专利名称：：一种雷公藤红素盐及其制备方法与用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种雷公藤红素盐及其制备方法及用途。
背景技术：
：-雷公藤是治疗自身免疫疾病的药物，它含有多种有效成分,如雷公藤甲素、雷公藤乙素、雷公藤红素(Celastrol)等。这些有效成分对多种免疫细胞有复杂的影响，包括抑制增殖、诱导凋亡及改变细胞因子分泌等。雷公藤红素为雷公藤中主要成分之一，其化学结构如下文献报道雷公藤红素具有抗炎(包括抑制COX2活性、NF-kB、NO、白三烯等方面)、抗肿瘤、抗氧化、抗真菌、抗肝炎、杀虫、抗疟、避孕、抑制头屑、治疗肾脏病、中枢神经系统疾病(如阿尔茨海默病)等药理活性。但因雷公藤红素属难溶性药物，其生物利用度较低，并在药物的给药途径上受到很大限制，从而影响其做为新药的开发。
发明内容-本发明的目的是提供一类雷公藤红素与不同有机或无机碱形成的雷公藤红素盐，该雷公藤红素盐不仅溶解性好，可制成稳定的以水为载体的制剂，而且口服生物利用度亦获得提高。本发明提供一种水溶性雷公藤红素盐，其特征在于如下列结构式(I)表示的盐或相应的异构体，其中结构式中的R为碱性氨基酸、有机胺、无机碱。本发明还提供一种雷公藤红素盐的制备方法即在反应瓶中依次加入雷公藤红素、碱性氨基酸或有机胺或无机碱和乙醇水溶液，室温下搅拌反应，减压回收，放置结晶，滤过，干燥，即得。上述制备方法中雷公藤红素与碱性氨基酸或有机胺或无机碱的摩尔配比为1:0.5~3，其中优选l:l。上述制备方法中所述的碱性氨基酸可以选自L-精氨酸、D-精氨酸、D、L-精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸、组氨酸等；所述的有机胺可以选自葡甲胺、叔丁胺等;所述的无机碱可以选自碱金属的氢氧化物、碱土金属的氢氧化物如氢氧化钠、氢氧化钾等，其中优选精氨酸。本发明提供雷公藤红素盐可以与药学载体组合，制成药学可以接受的各种剂型，包括注射剂、口服固体制剂如片剂、胶囊剂、颗粒剂等。本发明还提供雷公藤红素盐在制备肿瘤治疗药物方面的用途。本发明还提供雷公藤红素盐在制备抗炎药物方面的用途。雷公藤红素盐治疗肿瘤的剂量范围为每人每日5—15mg，静脉注射。抗炎剂量范围为每人每日10—40mg，用法口服。因为该给药剂量是根据动物药理试验推算而得，鉴于动物与人体的差异性，故实际临床用量可以允许有所调整。另因本发明获得的雷公藤红素盐水溶性好，可制成注射剂，且生物利用度较高，故抗肿瘤与抗炎皆可采用口服、注射方式给药。本段对给药途径的论述仅为代表性论述。以下具体实施方式用以解释本发明，并不限于此。具体实施例方式雷公藤红素通过购买市售品获得，如深圳市牌牌科技有限公司生产，纯度达98%以上。实施例l:雷公藤红素精氨酸盐的制备在反应瓶中依次加入雷公藤红素0.45g(0.001mol)、L-精氨酸0.174g(0.001mo1)和100ml62.5。/。乙醇水溶液，室温下搅拌反应6h，减压回收至20ml，4'C放置结晶，滤过，干燥，即得红色粉末状固体0.49g，收率78.5%。雷公藤红素精氨酸盐化学结构确认数据如下ESI-MSm/z(100%):624([M-H〗+,2.61),448([Cel-H]+,100),173([Arg-H〗+，8.38);13C-NMR《Hz):184.2,178.5,173.5,171.5,165.3,157.4,146.4,135.1,127.1,119.1,118.7,118.2,55.6,45.0,44.0,43.0,41.9,40.5，39.5,38.5,36.6,34.7,33.5，32.8，31.6,31.0,30.7,29.9，29.8,29.3,28.4,25.9,20.8,18.1,8.9。实施例2:雷公藤红素精氨酸盐的制备在反应瓶中依次加入雷公藤红素0.45g(0.001mo1)、L-精氨酸0.087g(0.0005mol)和100ml62.5%乙醇水溶液，室温下搅拌反应6h，减压回收至20ml，4'C放置结晶，滤过，干燥，即得红色粉末状固体0.61g，收率76.4%。