同双功能交联剂(例
如辛二酸二琥銷酰亚胺酯)。这些交Jf关剂购自Pierce Chemical Company, Rockford, IL。
括荧光化合物。示例性荧光可检测剂包括荧光素、荧光素异硫氰酸酯、 罗丹明、5-二曱胺-l-萘磺酰氯、藻红蛋白等。也可以诸如碱性磷酸酶、 辣根过氧化物酶、葡萄糖氧化物酶等可检测酶使抗体衍生化。当用可 检测酶j吏抗体衍生化时，通过添加该酶用其来生成可检测反应产物的 其他试剂进行检测。例如，当存在可检测剂辣根过氧化物酶时，添加 过氧化氢及二氨基联苯胺导致生成可检测的有色反应产物。也可采用 生物素使抗体衍生化，并通过间接测量抗生物素蛋白或链霉抗生物素 的结合进行检测。
本发明的抗体或抗体部分可通过在宿主细胞中重组表达免疫J求 蛋白轻链及重链基因而制备。为重组表达抗体，用一种或多种携带编 码抗体的免疫球蛋白轻链及重链的DNA片段的重组表达载体转染宿 主细胞，使得轻链及重链在宿主细胞内表达并且优选地分泌至培养宿 主细胞的培养基中，抗体可自该培养基回收。标准重组DNA方法用来 获得抗体重链及轻链基因，将这些基因引入重组表达载体中，并且将 这些载体导入宿主细月包内，例如Sambrook、 Fritsch及Maniatis(编)， M /ecw/ar C7om>2g，' ^ La6or<a/or_y M^歷a/， Cold Spring Harbor,
N.Y., (1989)， Ausubel等人(编)Cw/rewf尸ratoco/s M /ecw/ar Greene Publishing Associates, (1989)及Boss等人的美国专利第 4,816,397号中所述的那些标准重组DNA方法。
为表达D2E7或与D2E7相关的抗体，首先获得编码轻链及重链可 变区的DNA片段。这些DNA可通过使用聚合酶链反应(PCR)扩增及修饰种系轻链及重链可变序列而获得。人类重链及轻链可变区基因的种
系DNA序列在本领域中已知(参见例如"Vbase"人类种系序列数据库； 也参见Kabat等人(1991) Se《we"ce51 iVc^e/"s o/ /wmwwo/og/ca/ /"&r賊第5版，U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication第91-3242号；Tomli励n等人(1992)"The Repertoire of Human Germline VH Sequences Reveals about Fifty Groups of VH Segments with Different Hypervariable Loops "乂 A/o/. 227:776-798;及Cox等人(1994)"A Directory of Human Germ-line V78 Segments Reveals a Strong Bias in their Usage"五wr /wwwwo/. 24:827-836;其内容均引入本文作为参考)。为获得编码D2E7或与D2E7 相关的抗体的重链可变区的DNA片段，通过标准PCR扩增人类种系 VH基因的VH3家族成员。最优选地，扩增DP-31 VH种系序列。为获
准PCR扩增人类种系VL基因的VKl家族成员。最优选地，扩增A20VL 种系序列。适用于扩增DP-31种系VH及A20种系VL序列的PCR引物可 基于先前引用的文献中所揭示的核苷酸序列使用标准方法进行设计。 一旦获得种系VH及VL片段，则可使这些序列突变以编码本文中 所揭示的D2E7或与D2E7相关的氨基酸序列。首先将由种系VH及VL DNA序列编码的氨基酸序列与D2E7或与D2E7相关的VH及VL氨基酸 序列比较以鉴定与种系不同的D2E7或与D2E7相关的序列中的氨基酸 残基。随后，使用遗传密码测定应进行哪些核苷酸改变， -使种系DNA 序列的适当核苷酸突变，从而使突变的种系序列编码D2E7或与D2E7 相关的氨基酸序列。种系序列的诱变通过例如PCR介导的突变(其中突 变的核普酸引入PCR引物中，使得PCR产物含有该突变)或定点诱变的 标准方法进^亍。
一旦(如上所述通过种系VH和VL基因的扩增及诱变)获得编码 D2E7或与D2E7相关的VH和VL片段的DNA片段，则这些DNA片段可 通过标准重组DNA技术进一步操作，例如使可变区基因转变为全长抗 体链基因、Fab片段基因或scFv基因。在这些操作中，编码VL或VH的DNA片段有效连接于编码另 一种蛋白质例如抗体恒定区或柔性连接
体的另 一种DNA片段。如本发明内容中所使用的术语"有效连接"意思 是使两个DNA片段连接，使得由这两个DNA片段编码的氨基酸序列保 持在框内。
一编码重链恒定区(CH1 、 CH2及CH3)的DNA分子而转变为全长重链 基因。人类重链恒定区基因的序列在本领域中已知(参见例如Kabat等 人(1 991) S，/ewce^ q/'/Vo/e/.m' q/'/〃，丽o/og/c'a/ /"Z6Te仏 #5應,U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No.
链恒定区可为IgGl、 IgG2、 IgG3、 IgG4、 IgA、 IgE、 IgM或IgD恒定 区，但最优选为IgGl或IgG4恒定区。对于Fab片段重链基因而言，编 码VH的DNA可有效连接于另 一仅编码重4连CH1恒定区的DNA分子。
编码轻链恒定区(CL)的DN A分子而转变为全长轻链基因(以及Fab轻 链基因)。人类轻链恒定区基因的序列在本领域中已知(参见例如Kabat 等人(1991) 、S^wewtw q/7Vo/67'"5 /7/w" w冊/og/c'rt/ /"&rw/， U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No.
链恒定区可为K或X恒定区，但最优选为K恒定区。
为得到scFv基因，将编码VH及VL的DNA片段有效连接于另 一编 码柔性连接体(例如编码氨基酸序列(Gly4-Ser)3)的片段，使得VH及VL 序列可表达为相邻的单链蛋白，且VL及VH区由柔性连接体连接(参见 例如Bird等人(1988) 5"c'/誕r 242:423-426; Huston等人(1988)尸亂 ;V"〃. /k'"d OS」85:5879-5883; McCafferty等人，AWw^ (1990) 348:552-554)。
为表达本发明的抗体或抗体部分，将如上所述获得的编码部分或 全长轻链及重链的DNA插入表达载体内，使得这些基因有效连接于转 录及翻译控制序列。在本发明内容中，术语"有效连接"意思是将抗体
30基因连接至载体内使得载体内的转录及翻译控制序列起调节抗体基 因的转录及翻译的预期功能。选择表达载体及表达控制序列以使其可 与所使用的表达宿主细胞相容。可将抗体轻链基因及抗体重链基因插 入各自载体中，或更通常地将两种基因均插入相同表达载体中。通过 标准方法(例如连接抗体基因片段和载体上的互补限制性位点，或者 若不存在限制性位点则钝端连接)将抗体基因插入表达载体中。在插
入D2E7或与D2E7相关的轻链或重链序列之前，该表达载体可以已经 携带抗体恒定区序列。例如， 一种使D2E7或与D2E7相关的VH及VL 序列转变为全长抗体基因的方法是将其分别插入已编码重链恒定区 及轻链恒定区的表达载体中，使得VH片段有效连接于该载体内的CH 片段且VL片段有效连接于该载体内的CL片段。另外或者可替代地， 重组表达载体可编码促进抗体链从宿主细胞中分泌的信号肽。可将抗
末端。信号肽可以是免疫球蛋白信号肽或异源信号肽(即来自非免疫 球蛋白的信号肽)。
除抗体链基因之外，本发明的重组表达载体携带控制抗体链基因 在宿主细胞内表达的调节序列。术语"调节序列"意思是包括控制抗体 链基因转录或翻译的启动子、增强子及其它表达控制组件(例如聚腺 苷酸化信号)。这些调节序列描述于(例如)Goeddel; G^we五xpm^,》w rec/mo/ogy.. Me/Aod^ ￡>zz_ymo/c>g_y 185， Academic Press, San Diego， CA (1990)中。熟练技术人员应当了解包括选择调节序列的表达载体 的设计可取决于例如待转化的宿主细胞的选择、所需的蛋白质表达水 平等因素。用于哺乳动物宿主细胞表达的优选调节序列包括在哺乳动 物细胞内引导高水平蛋白质表达的病毒组件，例如由以下病毒衍生的 启动子和/或增强子巨细胞病毒(CMV)(例如CMV启动子/增强子)、 猿猴病毒40(SV40)(例如SV40启动子/增强子)、腺病毒(例如腺病毒主 要晚期启动子(AdMLP))及多瘤病毒。关于病毒调节组件及其序列的进 一步描述，参见例如Stinski的美国专利第5,168,062号、Bell等人的美 国专利第4,510,245号及Schaffner等人的美国专利第4，968,615号。除抗体链基因及调节序列之外，本发明的重组表达载体可携带其 他序列，例如调节载体在宿主细胞内复制的序列(例如复制起点)及选 择性标记基因。选择性标记基因有助于选择已导入载体的宿主细胞
(参见例如均为Axel等人的美国专利第4,399，216号、第4,634,665号及 第5,179,017号)。例如，通常选择性标记基因赋予已导入载体的宿主 细胞对例如G418、潮霉素或氨曱喋呤的药物的抗性。优选的可选择标 记基因包括二氢叶酸还原酶(DHFR)基因(用氨曱喋呤选择/扩增在 dhfr-宿主细胞中使用)及" 基因(用于G418选择)。
为表达轻链及重链，由标准技术将编码重链及轻链的表达载体转 染至宿主细胞内。术语"转染"的各种形式包括通常用于将外源DNA导 入原核或真核宿主细胞的大量技术，例如电穿孔、磷酸钙沉淀、DEAE-葡聚糖转染等。尽管在原核或真核宿主细胞内表达本发明的抗体在理 论上是可能的，然而抗体最优选地在真核细胞中表达，最优选地在哺 乳动物宿主细胞内表达，因为这些真核细胞、尤其哺乳动物细胞比原 核细胞更有可能组装且分泌适当折叠的免疫活性抗体。已报导抗体基 因的原核表达对于活性抗体的高产量生产无效(Boss和Wood (1985) 7b(i(2少6:12-13)。
