用于药物递送的胶束的制作方法

专利名称：：用于药物递送的胶束的制作方法
技术领域：
：本发明涉及制备用于药物递送的胶束的聚合物，还涉及由该聚合物制得的胶束。
背景技术：
：许多抗癌药被所有类型的细胞非特异性地吸收，导致严重的副作用。因此，用于抗癌药的理想递送载体应该能将药物特异性地运输到癌细胞并在细胞内释放药物分子至其药理活性部位。最近出现的聚合物胶束为有希望的胶体载体，将水溶性差的药物或两亲药物以及基因靶向肿瘤组织。使用这些胶束，由于它们高渗透的血管生成的血管，耙向固体癌症的药物可以顺利达到提高的渗透性和保留作用。使用对周围温度或pH敏感的聚合物也可以得到靶向药物。而且，将生物信号连接至纳米粒子的表面可以实现活性药物的靶向，该生物信号包括抗体、激素、肽和如叶酸的小分子化合物，这些生物信号能被癌症细胞识别。与抗体、激素和肽相比，叶酸更便宜，更容易与纳米粒子结合，且在运输、贮藏和使用期间更稳定。与列出的其它不同，叶酸酯(folate)是非免疫原性的，因为叶酸酯自然存在于身体内。更重要地，叶酸酯受体时常表达于多种人癌症细胞类型的表面，且叶酸酯-药物结合物或叶酸酯-结合的纳米载体的细胞吸收是基于叶酸酯受体调节的内吞作用。可以展望相似的策略，将含有胶束的药物在体内靶向其它疾病细胞。人们己经全面研究了聚合的核-壳纳米粒子(core-shellnanoparticle)，其壳由温度敏感的聚(N-异丙基丙烯酰胺)(PNIPAAm)或其共聚物构成。例如，已经报道了由PNIPAAm-b-聚(甲基丙烯酸丁酉旨)和PNIPAAm-b-聚(D,L-丙交酉旨)嵌段共聚物制得的阿霉素(DOX)-合并的胶束。低于LCST(较低临界溶液温度)形成核-壳纳米粒子且药物释放慢。然而，当温度高于LCST时，胶束结构变形，包括DOX的释放。另外，使用通过LCST的温度循环调节DOX的释放。预期使用温度感应核-壳纳米粒子，通过局部加热和冷却达到暂时药物递送。然而，这种系统遇到不易接近深层组织或肿瘤的不利影响。将药物靶向肿瘤组织的可选择方法是使用pH敏感载体。患者中大部分固体肿瘤的细胞外pH为5.7至7.8。肿瘤组织液的pH很少降低至低于pH6.5，开发pH变化窄窗的系统具有挑战性。最近，据报道由聚(L-组氨酸)-b-聚(乙二醇)(PEG)制得的核-壳纳米粒子对pH敏感。在pH7.4至6.8时，这些纳米粒子分解，因此释放附着的药物，DOX。然而，在pH7.4基于聚(L-组氨酸)-b-PEG的胶束(核-壳纳米粒子)不稳定，必需与聚(L-丙交酉旨)-b-PEG胶束混合从而提高它们的稳定性。并且，响应外部pH变化的相变不如温度变化诱导的变化剧烈。US专利申请号10/865,681报道pH触发的热感应的核-壳纳米粒子自组装自两亲三元共聚物聚(N-异丙基丙烯酰胺-共-N,N-二甲基丙烯酰胺-共-10-十一碳烯酸)[P(NIPAAm-共-DMAAni-共-UA)]。这些胶束改变相(从水溶性，良好分散于水溶液到水不溶性，从水溶液中沉淀)快速响应外部pH变化。这些纳米粒子显示pH依赖较低临界溶液温度(LCST)。在正常生理环境(pH7.4)中，纳米粒子的LCST较好是高于正常体温(37GC)，因此纳米粒子被良好的分散。然而在酸性环境(即肿瘤组织、内含体或溶酶体)，LCST低于37^，导致核-壳纳米粒子的变形和沉淀，且导致附着的药物分子的最终释放。本申请公开pH触发的温度敏感胶束，该胶束由NIPAAm(温度敏感)，DMAAm(亲水性-调节聚合物的LCST)禾QUA(疏水和pH敏感化合物)无规共聚物制得。这些胶束具有pH依赖的LCST,其在模拟生理条件下(PBS,pH7.4)高于正常体温，但在pH6.6或以下低于正常体温。因此，胶束在生理环境中是稳定的，但在pH6.6或以下就变形和沉淀，释放附着的药物分子。这些胶束可以提供用于将抗癌药递送至肿瘤组织(微酸性)或用于细胞内药物递送的良好载体(从内含体-低pH环境脱离，并由此进入胞质溶胶)。然而，本申请所述的聚合物是无规的两亲共聚物，由其形成的胶束具有弹性核和宽粒度分布。EP00822217公开了基于聚(环氧乙垸)b-聚酯，更特别是聚(环氧乙烷)b-聚丙交酯或聚内酯(polylactone)的二嵌段共聚物。EP00844269公开基于聚(环氧乙垸)b-聚酯或聚(甲基丙烯酸:)的二嵌段共聚物。要求保护的聚合物与EP00822217中公开的聚合物相似。EP00852243公开了基于聚(环氧乙垸)b-聚酯或聚(甲基丙烯酸)的二嵌段共聚物。在聚(环氧乙垸)嵌段的末端有糖基。要求保护的聚合物与EP00822217中公开的聚合物相似。所有公开的聚合物都通过离子活性聚合来合成，且都不具有pH和温度敏感功能。US6224903公开了聚合物-脂质结合物。经二硫键、pH敏感键、酶裂解键或光化学裂解键将亲水聚合物链释放地连接在脂质体。亲水聚合物链释放后，脂质体的疏水段暴露于生理膜，提供与细胞或脂质体膜融合的机会。US22082198公开了由聚(乙二醇)-b-聚(氨基酸)制得的大分子胶束。所述氨基酸具有氨基或羧基，翻译可控DNA或蛋白质递送的聚合物。特别是，公开了聚(乙二醇)-b-聚(赖氨酸)和聚(乙二醇)-b-聚(门冬氨酸)。US22172711公开了聚合物-脂质结合物，与US6224903的结合物相似。US24077540公开了包含生物活性剂和增强粘膜递送有效量的透化肽的药物组合物。它要求保护该药物组合物与增强膜渗透剂，如表面活性剂、混合胶束或脂质体的联合应用。然而，使用的胶束的类型没有被公开。WO00226241公开了包含药物递送配合物的脂质，用于基因递送。所述配合物包括聚(乙二醇)、脂质(例如DOTAP,DOPE,DOPC,DSPE,DLPE等)、聚阳离子(即PEI)和耙向肽。9WO04002404公开将药物靶向肿瘤的pH敏感嵌段共聚物。所述嵌段共聚物由聚(L-组氨酸)、聚(乙二醇)、聚(L-乳酸沐/或聚(乳酸-共-羟基乙酸)制备。然而，所述聚合物不包含将共聚物靶向肿瘤的靶向成分。US25025821公开了与WO04002404所公开的相似的聚合物。特别是，公开了包含聚(L-组氨酸)-聚(乙二醇)嵌段共聚物和聚(L-乳酸)-聚(乙二醇)嵌段共聚物的混合胶束。发明目的本发明的目的是克服或实质上改善上述至少一个缺点。
发明内容本发明第一方面是提供包含至少一种第一嵌段和一种第二嵌段的嵌段共聚物，其中所述第一嵌段包含多个温度敏感单体单元、多个亲水单体单元和多个靶向单体单元，且所述第二嵌段包含多个疏水单体单元，所述第二嵌段包含至少一个pH敏感部分。各个疏水单体单元可以包含至少一个pH-敏感部分，或者一个或多个可以包含至少一个pH-敏感部分且其它的可以不包含pH-敏感部分。各个温度敏感单体单元可以与其它温度敏感单体单元相同，或者一些可以是相同的且一些可以是不同的。各个亲水单体单元可以与其它亲水单体单元相同，或者一些可以是相同的且一些可以是不同的。各个靶向单体单元可以与其它靶向单体单元相同，或者一些可以是相同的且一些可以是不同的。各个疏水单体单元可以与其它疏水单体单元相同，或者一些疏水单体单元相同且一些疏水单体单元可以不同。所述嵌段共聚物可以采用共聚物是核-壳结构的构造，该核-壳结构具有疏水核和亲水壳，其中至少一些耙向单体单元位于亲水壳中。所述嵌段共聚物可以具有各个嵌段中的一个，或者可以具有多于一个的第一嵌段、第二嵌段，或者同时具有第一和第二嵌段。所述嵌段共聚物可以是AB嵌段共聚物。所述pH-敏感部分可以是酸性部分或碱性部分。其可以是例如羧酸、磺酸、亚磺酸、膦酸、次膦酸、硫羧酸、二硫羧酸或者一些其它酸性部分，或者其可以是任选被取代的胺。所述pH-敏感部分可以是能引起嵌段共聚物改变构造响应介质pH变化的部分，其中嵌段共聚物位于介质中。所述疏水单体单元来自能聚合的不饱和脂肪酸，例如末端不饱和((o-l不饱和)脂肪酸。所述脂肪酸可以包含大约2至大约50个或更多个主链碳原子，或大约2至20、2至10、2至5、5至50、5至30、5至20、5至10、10至50、20至50、10至40、10至30或10至20，例如大约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、35、40、45或50个主链碳原子。它可以包含一个碳-碳双键(单不饱和)，或者可以包含至少2个，例如2、3或多于3个碳-碳双键(多不饱和)。其可以是co-l脂肪酸。所述脂肪酸可以是例如(E)-9-十八碳烯酸、(Z)-9-十八碳烯酸、(Z)-ll-十八碳烯酸、(E)-9-十六碳烯酸、(Z)-9-十六碳烯酸、(Z)-9-十四碳烯酸、(Z)-ll-二十碳烯酸、(Z)-13-二十二碳烯酸、(Z)-15-二十四碳烯酸、4-戊烯酸、7-辛烯酸、10-十一碳烯酸、15冲六碳烯酸、19-二十碳烯酸、(E,E)-9，12-十八碳二烯酸、(Z,Z)-9，12-十八碳二烯酸、(E，E)-9,11-十八碳二烯酸、(Z,Z,Z)-9,12,15-十八碳三烯酸、(Z,Z,Z)-6,9,12-十八碳三烯酸、(Z,Z,Z，Z)-6,9,12,15-十八碳四烯酸、(Z,Z，)-lU4-二十碳二烯酸、(Z,Z,Z)-5,8,ll-二十碳三烯酸、(Z,Z,Z)-ll,14,17-二十碳三烯酸、(Z,Z,Z)-8，11,14-二十碳三烯酸、(Z,Z,Z,Z)-8，11,14,17-二十碳四烯酸、(Z,Z,Z,Z)-5,8,11,14-二十碳四烯酸、(Z,Z,Z,Z，Z)-5,8,11,14,17-二十碳五烯酸、(Z,Z)-13，16-二十二碳二烯酸、(Z,Z，Z)-13,16，19-二十二碳三烯酸、(Z,Z,Z,Z)-7,10,13,16-二十二碳四烯酸、(Z,Z,Z，Z,Z)-4,7,10,13,16-二十二碳五烯酸、(Z,Z,Z,Z，Z)-7,10,13,16,19-二十二碳五烯酸、(Z,Z,Z,Z，Z,Z)-4,7,10,13,16，19-二十二碳六烯酸或(Z,Z,Z,Z,Z，Z)-6,9，12，15,18,21-二十四碳六烯酸，或任意两种或多种这些化合物的混合物。它可以是直链或支化的。它可以包含或不包含环状结构。所述温度敏感单体单元可以改变其亲水性以响应温度的变化。所述温度敏感单体单元可以赋予嵌段共聚物随温度变化的构造。它可以赋予嵌段共聚物随温度变化的亲水性。它可以是能脱水(即失去一个或多个水合的水)响应温度升高的单体单元。所述温度敏感单体单元可以来自例如，N-丙烯酰基哌啶、N-丙烯酰基吡咯酮、N-羟丙基丙烯酸酯、羟甲基纤维素、N-叔丁基丙烯酰胺、N-哌啶基甲基丙烯酰胺、N,N-二乙基丙烯酰胺、N-异丙基丙烯酰胺、N-甲基丙烯酰基哌啶、N-甲基丙烯酰基吡咯酮、N-羟丙基甲基丙烯酸酯、羟丙基纤维素、N-甲基丙烯酸叔丁酯、N,N-二乙基甲基丙烯酰胺或N-异丙基甲基丙烯酰胺。所述亲水单体单元包含酰胺、羧酸、羧酸酯、胺、羟基胺、二醇或醇。它可以来自例如丙烯酸、丙烯酰胺、丙烯酸酯、吡咯酮、乙二醇、甲基丙烯酸2-氨基乙酯或其被取代的衍生物。所述丙烯酰胺或其被取代的衍生物可以选自丙烯酰胺(AAm)、N,N'-二甲基丙烯酰胺(DMAAm)或N-(羟甲基)丙烯酰胺。所述靶向单体单元可以是肿瘤靶向单体单元。所述靶向单体单元可以包含靶向基团。它可以包含肿瘤靶向基团，和/或可以包含适于在体内靶向其它特定细胞(例如疾病细胞)的靶向基团。靶向基团可以是小分子衍生基团，如叶酸酯或半乳糖、肽(例如LHRH:促黄体激素-释放激素，或RGD:含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸的肽)、抗体(例如人源抗-CD22抗体用于靶向B细胞表达抗原CD22)或一些其它耙向基团。所述肽可以是线性的或环状的或支化的。