专利名称：紫杉醇脂质体及其制备方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，涉及抗肿瘤药物紫杉醇的热敏脂质体、长循环脂质体和热敏长循环脂质体制剂，还涉及这些脂质体的制备方法。
背景技术：
紫杉醇为20世纪后期人类发现的具有确切和较强抗癌效果的单体化合物，被称为人类攻克癌症路程上的里程碑，尤其是该药在治疗乳腺癌，卵巢癌，非小细胞肺癌等恶性肿瘤方面已成为首选药物。
目前临床应用的紫杉醇注射液有国产的紫素，泰素，进口的Taxol(美国BMS公司)，Anzatax(澳大利亚Fauliding公司)等产品，这些产品均利用表面活性剂增溶法解决紫杉醇不溶于水的缺点，以达到静脉给药目的。但这些制剂在临床使用上出现不少副作用，尤其是已有市售紫杉醇注射液Taxol通常使用聚氧乙烯蓖麻油与无水乙醇作为混合溶媒溶解了包装袋上的有机物质，从而有引发过敏反应、超过敏反应的风险，使得用药前不得不给与抗过敏药作为预处理，即使如此仍有超过2％的严重过敏反应发生而引起死亡，并且该药还有相当强的心脏毒性。以上问题给患者和医护人员带来相应痛苦和不便，使该药在临床使用上受到限制。克服紫杉醇水不溶性缺点的同时减少其毒副作用是目前亟待解决的问题。
脂质体系指由磷脂为膜材及附加剂组成的封闭囊泡，具有双分子层结构。由于其结构类似生物膜，可包封水溶性和脂溶性药物，具有提高药物稳定性，减少药物用量，降低毒性；减轻变态反应和免疫反应；延缓释放，降低体内消除速度；改变药物在体内的分布，并能靶向性释药等优点而得到广泛注意和深入研究。因为脂质体的独特性能，对其的研究一直没有停止，目前正处于蓬勃发展的阶段。近年来脂质体的研究和应用有很大进展，一些药物的脂质体已用于多种给药途径和制剂，并开展了广泛的临床应用。作为药物载体，脂质体可用于肿瘤、感染性疾病、心血管疾病和皮肤病等的治疗。同时发现脂质体的稳定性差已成为其应用中的主要问题，脂质体进入体内后，由于血中的白蛋白、调理素、抗体等各种因素作用，脂质体发生破裂，包封药物快速渗漏，很快被网状内皮系统识别、吸收，限制了它的靶向功能。为此从各种途径想办法提高脂质体的稳定性，并增强其靶向性，制备了热敏长循环脂质体。
长循环脂质体是用聚乙二醇衍生物等高分子物质修饰或包覆的脂质体制剂，由于脂质体表面被修饰或包覆上高分子物质，其立体位阻保护脂质体不被血液中的调理素识别、摄取，从而降低了与MPS的亲和性，使脂质体的清除速度减慢，在血液中的驻留时间明显延长，有利于肿瘤组织及病理部位对药物的吸收。
热敏脂质体在高于生理温度的条件下可有效地将药物释放到靶部位，包封抗肿瘤药物的热敏脂质体与肿瘤热疗相结合治疗肿瘤的效果更好(1)在脂质体的相转变温度附近提高药物的选择性释放；(2)热疗使肿瘤外周血循环增强，微血管和组织细胞渗透性增强，使抗肿瘤药物在网状内皮系统的蓄积增加；(3)使肿瘤细胞对脂质体释放的药物更易接受和渗入，促进药物扩散和内吞进入肿瘤细胞，减少肿瘤细胞的耐药性。
单纯热敏脂质体和单纯长循环脂质体都有不足热敏脂质体虽然有明确的“被动”靶向性，但在血液中滞留时间短，未到达加热靶区部位时已部分被破坏，影响了治疗效果；而单纯长循环脂质体只是在体内留存时间较长但不具有在特定部位释药的“被动”靶向性。为了取长补短，制备出了热敏长循环脂质体，这种热敏长循环脂质体既具有热敏性，又具有在生物体内稳定的长循环性，是真正意义的“靶向”制剂。