优选用于表达本发明的重组抗体的哺乳动物宿主细胞包括中国 仓鼠卵巢(CHO细胞)(包括dhfr-CHO细胞，描述于Urlaub和Chasin， (1980) ZVoc. Wa".」c^/. Sc/. OS^ 77:4216-4220,与DHFR选择性标记 一起使用，例如，如Kaufman和Sharp (1982) Mo/. 5/。/. 159:601-621中 所述)、NS0骨髓瘤细胞、COS纟田胞及SP2纟田月包。当将编码抗体基因的 重组表达载体导入哺乳动物宿主细胞时，通过培养宿主细胞足以-使抗 体在宿主细胞内表达或更优选地4吏抗体分泌至宿主细胞于其中生长 的培养基内的 一 段时间来产生抗体。抗体可使用标准蛋白质纯化方法 从培养基中回收。
宿主细胞也可用于产生完整抗体的部分，例如Fab片段或scFv分 子。应了解以上程序的变化在本发明的范围内。例如，可能期望用编 码本发明的抗体的轻链或重链(但并非两者)的DNA转染宿主细胞。也结合hTNFcc并非必需的轻链及重 链的任一个或两者的一些或全部DNA。由这些经截短DNA分子表达的 分子也包含于本发明的抗体中。此外，可通过标准化学交联方法使本 发明的抗体与第二抗体交联产生双抗体，其中 一条重链及一条轻链为 本发明的抗体且另 一条重链及轻链对除hTNFoc之外的抗原具有特异 性。
在用于重组表达本发明的抗体或其抗原结合部分的优选系统中， 通过磷酸《丐介导的转染将编码抗体重链与抗体轻链的重组表达载体 导入dhfr-CHO细胞。在重组表达载体内，抗体重链及轻链基因各自有 效连接于CMV增强子/AdMLP启动子调节组件以驱动高水平的基因转 录。重组表达载体也携带DHFR基因，其允许选择已使用氨曱喋呤选 择/扩增用载体转染的C H O细胞。培养选择后的转化抹宿主细胞以表 达抗体重链及轻链并且从培养基中回收完整抗体。使用标准分子生物 学技术制备重组表达载体、转染宿主细胞、选择转化抹、培养宿主细 胞并且从培养基中回收抗体。
除本文中所揭示的D2E7或其抗原结合部分或与D2E7相关的抗体 之外的本发明的重组人类抗体可通过筛选使用由衍生自人类淋巴细 胞的mRNA制备的人类VL及VH cDNA制备的重组组合抗体库、优选 scFv噬菌体展示库而分离。制备及筛选这些库的方法在本领域中已 知。除商业上可购得的用于产生噬菌体展示库的试剂盒(例如 Pharmacia i ecow6z7 awf尸/zage ^4w/7'Z)o^v 5ys/ew， 目录号27-9400匿01;及 StratageneS^/Z4尸TM噬菌体展示试剂盒，目录号240612)之外，尤其适 用于产生及筛选抗体展示库的方法及试剂的实例可发现于(例 如)Ladner等人美国专利第5,223,409号；Kang等人PCT公开第WO 92/18619号；Dower等人PCT公开第WO 91/17271号；Winter等人PCT 公开第WO 92/20791号；Markland等人PCT公开第WO 92/15679号； Breitling等人PCT公开第WO 93/01288号；McCafferty等人PCT公开第 WO 92/01047号；Garrard等人PCT公开第WO 92/09690号；Fuchs等人 (1991) Bz'o/r"'/mo/ogj 9:1370-1372; Hay等人(1992) //ww爿""7wJ
33/fy6nWo^w 3:81-85;Huse等人(1989) Sc/e"ce 246:1275-1281; McCafferty等人，A^^" (1990) 348:552-554; Griffiths等人(1993) ￡M5<9 / 12:725-734; Hawkins等人(1992) J Mo/ 历o/ 226:889画896;Clackson等人(1991) 352:624-628; Gram等人(1992)
尸vV^S 89:3576-3580; Garrard等人(l 991)肠/rec/z"o/， 9:1373國1377; Hoogenboom等人(1991) tVmc爿czW Wm 19:4133-4137;及Barbas等人 (1991) /WAS* 88:7978-7982中。
在一个优选实施方案中，为分离对hTNFa具有高亲和力及低解离 速率常数的人类抗体，首先使用Hoogenboom等人，PCT公开第WO 93/06213号中所述的表位印记方法使用对hTNFa具有高亲和力及低解 离速率常数的鼠抗hTNFa抗体(例如MAK 195,登录号为ECACC 87 050801的杂交瘤)选择对hTNFa具有类似结合活性的人类重链及轻链 序列。此方法中所使用的抗体库优选为如McCafferty等人，PCT公开 第WO 92/01047号、McCafferty等人，iVWw" (1990) 348:552-554及 Griffiths等人，(1993)五A^(9J12:725-734中所述制备并筛查的scFv库。 scFv抗体库优选地使用重组人类TNFoc作为抗原进行筛查。
一旦选择初始人类VL及VH片段，则进行"混合及匹配"试验(其中 筛选不同对的初始选择的VL及VH片段用于hTNFoc结合)，以选择优选 的VL/VH对组合。另外，为了进一步改善对hTNFa结合的亲和力和/ 或降低对hTNFa结合的解离速率常数，优选的VL/VH对的VL及VH片 段可在类似于天然免疫应答过程中引起抗体亲和力成熟的体内体细 胞突变过程的过程中随机突变，优选地在VH和/或VL的CDR3域内突 变。该体外亲和力成熟可使用分别与VH CDR3或VL CDR3互补的PCR 引物通过扩增VH及VL区实现，这些引物已采用四种核苷酸碱基的随 机混合物在特定位置"刺突"(spike),使得产生的PCR产物编码VH 及VL片段，其中随机突变作用已被导入VH和/或VL CDR3域。可再次 筛选用于结合hTNFa的这些随机突变的VH及VL片段，并且可以选择 显示对于hTNFa结合而言高亲和力及低解离速率的序列。
从重组免疫球蛋白展示库筛选并分离本发明的抗hTNFa抗体之
34后，可从展示包装(例如从噬菌体基因组)回收编码选择的抗体的核酸，
并通过标准重组DNA技术亚克隆到其它表达载体中。如果需要，可以
将核酸进一步操作，以产生本发明的其它抗体形式(例如连接于编码 例如其他恒定区的其他免疫球蛋白域的核酸)。如以上进一步详细描 述的，为了表达通过筛选组合文库而分离的重组人类抗体，将编码抗
体的DNA克隆到重组表达载体中，并导入哺乳动物宿主细胞。
分离对hTNFot具有高亲和力及低解离速率常数的人类抗体的方
法也描述于美国专利第6,090,382号、第6，258,562号及第6，509，015号
中，均引入本文作为参考。
该TNFa抑制剂也可以为TNF融合蛋白，例如依那西普(Enbrel ,
Amgen;描述于WO 91/03553及WO 09/406476中，引入本文作为参考)。
在另一实施方案中，该TNFa抑制剂为重组TNF结合蛋白
(r隱TBP-I)(Serono)。
III.腐蚀性多关节炎的治疗
本发明提供治疗腐蚀性多关节炎的方法，包括将包含例如TNFct 抗体的TNFa抑制剂施用于患有腐烛性多关节炎的受试者。本发明也 描述确定TNFa抑制剂治疗腐蚀性多关节炎的功效的方法。优选地， 该TNFa为人类TNFa,并且该受试者为人类受试者。在一个实施方案 中，该TNFa抑制剂为阿达木单抗，也称作HUMIRA⑧或D2E7。下文 进一步描述利用包含抗体及抗体部分的TNFa抑制剂治疗腐蚀性多关 节炎的用途以及确定TNFa抑制剂治疗腐蚀性多关节炎的功效的方 法。
术语"多关节炎"通常是指在受试者的两个或两个以上关节处的炎 症，即肿胀、压痛或发热。
本文使用的术语"腐蚀性多关节炎"是指受试者所患的对关节造成 损伤的多关节炎。
本发明提供一种治疗腐蚀性多关节炎的方法，包括施用包含例如 TNFa抗体的TNFoc抑制剂。本发明也提供一种抑制与腐蚀性多关节炎
35相关的关节疾病的放射照相进展的方法。下文更详细地描述施用 TNFOC抗体或其抗原结合部分用于治疗腐蚀性多关节炎的方法。
本发明提供 一 种确定抗TNF a治疗腐蚀性多关节炎的功效的方 法。测定该功效的测量包括测定治疗后关节破坏或腐蚀是否改善的试 验。例如，可以利用受试者的改良总Sharp评分(mTSS)测定受试者体 内腐蚀性多关节炎的改善。也可以利用mTSS作为确定治疗腐蚀性多 关节炎的功效的分析。
Sharp评分为通过骨腐蚀及关节间隙狭窄评估的总关节损伤的变 化的x射线测量值(Sharp等人(1971) ^W/z〃'to &施w扁"扁14:706; Sharp等人(1985) J〃/7〃'^ cfe跑w腿"扁28:16)。 mTSS为基于评估患 者的手及足的x射线对关节损伤程度及严重性的测量值。针对关节腐 蚀与关节间隙狭窄对关节评分。mTSS为腐蚀评分(ES)与关节间隙狭 窄(JSN)评分的和，例如范围为约0至约398，其中0=无损伤。ES为对 46个关节收集的关节评分的和，范围例如为约0至约230。 JSN为对42 个关节收集的关节评分的和，范围为例如约0至约168。评分O表示无 变化。在本发明的一个实施方案中，mTSS通过结合范围为约0-192的 关节间隙狹窄评分及范围为约0-378的腐蚀评分而确定。
mTSS改善或不变证明TNFot抑制剂对治疗腐蚀性多关节炎有效。 在一个实施方案中，关节疾病未进展证明TNFa抑制剂治疗腐蚀性多 关节炎的功效，例如在患有腐蚀性多关节炎的受试者体内随着时间推 移Sharp评分、mTSS不变。在另一实施方案中，关节疾病的放射线进 展降低证明TNFot抑制剂治疗腐蚀性多关节炎的功效，例如在患有腐 蚀性多关节炎的受试者体内随着时间推移Sharp评分、mTSS降低。
在一个实施方案中，基线与用TNF a抑制剂治疗之后 一 段时间之 间mTSS的总变化^7约0.9与约-0.2。在另一实施方案中，基线与用 TNFa抑制剂治疗之后一段时间之间mTSS的总变化为约0.5与约-0.2。 在另一实施方案中，基线与用TNF a抑制剂治疗之后 一 段时间之间 mTSS的总变化为约0.2与约-0.2。
应注意到上述评分中间的范围(例如约-0.1至约0.3)也预期为本发明的一部分。例如，预期包括使用任意上述数值的组合作为上限和/ 或下限的数值范围。
虽然以抗炎症药剂治疗炎性疾病在治疗后可得到临床改善，但是
仍会存在由腐蚀性多关节炎引起的进行性关节损伤(Gladman等人 (1990) J脸w顧/c/ 17:809; Hanly等人(1988;Mw"/ze画D/"7:386)。 因此，本发明的一个特征为提供一种治疗可与另一病症相关的腐蚀性 多关节炎的方法。在一个优选实施方案中，本发明包括治疗与包括但 不限于以下病症的TNFoc活性为有害的病症相关的腐蚀性多关节炎 类风湿性关节炎(包括幼年型类风湿性关节炎)、克罗恩病、牛皮癣、 牛皮癣性关节炎和强直性脊柱炎。腐蚀性多关节炎也可与多中心网状 组织细胞增多症(MRH)相关(Santilli等人(2002)」朋We/zww ZXs 61: 485)。