在本文中，术语"抗体"包括抗体片段，包括但不限于，重链、轻链、可变区域、稳定区域、Fab、Fc、Fc受体、单链(scFV)抗体、互补测定区域(CDR)和任何蛋白质、多肽或包含抗体或其部分的肽。靶向基团可以与肿瘤，例如与肿瘤细胞、或与一些其它特定细胞(例如疾病细胞)在体内结合。所述靶向单体单元可以由靶向化合物，例如叶酸或其衍生物，与基质单体单元反应得到，其中所述基质单体单元包含能与靶向化合物11或其衍生物反应的官能团从而将靶向化合物或其衍生物结合至基质单体单元。所述官能团可以是胺，例如伯胺、或羟基或羧酸基。因此，所述靶向单体单元可以包含与基质单体单元结合的靶向化合物。所述基质单体单元可以包含胺基或羟基或羧酸基。它可以例如来自甲基丙烯酸氨基乙酯、丙烯酸氨基乙酯、丙烯酸氨基苯基酯或一些其它合适的氨基官能的单体单元、丙烯酸、N-(羟甲基)丙烯酰胺或甲基丙烯酸2-羟乙酯。所述第一嵌段可以包含无规共聚物嵌段或嵌段共聚物嵌段(例如二-、三、四或五-嵌段共聚物嵌段)或可选择共聚物嵌段或一些其它类型的共聚物嵌段。嵌段共聚物的分子量可以小于约40,000,或小于约35,000、30,000、25,000、20,000、15,000或10,000、或大约2000和大约40000之间、或大约2000和20000之间、2000和15000之间、2000和1000之间、5000和40000之间、10000和40000之间、20000和40000之间、3000和20000之间、3000和2000之间、5000和10000之间或5000和8000之间，例如大约2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500、7600、7700、7800、7900、8000、8500、9000、9500、1000、11000、12000、13000、14000、15000、20000、25000、30000、35000或40000。第一嵌段的分子量可以小于大约40,000、或小于大约35,000、30,000、25,000、20,000、15,000或10,000、或大约2000和大约40000之间、或大约2000和20000之间、2000和15000之间、2000和1000之间、5000和40000之间、10000和40000之间、20000和40000之间、3000和20000之间、3000和2000之间、5000和10000之间或3000和8000之间，例如大约2000、2500、3000、3500、3600、3700、3800、3卯0、4000、4100、4200、4300、4400、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500、7600、7700、7800、7900、8000、8500、9000、9500、1000、11000、12000、13000、14000、15000、20000、25000、30000、35000或40000。第二嵌段的分子量可以在大约200和2000之间、或大约200和1500之间、200和1000之间、400和2000之间、500和2000之间、1000和2000之间或500和1000之间，例如大约200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900或2000。因此，它可以被认为是低聚嵌段。各个嵌段的多分散性可以独立地是狭窄或宽泛。它可以在大约1.1和大约3之间、或大约1.1禾口2之间、1.1禾口1.5之间、1.3禾卩3之间、1.5禾口3之间、2禾口3之间或1.5和2之间，且可以是例如大约1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9或3。所述分子量可以是数均分子量、重均分子量、粘均分子量或Z-均分子量。所述分子量可以是使用聚苯乙烯标准测定的分子量。它们可以是聚苯乙烯-当量分子量。所述共聚物的较低临界溶液温度(LCST)可以充分低，以致在肿瘤或其它特定细胞的pH或其附近的pH，或至内含体(pH大约5-6.5)或溶酶体(pH大约4-5.5)，嵌段共聚物能伴随其亲脂嵌段递送药物至肿瘤或其它特定细胞。所述共聚物的较12低临界溶液温度(LCST)可以在pH小于大约7时低于大约37Gc。它可以低于大约36.5、36、35.5、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21或200C、或大约37和大约200C之间、或大约37和250C之间、37和300C之间、37和35^之间、37和36^C之间、36和35—Gc之间、36和3(^C之间、35和30。C之间、36.5和35.5QC之间、36.5和36QC之间、35和20^C之间、30和200C之间、35和30QC之间、35和32QC之间或30和20°C之间，例如大约20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、35.5、35.6、35,7、35.8、35.9、36、36.1、36.2、36.3、36,4、36.5、36.6、36.7、36,8、36.9或37。C,在pH小于大约7、或小于大约6.9、6.8、6.7、6.6、6.5、6.4、6.3、6.2、6.1、6、5.5或5、或大约7和大约1之间、6.9和1之间、6.8禾卩1之间、6.7禾P1之间、6.6禾口1之间、6.5禾n1之间、6.4禾n1之间、6.3禾nl之间、6.2禾nl之间、6禾I]1之间、5.5和1之间、5禾Q1之间、4禾l]1之间、3禾口1之间、2和1之间、6.8禾n3之间、6.8禾口5之间、6.8禾口6之间、6.6禾卩3之间、6.6禾口5之间或6.6禾口6之间，例如在大约l、2、3、4、5、5.5、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9或7。所述共聚物的较低临界溶液温度可以在pH7.4(正常生理pH)时高于大约37QC。在正常生理pH时，它可以高于大约37.5、38、38.5、39、39.5、40、45或50QC、或可以在大约37和大约50GC之间、或大约37和40QC之间、37和39QC之间、37.5和38.5GC之间、40和5(A:之间、或38和39^，且在正常生理pH时，可以是大约37、37.5、38、38.5、39、39.5、40、41、42、43、44、45、46、46、48、49或5(^c。如果每分子的温度敏感单体单元的数量是m，每分子的亲水单体单元的数量是n，每分子的靶向单体单元的数量是x，且每分子的疏水单体单元的数量是y，那么在嵌段共聚物中可以应用下列比例m/n在大约1和大约100之间、或大约1.和50之间、1和20之间、1和10之间、1和5之间、5和100之间、20和100之间、50和100之间、70和100之间、5和50之间、10和50之间、20和50之间、10和80之间、20和70之间、30和60之间、10禾卩20之间、20禾n30之间、30禾卩40之间、40禾卩50之间、50禾口60之间、60和70之间、70和80之间、80和90之间或90和100之间，例如大约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100;(m+n)/x在大约500和大约1之间、或大约100和500之间、100和400之间、200和400之间、200和300之间、或230和270之间，例如大约1、10、100、150、160、170、180、190、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295、300、310、320、330、340、350、400或500;(m+n+x)/y在大约2和大约500之间、或大约2和400之间、2和300之间、2禾口200之间、2和100之间、2禾口50之间、2禾口20之间、2和10之间、10禾口500之间、50和500之间、100和500之间、200和500之间、300和500之间、300和400之间、50和200之间、50和100之间、100和400之间、100和200之间或450和500之间，例如大约500、470、450、425、400、375、370、350、300、250、200、150、135、120、110、100、卯、80、70、60、50、40、30、20、10、9、8、7、6、5、4、3或2。在一个具体实施方案中比例m:n:x:y是大约49.0:15.2:0.236:3-10。在另一具体实施方案中，提供了包含至少一种第一嵌段和一种第二嵌段的嵌段共聚物，其中所述第一嵌段包含多个温度敏感单体单元、多个亲水单体单元和多个靶向单体单元，且所述第二嵌段包含多个疏水单体单元，所述第二嵌段包含至少一个pH敏感部分或能转化成pH敏感部分的官能团，且其中每个所述靶向单体单元由靶向化合物或其衍生物与基质单体单元反应得到，其中所述基质单体单元包含能与靶向化合物或其衍生物反应的官能团从而将靶向化合物或其衍生物结合至基质单体单元。能转化成pH敏感部分的官能团可以是能转化成羧酸基或转化成一些其它酸性基团，或转化成胺的官能团。能转化成pH敏感部分的官能团可以是例如甲基丙烯酸2-羟乙酯(HEMA)。在另一具体实施方案中，提供了包含至少一种第一嵌段和一种第二嵌段的嵌段共聚物，其中所述第一嵌段包含多个温度敏感单体单元、多个亲水单体单元和多个靶向单体单元，且所述第二嵌段包含多个疏水单体单元，所述第二嵌段包含至少一个pH敏感部分，且其中各个耙向单体单元包含结合至基质单体单元的叶酸。在另一具体实施方案中，提供了包含至少一种第一嵌段和一种第二嵌段的嵌段共聚物，其中所述第一嵌段包含多个來自N-异丙基丙烯酰胺的温度敏感单体单元、多个来自N,N-二甲基丙烯酰胺的亲水单体单元和多个靶向单体单元，且所述第二嵌段包含多个包含至少一个pH敏感部分的疏水单体单元，其中各个亲脂单体单元来自能聚合的不饱和脂肪酸，且其中各个靶向单体单元包含结合至来自甲基丙烯酸2-氨基乙酯的基质单体单元的叶酸。所述嵌段共聚物可以是胶束或纳米粒子的形式。所述胶束或纳米粒子可以包含疏水核和亲水壳。所述嵌段共聚物可以采用包含疏水核和亲水壳的构造。所述亲水壳可以包含靶向基团。当在极性溶剂中，例如水溶剂，它可以采用该构造。所述胶束或纳米粒子的平均直径可以为，在大约10和大约400纳米之间、或大约10和300之间、10和200之间、10和150之间、10和100之间、10和80之间、10和50之间、10和20之间、50和400之间、100和400之间、200和400之间、50和200之间、50和100之间、100和300之间、100和200之间、80和100之间、90和100之间、90和95之间、95禾Q100之间、80和150之间、80和130之间或80和120之间、例如大约10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、1465、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、120、130、140、150、200、250、300、350或400纳米。所述尺寸分布可以狭窄或宽泛。所述多分散性可以在大约0.1和0.5之间、或大约0.1和0.4之间、0.1禾口0.3之间、0.1禾口0.2之间、0.2禾口0.5之间、0.3禾口0.5之间、0.2禾口0.4之间或0.2禾卩0.3之间，例如大约O.l、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35、0.4、0.45或0.5。