将紫杉醇载入到脂质体中是解决其临床给药困难，给药时易产生副作用的一种途径，从而可以解决相应问题1、将紫杉醇载入脂质体中，免除了产生毒副作用的表面活性剂的使用。
2、将其制成脂质体制剂，由于网状内皮系统的吞噬，使紫杉醇在体内产生一定的储库效应和靶向性。
3、将其制成热敏长循环脂质体不仅可延长其在血液中的循环时间，还可显著增强其肿瘤靶向性，更有利于药物在肿瘤部位的蓄积和释放，继而产生有效的药理作用。
发明内容
本发明目的是解决紫杉醇水不溶性和副作用而制备了热敏脂质体、长循环脂质体以及热敏长循环脂质体。
本发明也相应提供了紫杉醇热敏脂质体注射剂、长循环脂质体注射剂、热敏长循环脂质体注射剂、热敏脂质体冻干制剂、长循环脂质体冻干制剂以及热敏长循环脂质体冻干制剂的制备方法。
本发明通过以下措施实现紫杉醇热敏脂质体、长循环脂质体和热敏长循环脂质体的配方包括1％-30％紫杉醇，1％-95％磷脂，0％-30％胆固醇，0％-50％热敏性辅料D，0％-50％辅料G，0-80％冻干保护剂，0-10％十八胺，0.001-50％抗氧剂，缓冲盐适量。
其磷脂采用现已上市的商品磷脂，其中包括天然提取磷脂，或者半合成或全合成的磷脂，或者天然磷脂和半合成或全合成磷脂的混合物。
其商品天然磷脂源于大豆、蛋黄、动物脑中的天然磷脂。
其商品半合成或全合成磷脂包括二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰胆碱(PC)、二鲸蜡磷酸酯(DCP)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二月桂酰磷脂酰胆碱(DLPC)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)等。
其热敏性辅料D是可使脂质体具有热敏性的辅料，或者是一种掺入后可使脂质体膜材具有热敏性的药物，或者是可使膜材具有热敏性的表面活性剂，或者是本身具有热敏性的磷脂如二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)等。也可以在膜材中加入热敏性聚合物如聚异丙烯酰胺，聚异丙烯酸、聚磷酸酯、聚磷酯酰胺共聚物等热敏聚合物；也可采用在膜材中加入某些油性药物，例如莪术油、榄香烯或鸭胆子油等；也可以在处方中加入表面活性剂，例如苄泽类表面活性剂或吐温80等。可以使脂质体的相变温度适合于肿瘤热疗温度的各种方法均包括在内。
其辅料G为聚乙二醇(PEG)或聚山梨醇酯(Tween)，均为聚氧乙烯型非离子表面活性剂，包括各不同分子量的聚乙二醇(200-8000)，一系列聚山梨醇酯(20-85)聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯(Tween20)，聚氧乙烯失水山梨醇单棕榈酸酯(Tween40)，聚氧乙烯失水山梨醇单硬脂酸酯(Tween60)，聚氧乙烯失水山梨醇酯三硬脂酸酯(Tween65)，聚氧乙烯失水山梨醇酯单油酸酯(Tween80)，聚氧乙烯失水山梨醇三油酸酯(Tween85)。
其冻干保护剂包括单糖为甘露醇、葡萄糖，双糖为乳糖、蔗糖、麦芽糖，多糖为海藻糖。