本文使用的术语"TNFot活性为有害的病症"包括其中患有病症的 受试者体内TNFa的存在已显示为或怀疑为造成病症的病理生理学原 因或导致病症恶化的因素的疾病及其它病症。因此，TNFoc活性为有 害的病症为预期抑制TN F a活性可减轻其病症的症状和/或进展的病 症。这些病症可以(例如)由可(例如)使用如上所述抗TNFa抗体检测的 患有病症受试者的生物流体内TNFa浓度增加(例如受试者的血清、血 浆、滑液等中TNFa浓度增加)而证实。存在大量TNFa活性为有害的 病症的实例。下文进一步"i仑述利用TNFa抑制剂治疗与特定病症相关 的腐蚀性多关节炎的用途
A.自身免疫疾病
在一个实施方案中，本发明包括治疗与自身免疫疾病相关的腐蚀 性多关节炎。在患有包括例如类风湿性关节炎及幼年型类风湿性关节 炎的关节炎形式的自身免疫疾病的患者中可发现腐蚀性多关节炎 (Verloes (1998)她d G潔r 35:943)。
例如阿达木单抗的TNFa抗体可用于治疗自身免疫疾病，尤其是 与腐蚀性多关节炎相关的那些自身免疫疾病。这些自身免疫疾病的实 例包括类风湿性关节炎、类风湿性脊推炎、骨关节炎及痛风关节炎、变态反应、多发性硬化症、自身免疫糖尿病、自身免疫葡萄膜炎及肾 病综合征。自身免疫疾病的其它实例包括多系统自身免疫疾病和自身
免疫听觉丧失。自身免疫疾病的其它实例描述于美国申请第10/622932 号中，引入本文作为参考。 幼年型类风湿性关节炎
病理生理学有关(Grom等人(1996) y^A〃'^ W/zewm. 39:1703; M""gge等 人(1995) ^W/zn'^ W/zewm. 8:211)。在一个实施方案中，本发明的TNFa 抗体用于治疗幼年型类风湿性关节炎。
本文使用的术语"幼年型类风湿性关节炎"或"JRA"是指发生在16 岁之前可导致关节或结締组织损伤的慢性、炎性疾病。JRA也被称作 幼年型慢性多关节炎和Still病。
JRA在16岁或更小的儿童体内导致关节炎症及僵硬6周以上。炎症 导致关节发红、肿胀、发热及疼痛。任意关节均可受影响，并且炎症 可限制受影响关节的移动性。 一种类型的JRA也可影响内脏器官。
通常由所涉及的关节数、症状及由血液检测所发现的某些抗体的 存在与否将JRA分为三类。这种分类有助于医生判定疾病如何发展及 内脏器官或皮肤是否受影响。JRA的分类包括以下
a. 少关节型JRA,其中患者有4个或少于4个关节受影响。少关节 型为最常见的JRA形式，通常影响大关节，例如膝。
b. 多关节型HRA,其中5个或5个以上关节受影响。最常涉及小 关节，例如手及足中的那些小关节，但该疾病也可影响大关节。
c. 全身型JRA，其特征在于关节肿胀、发烧、轻度皮渗，也可影 响内脏器官，例如心脏、肝脏、脾及'淋巴结。全身型JRA也称作Still 病。这些儿童中的一小部分在多个关节发展关节炎并且可能患有持续 至成人的严重关节炎。
B.脊推关节病
在一个实施方案中，本发明包括治疗与脊推关节病相关的腐蚀性 多关节炎。在患有例如与有害的TNFot活性相关的脊推关节病的炎性
38疾病的患者中可发现腐蚀性多关节炎(参见例如Moeller等人(1990) C>toA:/"e 2:162;美国专利第5,231，024号；欧洲专利申请第260 610号)。
本文使用的术语"脊推关节病"用来指几种影响脊关节的疾病的任 意一种，其中这些疾病有同样的普通临床、放射学及组织学特征。许 多脊推关节病有同样的遗传特征，即其与HLA-B27等位基因相关。在 一个实施方案中，术语脊推关节病除用来指强直性脊柱炎以外，还指 几种影响脊关节的疾病的任意一种，其中这些疾病有同样的普通临 床、放射学及组织学特征。脊推关节病的实例包括强直性脊柱炎、牛 皮癣性关节炎/脊推炎、肠道性关节炎、反应性关节炎或Reiter综合征 和未分化型脊推关节病。用于研究脊推关节病的动物模型的实例包括 朋M7"々转基因小鼠、HLA-B27转基因大鼠(参见Taurog等人(199 8) 77ze 6"/ cw^y/aW/z〃77'(^. Oxford:Oxford University Press)。
处于患脊推关节病的风险中的受试者的实例包括患有关节炎的
在本发明的一实施方案中，TNFa抑制剂用于治疗患有与腐蚀性多关 节炎相关的脊推关节病的受试者。可用TNFa抑制剂治疗的脊推关节 病的实例描述如下 强直性脊柱炎(AS)
在一个实施方案中，本发明包括使用TNFa抗体或其抗原结合部分 治疗与强直性脊柱炎相关的腐蚀性多关节炎。肿瘤坏死因子与强直性 脊4主炎的病j里生^里学有关(参见Verjans等人(1991) ^4w/^z7^尺/zeww. 34:486;Verjans等人(1994) C7," ￡xp/mm""o/. 97:45;Kaijtzel等人(1999) //mw /wwm"o/. 60:140)。强直性脊柱炎(AS)为包括一处或多处推骨炎 症的炎性病症。AS为影响包括脊骨的推骨与骶髂关节之间的关节及脊 骨与骨盆之间的关节的轴向骨骼和/或周边关节的慢性炎性疾病。AS 最终可导致受影响的推骨融合或生长在一起。包括AS的脊推关节病可 与牛皮癣性关节炎(PsA)和/或包括溃疡性结肠炎及克罗恩病的炎性肠 病(IBD)相关。
AS的早期表现可通过包括CT扫描及MRI扫描在内的放射线检测来确定。AS的早期表现通常包括scroiliitis以及骶髂关节变化，这由软 骨下骨的皮质边缘模糊，随后腐蚀及硬化而证实。疲劳也已被看作AS 的常见症状(Duffy等人(2002)」C7 ^m "a/ Sc/e"^/ c Mee""g摘要)。
牛皮癣性关节炎
在一个实施方案中，本发明包括使用TNFa抗体或其抗原结合部分
癣性关节炎(PsA)的病理生理学有关(Partsch等人(1998)力""W/zeww 57:691 ;Ritchlin等人(1998) J7 /zew/7 a^/. 25:1544)。 ^口本文中/斤才旨 的牛皮癣性TNFa与类风湿性关节炎的活化组织炎症有关，并且导致 关节破坏(参见例如Moeller， A.等人(1990) Cy^,"e 2:162-169; Moeller 等人的美国专利第5,231,024号;Moeller, A.的欧洲专利申请第260 610 Bl号;Tracey和Cerami，同上;Arend, W.P.及Dayer， J-M. (1995) ^r仇 W/7eww. 38:151-160;Fava， R.A.等人(1993) C/,", ￡xp. /www"o/. 94:261 -266)。 TNFoc也与促进糖尿病中的胰岛细胞死亡及调节胰岛素 抗性有关(参见例如Tracey及Cerami，同上；PCT公开第WO 94/08609 号)。TNFa也与多发性硬化症中的介导对少突胶质细胞的细胞毒性及 诱导炎性斑块有关(参见例如Tracey及Cerami,同上)。已对嵌合及人源 化鼠抗hTNF a抗体进行了治疗类风湿性关节炎的临床试验(参见例如 Elliott, M丄等人(1994)丄露"344:1125-1127;Elliot， M丄等人(1994) 344:1105-1110;Rankin， E.C.等人(1995) B广乂 i /zewwa/o/, 34:334-342)。
牛皮癣性关节炎是指与牛皮癣(一种在身体上导致红斑的常见慢 性皮肤病)相关的慢性炎性关节炎。20名牛皮癣患者中约有1人将发展 伴随有皮肤病的关节炎，并且在约75%的情况中，牛皮癣早于关节炎 发生。PsA本身以多种方式表现，从轻微关节炎至严重关节炎，其中 该关节炎通常影响手指及脊骨。当脊骨受影响时，症状与如上所述的 强直性脊柱炎的那些症状类似。TNFa抗体或其抗原结合片段可用于 治疗与PsA相关的腐蚀性多关节炎。
40PSA有时与关节残毁相关。关节残毁是指以过量骨腐蚀导致损坏 关节的全部腐蚀性畸形为特征的病症。
PsA的特征性放射线特征包括关节腐蚀、关节间隙狭窄、包括关
节周围及骨体骨膜炎的骨增生、包括"铅笔帽"畸形和肢端骨质溶解的
骨质溶解、关节强直、骨刺形成及脊推炎(Wassenberg等人(2001) Z i^ewwa o/ 60:156)。与类风湿性关节炎(RA)不同，PsA中的关节涉及 通常为不对称的且可为寡关节的；骨质疏松症为非典型的。尽管早期 PsA中的腐蚀性变化与RA中的腐蚀性变化一样在边缘出现，然而其随 着疾病进展由于靠近腐蚀处的骨膜骨形成而变得不规则且不正常界 定。在严重的情况中，腐蚀性变化可发展为形成铅笔帽畸形或全部骨 质溶解(Gold等人(1988) TW/o/ C7/" WoW/z Jw 26:1195; Resnick等人 (1977) J C鼎J^oc / "AW 28:187)。不对称腐蚀在腕骨内及在手的掌部 指骨(MCP)、近端指骨之间(PIP)及远侧指骨之间(DIP)关节内通过放射 线可见，但DIP关节通常先受影响。在指骨丛及在腱及韧带与骨的连
放射结果以支持PsA诊断。另外，手趋向于涉及比足高得多的频率， 两者的比率接近2:1。
脊推关节病的其它实例描述于美国申请第10/622932号中，引入本 文作为参考。
C.皮肤及指曱病症
在一个实施方案中，本发明包括治疗与皮肤及指甲病症相关的腐 蚀性多关节炎。本文使用的术语"TNFa活性为有害的皮肤及指甲病症 "包括其中患有病症的受试者体内TNFa的存在已显示为或怀疑为造 成病症的病理生理学的原因或导致病症恶化的因素的皮肤和/或指甲 病症及其它病症，例如牛皮癣。因此，TNFa活性为有害的皮肤及指 曱病症为预期抑制TNFa活性可减轻病症的症状和/或进展的病症。下 文中进一 步论述利用抗体、抗体部分或其它TNFa抑制剂治疗特定皮 肤及指甲病症的用途。在某些实施方案中，将本发明的抗体、抗体部 分或其它TNFa抑制剂与如下文中所述的另 一 治疗剂联合施用于受试者。在一个实施方案中，将TNFoc抗体与另一治疗剂联合施用于受试
者，用于治疗与牛皮癣相关的腐蚀性多关节炎以及治疗与关节炎相关
的牛皮癣。 牛皮癣