多分散性P表示如下P=s/R，其中s2是分布变量且R是平均粒子半径。P正常在0和1之间。胶束或纳米粒子在水中的临界缔合浓度(criticalassociationconcentration)可以在大约5和200毫克/升之间、或大约10和200毫克/升之间、20和200毫克/升之间、30和200毫克/升之间、50和200毫克/升之间、100和200毫克/升之间、5和150毫克/升之间、5和100毫克/升之间、5和50毫克/升之间、5和20毫克/升之间、5和10毫克/升之间、10和100毫克/升之间、10和50毫克/升之间、20和50毫克/升之间、30和50毫克/升之间、10和20毫克/升之间或15和20毫克/升之间，例如大约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、150或200毫克/升。本发明还提供了包含第一方面的嵌段共聚物的胶束或纳米粒子。本发明第二方面提供了制备嵌段共聚物的方法，所述方法包括一提供第一大分子单体，所述第一大分子单体包含多个温度敏感单体单元、多个亲水单体单元和多个靶向单体单元，且—将所述第一大分子单体与第二大分子单体反应，所述第二大分子单体包含多个疏水单体单元，且所述疏水嵌段包含至少一个pH-敏感部分或至少一个能转化成pH-敏感部分的基团。将第一大分子单体与第二大分子单体反应的歩骤可以包括将第一大分子单体与第二大分子单体进行共聚，或者该歩骤包括形成第一大分子单体和第二大分子单体1:1的加合物或1:2的加合物或2:1的加合物，或者该步骤包括一些其它形式的反应。所述温度敏感单体单元、亲水单体单元、靶向单体单元和疏水单体单元可以如第一方面中所述。所述提供第一大分子单体的步骤可以包括将前体大分子单体与耙向化合物，例如叶酸，或其衍生物(例如N-羟基琥珀酰亚胺酯)反应。所述反应将靶向化合物结合至前体大分子单体。所述前体大分子单体可以包含多个温度敏感单体单元、多个亲水单体单元和多个基质单体单元，其中各个基质单体单元包含能与耙向化合物或其衍生物反应的官能团从而将靶向化合物或其衍生物结合至前体大分子单体。所述第一大分子单体和/或所述前体大分子单体每分子可以包含至少一个羧基、羟基或氨基末端基团，且每分子可以包含一个末端羧基、羟基或氨基。所述羧基/羟基/氨基可以来自形成所述第一大分子单体和/或所述前体大分子单体使用的链转移剂。所述第一大分子单体的主链可以具有一个或多个端15基，该端基能与，或能被活化以至于能与第二大分子单体的主链的端基反应。第二大分子单体的主链可以具有一个或多个端基，该端基能与，或能被活化以至于能与第一大分子单体的主链的端基反应。本说明书的上下文中的大分子单体是寡聚或多聚的单体(即能聚合种类)。所述第一大分子单体的分子量(和，独立地，所述前体大分子单体的分子量)可以小于大约40,000、或小于大约35,000、30,000、25,000、20,000、15,000或10,000、或大约2000和大约40000之间、或大约2000和20000之间、2000和15000之间、2000和1000之间、5000和40000之间、10000和40000之间、20000和40000之间、3000和20000之间、3000和2000之间、5000和10000之间或3000和8000之间，例如大约2000、2500、3000、3500、3600、3700、3800、3900、4000、4100、4200、4300、4400、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7100、7200、7300、7400、7500、7600、7700、7800、7900、8000、8500、9000、9500、1000、11000、12000、13000、14000、15000、20000、25000、30000、35000或40000。所述第二大分子单体的分子量可以在大约200和2000之间、或大约200和1500之间、200和1000之间、400和2000之间、500和2000之间、1000和2000之间或500和1000之间，例如大约200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700、1800、1900或2000。因此，可以认为它是寡聚物。各个大分子单体的多分散性可以独立地是狭窄或宽泛。它可以在大约1.1和大约3之间、或大约1.1和2之间、1.1禾卩1.5之间、1.3禾卩3之间、1.5禾口3之间、2禾P3之间或1.5禾n2之间，且可以是例如大约1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9或3。提供第一大分子单体的步骤可以包括提供前体大分子单体的歩骤。提供前体大分子单体的歩骤可以包括将温度敏感单体、亲水单体和基质单体进行共聚(或者来自靶向分子与基质单体结合的靶向单体)，其中所述基质单体包含能与靶向化合物或其衍生物在所述共聚后反应的官能团，从而将靶向化合物或其衍生物结合至前体大分子单体。提供前体大分子单体的步骤可以包括自由基共聚。任选在链转移剂存在下，它可以使用自由基引发剂，例如过氧化苯酰。所述链转移剂可以是硫醇。它可以是羧基官能的链转移剂，或可以是羟基官能或氨基官能的链转移剂，或可以包含能转化成羧酸基、氨基或羟基的基团。它可以是例如羧基官能的硫醇，如巯基丙酸、巯基琥珀酸或巯基乙酸。它可以是例如羟基官能的硫醇，如巯基乙醇或硫醇官能的仲醇。它可以是氨基官能的硫醇，如2-氨基乙硫醇。所述反应可以在溶剂中进行，例如THF或一些其它合适的溶剂。所述反应基本上在不含氧的情况下进行。它可以在惰性气氛中进行，例如氮气、二氧化碳、氦气或氩气。所述反应可以在引发剂充分热分解至单体聚合的充分程度的温度和时间下进行。所述温度可以是例如溶剂的回流温度(沸点)。合适的温度可以在大约60和大约140。C之间,或大约60和100。C之间、100和140。C之间、60和80。C之间、1680和100。C之间、100和120°C之间或80和900C。C之间，例如大约60、70、80、85、卯、100、110、120、130或140t。所述反应可以进行大约1至大约48小时、或1至40、1至30、1至20、1至10、5至48、5至40、5至30、5至20、10至40、10至20或5至10小时，例如大约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、24、30、36、40、44或48小时。所述前体大分子单体的分子量可以小于大约40,000、或小于大约35,000、30,000、25,000、20,000、15,000或10,000、或在大约2000和大约40000之间、或大约2000和20000之间、2000和15000之间、2000和1000之间、5000和40000之间、10000和40000之间、20000和40000之间、3000和20000之间、3000和2000之间、5000和10000之间或3000和8000之间，例如大约2000、2500、3000、3500、3600、3700、3800、3900、4000、4100、4200、4300、4400、4500、5000、5500、6000、6500、6600、6700、6800、6900、7000、7500、7600、7700、7800、7900、8000、8500、9000、9500、1000、11000、12000、13000、14000、15000、20000、25000、30000、35000或40000。所述方法可以包括活化耙向化合物，例如形成适合与基质单体或与一个或多个前体大分子单体的基质单体单元结合的靶向化合物的衍生物。所述方法例如可以包括将耙向化合物的羧酸基与N-羟基琥珀酰亚胺反应从而形成靶向化合物的N-羟基琥珀酰亚胺衍生物(例如酯)。所述反应可以使用如N,N-二环己基碳二亚胺(DCC)的活化剂进行活化。活化衍生物与基质单体或与前体大分子单体内的基质单体单元的反应可以在合适溶剂如DMSO中或另一能溶解所有试剂的偶极非质子溶剂中进行。所述第二大分子单体包含疏水单体单元，该疏水单体单元包含至少一个pH-敏感部分或包含至少一个能转化成pH-敏感部分的基团。它可以是均聚物。它可以包含一个或多个羧酸单元如pH-敏感部分。它可以是聚合的羧酸。它可以包含至少一个(例如一个)末端氨基、羟基或羧基。所述方法也包括制备第二大分子单体的步骤。所述制备第二大分子单体的歩骤包括聚合能聚合疏水单体，所述能聚合疏水单体包含至少一个pH-敏感部分(例如能聚合羧酸)或包含能转化成如羧酸基的pH敏感部分的官能团。所述能聚合的疏水单体可以包含能聚合双键例如C=C双键，任选末端C-C双键。所述聚合可以是自由基的聚合且可以使用自由基引发剂。其可以使用例如过硫酸盐(例如过硫酸铵)且可以在链转移剂存在下进行。所述链转移剂可以是硫醇。它可以包含氨基、羟基或羧酸基。它可以包含能与第一大分子单体的端基反应的官能团。它可以是氨基硫醇，例如2-氨基乙硫醇。它可以是例如羧基官能的硫醇，如巯基丙酸、巯基琥珀酸或巯基乙酸。它可以是羟基官能的硫醇如巯基乙醇的或硫醇官能的仲醇。所述链转移剂可以与自由基引发剂形成氧化还原对。在一个实施例中，所述聚合依据下列方程式由硫醇基引发，由氨基乙硫醇盐酸盐与过硫酸盐反应产生2RSH+S208z-—2RS+2HS0、其中R代表氨乙基。所述反应在中性或碱性pH中进行，例如大约7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5或11或大约7和11之间、7和9之间、8禾口11之间、9禾口11之间、8禾卩10之间、7.5禾口9之间或8禾口9之间或7.5禾口8.5之间。在第二大分子单体具有末端羧基(例如来自羧基官能的链转移剂)的情况，优选所述第二大分子单体和由其制得的疏水单体不含有作为pH敏感部分的羧基。如果期望使用第二大分子单体制得的嵌段共聚物的第二嵌段具有作为pH敏感部分的羧基，优选所述第二大分子单体(和由其制得的疏水单体)具有能转化成羧酸基的官能团，例如所述第二大分子单体具有受保护的羧酸基。能转化成羧酸基的官能团可以是例如羟基或醛基(其可以被氧化成羧基)或羧酸酯(例如三甲基甲硅烷基、甲基、乙基；其可以被水解成羧基)或酐(例如乙酸酐、硫酸根、磷酸根、碳酸根；其可以水解成羧基)。在此情况下，一旦第二大分子单体通过与第一大分子单体反应并入嵌段共聚物，能转化成羧酸基的官能团可以转化成羧酸，以便嵌段共聚物的第二嵌段包含作为pH敏感部分的羧基。将第一大分子单体与第二大分子单体反应的歩骤可以包括活化第一大分子单体或第二大分子单体上的末端羧酸基。活化反应可以包括将末端羧基与活化剂，例如N-羟基琥珀酰亚胺反应，从而形成活化的酯，例如N-羟基琥珀酰亚胺酯。所述反应可以由上面所述的DCC活化。所述反应生成活化的大分子单体(活化的第一大分子单体或活化的第二大分子单体)。在与所述第二或第一大分子单体分别反应前，可以分离(例如过滤)和任选地干燥活化的第一或第二大分子单体。第一大分子单体与第二大分子单体的反应可以在合适溶剂中进行，例如DMSO或一些其它偶极非质子溶剂。因此，将第一大分子单体与第二大分子单体反应的步骤可以包括例如通过形成第一大分子单体的N-羟基琥珀酰亚胺酯活化第一大分子单体上的末端羧基，从而形成活化的第一大分子单体，且将活化的第一大分子单体与第二大分子单体反应。或者该歩骤可以包括例如通过形成第二大分子单体的N-羟基琥珀酰亚胺酯活化第二大分子单体上的末端羧基，从而形成活化的第二大分子单体，且将活化的第二大分子单体与第一大分子单体反应。