实施例3:雷公藤红素精氨酸盐的制备在反应瓶中依次加入雷公藤红素0.45g(0.001mo1)、L-精氨酸0.522g(0.003mo1)和100ml62.5%乙醇水溶液，室温下搅拌反应6h，减压回收至20ml，4。C放置结晶，滤过，干燥，即得红色粉末状固体0.41g，收率76.3%。实施例4:雷公藤红素赖氨酸盐的制备在反应瓶中依次加入雷公藤红素0.45g(0.001mo1)、赖氨酸0.146g(0.001mo1)和100ml62.5。/。乙醇水溶液，室温下搅拌反应6h，减压回收至20ml，4'C放置结晶，滤过，干燥，得红色粉末状固体0.45g，收率75.5%。实施例5:雷公藤红素葡甲胺盐的制备在反应瓶中依次加入雷公藤红素0.45g(0.001mo1)、葡甲胺0.195g(0.001mo1)和100加162.5%乙醇水溶液，室温下搅拌反应6h，减压回收至20ml，4。C放置结晶，滤过，干燥，即得红色粉末状固体0.42g，收率65.1%。实施例6:雷公藤红素钠盐的制备在反应瓶中依次加入雷公藤红素0.45g(0.001mo1)、氢氧化钠0.04g(0.001mo1)和3000ml无水乙醇，搅拌反应至澄清液，滤过，减压回收至10ml，4。C放置结晶，滤过，干燥，得红色粉末状固体0.36g，收率73.5%。实施例8:雷公藤红素钾盐的制备在反应瓶中依次加入雷公藤红素0.45g(0.001mo1)、氢氧化钾0.056g(0.001mo1)、甲醇1000ml，搅拌反应至澄清液，滤过，减压回收至10ml，4。C放置结晶，滤过，干燥，得红色粉末状固体0.35g，收率70%。实施例9:雷公藤红素精氨酸盐片剂的制备称取雷公藤红素精氨酸盐10g(按实施例l制备)，混匀，过80目筛，加入微晶纤维素90g、淀粉100g作为稀释剂组成制剂配方，混匀，喷入75%乙醇为粘合剂制软材，用24目筛制粒，干燥后整粒，混匀，压片，制成1000片，包衣，即得，每片含雷公藤红素精氨酸盐10mg。实施例10:雷公藤红素精氨酸盐注射液的制备称取雷公藤红素精氨酸盐0.5g(按实施例l制备)，将注射用水至卯Oml,搅拌使溶解，滤过，取滤液，0.1mol/lNaOH溶液调pH值至8—9，加注射用水至1000ml，经含量测定符合要求后，初滤，精滤至澄明度检査合格，灌封，灭菌，即得，0.5mg/ml。实施例ll:雷公藤红素葡甲胺盐胶囊剂的制备称取雷公藤红素葡甲胺盐10g(按实施例5制备)，混匀，过80目筛，加入预胶化淀粉190g作为稀释剂组成制剂配方，混匀，喷入75%乙醇为粘合剂制软材，用24目筛制粒，干燥后整粒，混匀，装胶囊，制成1000粒，即得，每粒含雷公藤红素葡甲胺盐10mg。试验例l溶解度测定分别精密称取研成细粉雷公藤红素5mg和雷公藤红素精氨基盐(按实施例1制备)、雷公藤红素葡甲胺盐(按实施例5制备)、雷公藤红素钠盐(按实施例6制备)各50mg，分别置于25°C±2°C50ml蒸馏水中，每隔5分钟强力振摇30秒钟；观察30分钟内的溶解情况。雷公藤红素仍有可见溶质颗粒，其水溶解度小于0.1mg/ml，属水几乎不溶物质；雷公藤红素精氨基盐、雷公藤红素葡甲胺盐、雷公藤红素钠盐则完全溶解。另精密称取研成细粉雷公藤红素精氨基盐、雷公藤红素葡甲胺盐、雷公藤红素钠盐各100mg，置于25'C士2'C50ml蒸馏水中，每隔5分钟强力振摇30秒钟；观察30分钟内的溶解情况，雷公藤红素精氨基盐、雷公藤红素葡甲胺盐、雷公藤红素钠盐均有少量可见溶质颗粒。因此雷公藤红素精氨基盐、雷公藤红素葡甲胺盐、雷公藤红素钠盐水溶解度大于lmg/ml，属水微溶物质。试验例2雷公藤红素盐与雷公藤红素口服生物利用度比较1.药液配制分别称取雷公藤红素精氨酸盐(按实施例1制备)、雷公藤红素葡甲胺盐(按实施例5制备)、雷公藤红素钠盐(按实施例6制备)适量,加去离子水溶解,分别配成浓度为5mg/mL溶液，为样A、B、C;称取雷公藤红素适量，力卩1%羧甲基纤维素钠溶液混悬，制成5mg/mL混悬液，为样D。2.灌胃给药方案大鼠禁食16h，自由饮水，分别灌胃给药样A、B、C、D,剂量分别为50mg/kg。