肺瘤坏死因子与牛皮癣的病理生理学有关(Takematsu等人(1989) 」rc/z Der腿/0/ to. 281:398; Victor及Gottlieb (2002) Z)er應to/. 1(3):264)。牛皮癣被描述为皮肤炎症(刺激及发红)，其特征为经常伴 随有皮肤发红、发痒及厚干银色鳞屑。具体地说，形成的病变涉及在 表皮增生、皮肤炎性应答及例如淋巴因子和炎性因子的调节分子的表 达中的初级及次级改变。牛皮癣性皮肤的形态学特征为表皮细胞更换 增加、表皮变厚、异常角质化、炎性细胞渗透至表皮及多形核白细胞 及淋巴细胞渗透至表皮层导致基底细胞循环增加。牛皮癣通常涉及指 甲，其常常显示为凹陷、指曱分离、变厚及变色。牛皮癣通常与例如 关节炎(包括类风湿性关节炎)、炎性肠病(IBD)及克罗恩病的其它炎性 病症相关。
虽然牛皮癣的迹象最常见于躯干、肘、膝、头皮、皮褶或手指甲 上，但其可影响皮肤的任意或所有部分。通常，新皮肤细胞自底层向 上移至表面需要约一个月。在牛皮癣中，此过程仅需要几天，从而导 致死皮细胞叠加和厚鳞屑的形成。牛皮癣的症状包括覆盖有银色鳞 屑的干或红皮肤斑、可裂开及变疼并且通常在肘、膝、躯干、头皮及 手上呈杂绿色的皮肤凸斑伴有红色边界；包括脓疮的皮肤病变、皮肤痛。
牛皮癣的治疗通常包括局部施用皮质类固醇、维生素D类似物及 局部施用或口服类视色素或其组合。在一个实施方案中，本发明的 TNFa抑制剂以与这些常用治疗之一组合的形式或在这些常用治疗之 一存在下施用。也可与TNFa抑制剂组合用于治疗牛皮癣的其他治疗 剂在下文中更详细地描述。
牛皮癣的诊断通常基于皮肤外观。另外可需要皮肤活组织检查或
42皮肤斑的碎屑或培养物以排除其它皮肤病症。若关节疼痛存在并持续 存在，则可用X射线检查牛皮癣性关节炎。
在本发明的一个实施方案中，TNFa抑制剂用于治疗牛皮癣，包 括慢性斑状牛皮癣、点状牛皮裤、反式牛皮癣、脓疱型牛皮癣、寻常 天疱疮、红皮症型牛皮癣、与炎性肠病(IBD)相关的牛皮癣及与类风 湿性关节炎(RA)相关的牛皮癣。本发明治疗方法中包括的特定类型的 牛皮癣包括慢性斑状牛皮癣、点状牛皮癣、反式牛皮癣和脓疱型牛皮 癣。牛皮癣及其它类型的皮肤及指甲病症的其它实例描述于美国申请 第10/622932号，引入本文作为参考。
确定TNFa抑制剂治疗与TNFa活性为有害的病症相关的腐蚀性 多关节炎的功效的方法包括测量包括关节间隙狭窄和/或关节腐蚀的 关节毁坏程度的任一分析。在一个实施方案中，使用放射线照相术测 量关节毁坏。这些分析可通过测定在以TN F a抑制剂治疗的受试者或 患者群体中是否得到改善而用于检查TNFa抑制剂的功效。 一般而言， 通过比较以TNFa抑制剂治疗之前测定的评分基线与以TNFa抑制剂 治疗之后的时间测定的评分，来确定改善状况。
关节炎疾病(例如Ra、 PsA及JRA)的其他改善可以通过测定ACR应 答来确定。例如ACR20、 ACR50、 ACR70的ACR阈值可用于定义RA 及PsA的改善，并且显示7种疾病活性测量值的改善百分比。标准包括 脆弱及肿胀关节计数的改善百分比及以下至少3种标准的改善患者 疼痛评估、患者整体评估、医生整体评估、患者自我评估失能或疾病 活性(即红细胞沉降速率或C反应蛋白水平)的实验室测量值(Felson等 人(1993)JW/zW^ / /zaw. 36(6):729)。
其它用于测定针对治疗RA、 JRA及PsA的特定疗法的改善的分析 包括EULAR反应、DAS评分、FACIT-F、 HAQ评分及SJC和/或TJC计 数。
EULAR标准使用DAS来定义应答。应答定义为(a)疾病活性相对 于基线的变化，和(b)追踪过程中达到的疾病活性水平。用于定义DAS 的标准包括Ritchie关节指标、肺胀关节计数(44个关节计数)、红细胞沉降速率及健康评估调查问巻。DAS标准的变化形式DAS28对于肿 胀及脆弱关节使用28个关节计数。应答定义为相对于基线的显著变化 与所获得的疾病活性水平的组合。良好应答定义为D A S显著降低 (>1.2)及低水平疾病活性(小于或等于2.4)。无应答定义为降低小于或 等于0.6,或在获得DAS〉3.7的情况下DAS降低大于0.6及小于或等于 1.2。任意其它评分均被-f见为适度应答。
DAS为基于Ritchie关节指标、44个肿胀关节计数、ESR及对VAS 的整体健康评估的评分。范围从1至9变化。DAS及DAS28的连续测量 值为身体障碍及放射照相进展的强有力预测，两种指标均为具有高和 低疾病活性的患者之间及活性和安慰剂治疗的患者组之间的灵敏鉴 别器。
FACIT-F(慢性疾病疗法的功能评估-疲劳)为设计为确定患者的 疲劳-慢性疾病中的相关因素的评估的有效调查问巻(参见Cella及 Webster (1997) (9wco/ogy 11:232及Lai等人(2003) gwa/丄z/e
to. 12(5):485)。
健康评估调查问巻(HAQ)为设计用来评估患者进行日常活动的能 力的有效调查问巻，尤其在成人关节炎患者中。手段由HAQ障碍指标 (20项)、疼痛等级(l项)及测量障碍/身体机能及生活质量的全身健康状 况(l项)组成(Fries等人(1982) J^/7ewmato/. 9(5):789)。
肺胀及脆弱关节(SJC及TJC)是RA的最具特征性的特征，疾病严重 性直接与肿胀及脆弱关节的数量相关。计数肿胀和脆弱关节是临床评 估RA的关4建部分。
PsA及牛皮癣的改善也可使用PASI应答、DLQI和BSA评分测定。 DLQI(皮肤病学生活质量指数)为广泛用于包括PsA及牛皮癣的多种皮 肤疾病的与健康相关的生活质量测量值。体表面积(BSA)评分提供基 于身高及体重并以n^表示的表面积测量值。PASI(牛皮癣面积及严重
度指数)为对于特定患者而言红斑、硬化、脱皮及受牛皮癣影响的体 表面积的复合测量值。针对头、躯干、上肢及下肢侵犯评估患者。评 分范围为O(无缺陷)至72(最严重)。
44治疗中PsA的改善也可使用PsARC(牛皮癣性关节炎反应标准)测 量值，其提供脆弱及肺胀关节评分变化的临床测量值以及疾病活性的 一系列全面评估。
AS的改善可通过使用任意数量的手段评估各种AS症状来测量。 一些常用等级包括强直性脊柱炎(ASAS)、 Bath强直性脊柱炎病情活动 指标(BASDAI)(Garrett等人(1994) J W/7ewmW0/ 21:2286)、 Bath强直性 脊柱炎度量指标(BASMI)(Jenkinson等人(1994) J 7 /^wm"/o/ 21:1694) 及Bath强直性脊柱炎功能指标(BASFI)(Calin等人(1994) / i^ewwato/ 21:2281)中的评估。这些指标可用以随时间监测患者并测定改善。用 于评估AS的改善的其他描述测量描述于美国申请第l 0/622932号，亏1 入本文作为参考。
IV.药物组合物及药物给药
A.组合物及给药
用于本发明的方法中的抗体、抗体部分及其它TNFa抑制剂可引 入适于施用于患有腐蚀性多关节炎的受试者的药物组合物中。通常， 该药物组合物包含本发明的抗体、抗体部分或其它TNFa抑制剂及药 学上可接受的载体。本文使用的"药学上可接受的载体"包括生理上相 容的任意及所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂及抗真菌剂、等渗 剂及吸收延迟剂及其类似物。药学上可接受的载体的实例包括水、盐 水、磷酸盐緩冲液、右旋糖、甘油、乙醇等的一种或多种及其组合。 在许多情况中，优选地组合物中包括等渗剂，例如糖、例如甘露醇、 山梨糖醇的多元醇或氯化钠。药学上可接受的载体可进一步包括少量 辅助物质，例如湿润剂或乳化剂、防腐剂或緩冲剂，其增加抗体、抗 体部分或其它TNFoc抑制剂的保存期或有效性。
用于本发明的方法中的组合物可以以多种形式存在。这些形式包 括(例如)液体、半固体及固体药剂形式，例如液体溶液(例如可注射及 可输注溶液)、分散液或悬浮液、锭剂、丸剂、粉剂、脂质体和栓剂。 优选的形式取决于预期的给药方式及治疗应用。通常，优选的组合物 为可注射或可输注溶液形式，例如类似于以其它抗体或其它TNF a抑制剂用于人类的被动免疫的那些组合物的组合物。优选的给药方式为 非肠胃(例如静脉内、皮下、腹膜内、肌肉内)方式。在一个实施方案
中，抗体或其它TNFa抑制剂由静脉内输注或注射施用。在另一实施 方案中，抗体或其它TNFa抑制剂由肌肉内或皮下注射施用。
该组合物配制为溶液、微乳液、分散液、脂质体或适于高药物浓度的 其它有序结构。无菌可注射溶液可通过采用以上列举的成份的一种或 组合将活性化合物(即抗体、抗体部分或其它TNFa抑制剂)以所需要的 量引入适当溶剂中并根据需要随后过滤灭菌而制备。 一般而言，分散 液通过将活性化合物引入含有碱性分散介质及来自以上列举的那些 成份的所需其它成份的无菌载体中而制备。在用于制备无菌可注射溶 液的无菌粉剂的情况中，优选的制备方法为真空干燥及冷冻千燥，其 产生活性成份加上来自其预先无菌过滤的溶液的任意其他所需成份 的粉剂。溶液的适当流动性可(例如)通过使用例如卵磷脂的包衣，由 在分散液情况中保持所需粒径及由使用界面活性剂而得以保持。可注 射组合物的延迟吸收可通过将例如硬脂酸盐及明胶的延迟吸收剂包 含于组合物中而获得。
于本发明的方法中的抗体或抗体部分与 一种或多种包括腐蚀性多关 节炎抑制剂或拮抗剂的其他治疗剂共配制和/或共施用。例如，本发明 的抗hTNFa抗体或抗体部分可与 一种或多种结合与腐蚀性多关节炎 相关的其它靶标的其他抗体(例如结合其它细胞因子或结合细胞表面 分子的抗体)、 一种或多种细胞因子、可溶性TNFa受体(参见例如PCT 公开第WO 94/06476号)和/或一种或多种抑制hTNFa产生或活性的化 学药剂(例如如PCT公开第WO 93/19751号中所述的环己烷-亚基衍生 物)或其任意组合共配制和/或共施用。此外，本发明的一种或多种抗 体可与两种或两种以上上述治疗剂组合4吏用。这些组合疗法可有利地 利用以更低剂量施用的治疗剂，因此避免由于与各种单一疗法相关的 患者可能出现的副作用、并发症或低水平应答。
46在一个实施方案中，本发明包括包含有效量的TNFoc抑制剂及药 学上可接受的载体的药物组合物，其中该有效量的TNF oc抑制剂可有 效地治疗腐蚀性多关节炎。在一个实施方案中，将用于本发明的方法 中的抗体或抗体部分掺入药物制剂中，如PCT/IB03/04502及美国申请 第10/222140号中所述，引入本文作为参考。该制剂包括浓度为50 mg/ml的抗体D2E7，其中 一个预先填充的注射器含有40 mg的抗体用 于皮下注射。在另一实施方案中，本发明的制剂包括D2E7。