在具体实施方案中，所述方法包括一将温度敏感单体、亲水单体和基质单体进行共聚从而形成前体大分子单体，其中所述基质单体包含能与靶向化合物或其衍生物在所述共聚后反应的官能团，从而将靶向化合物或其衍生物结合至前体大分子单体，一将耙向化合物结合至前体大分子单体从而形成第一大分子单体，且—将第一大分子单体与第二大分子单体反应，所述第二大分子单体包含多个疏水单体单元，且所述疏水嵌段包含至少一个pH-敏感部分。在另一具体实施方案中，所述方法包括—将温度敏感单体、亲水单体和基质单体在羧基官能的链转移剂存在下进行18共聚从而形成羧基官能的前体大分子单体，其中所述基质单体包含能与靶向化合物或其衍生物在所述共聚后反应的官能团从而将靶向化合物或其衍生物结合至前体大分子单体，一将靶向化合物结合至前体大分子单体从而形成第一大分子单体，—在氨基官能或羟基官能的链转移剂存在下，聚合包含至少一个pH-敏感部分的疏水单体从而形成氨基官能或羟基官能的第二大分子单体，—活化第一大分子单体以与第二大分子单体上的末端官能团(例如羟基或氨基)反应，且一将活化的第一大分子单体与第二大分子单体反应。在另一具体实施方案中，所述方法包括一将温度敏感单体、亲水单体和基质单体在羟基官能或氨基官能的链转移剂存在下进行共聚从而形成羟基官能或氨基官能的前体大分子单体，其中所述基质单体包含能与靶向化合物或其衍生物在所述共聚后反应的官能团，从而将靶向化合物或其衍生物结合至前体大分子单体，—将靶向化合物结合至前体大分子单体从而形成第一大分子单体，—在羧基官能的链转移剂存在下，聚合包含至少一个pH-敏感部分的疏水单体从而形成羧基官能的第二大分子单体，一活化第二大分子单体以与第一大分子单体上的末端官能团(例如羟基或氨基)反应，且一将活化的第二大分子单体与第一大分子单体反应。在另一具体实施方案中，所述方法包括—将温度敏感单体、亲水单体和基质单体在羟基官能或氨基官能的链转移剂存在下进行共聚从而形成羟基官能或氨基官能的前体大分子单体，其中所述基质单体包含能与靶向化合物或其衍生物在所述共聚后反应的官能团从而将靶向化合物或其衍生物结合至前体大分子单体，—将耙向化合物结合至前体大分子单体从而形成第一大分子单体，一在羧基官能的链转移剂存在下，聚合包含至少一个受保护的羧基的疏水单体，例如三甲基甲硅烷基酯从而形成羧基官能的第二大分子单体，—活化第二大分子单体以与第一大分子单体上的末端官能团(例如羟基或氨基)反应，一将活化的第二大分子单体与第一大分子单体反应，且一将受保护的羧基脱保护，例如水解，生成不受保护的羧基。在另一具体实施方案中，所述方法包括一将靶向化合物结合至基质单体从而形成靶向单体，其中所述基质单体包含与靶向化合物或其衍生物反应的官能团从而将靶向化合物或其衍生物结合至基质单体，一将温度敏感单体、亲水单体和靶向单体进行共聚从而形成第一大分子单体，且一将第一大分子单体与第二大分子单体反应，所述第二大分子单体包含多个疏水单体单元，且所述第二大分子单体包含至少一个pH-敏感部分。在另一具体实施方案中，所述方法包括一将温度敏感单体、亲水单体和氨基官能的单体进行共聚从而形成前体大分子单体，一将叶酸衍生物结合至前体大分子单体从而形成第一大分子单体，且一将第一大分子单体与第二大分子单体反应，所述第二大分子单体是疏水性的且包含pH敏感部分。在另一具体实施方案中，所述方法包括一将N-异丙基丙烯酰胺、N，N-二甲基丙烯酰胺和甲基丙烯酸2-氨基乙酯共聚，一将叶酸结合至前体大分子单体从而形成第一大分子单体，且—将第一大分子单体与第二大分子单体反应，所述第二大分子单体是10-十一碳烯酸的聚合物。在另一具体实施方案中，所述方法包括一将N-异丙基丙烯酰胺、N,N-二甲基丙烯酰胺和甲基丙烯酸2-氨基乙酯在羧基官能的硫醇存在下进行共聚从而形成前体大分子单体，一将叶酸的N-羟基琥珀酰亚胺衍生物与前体大分子单体反应从而形成第一大分子单体，一活化第一大分子单体以与胺反应从而形成活化的第一大分子单体，且一将活化的第一大分子单体与第二大分子单体反应，所述第二大分子单体是具有末端氨基的10-十一碳烯酸的聚合物。本发明还提供了通过第二方面的方法制备的嵌段共聚物。本发明第三方面提供了温度和pH敏感组合物，所述组合物包含一治疗剂，和—包含至少一种第一嵌段和一种第二嵌段的嵌段共聚物，其中所述第一嵌段包含多个温度敏感单体单元、多个亲水单体单元和多个靶向单体单元，且所述第二嵌段包含多个疏水单体单元，且所述第二嵌段包含至少一个pH敏感部分。所述嵌段共聚物是第一方面的嵌段共聚物，或依据第二方面制备得到。所述治疗剂可以是药物，例如抗癌药、抗炎药或治疗神经障碍的药物、或可以包含两种或多种这些药物的混合物，或可以是一些其它类型的药物。所述抗癌药可以是例如阿霉素、阿纳托唑、依西美坦、环磷酰胺、表柔比星、托瑞米芬、来曲唑、曲妥单抗、甲地孕酮、他莫昔芬、紫杉醇、多西他奇、卡培他滨、醋酸高锡林、羟基尿素、乙琥红霉素、环孢霉素或顺铂或任意两种或多种这些药物的混合物。所述组合物可以包含胶束或纳米粒子，或者是胶束或纳米粒子的形式。所述20胶束可以是球形的、伪球形的、基本上球形的、圆形的、扁球形的、卵球形的或一些其它形状。胶束的平均直径可以小于250纳米，或小于大约200、150、100或50纳米、或大约50和大约250纳米之间、或大约50和200之间、50和150之间、50和100之间、100和250之间、200和250之间、100和200之间、50和150之间或80和130纳米之间，例如大约50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、200或250纳米，或者可以大于250纳米。所述共聚物被制成至少一个包含疏水核和亲水壳的纳米粒子。所述治疗剂包含或位于或分布在所述疏水核内。所述壳可以包含靶向基团。至少一些靶向基团可以在纳米粒子的外表面。本发明第四方面提供了制备温度和pH敏感组合物的方法，所述方法包括将治疗剂与嵌段共聚物的溶液结合，所述嵌段共聚物包含至少一种第一嵌段和一种第二嵌段嵌段，其中所述第一嵌段包含多个温度敏感单体单元、多个亲水单体单元和多个靶向单体单元，且所述第二嵌段包含多个疏水单体单元，所述第二嵌段包含至少一个pH敏感部分。所述嵌段共聚物的溶液可以是胶束溶液。所述方法可以包括制备胶束或纳米粒子形式的组合物，或者可以包括将组合物转化成胶束或纳米粒子。所述胶束或纳米粒子可以各自包含疏水核和亲水壳，其中所述治疗剂包含在所述疏水核内本发明还提供了由第四方面的方法制备的组合物、纳米粒子或胶束。所述嵌段共聚物的溶液可以是在合适溶剂中的溶液。合适溶剂可以是偶极非质子溶剂。它可以是和水混溶的。它可以是例如二甲乙酰胺、DMSO或一些其它合适的溶液。当与嵌段共聚物溶液结合时，所述治疗剂可以在溶液中。所述治疗剂可以是中和的治疗剂。所述方法可以包含中和治疗剂。所述结合可以包括一次或多次混合、回荡、超声、震摇、共混、涡旋或一些其它形式的搅拌。所述方法包括一次或多次一透析结合的嵌段共聚物溶液和治疗剂从而形成包含所述治疗剂和所述嵌段共聚物的胶束或纳米粒子，且除去没有并入胶束或纳米粒子的治疗剂，且除去没有并入胶束或纳米粒子的嵌段共聚物，例如使用具有大约500和大约40000之间、或大约500和20000之间、500和10000之间、500和5000之间、500和2000之间、500和1500之间、1500和3000之间、1500和2000之间、2000和3000之间、1500和2500之间、2000和10,000之间、2000和40000之间、5000和40000之间、10000和40000之间、20000和40000之间、1000和20000之间、1000和10000之间、1000和5000之间或大于40000，例如大约500、1000、1500、1600、1700、1800、1900、2000、2100、2200、2300、2400、2500、2600、2700、2800、2900、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、10000、15000、20000、25000、30000、35000或40000或大于40000分子量筛截的透析膜；一通过过滤器过滤结合的嵌段共聚物溶液和治疗剂，例如0.45微米、0.3微米、0.2微米或0.1微米尺寸的过滤器或膜；21一干燥滤液，例如冷冻干燥。在具体实施方案中，所述方法包括一将治疗剂与嵌段共聚物的溶液结合，所述嵌段共聚物包含至少一种第一嵌段和一种第二嵌段嵌段，其中所述第一嵌段包含多个温度敏感单体单元、多个亲水单体单元和多个靶向单体单元，且所述第二嵌段包含多个疏水单体单元，所述第二嵌段包含至少一个pH敏感部分；一使用具有大约2000分子量筛截的透析膜透析所述结合的嵌段共聚物溶液和治疗剂从而形成包含所述治疗剂和所述嵌段共聚物的胶束或纳米粒子；一通过0.45微米的过滤器过滤嵌段共聚物溶液和治疗剂的透析结合物从而分离滤液(即通过过滤分离胶束或纳米粒子)；且一冷冻干燥滤液(即胶束或纳米粒子)。本发明第五方面提供了给受实验者，例如动物或人类提供治疗剂的方法，所述方法包括给予动物或人类温度和pH敏感组合物，该温度和pH敏感组合物包含一治疗剂，和一包含至少一种第一嵌段和一种第二嵌段的嵌段共聚物，其中所述第一嵌段包含多个温度敏感单体单元、多个亲水单体单元和多个靶向单体单元，且所述第二嵌段包含多个疏水单体单元，且所述第二嵌段包含至少一个pH敏感部分；其中所述共聚物被制成至少一个包含疏水核和亲水壳的纳米粒子且其中所述治疗剂包含、处于或分散在所述疏水核内。所述组合物可以经口服、局部、静脉内、局部区域(tropically)、肠胃外递送，经吸收或眼部途径递送。所述治疗剂包含抗癌药。靶向基团在纳米粒子的外表面上。所述组合物可以是抗癌组合物。所述靶向基团可以是肿瘤靶向基团。所述受实验者可以是人类或非人类动物。它可以是灵长类动物。它可以是家畜或者它可以是非家畜。它可以是例如猿、猴、马、绵羊、母牛、公牛、山羊、猪、狗、猫、大象或一些其它类型的动物。当用于给动物或人类提供治疗剂时，还提供了第一方面的嵌段共聚物或第三方面的组合物。本发明第六方面提供药物组合物，所述药物组合物包含本发明第三方面的组合物以及至少一种药学上可接受的载体和/或佐剂。所述载体可以例如包含无菌水、注射用水、其它合适的水、复方氯化钠注射液、哈特曼氏溶液、葡萄糖溶液或盐水溶液。还提供所述药物组合物治疗患者病症的用途，其中治疗剂用于所述治疗。所述病症可以是癌症、或神经障碍，或可以是一些其它病症。本发明第七方面提供了第一方面的嵌段共聚物或第三方面的组合物在制备治疗癌症或神经障碍的药物或药物组合物中的用途。本发明第八方面提供了包含至少一种第一嵌段和一种第二嵌段的前体嵌段共聚物，其中所述第一嵌段包含多个温度敏感单体单元、多个亲水单体单元和多个基质单体单元，且所述第二嵌段包含多个疏水单体单元，且所述第二嵌段包含至少一个pH敏感部分，其中各个基质单体单元包含能与耙向化合物或其衍生物反应的官能团从而将靶向化合物或其衍生物结合至前体嵌段共聚物。所述温度敏感单体单元、亲水单体单元、基质单体单元和疏水单体单元如前面所述。所述前体嵌段共聚物可以与第一方面的嵌段共聚物相同，除了所述靶向单体单元被基质单体单元代替。因此，例如分子量、嵌段中单体数量等可以如第一方面的嵌段共聚物所述。各个温度敏感单体单元可以与其它温度敏感单体单元相同，或者一些可以相同且一些可以不同。各个亲水单体单元可以与其它亲水单体单元相同，或者一些可以相同且一些可以不同。各个基质单体单元可以与其它基质单体单元相同，或者一些可以相同且一些可以不同。各个疏水单体单元可以与其它疏水单体单元相同，或者一些可以相同且一些可以不同。