其抗氧剂为亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、抗坏血酸、没食子酸丙酯、抗坏血酸棕榈酸酯、叔丁基对羟基茴香醚(BHA)、二叔丁基对甲酚(BHT)、维生素E、半胱氨酸、蛋氨酸中的一种或一种以上的混合物。丁羟基茴香醚(BHA)、丁羟基甲苯(BHT)、硫二丙酸、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、二硫代氨基苯甲酸类、抗坏血酸、枸橼酸、苹果酸、山梨醇、甘油、丙二醇、抗坏血酸棕榈酸酯、氢醌、羟基香豆素、维生素E、乙醇胺、磷酸及其盐、亚磷酸及其盐中的一种或几种。
其缓冲盐溶液为乙醇-醋酸缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、巴比妥缓冲液、甲酸钠缓冲液、邻苯二甲酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液、氨-氯化铵缓冲液、硼砂-氯化钙缓冲液、醋酸盐缓冲液、醋酸-锂盐缓冲液、醋酸-醋酸钠缓冲液、醋酸-醋酸铵缓冲液、磷酸-三乙胺缓冲液、磷酸盐缓冲液，且pH范围为3-10。
本发明的制备方法可采用逆向蒸发法、冻融法、薄膜分散法、冷冻干燥法以及以上任意两种或两种以上方法结合使用的方法等。
本发明的优点有解决了紫杉醇水不溶性缺点，与现有制剂相比降低了毒副作用，由于其作用时间长，因而延长了给药时间，提高了病人的顺应性，同时也提高了化疗药物紫杉醇的靶向性，增强了其抗肿瘤作用。各种配方成分均为生理相容性物质，安全且易购，通过调整处方中原料的量，可制得热敏脂质体、长循环脂质体以及热敏长循环脂质体，并可控制脂质体粒径大小，以适应各种给药途径及用药要求。
具体实施例方式
实施例1处方紫杉醇 0.4g注射用豆磷脂20.0g胆固醇 2.4g辅料D 5.0g十八胺 0.1g
维生素E 0.2g缓冲盐溶液至200mL制备工艺将处方量紫杉醇、注射用豆磷脂、胆固醇、辅料D、维生素E溶解于有机溶剂中并倒入梨形瓶，再加入含有十八胺的少量缓冲盐溶液，超声使成均匀乳，旋转蒸发仪上减压除尽有机溶剂，使成凝胶，涡流振荡间隔减压蒸馏，得白色均匀脂质体溶液，再用缓冲溶液定容至200mL。再通过加压过膜(0.22μm)整粒除热原，分装至西林瓶中冷冻干燥，即得紫杉醇热敏脂质体。
实施例2处方紫杉醇 0.4g注射用豆磷脂20.0g胆固醇 2.4g辅料D 5.0g十八胺 0.1g维生素E 0.2g缓冲盐溶液 至200mL制备工艺将处方量紫杉醇、注射用豆磷脂、胆固醇、辅料D、维生素E溶解于有机溶剂中并倒入梨形瓶，再加入含有十八胺的少量缓冲盐溶液，超声使成均匀乳，旋转蒸发仪上减压除尽有机溶剂，使成凝胶，涡流振荡间隔减压蒸馏，得白色均匀脂质体溶液，再用缓冲溶液定容至200mL。再通过加压过膜(0.22μm)整粒除热原，分装至安瓿中冰箱冷冻后室温融化，重复3次，即得紫杉醇热敏脂质体。
实施例3处方紫杉醇 0.4g注射用豆磷脂20.0g胆固醇 2.4g辅料D 5.0g蔗糖5.0g甘露醇 0.1g十八胺 0.1g维生素E 0.2g缓冲盐溶液 至200mL制备工艺将处方量紫杉醇、注射用豆磷脂、胆固醇、辅料D、维生素E溶解于有机溶剂中并倒入梨形瓶，在30转/秒，60℃水浴条件下旋转蒸干有机溶剂，使在玻璃瓶壁上形成干膜，将处方量蔗糖与甘露醇溶解在200mL缓冲盐溶液中，倒入梨形瓶中在40转/秒，室温(25℃)条件下旋转水化直至将瓶壁上的干膜完全洗脱下来为止，并将所得粗混悬液在室温(25℃)条件下水化1小时。所得粗混悬液依次通过0.8μm微孔滤膜1次，0.45μm微孔滤膜3次，0.22μm微孔滤膜3次，0.1μm微孔滤膜3次，得最终混悬液，装瓶，罐封氮气，冷冻干燥，即得紫杉醇热敏脂质体。