尽管对于许多治疗应用而言优选的给药途径/方式为皮下注射，但 是本发明的抗体、抗体部分及其它TNFoc抑制剂可通过本领域中已知 的多种方法施用。在另一实施方案中，给药通过静脉内注射或输注进 行。如熟练技术人员所了解的，给药途径和/或方式可根据所需结果而 改变。在某些实施方案中，活性化合物可用保护化合物不会快速释放 的载体制备，例如控释制剂，包括植入物、透皮贴剂和微胶嚢递送系 统。可使用生物可降解、生物相容的聚合物，例如乙烯醋酸乙烯酯、 聚酸酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯及聚乳酸。制备这些制剂的 许多方法已申请专利或通常为熟练技术人员所知。参见例如SwWa/wW 朋J CoWra〃ed We/ea" Z)e//ver_y 5ywe膽，Robinson编,Dekker，
Inc., New York, 1978。
TNFot抗体也可以蛋白质晶体制剂形式施用，包括包裹于聚合载 体内以形成包衣颗粒的蛋白质晶体的组合。蛋白质晶体制剂的包衣颗 粒可为球形，且为直径高达500微米的微球体或其可具有一些其它形 态且为微粒。蛋白质晶体的增加的浓度使得本发明的抗体可以皮下方 式递送。在一个实施方案中，本发明的TNFoc抗体通过蛋白质递送系 统递送，其中将一种或多种蛋白质晶体制剂或组合物施用于患有与 TNFot相关的病症的受试者。组合物及制备全部抗体晶体或抗体片段 晶体的稳定制剂的方法也描述于WO 02/072636中，引入本文作为参 考。在一个实施方案中，描述于PCT/IB03/04502及美国申请第 10/222140号中的包含晶体化抗体片段的制剂用来使用本发明的治疗 方法治疗腐蚀性多关节炎。
47在某些实施方案中，本发明的抗体、抗体部分或其它TNFa抑制剂 可口服给药，例如与惰性稀释剂或可吸收可食用的载体一起给药。该 化合物(和，如果需要，其它成份)也可装入硬壳或软壳明胶胶嚢中压 缩成片剂，或直接掺入患者的饮食中。对于口服治疗给药而言，可将 化合物与赋形剂一起掺入且可以可摄取片剂、口腔片剂、锭剂、胶嚢、 酏剂、悬浮液、糖浆、糯米纸嚢剂等形式使用。为通过除非肠胃给药 之外的形式施用本发明的化合物，必需以防止其失活的物质涂覆化合 物或与化合物共施用。
本发明的药物组合物可包括"治疗有效量"或"预防有效量"的本发 明的抗体或抗体部分。"治疗有效量"是指在剂量上及对于所需要的时 间而言对获得所需治疗结果有效的量。抗体、抗体部分或其它TNFa 抑制剂的治疗有效量可根据例如个体的疾病状态、年龄、性别及体重 及抗体、抗体部分、其它TNFa抑制剂在个体内引起所需应答的能力 等因素而变化。治疗有效量也为其中治疗有益效果超过抗体、抗体部 分或其它TNFa抑制剂的任意有毒或有害效果的量。"预防有效量"是 指在剂量上及对于所需要的时间而言对获得所需预防结果有效的量。 通常，由于预防剂量在疾病的较早期阶段之前或在疾病的较早期阶段 时用于受试者，因此预防有效量比治疗有效量要小。
可调节给药方案以提供最适宜的所需应答(例如治疗或预防应 答)。例如，可施用单个大丸剂，可随时间以几个分开的剂量施用或 在显示紧急治疗状况时可成比例地减少或增加剂量。尤其有利的是配 制易于施用且剂量均 一的剂量单位形式的非肠胃组合物。本文使用的 剂量单位形式是指适用于待治疗的哺乳动物受试者的单位剂量的实
体离散单位；各单位含有计算为与所需药物载体产生所需治疗效果的 预定量的活性化合物。本发明的剂量单位形式的规格由以下规定并且 直接取决于(a)活性化合物的独特特征及待获得的特定治疗或预防效 果，及(b)在配制该活性化合物用于治疗个体的敏感性的技术中的固有限制。
在一个实施方案中，本发明提供一种治疗腐蚀性多关节炎的单剂量方法，其包括向需要治疗的受试者施用单剂量的例如人类抗体的
TNFa抑制剂。在 一 个实施方案中，该TNFa抑制剂为抗TNFa抗体阿 达木单抗。该TNFa抑制剂的单剂量可为任意治疗或预防有效量。在 一个实施方案中，将20mg、 40mg或80mg单剂量的阿达木单抗(也称 作D2E7)施用于受试者。单剂量可通过包括(例如)皮下给药的任意途 径施用。两周一次给药方案可用于治疗腐蚀性多关节炎，进一步描述 于美国申请第10/163657号中。治疗或预防的多可变剂量方法也可用于 治疗腐蚀性多关节炎，进一 步描述于PCT申请第PCT/US05/012007号 中。
应当注意，剂量值可随待减轻的疾病类型及严重性而变化。进一 步应当理解，对于任意特定受试者而言，应根据个体需要及施用或监 督组合物施用者的专业判断随时间调整特定给药方案，本文中所提出 的剂量范围仅为示例性的，并不意在限制所要求保护的组合物的范围 或实施。也应当注意到，本发明关于治疗腐蚀性多关节炎的方法，包 括疾病的急性处理及慢性处理。
炎的包装的药物组合物或试剂盒。在本发明的一个实施方案中，该试 剂盒包含例如抗体的TNFa抑制剂、包含其他治疗剂的第二药物组合 物及用于给药以治疗腐蚀性多关节炎的说明。这些说明可描述如何 (例如经皮下)及何时(例如在第0周及第2周)将不同剂量的TNFot抑制 剂和/或其他治疗剂施用于受试者进行治疗。
本发明的另 一方面涉及含有包含抗TNFa抗体及药学上可接受的 载体的药物组合物及各自包含适用于治疗腐蚀性多关节炎的药物及 药学上可接受的载体的一种或多种药物组合物的试剂盒。或者，该试 剂盒包含含有抗TNFa抗体、 一种或多种适用于治疗腐蚀性多关节炎 的药物及药学上可接受的载体的单一药物组合物。该试剂盒含有用于 药物组合物给药以治疗腐蚀性多关节炎的说明。
该包装或试剂盒可含有TNFa抑制剂，并且可将其促进以(在包装 内或通过所附说明)使用或治疗本文中所述的病症。包装药物或试剂
49盒另外可包括与使用第二药剂(如本文中所述)以及第一药剂(如本文 中所述)的说明 一 同包装或共促进的第二药剂。 B.其他治疗剂
本发明也描述治疗腐蚀性多关节炎的方法，包括将TNFot抑制剂 与其他治疗剂联合施用。本发明也涉及药物组合物及使用它与其他治 疗剂联合治疗腐蚀性多关节炎的方法。该药物组合物包含治疗腐蚀性 多关节炎的第一药剂。该药物组合物也可包含为活性医药成份的第二 药剂；换言之，该第二药剂为治疗性的且其功能为非惰性成份，所述 惰性成分例如为药物载体、防腐剂、稀释剂或緩冲剂。在一个实施方 案中，该第二药剂可适用于治疗或预防腐蚀性多关节炎。在另一实施 方案中，该第二药剂可减少或治疗至少一种与例如牛皮癣性关节炎的 与腐蚀性多关节炎相关的病症相关的症状。在另一实施方案中，该其 他药剂适用于治疗腐蚀性多关节炎和其他病症。第一及第二药剂可由 类似或无关的作用机制发挥其生物效应；或第一与第二药剂的任一或 两者可由多重作用机制发挥其生物效应。药物组合物也可包含第三化 合物或甚至更多化合物，其中该第三(及第四，等)化合物具有与第二 药剂相同的特征。
应当了解，对于各个所述实施方案而言，本文中所述的药物组合 物含有在相同药学上可接受的载体中或不同药学上可接受的载体中 的第一及第二药剂、第三或其他药剂。进一步应当了解，在所述实施 方案中，第一药剂、第二药剂、第三药剂及其他药剂可同时或相继施 用。或者，第一及第二药剂可同时施用，且第三或其他药剂可在前面 两种药剂之前或之后施用。
本文中所述的方法及药物组合物中所使用的药剂的联合可对所 治疗的病症或疾病具有其他或协同治疗效果。本文中所述的方法或药 物组合物中所使用的药剂的联合也可减少当单独施用或无特定药物 组合物的其它药剂时与至少一种药剂相关的有害作用。例如， 一种药 剂的毒性副作用可被组合物的另一药剂削弱，因此允许更高剂量、改 善患者顺应性及改善治疗结果。组合物的附加或协同效应、益处及优
50点应用于治疗剂的种类(结构或功能类别)或个别化合物本身。
补充的活性化合物也可掺入组合物中。在某些实施方案中，本发 明的抗体或抗体部分与一种或多种适用于治疗腐蚀性多关节炎的其
他治疗剂共配制和/或共施用。例如，本发明的抗hTNFa抗体、抗体部 分或其它TNFa抑制剂可与 一种或多种结合其它靶标的其他抗体(例 如结合其它细胞因子或结合细胞表面分子的抗体)、 一种或多种细胞 因子、可溶性TNFa受体(参见例如PCT公开第WO 94/06476号)和/或一 种或多种抑制hTNFa产生或活性的化学药剂(例如如PCT公开第WO 93/19751号中所述的环己烷-亚基衍生物)共配制和/或共施用。此外， 一种或多种本发明的抗体或其它TNF a抑制剂可与两种或两种以上的 上述治疗剂组合使用。这些组合疗法有利地可利用更低剂量的施用的 治疗剂，从而避免与各种单一疗法相关的可能的毒性或并发症。
本文中所述的TNFa抑制剂例如TNFa抗体或其抗原结合部分可 与其他治疗剂联合使用，用于治疗腐蚀性多关节炎。优选地，其它药 物为緩解疾病的的抗类风湿药物(DMARD)或非甾体抗炎药(NSAID) 或类固醇或其任意联合。DMARD的优选实例为羟氯喹、来氟米特、 氨曱喋呤、非肠胃金、口服金和柳氮磺吡啶。
也可与TNFa抑制剂例如TNFa抗体或其抗原结合部分联合使用治 疗腐蚀性多关节炎的非限制性的其他药剂包括但不限于以下药剂非 甾体抗炎药(NSAID);细胞因子抑制抗炎症药物(CSAID); CDP-571/BAY-10-3356(人源化抗TNFa抗体；Celltech/Bayer); cA2/ 英利昔单抗(嵌合抗TNFa抗体；Centocor); 75 kdTNFR-IgG/依那西普 (75 kD TNF受体-IgG融合蛋白；Immunex; 参见例如Jr/An'to & 脸謂油雄(1994) Vol. 37， S295; J. (1996) Vol. 44，