所述嵌段共聚物可以采用所述共聚物为含有疏水核和亲水壳的核-壳结构的构造，其中至少一些基质单体单元位于亲水壳。所述嵌段共聚物可以具有各个嵌段中的一个，或可以具有多于一个的第一嵌段、第二嵌段、或第一嵌段和第二嵌段。所述嵌段共聚物可以是AB嵌段共聚物。本发明第九方面提供制备前体嵌段共聚物的方法，所述方法包括一提供前体大分子单体，所述前体大分子单体包含多个温度敏感单体单元、多个亲水单体单元和多个基质单体单元，且—将所述前体大分子单体与第二大分子单体反应，所述第二大分子单体包含多个疏水单体单元，且所述第二大分子单体包含至少一个pH-敏感部分。所述前体大分子单体可以如本发明第二方面所述。本发明还提供了通过第九方面的方法制备的前体嵌段共聚物。本发明第十方面提供了制备嵌段共聚物的方法，所述方法包括将本发明第八方面的前体嵌段共聚物或通过本发明第九方面的方法制备的前体嵌段共聚物，与靶向化合物或其衍生物反应从而将所述靶向化合物或其衍生物结合至前体嵌段共聚物。所述嵌段共聚物可以是本发明第一方面的嵌段共聚物。现在通过实施例描述本发明优选的方式并参考随附的附图，其中图1显示UA(A)和PUA(B)的^-NMR图谱(d-DMSO作为溶剂)；图2显示PUA-NH2(A)和叶酸酯-结合的P(NIPAAm-共-DMAAm-共-AMA)-b-PUA(B)的FT-IR图谱(其中AMA是甲基丙烯酸2-氨基乙酯)；图3是叶酸酯-结合的P(NIPAAm-共-DMAAm-共-AMA)-b-PUA的^-NMR图谱(d-DMSO作为溶剂)；图4是胶束在PBS(磷酸盐缓冲溶液)中的透光率曲线，为温度的函数，在500纳米变化pH:(a)pH7.4;(b)pH6.6;23图5是I335.5/I334.0的强度比曲线，为在去离子水中聚合物浓度(logC)的对数函数；图6是I335.5/I334.0的强度比曲线，为聚合物在不同缓冲液中pH的函数；图7显示空白胶束(a)和DOX(阿霉素)-负载的胶束(b)的透射电子显微镜(TEM)影像；图8显示在37°C(a)pH7.4;(b)pH6.6孵育从胶束释放DOX的分布；图9显示共焦纤维影像(a)用游离DOX孵育的4T1细胞；(b)由P(NIPAAm-共-DMAAm-共-UA)制得的DOX-负载的胶束；禾Q(c)叶酸酯-结合的P(NIPAAm-共-DMAAm-共-AMA)-b-PUA(DOX浓度=10毫克/升)；图IO是显示用DOX,DOX-负载的P(NIPAAm-共-DMAAm-共-UA)和叶酸酉B-结合的P(NIPAAm-共-DMAAm-共-AMA)-b-PUA胶束在37QC孵育48小时后的4T1细胞的存活率图11是显示肿瘤中DOX浓度的图，用于游离DOX禾卩DOX-负载的胶束的制剂；图12是显示游离DOX生物分布的图；和图13是显示DOX-负载的胶束的生物分布的图。具体实施例方式在一个具体实施方案中，本说明书公开基于叶酸酯-结合聚(N-异丙基丙烯酰胺-共-N,N-二甲基丙烯酰胺-共-甲基丙烯酸2-氨基乙酯)-b-聚(10-十一碳烯酸))的嵌段共聚物，其是pH-和温度敏感的。该聚合物可以自组装成核-壳纳米粒子。在自组装过程中，一种或多种药物可以被包封入纳米粒子。所述纳米粒子在正常生理条件下是稳定的，但是在低pH环境如肿瘤组织、内含体或溶酶体中变形。靶向基团(叶酸酯)将纳米粒子导向肿瘤细胞且纳米粒子释放药物分子至胞质溶胶(细胞内药物递送)。生物信号(即耙向基团)被结合至共聚物的亲水嵌段，用于靶向过度表达叶酸酯受体的癌症细胞。更具体而言，本文公开了(AaBbQO-Dy结构的嵌段共聚物，其中A是温度敏感单体单元，B是亲水单体单元，C是耙向单体单元且D是疏水单体单元，且a、b、x和y大于1。所述A3bC、嵌段可以包含无规共聚物嵌段或嵌段共聚物嵌段或可选择的共聚物嵌段或一些其它类型的共聚物嵌段。(AaBbCx)-Dy的分子量可以小于大约40,000且AaBbCx的分子量可以小于大约40,000。Dy嵌段的分子量可以在大约200和2000之间，且因此被认为是寡聚嵌段。各个嵌段的多分散性可以独立地是大约1.1和大约3之间。每分子温度敏感单体单元的数量除以每分子亲水单体单元的数量之值可以在大约1和大约100之间。每分子温度敏感单体单元的数量加上每分子亲水单体单元的数量的总数与每分子靶向单体单元的数量的比率可以是大约500和大约1之间。AaBbQc嵌段中单体单元的数量和Dy嵌段嵌段中单体单元的数量的比率可以在大约2和大约500之间。将具有聚合物结构的AaBbCx结构的共聚物，特别是A3bCx-G！结构的聚合物与Dy-G2结构的聚合物反应可以制备嵌段共聚物(AaBbCx)-Dy，其中G!和G2是能反应将AaBbQrGi与Dy-G2偶联的基团。或者，其可以通过(AaBbSx)-Dy结构的嵌段共聚物与靶向分子反应而制备，其中S是能与靶向分子反应从而生成耙向单体单元C的基质单体基团。将衍生出A、B和C的单体进行共聚，或者将AaBbSx结构的共聚物与靶向分子反应可以制备共聚物AaBbCx。将衍生出A、B和S的单体进行共聚可以制备共聚物AaBbSx。通过自由基共聚合成聚合物的亲水和疏水嵌段，然后将这两种嵌段结合形成嵌段共聚物，其可以自组装成核-壳纳米结构或纳米粒子(即胶束)。所述胶束能吸收内含体或溶酶体内的质子，打破内含体或溶酶体内外的质子浓度的平衡，因此与内含体或溶酶体膜融合。另外，所述纳米粒子的表面在低pH环境如肿瘤位置、内含体或溶酶体中是疏水性的，因此提高纳米粒子对肿瘤位置的附着或与内含体或溶酶体膜融合。p(NIPAAm-共-DMAAm-共-AMA)-b-PUA是嵌段亲水共聚物，与现有技术相比其形成具有用于药物并入的更稳定壳和更小尺寸具有更窄分布的胶束。所述聚合物能在亲水嵌段并入叶酸酯部分，导致具有壳的胶束，在共聚物自组装后所述壳包含叶酸酯分子。这些胶束适于靶向抗癌药至过度表达叶酸酯受体的肿瘤细胞且在细胞内释放药物分子至胞质溶胶，提供癌症治疗的更好方法。在现在的工作中，本发明人已经合成了多官能嵌段共聚物叶酸酯-结合聚(N-异丙基丙烯酰胺-共-N，N-二甲基丙烯酰胺-共-甲基丙烯酸2-氨基乙酯)-b-10-十一碳烯酸(P(NIPAAm-共-DMAAm-共-AMA)-b-PUA)。应用单体甲基丙烯酸2-氨基乙酯生成用于叶酸酯结合的氨基。所述嵌段共聚物能在水溶液中自组装成胶束，每个所述胶束具有包含叶酸分子的壳。这些胶束也显示依赖pH的LCST，但是当与P(NIPAAm-共-DMAAm-共-UA)胶束相比时，显示更稳定的内核和具有更窄分布的更小尺寸(<100纳米)。阿霉素(DOX)被用作抗癌药模型。DOX释放响应环境pH变化。研究和比较空白胶束、游离DOX和DOX-负载的胶束对4T1小鼠乳腺癌细胞的细胞吸收和体外细胞毒性。应用由4T1细胞诱导的小鼠乳腺癌模型研究DOX的生物分布和其血液浓度，为时间的函数。当与游离DOX相比时，DOX-负载的胶束用药后，在肿瘤组织中累积了更多的DOX。这些多官能胶束可以成为有希望的载体从而特异性地运输抗癌药至肿瘤细胞并在细胞内释放药物至胞质溶胶。在本系统中，聚合10冲一碳烯酸(UA)从而形成PUA，且将具有氨基的单体，甲基丙烯酸2-氨基乙酯(AMA)与N-异丙基丙烯酰胺(NIPAAm)和N，N-二甲基丙烯酰胺(DMAAm)进行共聚。将所得的聚(NIPAAm-共-DMAAm-共-AMA)与叶酸酯结合，所述叶酸酯是耙向信号(肿瘤靶向化合物)，它能识别过度表达叶酸酯受体的癌症细胞。将叶酸酯-结合的P(NIPAAm-共-DMAAm-共-AMA)进一步结合至PUA从而形成多官能嵌段共聚物，其是pH和温度敏感的以及对肿瘤细胞敏感。25该两亲嵌段共聚物可以自组装成具有小尺寸和窄尺寸分布的胶束(核-壳纳米粒子)。另夕卜，当与P(NIPAAm-共-DMAAni-共-UA)胶束相比时，形成的胶束显示更稳定的并入药物的内核。这些胶束可以靶向抗癌药至过度表达叶酸酯受体的肿瘤细胞并在细胞内释放药物至胞质溶胶，提供癌症治疗的更好方法。因此，在一个实施例中，本发明提供了多官能胶束，例如核-壳纳米粒子的形式，其可以由叶酸酯-结合的聚(N-异丙基丙烯酰胺-共-N,N-二甲基丙烯酰胺-共-甲基丙烯酸2-氨基乙酯)-b-聚(10-十一碳烯酸)(P(NIPAAm-共-DMAAm-共-AMA)-b-PUA)自组装。所述胶束可以用于药物，例如抗癌药的靶向递送。当与由无规共聚物聚(N-异丙基丙烯酰胺-共-N,N-二甲基丙烯酰胺-共-十一碳烯酸)(P(NIPAAm-共-DMAAm-共-UA))(公开在美国专利申请No.10/865,681)制得的胶束相比，己证明这些胶束具有更好定义的核-壳结构、更稳定的核、具有更窄分布的更小尺寸。以P(NIPAAm-共-DMAAm-共-UA)胶束相似的方式，P(NIPAAm-共-DMAAm-共-AMA)-b-PUA胶束也显示依赖pH的LCST(较低临界溶液温度)，其在生理条件下，于pH7.4时高于正常体温，但是于pH6.6或以下时低于正常体温。因此，所述胶束在PBS中于pH7.4时稳定，但是于pH6.6或以下时变形和沉淀，释放附着的药物化合物。在一个实施例中，通过膜透析的方法，将抗癌药模型，阿霉素(DOX)加载至叶酸酯结合的P(NIPAAm-共-DMAAm-共-AMA)-b-PUA的胶束。所述DOX-负载的胶束小于大约100纳米，具有狭窄尺寸分布。从胶束释放DOX也是依赖pH的，于37QC在pH6.6或以下时释放更慢，但是在pH7.4时释放更快。本发明胶束的另一特征是它们靶向抗癌药至过度表达叶酸酯受体的肿瘤细胞的能力，因为叶酸酯分子存在与胶束的表面。因此，通过叶酸酯受体-表达细胞株，4T1小鼠乳腺癌细胞的模型，它们的细胞吸收高于不含叶酸酯的P(NIPAAm-共-DMAAm-共-UA)胶束，导致更大的细胞毒性。体内研究显示，当与游离DOX相比时，DOX-负载的叶酸酯结合的P(NIPAAm-共-DMAAm-共-AMA)-b-PUA胶束在肿瘤组织产生更高的DOX水平，在心脏产生更低水平且延长血液循环。本发明人假设所述胶束通过网状内皮系统(RES)和单核吞噬细胞系统(MPS)稳定DOX且降低它的吸收。另外，在心脏DOX水平的降低可以减少DOX的心脏毒性，DOX的主要副作用。因此，这些多官能胶束可以用作更充分递送抗癌药的载体。与美国专利申请No.10/865,681公开的聚合物相比，本发明的嵌段共聚物提供了具有更稳定的用于药物并入的内核和具有更窄分布的更小尺寸的胶束。更重要的是，所述聚合物在亲水嵌段包含肿瘤靶向部分，例如叶酸酯部分，导致自组装后胶束具有含肿瘤靶向部分的壳。这些胶束能靶向抗癌药至过度表达叶酸酯受体的肿瘤细胞并在细胞内释放药物至胞质溶胶，提供癌症治疗的更好方法。本发明可以比先前胶束更有效用于靶向药物至肿瘤组织。另外，它可以在体外或动物研究中用于药物发现。26在下面所述的实施例中，多官能嵌段共聚物叶酸酯-结合的聚(N-异丙基丙烯酰胺-共-N,N-二甲基丙烯酰胺-共-甲基丙烯酸2-氨基乙酯)-b-聚(十一碳烯酸)已成功合成且并用于制备抗癌药靶向递送的胶束。在自然界所述胶束是球形的，且空白和DOX-负载的胶束的平均直径小于100纳米。所述胶束的较低临界溶液温度(LCST)是依赖pH的。因此，粒度和从胶束的药物释放也是依赖pH的。所述胶束在37。C于PBS(pH7.4)中是稳定的，但是在酸性环境中变形，导致快速药物释放。经受体介导细胞摄粒作用，通过叶酸酯受体-表达4Tl细胞吸收具有叶酸酯的DOX-负载的胶束。当与不含叶酸酯的DOX-负载的胶束相比时，观测到更多的吸收，导致升高的细胞毒性。从体内研究得到的结果显示当与游离DOX相比时，由该多官能聚合物自组装的DOX-负载的胶束在血液中具有更长的循环时间，并在肿瘤中产生更高浓度，但是在心脏中产生更低浓度。