实施例4紫杉醇0.3g注射用豆磷脂 20.0g胆固醇2.5gPEG4000 0.5g维生素E 0.1g缓冲盐溶液至200mL制备工艺将处方量紫杉醇、注射用豆磷脂、胆固醇、维生素E溶解于有机溶剂中并倒入梨形瓶，在30转/秒，60℃水浴条件下旋转蒸干有机溶剂，使在玻璃瓶壁上形成干膜，将处方量PEG4000溶解在200mL缓冲盐溶液中，倒入梨形瓶中在40转/秒，室温(25℃)条件下旋转水化直至将瓶壁上的干膜完全洗脱下来为止，并将所得粗混悬液在室温(25℃)条件下水化1小时。所得粗混悬液依次通过0.8μm微孔滤膜1次，0.45μm微孔滤膜3次，0.22μm微孔滤膜3次，0.1μm微孔滤膜3次，得最终混悬液，装安瓿，罐封氮气，即得紫杉醇长循环脂质体。
实施例5处方紫杉醇 0.5g注射用豆磷脂20.0g胆固醇 2.5g辅料D 5.0gPEG400 0.5g十八胺 0.1g维生素E 0.2g缓冲盐溶液 至200mL制备工艺将处方量紫杉醇、注射用豆磷脂、胆固醇、辅料D、维生素E溶解于有机溶剂中并倒入梨形瓶，再加入含有十八胺的少量缓冲盐溶液，超声使成均匀乳，旋转蒸发仪上减压除尽有机溶剂，使成凝胶，涡流振荡间隔减压蒸馏，得白色均匀脂质体溶液，再用含有PEG4000的缓冲溶液定容至200mL。通过加压过膜(0.22μm)整粒除热原，分装至安瓿中，灌封氮气，即得紫杉醇热敏长循环脂质体。
实施例6紫杉醇0.5g
DSPC 5.0gDPPC 1.0gPEG40000.5g维生素E0.2g缓冲盐溶液 至200mL制备工艺将处方量紫杉醇、DSPC、DPPC、维生素E溶解于有机溶剂中并倒入梨形瓶，在30转/秒，60℃水浴条件下旋转蒸干有机溶剂，使在玻璃瓶壁上形成干膜，将处方量PEG4000溶解在200mL缓冲盐溶液中，倒入梨形瓶中在40转/秒，室温(25℃)条件下旋转水化直至将瓶壁上的干膜完全洗脱下来为止，并将所得粗混悬液在室温(25℃)条件下水化1小时。所得粗混悬液经短时超声后依次通过0.8μm微孔滤膜，0.45μm微孔滤膜，0.22μm微孔滤膜，0.1μm微孔滤膜，得最终混悬液，装安瓿，罐封氮气，即得紫杉醇热敏长循环脂质体。
权利要求
1.紫杉醇脂质体，其特征在于处方中各组分重量百分比如下1％-30％紫杉醇，1％-95％磷脂，0％-30％胆固醇，0％-50％热敏性辅料D，0％-50％辅料G，0-80％冻干保护剂，0-10％十八胺，0.001-50％抗氧剂，缓冲盐适量。
2.根据权利要求1所述的紫杉醇脂质体，其特征在于所述的磷脂采用现已上市的商品磷脂，包括天然提取磷脂，或者半合成或全合成的磷脂，或者天然磷脂和半合成或全合成磷脂的混合物。
3.根据权利要求2所述的紫杉醇脂质体，其特征在于所述的商品天然磷脂源于大豆、蛋黄、动物脑或脏器中的天然磷脂。
4.根据权利要求2所述的紫杉醇脂质体，其特征在于所述的商品半合成或全合成磷脂包括二棕榈酰磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰胆碱、二鲸蜡磷酸酯、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱。