23 5A) ; 55 kdTNF-IgG (55 kD TNF受体-IgG融合蛋白； Hoffmann-LaRoche); IDEC-CE9.1/SB 210396(非消耗的灵长动物化抗 CD4抗体；IDEC/SmithKline;参见例如爿"/znto & W/zewma^m (1995) Vol. 38, S185); DAB 486-IL-2和/或DAB 389-IL-2(IL-2融合蛋白； Seragen;参见例如^油他cS:跑画a"， (1993) Vol. 36， 1223);抗Tac(人源化抗IL-2Ra; Protein Design Labs/Roche); IL-4(抗炎性细胞 因子；DNAX/Schering); IL-10(SCH 52000;重组IL-IO，抗炎性细胞 因子；DNAX/Schering); IL-4、 IL-10和/或IL-4激动剂(例如激动剂抗 体)；IL-1RA(IL-1受体拮抗剂；Synergen/Amgen); 阿那白滞素 (Kineret /Amgen); TNF-bp/s-TNF(可溶性TNF结合蛋白；参见例如 B/7" "跑w腸"纖(1996) Vol. 39， No. 9(增刊)，S284;力膨r 尸/z戶'o/, - //ear/ am/ C/rcw/a組少P/z戶.o/ogy (1995) 第268巻,第37-42 页)；R973401 (IV型磷酸二酯酶抑制剂；参见例如jw/zn'& & W/7ewwa/,:，(1996)Vo1.39， No.9(增刊)，S282); MK-966(COX-2抑制 剂；参见例如v4w/7n'^ &跑w顧"纖(1996) Vol. 39， No. 9(增刊)，S81); 伊洛前列素(参见例如^W/zWto &跑画油'扁(1996) Vol. 39, No. 9(增 刊)，S82);氨甲喋呤；沙立度胺(thalidomide)(参见例如y^ /zn'^ cfe W/zewwa/,'5m (1996) Vol. 39， No. 9(增刊)，S282)及与沙立度胺相关的 药物(例如Celgen);来氟米特(抗炎症及细胞因子抑制剂；参见例如 j〃/zn' "， A/zewwa,"、w (1996) Vol. 39, No. 9(增刊)，S131; /"/7"mw"f/o" / e"arc/z (1996) Vol. 45, pp. 103-107); 抗凝血酸(tranexamic acid)(血 浆素原活化的抑制剂；参见例如^"/zn'to在尺/K wwatow (1996) Vol. 39, No. 9(增刊)，S284); T-614(细胞因子抑制剂；参见例如^W/2Wto & W/zwm"^w(1996) Vol. 39， No. 9(增刊),S282);前列腺素E1(参见例 如爿W/zn'to c& W/zewwa^w (1996) Vol. 39, No. 9 (增子'J)， S282);替尼 达普(Tenidap)(非甾体抗炎药；参见例如JW/zn'似cS: 7 /2eww"^yw (1996) Vol. 39， No. 9(增刊)，S280);萘普生(Naproxen)(非甾体抗炎药；参 见例如7Vewra7^; oW(1996) Vol. 7, pp. 1209-1213);美洛昔康(非甾体 抗炎药)；布洛芬(非甾体抗炎药)；吡罗昔康(非甾体抗炎药)；双氯芬 酸(非甾体抗炎药)；吲哚美辛(非甾体抗炎药)；柳氮磺吡啶(参见例如 爿w/in.fe c&尺/zwwa /^ (1996) Vol. 39， No. 9 (增刊)，S281);碌J坐噪 呤(参见例如」W/^/to在跑w脂〃扁(1996) Vol. 39， No. 9 (增刊)， S281); ICE抑制剂(酶白介素-1(3转化酶的抑制剂)；zap-70和/或lck抑 制剂(酪氨酸激酶zap-70或lck的抑制剂)；VEGF抑制剂和/或VEGF-R抑剂；血管生成的抑制剂)；皮质类固醇抗炎症药物(例如SB203580);TNF-转化酶抑制剂；抗IL-12抗体；抗IL-18抗体；白介素-ll(参见例如Jr/Z7〃'to & A/zewwatow (1996) Vol. 39, No, 9 (增刊)，S296);白介素-13(参见例如^W/zr"^ cS: A/zewmatom (1996) Vol. 39, No. 9 (增刊)，S308);白介素-17抑制剂(参见例如爿"/z"'to & 7 /2eww"tow (1996) Vol.39, No.9(增刊)，S120);金；青霉胺；氯喹；苯丁酸氮芥；羟氯喹；环孢菌素；环磷酰胺；全淋巴照射；抗胸腺细胞球蛋白；抗CD4抗体；CD5-毒素；口服施用的肽及胶原蛋白；氯苯扎利二钠；细胞因子调节剂(CRA)HP228及HP466(Houghten Pharmaceuticals, Inc.); ICAM画1反义硫代磷酸酯寡脱氧核苷酸(ISIS 2302; Isis Pharmaceuticals, Inc.);可溶性补体受体1(TP10; T Cell Sciences, Inc.);泼尼松；奥古蛋白；聚硫酸葡萄糖胺聚糖；米诺环素；抗IL2R抗体；海洋及植物脂质(鱼及植物种子脂肪酸；参见例如DeLuca等人(1995) W/zeMw. A^W/zj肌21:759-777);金诺芬；苯基丁氮酮；甲氯芬那酸；氟芬那酸；静脉内免疫球蛋白；齐留通；阿扎立平；霉酚酸(RS-61443);他克莫司(FK-506);西罗莫司(雷帕霉素)；氨普立糖(themfectin);克拉屈滨O氯脱氧腺苷)；氨曱喋呤；抗病毒药；免疫调节剂。任意以上提及的药剂均可与TNFa抑制剂包括TNFot抗体联合施用以治疗腐蚀性多关节炎或抑制关节疾病的放射照相进展。
在一个实施方案中，将TNFoc抑制剂例如TNFoc抗体或其抗原结合部分与以下的药剂之一联合施用以治疗类风湿性关节炎KDR的d、分子抑制剂(ABT-123)、 Tie-2的小分子抑制剂；氨甲喋呤；泼尼松；赛来昔布；叶酸；硫酸鞋化氯喹；罗非昔布；依那西普；英利昔单抗；来氟米特；萘普生；伐地考昔；柳氮磺吡啶；甲泼尼龙；布洛芬；美罗昔康；醋酸甲泼尼龙；硫代苹果酸金钠；阿司匹林；硫唑噪呤；曲安奈德；萘石黄酸右丙氧芬(propxyphene napsylate)/apap;叶酸盐(或酯)；萘丁美酮；双氯芬酸；吡罗昔康；依托度酸；双氯芬酸钠；奥沙普秦；盐酸羟考酮；二酒石酸氢可酮/apap;双氯芬酸钠/米索前列醇；芬太
53尼；阿那白滞素，人类重组；盐酸曲马多；双水杨酸酯；舒林酸；氰基钴胺素/fa/吡哆醇；乙酰胺苯酚；阿仑膦酸钠；泼尼龙；^克酸吗啡碱；盐酸利多卡因；吲哚美辛；硫酸葡糖胺/软骨素；环孢菌素；盐酸阿密曲替林；磺胺嘧啶；盐酸羟考酮/乙酰胺苯酚；盐酸奥洛他定；米索前列醇；萘普生钠；奥美拉唑；霉酚酸酯；环磷酰胺；利妥昔单抗；IL-l TRAP; MRA; CTLA4-IG; IL-18BP; ABT-874; ABT画325(抗IL18);抗IL 15; BIRB-796; SCIO-469; VX画702; AMG-548; VX画740;罗氟司特；IC-485; CDC-801;及mesopram。在另一实施方案中，本发明的TNFoc抗体与以上提到的用于治疗类风湿性关节炎的药剂之一耳关合施用，治疗与TNFa相关的病症。
在一个实施方案中，TNFa抑制剂例如TNFa抗体或其抗原结合部分与用于治疗克罗恩病或与克罗恩病相关的病症的药物联合使用。可用于治疗克罗恩病的治疗剂的实例包括美沙拉秦、泼尼松、硫唑噤呤、巯噪呤、英利昔单抗、布地奈德、柳氮磺吡啶、曱泼尼龙丁二酸钠、地芬诺酯/硫酸阿托品、盐酸咯哌丁胺、氨甲喋呤、奥美拉唑、叶酸盐(或酯)、环丙沙星/右旋糖-水、二酒石酸氢可酮/apap、盐酸四环素、氟轻松、曱硝唑、硫柳汞/硼酸、考来烯胺/蔗糖、盐酸环丙沙星、硫酸荒菪^5咸、盐酸哌替啶、盐酸咪达唑、盐酸羟考酮/乙酰胺苯酚、盐酸异丙。秦、磷酸钠、磺胺甲噁唑/曱氧千啶、赛来昔布、聚卡波非、萘磺
酸丙氧芬、氢化可的松、多种维生素剂、巴柳氮二钠、磷酸可待因/apap、盐酸考来维仑、氰基钴胺素、叶酸、左氧氟沙星、甲泼尼龙、那他珠单抗和干扰素，。
在一个实施方案中，TNFa抑制剂例如TNFoc抗体或其抗原结合部分与通常用于治疗脊推关节病的药剂例如AS联合施用。这些药剂的实例包括非甾体抗炎药(NSAID)、包括Celebrex⑧、￥1(^乂@及86乂化&@的COX2抑制剂和埃托考昔。物理疗法也常用于治疗脊推关节病，通常与非甾体抗炎药联合进行治疗。
在一个实施方案中，TNFoc抑制剂例如TNFa抗体或其抗原结合部分与其他治疗剂联合施用以治疗强直性脊柱炎。可用于减轻或抑制强
54直性脊柱炎的症状的药剂的实例包括布洛芬、双氯芬酸及米索前列醇、萘普生、美罗昔康、吲哚美辛、双氯芬酸、赛来昔布、罗非昔布、柳氮磺吡啶、泼尼松、氨甲喋呤、硫唑嘌呤、米诺环素、泼尼松、依那西普及英利昔单抗。
在一个实施方案中，TNFot抑制剂例如TNFoc抗体或其抗原结合部分与其他治疗剂联合施用以治疗牛皮癣性关节炎。可用于减轻或抑制牛皮癣性关节炎的症状的药剂的实例包括氨甲喋呤；依那西普；罗非昔布；赛来昔布；叶酸；柳氮磺吡啶；萘普生；来氟米特；醋酸甲泼尼龙；吲哚美辛；硫酸羟化氯喹；舒林酸；泼尼松；强化倍他米松二丙酸酯；英利昔单抗；氨曱喋呤；叶酸盐；曲安奈德；双氯芬酸；二甲亚砜；吡罗昔康；双氯芬酸钠；酮洛芬；美洛昔康；泼尼松；曱泼尼龙；萘丁美酮；托美丁钠；卡泊三烯；环孢菌素；双氯芬酸；钠/米索前列醇；氟轻松；硫酸葡糖胺；硫代苹果酸金钠；氢可酮；酒石酸氢盐/apap;布洛芬；利塞膦酸钠；磺胺嘧啶；硫鸟嘌呤；伐地考昔；阿来法塞及依法珠单抗(efal izumab)。
在一个实施方案中，TNFa抑制剂例如TNFa抗体或其抗原结合部分与局部皮质类固醇、维生素D类似物及局部或口服类视色素或其组合联合施用以治疗牛皮癣。此外，本发明的TNFa抗体与以下药剂之一联合施用以治疗牛皮癣KDR的小分子抑制剂(ABT-123)、 Tie-2的小分子抑制剂、卡泊三烯、氯倍他索丙酸酯、曲安奈德、卤倍他索丙酸酯、他扎罗汀、氨甲喋呤、氟轻松、强化倍他米松二丙酸酯、氟轻木》、丙酮4匕物、阿曲汀(acitretin)、焦油香波(tar shampoo)、戊酸4咅4也米松、莫米松糠酸酯、酮康唑、普莫卡因/氟轻松、戊酸氢化可的松、丙酮缩氟氢羟龙、尿素、倍他米松、氯倍他索丙酸酯/emoll、氟替卡松丙酸酯、阿奇霉素、氬化可的松、增湿分子、叶酸、地奈德、煤焦油、双醋二氟拉松、依那西普、叶酸盐、乳酸、曱氧沙林、hc/bismuthsubgal/znox/resor、醋酸曱泼尼龙、泼尼松、防晒剂、水杨酸、氯氟舒枉\地蒽酚、新戊酸氯可托龙、煤^是取物、煤焦油/水杨酸、煤焦油/水杨酸/硫、去轻米+》、地西泮、润肤剂、吡美莫司润肤剂、氟轻松/润肤剂、矿物油/蓖麻油/乳酸钠、矿物油/花生油、石油/十四烷酸异丙酯、补骨脂素、水杨酸、脂肪酸盐/三溴沙仑、硫柳汞/硼酸、赛来昔布、英利昔单抗、阿来法塞、依法珠单抗、他克莫司、吡美莫司、PUVA、
UVB和柳氮磺吡啶。
抗体、抗体部分或其它TNFot抑制剂，例如TNFa抗体或其抗原结合部分，可与其它药剂联合使用以治疗皮肤病症。例如，本发明的抗体、抗体部分或其它TNFa抑制剂与PUVA疗法组合。PUVA是补骨脂素(P)与用于治疗许多不同皮肤病症的长波紫外辐射(UVA)的组合。本发明的抗体、抗体部分或其它TNFa抑制剂也可与吡美莫司组合。在另一实施方案中，本发明的抗体用于治疗牛皮癣，其中这些抗体与他克莫司组合施用。在另一实施方案中，他克莫司及TNFa抑制剂与氨曱喋呤和/或环孢菌素组合施用。在另一实施方案中，本发明的TNFa抑制剂以准分子激光疗法施用于治疗牛皮癣。