使用这些胶束在肿瘤中DOX的累积升高，可以提供更有效的癌症治疗。实施例嚴拜^力一法麟通过从正己烷中重结晶纯化N-异丙基丙烯酰胺(NIPAAm,购自Sigma-Aldrich)。N,N-二甲基丙烯酰胺(DMAAm)和10-^^—碳烯酸(98%,UA)购自Sigma且在使用前真空蒸馏。牛血清白蛋白(FBS)由Invi加genCorporation供给。阿霉素盐酸盐(DOX)、芘、3-巯基丙酸(MPA)、甲基丙烯酸2-氨基乙酯盐酸盐(卯％)、2-氨基乙硫醇(AET)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、二环己基碳二亚胺(DCC)、3-[4,5-二甲基噻唑基-2]-2,5-二苯基四唑溴化物(MTT)、L-谷氨酰胺、乙腈(HPLC级)、无水二氯甲烷(DCM)、无水二甲基亚砜(DMSO)、N,N-二甲乙酰胺(DMAc)和甲醇(HPLC级)购自Sigma-Aldrich，且未处理直接使用。过硫酸铵(APS)购自Bio-RadLaboratories。四氢^^喃(THF)和甲苯购自Merck，且用钠干燥。4T1细胞株购自ATCC。所以其它化学试剂为分析级，且未处理直接使用。叶酸酯-结合的聚(N-异丙基丙烯酰胺-共-N,N-二甲基丙烯酰胺-共-甲基丙烯酸2-氨基乙酯)-b-聚(lO-i^—碳烯酸)(P(NIPAAm-共-DMAAm-共-AMA)-b-PUA)的合成P(NIPAAm-共-DMAAm-共-AMA)-COOH的合成27H2C=CHIINHCHMe2NIPAAmHSCH2CH2COOHBPO,THF回流H2C=CHH3IIC=0+xCH2=^IIC=0DMAAmOCH2CH2NH2AMAH-H2C—CH.H2C—CH"严H2C—C——-SCH2CH2COOH广oij;==o-厂crNHCHMe2NMe2OCH2CH2NH2方案1P(NIPAAm-共-DMAAm-共-AMA)-COOH的合成。通过自由基共聚，使用作为引发剂的过氧化苯酰(BPO)和作为链转移剂的3-巯基丙酸(MPA)制备羧酸-封端的P(NIPAAm-共-DMAAm-共-AMA)前体聚合物(方案l)。例如，将N-异丙基丙烯酰胺(20.0克，176.9毫摩尔)、N,N-二甲基丙烯酰胺(3.50克，35.38毫摩尔)、甲基丙烯酸2-氨基乙酯盐酸盐(90%)(158.4毫克，0.86毫摩尔)、MPA(269毫克，2.54毫摩尔)和BPO(85.6毫克，0.35毫摩尔)溶解在30毫升THF中。将溶液用氮气鼓泡20分钟除空气。在氮气中于85。C将反应混合物回流8小时。反应完成后，加入乙醚，沉淀析出产物。使用缓慢液-液扩散法从THF-乙醚中通过三次再沉淀纯化该产物，然后真空干燥。使用2000分子量筛截的透析膜(Spectra/Por7，SpectrumLaboratoriesInc.)对去离子(DI)水透析一星期来进一步纯化该产物。通过冷冻干燥获得最终产物。〃/"變潔層兹合游iYA^A4w-^M)M44m-^^4M^-COC^游^V龙<formula>formulaseeoriginaldocumentpage29</formula>方案2叶酸酯-结合的P(NIPAAm-共-DMAAm-共-AMA)-COOH的合成。在室温，用DCC(0.495克，2.4毫摩尔)和NHS(0.463克4毫摩尔)预活化溶解在20毫升DMSO中的叶酸的羧酸基(1,0克，2毫摩尔)(方案2)。在该反应中，形成二环己基脲并通过过滤去除。将真空干燥的前体聚合物加至反应液中。反应在室温中进行48小时。将所得的溶液置于2000分子量筛截的透析膜上，并用一周对DI水透析。通过冷冻干燥获得最终产物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage29</formula>APSyH2C=CH+H2NCH2CH2SH-CH2(CH2)5CH2ICH2ICOOH方案3H—pH8.0H2C—CH-PUA-NH2的合成c-SCH2CH2NH2CH2Jy(CH2)5a,CH2b'CH2c,COOH通过自由基共聚，使用作为引发剂的氧化还原剂过硫酸钹(APS)和作为链转移剂的2-氨基乙硫醇制备胺基-封端的聚(10-十一碳烯酸)前体聚合物。简要地，通过与100毫升氢氧化钠溶液(0.1M)反应首先将^—碳烯酸(40.0克，217.0毫摩尔)转化成钠盐，且将溶液的pH调至8.0。将该溶液用氮气鼓泡过夜。然后，搅拌下将AET(2.0%-2.5%的单体，以摩尔计)和APS(4%的单体，以重量计)加入到溶液中(方案3)。反应在70。C进行48小时。反应完成后，加入冷乙醇，沉淀析出粗产物。将沉淀物在乙醇中再分散三次去除未反应的单体。使用1000Da分子量筛截的透析膜，将产物对DI水透析从而去除盐，且通过冷冻干燥获得产物。户tt4-A^2与〃户凝:^-兹合游iYMP^4m-^-"M14m-^^4Mi)-C00//游祭会-H2C—CH-I^c=oNHCHMe2过滤，乙醚沉淀H2C—CH~卞=0CH3I'H2C~C—SCH2CH2COOH-NHS,DCCDCMc=o」xNMe2OCH2CH2NH—FA真空干燥PUA-NH2DMSOH--H2C—CH.H2C—CH"6=0,NHCHMe2OT3H2C——=0-SCH2CH2CONHCH2CH2S--H2C—CH.NMe2bC=0」xOCH2CH2NH—FA-HCH2Jy(CH"a'fH2b'CH2c,COOH方案4叶酸酯-结合的P(NIPAAm-共-DMAAm-共-AMA)-b-PUA的合成。使用DCM中的DCC(1.2毫摩尔)和NHS(2毫摩尔)活化叶酸酯-结合的30P(NIPAAm-共-DMAAm-共-AMA)-COOH的羧酸基(1毫摩尔)。通过过滤去除二环己基脲，加入过量的乙醚沉淀活化的叶酸酯-结合的P(NIPAAm-共-DMAAm-共-MAm)-COOH，其进一歩真空干燥。将活化的叶酸酯-结合的P(NIPAAm-共-DMAAm-共-MAm)-COOH(1克)和过量的PUA-NH2(3克)溶解在30毫升DMSO中，并在室温下搅拌48小时(方案4)。通过使用3,500Da分子量筛截的透析膜，用一周对DMSO透析从而去除未反应的PUA-NH2，且每天补充DMSO。进一步用另一周对DI水透析。通过冷冻干燥得到最终的浅黄色的产物，且该产物通过GPC、)H-NMR、FTIR和滴定法鉴定。分殘分折通过具有差示折光检测器(Waters410,MA,USA)的凝胶渗透色谱(GPC)(Waters2690,MA，USA)测定聚合物的分子量。使用的流动相是THF，流速为1毫升/分钟。从使用一系列聚苯乙烯标准品(PolymerLaboratoriesInc.,MA,USA,分子量范围从1350至151,700)的标准曲线计算重均分子量以及多分散性指数。凝拱嚴(7VM&分,使用BrukerAvance400光谱仪(400MHz)研究聚合物的'H-NMR图谱，且将氯仿-d(CDCl3)用作溶剂。Fr-/i分桥应用傅里叶变换红外线光谱仪(FT-IR,Perkin-ElmerSpectrum2000)研究聚合物的化学结构。在FT-IR分析前将样品压制成溴化钾压片。,潘定酸碱滴定用于评价聚合物的羧酸基。简单地，将100毫克聚合物溶解在10毫升DI水中，且用O.OlNNaOH滴定，使用酚酞作指示剂。，透郝應定使用UV-VIS光谱仪(Jasco,V-570,日本)于500纳米测定在不同温度的聚合物水溶液(5毫克/毫升)的光学透射率。以温度控制器将样品细胞自动调温。加热速率为0.1。C/分钟。在显示50%光学透射率的温度测定结合物溶液的LCST值。縱俯使用装有He-Ne激光束的Zetasizer3000HAS(MalvernInstrumentLtd.,Malvern,英国)在658纳米(散射角90°)测定胶束的粒度。每个测定重复5次。从ii次测定得到平均值。通过多模式分析进行尺寸测定。透i/冶^M錄楚r^M检產通过TEM(PhilipsCM300,荷兰)分析空白和DOX-负载的胶束的形态学。将几滴包含O.Ol(w/v)。/。磷钨酸的新制备的胶束溶液置于涂有碳膜的铜载网，并在室温空气干燥。用300keV的电子动能进行观测。游岸/齡浓度通过荧光光谱使用芘作为探针评价嵌段聚合物在DI水和PBS中的临界缔合浓31度(CAC)。通过LS50B荧光光谱仪(PerkinElmer,美国)在室温记录荧光光谱。将芘的丙酮溶液(6.16xl(^M，IOO微升)加至15毫升容量烧瓶中，并让丙酮蒸发。然后，将10mL从0.01ppm至500卯m不同浓度的聚合物溶液加入烧瓶中。最终芘浓度为6.16xl0-7M。在室温(20。C)平衡该溶液24小时。以395纳米发射波长从300至360纳米记录激发光谱。激发和发射的带宽都设在2.5纳米。绘制1335.5与1334.0的强度比，为聚合物浓度的对数的函数。在曲线拐点的切线与低浓度通过该点的水平切线的交点得到CAC值。棘層备通过膜透析法制备空白和DOX-负载的胶束。对于空白胶束，将聚合物(20毫克)溶解在4毫升DMAc中。然后使用2,000Da的分子量筛截的透析膜(Spectra/Por7,SpectrumLaboratoriesInc.),将所述溶液在室温(20V)对DI水进行透析24小时。最初3小时每小时换水。对于DOX-负载的胶束，将聚合物(20毫克)溶解在2毫升DMAc中。用2毫升DMAc中用过量两摩尔的三乙胺中和DOX(10毫克)。将该DOX溶液加至聚合物溶液中并通过涡旋混合5分钟。使用2,000Da的分子量筛截的透析膜，将混合物在室温(2(^C)对DI水进行透析48小时。透析后，收集透析袋里的溶液，并用0.45微米注射器式过滤器过滤且冷冻干燥2天。为了测定DOX的负载水平，将已知量的DOX-负载的纳米粒子溶解在1毫升DMAc中。使用UV-VIS分光光度计在485纳米评价DOX浓度。基于从DMAc中的DOX得到的标准曲线计算药物的负载。胶束的产率被计算成回收的胶束与最初聚合物和药物的重量比。斜药激微将制备的DOX-负载的胶束溶液稀释至1毫克/mL。将稀释溶液(5毫升)转移至10,000Da的分子量筛截的透析膜试管(Spectra/Por7，SpectrumLaboratoriesInc.)。然后将试管浸入包含30毫升PBS缓冲液(pH7.4和6.6)的烧杯中，其以100转/分钟的速度震摇，并在37。C孵育。在特定的时间间隔，抽取l毫升溶液并用新鲜的PBS缓冲液替换。使用UV-VIS分光光度计在485纳米分析样品的DOX浓度。ZX)X飾應分布将在RPMI1640培养基(不含叶酸酯)中的游离DOX(10毫克/升)和DOX-负载的胶束(DOX浓度10毫克/升)用4T1细胞在检测前孵育4小时。用PBS充分三次洗涤盖玻片上的细胞且用CLSM(OlympusFV300,日本)显像。在532纳米用595纳米的发射波长激发DOX。激光功率为10%。使用相同的分辨率进行所有的观测。浙應毒丝试验将4T1小鼠乳腺癌细胞在补充有10%FBS、5%盘尼西林、2mML-谷氨酰胺(Sigma)的RPMI1640(不含叶酸酉旨)中培养，且在37°C，5%(:02孵育。将细胞种于96-孔板上，每孔10，000细胞，且孵育一天。用生长培养基稀释在RPMI1640中的游离DOX，DOX-负载的胶束从而使最终DOX浓度为0.01、0.1、1.0、5.0、10.0和20.0毫克/升。将在RPMI1640中的空白聚合物胶束稀释至1、10、50.0、100.0、300.0和600.0毫克/升。用IOO微升预制备样品替换孔中的培养基。然后将板返回孵育器且在5%C02，37°C中保持48小时。