5.根据权利要求1所述的紫杉醇脂质体，其特征在于所述的热敏性辅料D是可使脂质体具有热敏性的辅料，或者是一种掺入后可使脂质体膜材具有热敏性的药物，或者是可使膜材具有热敏性的表面活性剂，或者是本身具有热敏性的二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱或在膜材中加入聚异丙烯酰胺，聚异丙烯酸、聚磷酸酯、聚磷酯酰胺共聚物类热敏聚合物；或在膜材中加入莪术油、榄香烯或鸭胆子油等油性药物；或处方中加入吐温80或苄泽类表面活性剂。
6.根据权利要求1所述的紫杉醇脂质体，其特征在于所述的辅料G为聚乙二醇或聚山梨醇酯，均为聚氧乙烯型非离子表面活性剂，包括各种分子量为200-8000的聚乙二醇；聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯，聚氧乙烯失水山梨醇单棕榈酸酯，聚氧乙烯失水山梨醇单硬脂酸酯，聚氧乙烯失水山梨醇酯三硬脂酸酯，聚氧乙烯失水山梨醇酯单油酸酯，聚氧乙烯失水山梨醇三油酸酯。
7.根据权利要求1所述的紫杉醇脂质体，其特征在于所述的冻干保护剂为单糖、双糖或多糖，单糖为甘露醇、葡萄糖，双糖为乳糖、蔗糖、麦芽糖，多糖为海藻糖。
8.根据权利要求1所述的紫杉醇脂质体，其特征在于所述的抗氧剂为亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、抗坏血酸、没食子酸丙酯、抗坏血酸棕榈酸酯、叔丁基对羟基茴香醚、二叔丁基对甲酚、维生素E、半胱氨酸、蛋氨酸中的一种或一种以上的混合物；丁羟基茴香醚、丁羟基甲苯、硫二丙酸、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、二硫代氨基苯甲酸类、抗坏血酸、枸橼酸、苹果酸、山梨醇、甘油、丙二醇、抗坏血酸棕榈酸酯、氢醌、羟基香豆素、维生素E、乙醇胺、磷酸及其盐、亚磷酸及其盐中的一种或几种。
9.根据权利要求1所述的紫杉醇脂质体，其特征在于所述的缓冲液为乙醇-醋酸缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、巴比妥缓冲液、甲酸钠缓冲液、邻苯二甲酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液、氨-氯化铵缓冲液、硼砂-氯化钙缓冲液、醋酸盐缓冲液、醋酸-锂盐缓冲液、醋酸-醋酸钠缓冲液、醋酸-醋酸铵缓冲液、磷酸-三乙胺缓冲液、磷酸盐缓冲液，且pH范围为3-10。
10.紫杉醇脂质体的制备制备方法，其特征在于采用注入法、逆向蒸发法、冻融法、薄膜分散法、冷冻干燥法以及以上任意两种方法结合使用的方法。
全文摘要
本发明属于医药技术领域，公开了紫杉醇脂质体及其制备方法，主要包括长循环脂质体、紫杉醇热敏脂质体以及紫杉醇热敏长循环脂质体。其组成为1％－30％紫杉醇，1％－95％磷脂，0％－30％胆固醇，0％－50％热敏性辅料D，0％－50％辅料G，0－80％冻干保护剂，0－10％十八胺，0.001－50％抗氧剂，缓冲盐适量。这是三种新型紫杉醇脂质体制剂，解决了紫杉醇水不溶性缺点，紫杉醇热敏长循环脂质体不仅具有紫杉醇普通脂质体制剂的低毒性、高稳定性和减少毒副作用等特点，还同时具有长循环脂质体的长循环性以及热敏脂质体的热敏性，可延长紫杉醇在体内的循环时间，提高对肿瘤的靶向性，从而提高其抗肿瘤作用。
文档编号A61P35/00GK101015525SQ200710010448
公开日2007年8月15日 申请日期2007年2月15日 优先权日2007年2月15日
发明者邓英杰, 王浩 申请人:沈阳药科大学