可与TNFa抑制剂例如TNFa抗体或其抗原结合部分组合治疗皮
可与TNFa抑制剂组合使用的其它非限制性实例包括抗IL-12和抗IL-18治疗剂，包4舌抗体。
可将任一 以上提到的治疗剂(单独或与其组合)与包括TNFa抗体或其抗原结合部分的TNFa抑制剂组合施用于患有腐蚀性多关节炎的受试者。TNFa抗体或其抗原结合部分可与已知对患有腐蚀性多关节炎的受试者的急性治疗有效的其他治疗剂组合使用。TNFa抗体或其抗原结合部分也可与已知对患有腐蚀性多关节炎的受试者的治疗有效的其他治疗剂组合使用。
本发明由以下实施例进一步说明，这些实施例不应—见为限制性
的。贯穿本申请中所引用的所有参考文献、专利和公开的专利申请的内容均引入本文作为参考。
实施例
使用TNF抑制剂治疗牛皮癣性关节炎患者中的腐蚀性多关节炎
56相当大比例的牛皮癣性关节炎(PS A)患者中发生腐蚀性多关节炎。
通常，非生物DMARD并未显示对该疾病中关节损伤的放射照相进展
具有有效抑制作用。
进行以下研究来评估TNF抑制剂，更具体而言，抗TNF抗体阿达木单抗治疗腐蚀性多关节炎的功效。进行该研究来评估阿达木单抗在抑制中度至严重PsA患者中与腐蚀性多关节炎相关的关节疾病的放射线进展方面是否有效。
对应用NSAID疗法失败的中度至严重活性PsA(>3个胂胀关节及23个脆弱关节)成年患者进行24周双盲随机安慰剂控制试验。根据氨甲喋呤(MTX)使用(是/否)及牛皮癣程度(d。/。或^3。/。体表面积[BSA])将患者分级。除具有》3个肿胀关节及》3个脆弱关节之外，纳入标准包括对NSAID疗法不充分应答、牛皮癣病史及年龄218岁。排除标准包括以下标准预先抗TNF疗法、研究开始前12周内以阿来法塞治疗、研究开始前6周内以其它生物制剂治疗、研究开始前4周内对牛皮癣进行全身治疗及研究开始前2周内进行光疗法及局部疗法。
患者每隔 一周(eow)随机皮下接受阿达木单抗40 mg或安慰剂共24周。完成24周试验的患者有资格参加标签公开延长(OLE)研究，其中所有患者均每隔 一周接受阿达木单抗。釆用标签公开治疗12周之后，未满足预先规定的标准的患者每周接受4 0 m g 。
在盲试部分(第0及24周)和标签公开部分(第48周)期间进行放射照相评估。手和足的放射线照片利用改良总Sharp评分(mTSS)评估，其中加入PsA中通常所涉及的其他关节以更好地量化PsA中发生的显著骨质溶解，数值范围得以扩大。通过将关节间隙狭窄评分(0-192)和腐蚀评分(0-378)组合确定mTSS,如图la所示。还评估与PsA相关的临床结果例如铅笔帽变化。用于该研究的mTSS图以及与PsA相关的放射线照相结果分别显示于图la及lb中。
放射线照片读取程序包括以下内容。所有胶片均由不知道治疗及胶片次序的两位独立读取者读取。读取号1为基线及第2 4周胶片的评估。读取号2为基线、第24周及第48周胶片的评估。利用几个灵敏度分析来评估缺失放射线照片的影响(归因于零改
变、最差级变化、基于具有类似基线评分的患者的50/75百分数变化以
及当可得到多张放射线照片时的线性外推)。
第24周分析包括以下内容第24周分析中包含所需要的基线与第24周胶片，其中可评估至少50%的关节。第48周分析包括以下内容来自第24周分析的所有患者均进行第48周分析。若不可获得第48周胶片(或可评估小于50%的关节)，则进行以下原因分析若安慰剂初始随机化则归因于0改变；且若阿达木单抗初始随机化则使用开始两张胶片进行线性外推。
基线人口统计及疾病严重程度特征与中度至严重PsA—致，并且在治疗组之间良好匹配(阿达木单抗N451，安慰剂N462;平均值±SD):年龄49.0士11.8岁;PsA持续时间9.5士8.5年;SJC (76) 14±12;TJC (78) 25±18; HAQ 1.0士0.6; mTSS 20.8士40.9; 51%同时服用氨曱喋呤。总计，296名患者在基线及第24周照射X射线，265名患者也在第48周照射X射线。
如以前研究中所报道的，以阿达木单抗治疗的患者在第24周的ACR20、 ACR50及ACR70应答和PASI50、 PASI75及PASI90应答显著优于安慰剂组。在第24周的ACR及PASI应答显示于以下表1及2中(所有结果均pSO.OOl,安慰剂对阿达木单抗)
表l: ACR反应患者％
ACR20ACR50ACR70
安慰剂(N=162)1561
阿达木单抗(N—51)573923
表2: PASI反应患者°/
PASI50PASI75PASI90
安慰剂(N^69)1210
阿达木单抗(N二69)755942
58在盲试研究阶段(24周)，阿达木单抗治疗的患者的mTSS进展显著 低于安慰剂处理患者的mTSS进展(mTSS平均改变为-0.2对1.0 ， p<0.001,秩ANCOVA)。在所有灵敏度分析中均保持统计学显著性。 图2显示mTSS评分的分布，表明与安慰剂治疗的患者相比，在24周治 疗过程中更少的以阿达木单抗治疗的患者结构损伤增加。根据在第24 周所看到的平均评分及研究过程中Sharp评分增加的患者数量及百分 数观察分布差异(参见表3)。在起初24周治疗过程中，mTSS增力口(大于 0.5单位)的患者中安慰剂治疗的患者为阿达木单抗治疗的患者的大约 3倍。
表3:第24周时改良总Sharp评分的变化^
安慰剂 阿达木单抗 N=152 N=144
_H(5i)_n(%)
Sharp评分降低 8(5.3%) 27(18.8%)
Sharp评分不变 100(65.8%) 104(72.2%)
Sharp评分增力口 44(28.9%) 13(9.0%)
p^O.OOl,使用CMH检验，安慰剂对阿达木单抗 *变化定义为mTSS评分大于0.5单位
在以阿达木单抗与安慰剂治疗的受试者之间，腐蚀评分与关节狭 窄评分(p幼.OOl,使用秩ANACOVA)均观察到统计显著差异。在第24 周，腐蚀评分的变化(相对于基线变化)对于安慰剂患者而言为0.6,对 于阿达木单抗患者而言为0.0(p<0.001,秩ANCOVA),关节间隙狭窄评 分的变化(相对于基线变化)对于安慰剂患者而言为0.4，对于阿达木单 抗患者而言为-0.2(pO.001，秩ANCOVA)。
进行说明缺失的患者胶片的灵敏度分析，所有分析的结果均保持 统计学显著性。排除足和DIP的事后灵敏度分析如下排除足和DIP 进行一种分析，并排除所有DIP关节进行第二分析。在两种分析中均 保持统计学显著性。
59在用阿达木单抗和安慰剂治疗的受试者之间不论是否使用伴随
的MTX均观察到统计学显著性差异。对于服用伴随的MTX的患者而 言，平均差异略高。采用单一疗法的患者显示对于阿达木单抗(n二68) 相对于基线变化为-0.1 ，对于安慰剂0=74)相对于基线变化为 0.9(p《0.001，使用秩ANACOVA)。采用伴随的MTX的患者显示对于 阿达木单抗(n^76)相对于基线变化为-0.3，对于安慰剂(>=78)相对于基 线变化为1.2(p幼.001,使用秩ANACOVA)。图3a及3b显示采用及不采 用MTX的受试者的m T S S的累积分布函数图。
48周放射线照片分析说明在阿达木单抗患者中在第24周观察到 的未进展(mTSS不变)保持到第48周(参见图4)。用安慰剂治疗24周的 患者在标签公开期间并未有疾病的放射线进展。没有治疗组证明与 PsA相关的特征显著进展。与PsA相关的结果的分布情况显示于表4 中。在基线处各组之间未发现显著差异，在24周研究期间在任一组中 未发现显著进展。
表4:与PsA相关的结果的分布情况 _ 全部患者(N二313)n〖0/0)
关节间隙变宽 全部骨质溶解
不全脱位 铅笔帽
近关节骨膜炎
骨干骨膜炎
指骨丛再吸收
38(12.1%) 60(19.2%) 49(15.7%) 9(2.9%) 247(78.9%) 140(44.7%) 224(71.6%)
此外，如以前所才艮道的，阿达木单抗通常具有良好的耐受性。 在24周阶段期间阿达木单抗抑制放射线疾病进展比安慰剂更有 效。在服用伴随的氨曱喋呤的患者中与服用阿达木单抗作为单一疗法 的那些患者中，阿达木单抗显示出相对于安慰剂的差异。在用阿达木 单抗治疗的患者中在24周所观察到的结构损伤进展的抑制作用保持l
60年。总之，该研究证明阿达木单抗在也患有中度至严重活性PsA的患
者中有效治疗腐蚀性多关节炎及放射照片疾病进展超过l年。 等同方案
熟练技术人员应当认识5 J或仅仅使用常规试验就能确定本文所 述的本发明的特定实施方案的许多等同方案。这些等同方案包括于以 下的权利要求书范围中。贯穿本申请中所引用的所有参考文献、专利 及公开的专利申请的内容均引入本文作为参考。
评分评分评分评分评分评分
权利要求
1. 一种治疗患有腐蚀性多关节炎的人类受试者的方法，包括给该受试者施用TNFα抗体或其抗原结合部分，使腐蚀性多关节炎得到治疗。
2. 如权利要求1的方法，其中所述TNFa抗体或其抗原结合部分是 选自人源化抗体、嵌合抗体和多价抗体的抗体。
3. 如权利要求1的方法，其中所述TNFa抗体或其抗原结合部分为 英利昔单抗或格里木单抗。
4. 如权利要求1的方法，其中所述TNFa抗体或其抗原结合部分为 人类抗体。
5. 如权利要求4的方法，其中所述人类抗体或其抗原结合部分以通 过表面等离振子共振测定的lx10—8 M或更低的Kd及lx10—3 s"或更低的 K。ff速率常数从人类TNFa上解离，并且在标准体外L929分析中以 lxl(T7 M或更低的IC5o中和人类TNFa细胞毒性。
6. 如权利要求4的方法，其中所述人类抗体或其抗原结合部分具有 以下特征a) 以通过表面等离振子共振测定的1 x 10-3 s"或更低的K。ff速率常 数从人类TNFa上解离；b) 具有一个轻链CDR3域，其包含SEQIDNO: 3的氨基酸序列，或 通过位置l、 4、 5、 7或8处的单一丙氨酸置换或通过位置1、 3、 4、 6、 7、 8和/或9处的l至5个保守氨基酸置换由SEQIDNO: 3修饰得到的氨 基酸序列；c) 具有一个重链CDR3域，其包含SEQIDNO: 4的氨基酸序列，或 通过位置2、 3、 4、 5、 6、 8、 9、 10或1 l处的单一丙氨酸置换或通过 位置2、 3、 4、 5、 6、 8、 9、 10、 1 l和/或12处的l至5个保守氨基酸置 换由SEQ ID NO: 4修饰得到的氨基酸序列。