48小时后，将新生长培养基和10微升MTT溶液用于替换各孔中的混合物。然后将平板返回孵育器且在5%C02，37°C中进一步保持3小时。然后去除各个孔中的生长培养基和过量的MTT。然后将DMSO(150微升)加入至各个孔从而溶解内化的紫色甲臜(internalisedpurplefonnazari)结晶。从各个孔吸取100微升样品并转移至新的96-孔板。每个样品在每个板重复检测八份。使用三个板，每个样品总共有24份复制品。然后在550纳米和690纳米测定所述板。在550纳米扣除690纳米的读数得到甲臜结晶的吸收率读数。结果被表示为空白对照的吸收率的百分比。动激微将4T1细胞皮下植入雌性balb/c(体重19-21克)(每个动物107细胞)。将肿瘤生长2周。将游离DOX和DOX-负载的胶束通过尾部静脉注射给予动物，当量DOX剂量为5毫克/千克。在10分钟、30分钟、2小时和4小时，抽取血液样品，并处死动物。取出肝、肺、心脏、脾、肾和肿瘤，并保藏在-80t用于将来的分析。将器官称重并均质化。使用氯仿和异丙醇提取不同器官分布的DOX，且通过H.S.Yoo,T.G.Park,_/Co",to/.M2004，100,247中所述的方法进行分析。在800C将均质化的组织加入到包含2.0MHC1溶液的酸性水解缓冲液中，维持10分钟。收集上清液，然后加入0.9毫升氯仿和异丙醇的混合物(以体积计，3:1)。涡旋混合后，在室温通过16,000转/分钟离心15分钟收集有机层。干燥溶液，并将其再溶解在流动相中且用高效液相色谱(HPLC)分析。回收率为70%，通过内标物校正。HPLC系统由Waters2690分离模块和Waters2475多入荧光检测器组成。流动相由0.01%三氟乙酸水溶液和乙腈组成，在40分钟内乙腈的百分比从5%至45%梯度增加。在480纳米激发波长和580纳米发射波长检测DOX峰。〃/^f/#-^^^/YA7^^/"-^r-JDM^4,"-^^Mi)-6-JPK4必会成通过多步骤合成所述叶酸酯-结合的共聚物。第一，通过NIPAAm,DMAAm和AMA的自由基共聚，使用作为引发剂的过氧化苯酰(BPO)和作为链转移剂的3-巯基丙酸制备羧酸-封端的P(NIPAAm-共-DMAAm-共-AMA)。由于胺基的存在引入AMA单体，所述胺基可以用于进一步和叶酸的结合。通过液-液扩散法(THF/Et20)纯化后，得到前体聚合物，接着对DI水透析。该聚合物的重均分子量为6.8kDa，具有1.7的多分散性(表1)。表l共聚物的性质。<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>-DMAAm-共-AMA)-COOH叶酸酯-结合的P(NIPAAm-共-DMAAm-共-AMA)-b-PUA7.75.01.5接着，将活化的叶酸结合至P(NIPAAm-共-DMAAm-共-AMA)-COOH的胺基。虽然叶酸具有a-和Y-羧酸基，但是Y-羧酸由于它的高活性，主要在DCC/NHS反应中被活化。离心得到的溶液从而丢弃片状沉淀物，接着对DI水透析。冷冻干燥后得到叶酸酯-结合的P(NIPAAm-共-DMAAm-共-AMA)-COOH。该聚合物的重均分子量为7.1kDa，具有1.8的分散性。第三，通过UA的自由基共聚，使用作为引发剂的氧化还原剂过硫酸铵(APS)和作为链转移剂的2-氨基乙硫醇制备胺基-封端的PUA聚合物。UA单体的成功聚合通过在S4.8-5.0(C压=CHCH2)禾B55.7-5.9(CH2-C/ZCH2)的乙烯质子信号的缺失得到证实(图1A)。在S1.3,1.5和2.2的峰分别归属于CZ/2CH2(方案3，信号a')HOOCCH2CH2和HOOCCH2(方案3,信号b')(图1B)。PUA-NH2的FT-IR光谱在3084cm"(=CH伸縮峰)和911cm"(HC-CH变形峰)没有吸收，进一步证明UA单体的成功聚合(图2A)。PUA-NH2的光谱还显示来自COOH基团的羰基带(vo-cK),a)，在1712.3cm—1。最后，使用在DCM中的DCC/NHS，活化叶酸酯-结合的P(NIPAAm-共-DMAAm-共-MAm)-COOH的羧酸基。将活化的叶酸酯-结合的聚(NIPAAm-共-DMAAm-共-MAm)-COOH溶解在DMSO中，并与过量的PUA-NH2反应。最终产物的NMR光谱显示在图3中。在53.8(信号a)的峰归属于NIPAAm部分的-NHCm4e2基团的氢质子。在S2.7-3.0(信号b)的宽峰来自DMAAm部分的-NMe2基团。在S6.6(信号c),57.7(信号d)和S8.7(信号e)的弱峰来自叶酸部分。NIPAAm、DMAAm、叶酸酯的摩尔比为3.7:1:0.026，其由信号a、b和c的积分值得到(图3)。FTIR光谱在1647.1cm"(v脂—c-。)和1547.8cm"(Vc-N)显示两个强吸收，其来自P(NIPAAm-共-DMAAm-共-AMA)嵌段。另一个在1720cm"(vo-oo,b)的弱吸收來自PUA-NH2嵌段和叶酸酯部分(图2B)。最终产物的重均分子量是7.7kDa，具有1.5的多分散性(表1)。Mw的提高显示PUA-NH2己成功结合至叶酸酯-结合的P(NIPAAm-共-DMAAm-共-AMA)-COOH。通过滴定评价COOH的浓度，为每克聚合物18.4毫克。舰mcsr御//諸PNIPAAm显示在水中32QC的LCST。通过引入亲水单体(例如DMAAm)，可以将LCST在生理环境调节至稍微高于正常体温(37^C)。在不同pH的磷酸盐缓冲盐水(PBS)溶液中，测定由叶酸酯-结合的P(NIPAAm-共-DMAAm-共-AMA)-b-PUA自组装胶束的LCST。如图4所示，它是依赖pH的。例如，在pH7.4，LCST为38.0GC，高于正常体温。然而，在pH6.6，它降至36.2GC，低于37QC。随着外环境pH的升高，10-十一碳烯酸片段的羧酸基和叶酸酯更容易脱质子，因此提高聚合物的亲水性。这导致聚合物的LCST提高，由此纳米粒子的提高。pH越高，LCST越大。由于在生理环境(PBS，pH7.4)胶束的LCST高于正常体温，但是34低于正常体温，因此这些胶束可以用于细胞内药物递送。在pH范围从4.0至6.5的内含体和溶酶体中，所述胶束的核-壳结构可以变形，是否附着的药物分子。另一方面，胶束吸收质子，且在这些环境中，胶束的壳由于LCST的提高而变为疏水性，引起核内质/溶酶体膜的渗透性提高，因此促进附着的药物分子运输至细胞质。C4C,淀使用使用芘作探针，通过荧光光谱分析聚合物的CAC。芘的激发光谱显示在图5A中。由于聚合物浓度升高，荧光强度增强且第三峰从334.0纳米移至335.5纳米。第三峰的红移说明芘分子被转移至胶束核的低极性区域。图5B显示在DI水中1334.0与1335.5比率随聚合物浓度的变化。CAC值测定为17.8毫克/升。应注意，当与由无规聚合物P(NIPAAm-共-DMAAm-共-UA)制得的胶束相比时，由嵌段共聚物自组装的胶束形成后，由芘发射光谱得到的I3/Ii大得多，提示更多疏水核的形成可能归因于更多数量的UA单元和更好定义的核-壳结构的存在。-膽1纷妙/德锁为了研究pH对胶束结构变化的作用，在37。C，溶解在不同pH，但是154mM的离子强度相同的PBS中的聚合物存在下，研究芘强度比(I335.5/I334.0)的变化。如图6所示，对于pH7.4和pH7.2的胶束，该比率高，说明芘分子在低极性的微环境中。然而，由于pH从7.0降至6.8，该比率快速下降，提示芘分子暴露于更高极性的环境(即水介质)。如前面部分所讨论，胶束中的羧酸基在pH6.8或以下容易质子化，导致LCST低于37。C，因此导致胶束的核-壳结构变形。这将芘分子暴露于水介质中。该发现进一歩证明所述核-壳结构对外部pH变化敏感。麽贵游^V"、/#分务///#漆学表2空白和DOX-负载的胶束的性质样品有效直径多分散性(纳米)空白胶束92.8±0.10.27±0.01DOX-负载的胶束98.5+2.10.28+0.01表2显示DI水中制备的空白和DOX-负载的胶束的尺寸和尺寸分布。应该发现胶束具有相对狭窄的尺寸分布。空白和DOX-负载的胶束的平均有效直径分别为92.8纳米和98.5纳米。SEM影像说明空白和DOX-负载的胶束在自然界是球形的(图7)。从TEM影像观察到的粒度与通过动态光散射测定的非常一致。考虑到临床应用，胶束的物理稳定性是另一重要方面，因为胶束的聚集可以引起血管阻塞，且使它们对网状内皮系统(RES)的清除更敏感。在室温，超过一周，粒度在PBS(pH7.4)中变化不大，范围从87.0纳米至97.0纳米，提示所述胶束是稳定的。另一方面，经过五次稀释后，粒度没有显著变化(87.0纳米对92.1纳米)。这很重要，由35于给药后胶束的分解可以导致附着的药物快速释放，在体内引起副作用。而且，应该观察到经在PBS(pH7.4)中10。/。牛血清白蛋白(BSA)刺激后，空白胶束的尺寸保持稳定，说明胶束和BSA的相互作用被亲水壳和负电荷很好的抑制，所述负电荷由叶酸分子的羧酸基在pH7.4脱质子引起。应预期所述胶束在体内可以具有良好的物理稳定性。在37QC，PBS中胶束的尺寸是依赖pH的，为117.2纳米和612.6纳米，分别对应pH7.4和pH6.6。粒度的增加是由于在pH6.6胶束团聚。另外，粒度也是依赖温度的。例如，在PBS(pH7.4)中，当稳定升高至4(^C，胶束的粒度提高到740.0纳米，因为在LCST以上胶束团聚。这些发现说明所述胶束是pH-和温度敏感的。特别是，粒度的变化是可逆的。辦药激微在胶束中DOX的实际负载水平是大约2.5重量％。图8显示在37。C，刺激生理条件下(PBS，pH7.4)和酸性环境中(pH6.6)，DOX从胶束的体外释放分布。24小时内，在pH6.6时DOX的释放比在pH7.4时更快，分别具有大约85%和40%的药物释放。在pH6.6，胶束的LCST降低至36.2QC，导致胶束的疏水壳。胶束的亲水/疏水平衡(HLB)的丧失导致核-売结构的最终变形，释放附着的药物分子。"0￥-^^^^^_^游一智應级#//7/^^毒丝通过共聚焦显微镜检测游离DOX和DOX-负载的胶束通过4T1细胞的细胞吸收。如图9所示，当用4T1细胞孵育游离DOX时，通过被动扩散途径将阿霉素分子转移至所述细胞，且仅仅在细胞核内累积。然而，当所述细胞与DOX-负载的胶束孵育时，在细胞质以及细胞核观测到强荧光。出现在细胞核的强信号归因于从胶束释放的阿霉素分子。该发现说明通过内吞作用，DOX-负载的胶束被纳入所述细胞，然后从内含体和/或溶酶体脱离，进入细胞质。另外，由叶酸酯-结合的P(NIPAAm-共-DMAAm-共-AMA)-b-UA制得的DOX-负载的胶束的细胞吸收高于不含叶酸酯的DOX-负载的P(NIPAAm-共-DMAAm-共-UA)的细胞吸收，可能因为叶酸酯受体介导细胞摄粒作用特异性更高。研究游离DOX和DOX-负载的胶束对4T1细胞的细胞毒性。DOX的IC50值，50%细胞被杀死的浓度，针对游离DOX、具有叶酸酯和不含叶酸酯的DOX-负载的胶束分别为3.0、3.8和7.6毫克/升(图IO)。因为更高的细胞吸收，具有叶酸酯的D0X-负载的胶束对4T1细胞的细胞毒性比不含叶酸酯的DOX-负载的胶束的细胞毒性大得多。应当提及的是空白胶束在浓度高达500毫克/升时没有细胞毒性。/他微使用小鼠皮下4T1乳腺肿瘤进行动物研究，从而研究游离DOX和DOX-负载的胶束的生物分布。图11显示给予游离DOX和DOX-负载的胶束后，肿瘤组织中DOX的水平，为时间的函数。对于游离DOX，在30分钟达到最大DOX水平，为2.9微克/克，但是DOX水平迅速降低，在240分钟仅为1.0微克/克。