7. 如权利要求4的方法，其中所述人类抗体或其抗原结合部分包含一个具有CDR3域的轻链可变区(LCVR)，该CDR3域包含SEQ ID NO: 3 的氨基酸序列或通过位置l、 4、 5、 7或8处的单一丙氨酸置换由SEQ ID NO: 3修饰的氨基酸序列；以及包含一个具有CDR3域的重链可变区 (HCVR)，该CDR3域包含SEQIDNO: 4的氨基酸序列或通过位置2、 3、 4、 5、 6、 8、 9、 10或11处的单一丙氨酸置换由SEQ ID NO: 4修饰的 氨基酸序列。
8. 如权利要求4的方法，其中所述人类抗体或其抗原结合部分包含 一个轻链可变区(LCVR),该轻链可变区包含SEQ ID NO: l的氨基酸序 列；以及一个重链可变区(HCVR),该重链可变区包含SEQ ID NO: 2的氨基酸序列。
9. 如权利要求4的方法，其中所述人类抗体或其抗原结合部分为阿 达木单抗。
10. 如权利要求1至9中任一项的方法，其中所述药物以两周一次 的给药方案施用。
11. 如权利要求1至9中任一项的方法，其中所述受试者患有其中 TNFa活性为有害的病症。
12. 如权利要求ll的方法，其中所述TNFa活性为有害的病症选 自牛皮癣性关节炎、强直性脊柱炎和幼年型类风湿性关节炎。
13. 如^L利要求11的方法，其中所述TNFa活性为有害的病症为 牛皮癣性关节炎。
14. 如权利要求1至9中任一项的方法，其进一步包括施用其他治 疗剂。
15. 如权利要求14的方法，其中所述其他治疗剂为氨甲喋呤。
16. —种测试TNFa抗体或其抗原结合部分降低与腐蚀性多关节 炎相关的关节疾病的放射照相进展的功效的方法，该方法包括利用患 有与腐蚀性多关节炎相关的关节疾病的患者群体的改良总Sharp评分 (mTSS)及施用该TNFot抗体或其抗原结合部分之后该患者群体的 mTSS来确定该TNFoc抗体或其抗原结合部分的功效，其中当该mTSS 不变或降低时，显示该TNFot抗体或其抗原结合部分对于降低与腐蚀性多关节炎相关的关节疾病的放射照相进展是有效的。
17. 如权利要求16的方法，其中所述患者群体进一步患有TNFoc 活性为有害的病症。
18. 如^L利要求17的方法，其中所述TNFa活性为有害的病症选 自牛皮癣性关节炎、强直性脊柱炎和幼年型类风湿性关节炎。
19. 如权利要求16至18中任一项的方法，其中所述mTSS降低约-0.2。
20. 如权利要求16至18中任一项的方法，其中所述TNFa抗体或 其抗原结合部分是选自人源化抗体、嵌合抗体及多价抗体的抗体。
21. 如权利要求16至18中任一项的方法，其中所述TNFa抗体或 其抗原结合部分为英利昔单抗或格里木单抗。
22. 如权利要求16至18中任一项的方法，其中所述TNFa抗体或 其抗原结合部分为人类抗体。
23. 如权利要求22的方法，其中所述人类抗体或其抗原结合部分 以通过表面等离振子共振测定的lxl(T8 M或更低的Kd和lx10—3 s"或更 低的K。ffit率常数从人类TNFa上解离；并且该人类抗体或其抗原结合 部分在标准体外L929分析中以1 x 1 (T7 M或更低的IC5。中和人类TNFa 细月包毒性。
24. 如权利要求22的方法，其中所述人类抗体或其抗原结合部分 具有以下特征a) 以通过表面等离振子共振测定的lx10—3 s"或更低的K。ff速率常 数从人类TNFa上解离；b) 具有一个轻链CDR3域，其包含SEQ ID NO: 3的氨基酸序列或通 过位置l、 4、 5、 7或8处的单一丙氨酸置换或通过位置1、 3、 4、 6、 7、 8和/或9处的l至5个保守氨基酸置换由SEQ ID NO: 3修饰得到的氨基 酸序列；c) 具有一个重链CDR3域，其包含SEQIDNO: 4的氨基酸序列或通 过位置2、 3、 4、 5、 6、 8、 9、 10或11处的单一 丙氨酸置换或通过位 置2、 3、 4、 5、 6、 8、 9、 10、 1 l和/或12处的l至5个保守氨基酸置换由SEQ ID NO: 4修饰得到的氨基酸序列。
25. 如权利要求22的方法，其中所述人类抗体或其抗原结合部分 包含一个具有CDR3域的轻链可变区(LCVR)，该CDR3域包含SEQ ID NO: 3的氨基酸序列或通过位置1、 4、 5、 7或8处的单一丙氨酸置换由 SEQ ID NO: 3修饰得到的氨基酸序列；并且包含一个具有CDR3域的 重链可变区(HCVR),该CDR3域包含SEQ ID NO: 4的氨基酸序列或通 过位置2、 3、 4、 5、 6、 8、 9、 10或11处的单一丙氨酸置换由SEQ ID NO: 4修饰得到的氨基酸序列。
26. 如权利要求22的方法，其中所述人类抗体或其抗原结合部分 包含一个轻链可变区(LCVR),该轻链可变区包含SEQ ID NO: l的氨基 酸序列；以及一个重链可变区(HCVR),该重链可变区包含SEQ ID NO: 2的氨基酸序列。
27. 如权利要求22的方法，其中所述人类抗体或其抗原结合部分 为阿达木单抗。
28. 如权利要求16至18中任一项的方法，其中所述TNFot抗体或 其抗原结合部分以两周一次的给药方案施用于受试者。
29. 如权利要求16至18中任一项的方法，其中所述抗体或其抗原 结合部分与其他治疗剂结合施用。
30. 如权利要求29的方法，其中所述其他治疗剂为氨曱喋呤。
31. —种监测TNFa抗体或其抗原结合部分治疗人类受试者的腐 蚀性多关节炎的有效性的方法，该方法包括利用患有腐蚀性多关节炎 的患者群体的改良总Sharp评分(mTSS)基线及施用该TNFa抗体或其 抗原结合部分之后患者群体的mTSS值来确定该TNFa抗体或其抗原 结合部分的有效性，其中选自i) 约9-27。/。的患者群体mTSS降低；ii) 约65-73。/。的患者群体mTSS不变；及iii) 约9-28o/o的患者群体mTSS增力口的结果显示该TNFa抗体或其抗原结合部分在治疗腐蚀性多关节 炎中有效。
32. 如权利要求31的方法，其中所述TNFa抗体或其抗原结合部 分是选自人源化抗体、嵌合抗体及多价抗体的抗体。
33. 如权利要求31的方法，其中所述TNFa抗体或其抗原结合部 分为英利昔单抗或格里木单抗。
34. 如权利要求31的方法，其中所述TNFa抗体或其抗原结合部 分为人类抗体。
35. 如权利要求34的方法，其中所述人类抗体或其抗原结合部分 以通过表面等离^展子共振测定的lxl(T8 M或更j氐的Kd与lxl(T3 s^或更 低的K。ff速率常数从人类TNFa上解离，并且该人类抗体或其抗原结合 部分在标准体外L929分析中以lxl(T7 M或更低的IC5o中和人类TNFa细胞毒性。
36. 如权利要求34的方法，其中所述人类抗体或其抗原结合部分 为阿达木单抗。
37. —种测试TN F a抗体或其抗原结合部分治疗与牛皮癣性关节 炎相关的腐蚀性多关节炎的功效的方法，该方法包括利用患有腐蚀性 多关节炎的患者群体的改良总Sharp评分(mTSS)基线及牛皮癣面积及 严重度指数(PASI)评分基线或ACR评分基线与施用该TNFoc抗体或其 抗原结合部分之后该患者群体的mTSS及PASI或ACR评分相比以确定 该TNFot抗体或其抗原结合部分的功效，其中当mTSS不变或降低，及 至少约57%患者群体中达到ACR20反应或至少约75%患者群体中达到 PASI50反应时，显示该TNFot抗体或其抗原结合部分在治疗与牛皮癣 性关节炎相关的腐蚀性多关节炎中有效。
38. 如权利要求37的方法，所述患者群体中至少约39%进一步达 到ACR50反应。
39. 如权利要求38的方法，所述患者群体中至少约23%进一步达 到ACR70反应。
40. 如权利要求37的方法，所述患者群体中至少约59%进一步达 到PASI75反应。
41. 如权利要求40的方法，所述患者群体中至少约42%进一步达到PASI90反应。
42. 如权利要求37至41中任一项的方法，其中所述TNFoc抗体或 其抗原结合部分为阿达木单抗。
43. —种治疗腐蚀性多关节炎的方法，其包括以两周一次的给药 方案将阿达木单抗施用于患有腐蚀性多关节炎的受试者。
44. 如权利要求43的方法，其中阿达木单抗的剂量为约40mg。
45. —种试剂盒，其包含含有TNFot抗体或其抗原结合部分和药学上可接受的载体的药物 组合物，和用于施用该药物组合物以治疗腐蚀性多关节炎的说明。
46. 如权利要求45的试剂盒，其中所述药物组合物包含TNFa抗 体或其抗原结合部分阿达木单抗。
47. 如权利要求46的试剂盒，其中所述药物组合物包含约40mg的阿达木单抗。
48. 如权利要求45至47中任一项的试剂盒，其进一步包含其他治疗剂。
49. 如权利要求48的试剂盒，其中所述其他治疗剂为氨曱喋呤。
50. —种制造物品，其包含a) 包装材料；b) TNFa抗体或其抗原结合部分；及c) 包含于该包装材料内的标签或包装插页，其说明该TNFa抗体或 其抗原结合部分可用于治疗腐蚀性多关节炎。
51. —种制造物品，其包含a) 包装材料；b) TNFoc抗体或其抗原结合部分；及c) 包含于该包装材料内的标签或包装插页，其说明该TNFa抗体或 其抗原结合部分可用于抑制关节疾病的放射照相进展。
52. 如权利要求50或51的物品，其中所述抗TNFoc抗体或其抗原 结合部分为选自人源化抗体、嵌合抗体及多价抗体的抗体。
53. 如权利要求50或51的物品，其中所述TNFoc抗体或其抗原结 合部分为英利昔单抗或格里木单抗。
54. 如权利要求50或51的物品，其中所述TNFa抗体或其抗原结 合部分为人类抗体。
55. 如权利要求54的物品，其中所述人类抗体或其抗原结合部分 以通过表面等离振子共振测定的lxl(T8 M或更低的Kd和lxl(T3 s"或更 低的K。ff速率常数从人类TNFa上解离，并且该人类抗体或其抗原结合 部分在标准体外L929分析中以1 x 1 (T7 M或更低的IC5o中和人类TNFa 细月包毒性。
56. 如权利要求54的物品，其中所述人类抗体或其抗原结合部分 为阿达木单抗。
全文摘要
本发明描述了治疗腐蚀性多关节炎的方法，其包括施用TNFα抗体或其抗原结合部分。本发明还描述了一种测试TNFα抗体或其抗原结合部分治疗腐蚀性多关节炎的功效的方法。
文档编号A61K39/395GK101500607SQ200680023737
公开日2009年8月5日 申请日期2006年5月16日 优先权日2005年5月16日
发明者M·温伯格, R·S·霍夫曼 申请人:艾博特生物技术有限公司