相反，在胶束制剂中DOX保持在较高水平直至240分钟。这可能是因为EPR作用和基于叶酸酯受体介导细胞摄粒作用的DOX-负载胶束的增强的细胞吸收。另外，还分析了血液中的DOX水平。如图12和13所示，对于游离DOX，当与DOX-负载的胶束相比时，血液中的DOX水平降低得快得多。清楚地，DOX-负载的胶束显示更长的循环时间，与J.W.Cowens,P.J.Creaven，W.R.Greco,D.E.Brenner,Y.Tung，M.Ostro,F.Pilkiewicz,R.Ginsberg,N.Petrelli,Owcwiew"r/21993,53,2796报道的结论相一致。游离DOX和DOX-负载的胶束在血液中的t/2分别为大约30分钟和140分钟。这延长的循环可能归因于胶束通过RES和单核吞噬细胞系统降低DOX的吸收的事实。图12和13还显示在不同器官中的DOX水平，例如脾、肾、心脏、肝和肺。游离DOX具有宽泛的分布，均匀地累积在心脏、肺和肝。然而，在胶束的制剂中，DOX优先地积累在富含RES的器官中，例如肝和脾。发现DOX水平在心脏中显著降低，说明所述胶束可以降低DOX的心脏毒性，DOX的主要副作用。权利要求1、一种嵌段共聚物，包含至少一种第一嵌段和一种第二嵌段，其中所述第一嵌段包含多个温度敏感单体单元、多个亲水单体单元和多个靶向单体单元，且所述第二嵌段包含多个疏水单体单元，所述第二嵌段包含至少一个pH敏感部分。2、根据权利要求1所述的嵌段共聚物，其中所述耙向单体单元是肿瘤靶向单体单元。3、根据权利要求l所述的嵌段共聚物，其中所述各个疏水单体单元包含至少一个pH-敏感部分。4、根据权利要求1所述的嵌段共聚物，其中所述疏水单体单元来自能聚合的不饱和脂肪酸。5、根据权利要求1所述的嵌段共聚物，其中所述温度敏感单体单元来自N-丙烯酰基哌啶、N-丙烯酰基吡咯酮、N-羟丙基丙烯酸酯、羟甲基纤维素、N-叔丁基丙烯酰胺、N-哌啶基甲基丙烯酰胺、N,N-二乙基丙烯酰胺、N-异丙基丙烯酰胺、N-甲基丙烯酰基哌啶、N-甲基丙烯酰基吡咯酮、N-羟丙基甲基丙烯酸酯、羟丙基纤维素、N-叔丁基甲基丙烯酰胺、N,N-二乙基甲基丙烯酰胺或N-异丙基甲基丙烯酰胺。6、根据权利要求1所述的嵌段共聚物，其中所述亲水单体单元包含酰胺、羧酸、羧酸酯、胺、二醇或醇。7、根据权利要求l所述的嵌段共聚物，其中所述亲水单体单元來自选自以下的种类丙烯酸、丙烯酰胺(AAm)、丙烯酸酯、吡咯酮、乙二醇、甲基丙烯酸2-氨基乙酯、N，N'-二甲基丙烯酰胺(DMAAm)或N-(羟甲基)丙烯酰胺或其取代的衍生物。8、根据权利要求1所述的嵌段共聚物，其中所述靶向单体单元包含叶酸酯、半乳糖、肽、抗体或抗体片段。9、根据权利要求1所述的嵌段共聚物，其中所述靶向单体单元由靶向化合物或其衍生物与基质单体单元反应得到，其中所述基质单体单元包含能与靶向化合物或其衍生物反应的官能团从而将靶向化合物或其衍生物结合至基质单体单元。10、根据权利要求1所述的嵌段共聚物，其中所述共聚物的分子量小于大约40,000。11、根据权利要求1所述的嵌段共聚物，其中所述共聚物的较低临界溶液温度(LCST)在pH大约6.6至大约1时低于大约37QC。12、根据权利要求1所述的嵌段共聚物，其中所述共聚物的较低临界溶液温度在正常生理pH时高于大约37QC。13、根据权利要求1所述的嵌段共聚物，其中所述温度敏感单体单元来自N-异丙基丙烯酰胺，所述亲水单体单元来自N,N-二甲基丙烯酰胺，所述靶向单体单体单元是来自甲基丙烯酸2-氨基乙酯的结合叶酸酯的单体单元，且所述疏水单体单元来自10-十一碳烯酸。14、一种制备嵌段共聚物的方法，所述方法包括—提供第一大分子单体，所述第一大分子单体包含多个温度敏感单体单元、多个亲水单体单元和多个耙向单体单元，且一将所述第一大分子单体与第二大分子单体反应，所述第二大分子单体包含多个疏水单体单元，且所述第二大分子单体包含至少一个pH-敏感部分。15、根据权利要求14所述的方法，其中所述靶向单体单元是肿瘤靶向单体单元。16、根据权利要求14所述的方法，其中所述提供第一大分子单体的歩骤包括将前体大分子单体与靶向化合物或其衍生物反应。17、根据权利要求16所述的方法，包括将温度敏感单体、亲水单体和基质单体进行共聚从而形成前体大分子单体，其中所述基质单体包含能与靶向化合物或其衍生物在所述共聚后反应的官能团从而将靶向化合物或其衍生物结合至前体大分子单体。18、根据权利要求14所述的方法，其中所述提供第一大分子单体的歩骤包括将温度敏感单体、亲水单体和来自结合靶向分子和基质单体的靶向单体进行共聚。19、根据权利要求17所述的方法，其中所述共聚在硫醇链转移剂存在下进行，所述硫醇链转移剂为羧基官能、氨基官能或羟基官能或其包含能转化成羧酸基、氨基或羟基的官能团。20、根据权利要求18所述的方法，其中所述共聚在硫醇链转移剂存在下进行，所述硫醇链转移剂为羧基官能、氨基官能或羟基官能或其包含能转化成羧酸基、氨基或羟基的官能团。21、根据权利要求14所述的方法，包括将能聚合的疏水单体聚合制备第二大分子单体的歩骤，所述能聚合的疏水单体包含至少一个pH-敏感部分或包含能转化成pH-敏感部分的官能团。22、根据权利要求21所述的方法，其中所述聚合在链转移剂存在下进行，所述链转移剂是硫醇，该硫醇包含能与第一大分子单体端基反应的官能团。23、根据权利要求22所述的方法，其中所述官能团选自胺基、羟基或羧酸基。24、根据权利要求14所述的方法，所述方法包括一将N-异丙基丙烯酰胺、N,N-二甲基丙烯酰胺和甲基丙烯酸2-氨基乙酯在羧基官能的硫醇存在下进行共聚从而形成前体大分子单体，一将叶酸的N-羟基琥珀酰亚胺衍生物与前体大分子单体反应从而形成第一大分子单体，一活化的第一大分子单体以与胺反应从而形成活化的第一大分子单体，且一将活化的第一大分子单体与第二大分子单体反应，所述第二大分子单体是具有末端氨基的10-十一碳烯酸的聚合物。25、一种通过以下方法制备的嵌段共聚物，该方法包括一提供第一大分子单体，所述第一大分子单体包含多个温度敏感单体单元、多个亲水单体单元和多个靶向单体单元，且一将所述第一大分子单体与第二大分子单体反应，所述第二大分子单体包含多个疏水单体单元，且所述第二大分子单体包含至少一个pH-敏感部分。26、一种温度和pH敏感组合物，所述组合物包含一治疗剂，和一包含至少一种第一嵌段和一种第二嵌段的嵌段共聚物，其中所述第一嵌段包含多个温度敏感单体单元、多个亲水单体单元和多个靶向单体单元，且所述第二嵌段包含多个疏水单体单元，所述第二嵌段包含至少一个pH敏感部分。27、根据权利要求26所述的组合物，其中所述治疗剂选自抗癌药、抗炎药或治疗神经障碍的药物，或所述治疗剂包含两种或多种这类药物的混合物。28、根据权利要求26所述的组合物，其中所述治疗剂是抗癌药且所述靶向单体单元是肿瘤靶向单体单元。29、根据权利要求26所述的组合物，其中所述治疗剂选自阿霉素、阿纳托唑、依西美坦、环磷酰胺、表柔比星、托瑞米芬、来曲唑、曲妥单抗、甲地孕酮、他莫昔芬、紫杉醇、多西他奇、卡培他滨、醋酸高锡林、羟基尿素、乙琥红霉素、环孢霉素、顺铂或这些药物任意两种或多种的混合物。30、根据权利要求26所述的组合物，其中所述嵌段共聚物被制成至少一个纳米粒子，所述纳米粒子包含疏水核和亲水壳，且其中所述治疗剂包含在所述疏水核内。31、根据权利要求30所述的组合物，所述组合物在纳米粒子的外表面包含靶向基团。32、一种制备温度和pH敏感组合物的方法，所述方法包括将治疗剂与嵌段共聚物溶液结合，所述嵌段共聚物包含至少一种第一嵌段和一种第二嵌段嵌段，其中所述第一嵌段包含多个温度敏感单体单元、多个亲水单体单元和多个靶向单体单元，且所述第二嵌段包含多个疏水单体单元，所述第二嵌段包含至少一个pH敏感部分。33、根据权利要求32所述的方法，其中所述靶向单体单元是肿瘤靶向单体单元。34、根据权利要求32所述的方法，所述方法包括一次或多次以下步骤一透析所述结合的嵌段共聚物溶液和治疗剂从而形成包含所述治疗剂和所述嵌段共聚物的胶束或纳米粒子，且除去没有并入胶束或纳米粒子的治疗剂，且除去没有并入胶束或纳米粒子的嵌段共聚物；一通过过滤分离所述胶束或纳米粒子；—干燥所述胶束或纳米粒子。35、根据权利要求32所述的方法，所述方法包括—将治疗剂与嵌段共聚物溶液结合，所述嵌段共聚物包含至少一种第一嵌段和一种第二嵌段嵌段，其中所述第一嵌段包含多个温度敏感单体单元、多个亲水单体单元和多个耙向单体单元，且所述第二嵌段包含多个疏水单体单元且所述第二嵌段包含至少一个PH敏感部分；一使用具有大约2000分子量筛截的透析膜透析所述结合的嵌段共聚物溶液和治疗剂从而形成包含所述治疗剂和所述嵌段共聚物的胶束或纳米粒子；—通过0.45微米过滤器过滤所述胶束或纳米粒子从而分离粒子或胶束；且—冷冻干燥所述粒子或胶束。36、一种给动物或人类提供治疗剂的方法，所述方法包括给予所述动物或人类温度和pH敏感组合物，该温度和pH敏感组合物包含—治疗剂，和—嵌段共聚物，所述嵌段共聚物包含至少一种第一嵌段和一种第二嵌段，其中所述第一嵌段包含多个温度敏感单体单元、多个亲水单体单元和多个靶向单体单元，且所述第二嵌段包含多个疏水单体单元，所述第二嵌段包含至少一个pH敏感部分；其中所述共聚物被制成至少一个包含疏水核和亲水壳的纳米粒子且其中所述治疗剂包含在所述疏水核内。37、根据权利要求36所述的方法，其中所述组合物经口服、局部、静脉内、局部区域、肠胃外递送，经吸收或眼部途径递送。38、根据权利要求36所述的方法，其中所述治疗剂包含抗癌药，且其中在纳米粒子的外表面上有肿瘤靶向基团。39、一种药物组合物，该药物组合物包含一温度和pH敏感组合物，该温度和pH敏感组合物包含治疗剂，禾口包含至少一种第一嵌段和一种第二嵌段的嵌段共聚物，其中所述第一嵌段包含多个温度敏感单体单元、多个亲水单体单元和多个靶向单体单元，且所述第二嵌段包含多个疏水单体单元，所述第二嵌段包含至少一个pH敏感部分，和_至少一种药学上可接受的载体和/或佐剂。40、一种甜体嵌段共聚物，其包含至少一种第一嵌段和一种第二嵌段，其中所述第一嵌段包含多个温度敏感单体单元、多个亲水单体单元和多个基质单体单元，且所述第二嵌段包含多个疏水单体单元，且所述第二嵌段包含至少一个pH敏感部分，其中各个基质单体单元包含能与靶向化合物或其衍生物反应的官能团从而将耙向化合物或其衍生物结合至前体嵌段共聚物。41、一种制备前体嵌段共聚物的方法，所述方法包括—提供一种前体大分子单体，所述前体大分子单体包含多个温度敏感单体单元、多个亲水单体单元和多个基质单体单元，且—将所述前体大分子单体与第二大分子单体反应，所述第二大分子单体包含多个疏水单体单元，且所述第二大分子单体包含至少一个pH-敏感部分。42、一种制备嵌段共聚物的方法，所述方法包括将前体嵌段共聚物与靶向化合物或其衍生物反应从而将所述靶向化合物或其衍生物结合至前体嵌段共聚物，其中所述前体嵌段共聚物包含至少一种第一嵌段和一种第二嵌段，其中所述第一嵌段包含多个温度敏感单体单元、多个亲水单体单元和多个基质单体单元，且所述第二嵌段包含多个疏水单体单元，且所述第二嵌段包含至少一个pH敏感部分，其中各个基质单体单元包含能与靶向化合物或其衍生物反应的官能团从而将靶向化合物或其衍生物结合至前体嵌段共聚物。全文摘要本发明提供包含至少一种第一嵌段和一种第二嵌段的嵌段共聚物。所述第一嵌段包含多个温度敏感单体单元、多个亲水单体单元和多个靶向单体单元，且所述第二嵌段包含多个疏水单体单元。所述第二嵌段包含至少一个pH敏感部分。文档编号A61P35/00GK101501108SQ200680055523公开日2009年8月5日申请日期2006年7月5日优先权日2006年7月5日发明者S-Q·刘,Y-Y·杨申请人:新加坡科技研究局