分别于给药前5min和给药后15min、30min、45min、60min、90min、120min、180min、240min、300mm、、360min、480min取血，分离血清。3.样品处理血浆样品的处理精密吸取血浆便样品0.2mL，精密加入冷藏的10%三氯乙酸40pL，涡旋3min，12000r/min离心10min，吸取上清液约120|iL置于尖底进样瓶中，HPLC自动进样。4样品的测定4.1仪器1100系列高效液相色谱仪(美国Agilent公司);包括G1312A二元泵，G1313A自动进样器。4.2血浆样品测定的色谱条件色谱柱discoverODS柱(250mmx4mm,5^m);流动相:乙腈:水(87:13);流速lmL/min，检测波长425nm。4.3结果_表1雷公藤红素精氨酸盐与雷公藤红素的生物利用度比较<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>上述结果显示口服雷公藤红素精氨酸盐、葡甲胺盐、钠盐血药浓度(Cmax)远高于口服雷公藤红素血药浓度(Cmax)，表明雷公藤红素盐生物利用度显著提高。试验例3雷公藤红素盐抗肿瘤作用观察受试物静脉注射对U14宫颈癌、PC-3、及Lewis肺癌的抑瘤活性。实验选用SPF级C57BL/6小鼠。设阴性对照组、雷公藤红素组、雷公藤红素精氨酸盐组(按实施例l制备)。采用腋下接瘤方法，接瘤后次日随机分组，连续静脉给药10天，末次给药24小时后，脱颈椎处死小鼠，剥取瘤组织，称重，计算抑瘤率。结果显示雷公藤红素精氨酸盐静脉给药具有显著的抑瘤作用，优于雷公藤红素。详见表2:表2雷公藤红素盐对各种瘤株的抑瘤率(％)剂量(mg/kg)PC-3U14宫颈癌Lewis肺癌3605346雷公藤红素组14534293807467雷公藤红素精氨酸盐组1645748试验例4雷公藤红素盐对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响1.材料与动物雷公藤红素精氨酸盐按实施例1制备。地塞米松批号0601146，郑州羚锐制药有限公司生产。二甲苯杭州中山化学有限公司生产。昆明种小鼠，昆明医学院实验动物中心提供。2.分组及方法取昆明种小白鼠80只,随机分为8组。模型组(生理盐水)、雷公藤红素高剂量组(ig，2mg/kg)、中剂量组(ig，4mg/kg)、低剂量组(ig，8mg/kg)、雷公藤红素精氨酸盐高剂量组(ig，2mg/kg)、中剂量组(ig，4mg/kg)、低剂量组(ig，8mg/kg)、地塞米松阳性对照组(iv，2mg/kg)。灌胃给药3天，末次给药后40min，将50pl二甲苯涂于小鼠右耳廓两面致炎，左耳作为对照，致炎后lh断颈处死动力，沿耳廓基线剪下两耳，用直径9mm的打孔器分别在同一部位打下耳片，即时称重，计算各组肿胀度及抑制率。肿胀度(mg)=左耳耳片重(mg)—右耳耳片重(mg)抑制率(％)=(模型组平均耳片重一给药组平均耳片重)/模型组平均耳片重\100%3.结果雷公藤红素精氨酸盐可显著抑制二甲苯引起的耳廓肿胀，优于雷公藤红素。详见表3。表3雷公藤红素精氨酸盐对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(x±s，n=10)组别剂量(mg/kg)肿胀度(mg)抑制率(％)模型组-22.52±2.45-地塞米松组-4.18±2.5981.4雷公藤红素组214.75土2.16'34.5412.25士2.66'45.6(ig)承*89.53±2.1857.7雷公藤红素精氨酸盐212.08土2.14'46.449.28±2.67**58.8(ig)*承+87.23±2.1167.9注与模型组比较*P<0.05，"尸<0.01,***户<0.001。权利要求1.一种水溶性雷公藤红素盐，其特征在于如下列结构式(I)表示的盐或相应的异构体，其中结构式中的R为碱性氨基酸、有机胺、无机碱。2.权利要求1所述雷公藤红素盐的制备方法，其特征在于在反应瓶中依次加入雷公藤红素、碱性氨基酸或有机胺或无机碱和乙醇水溶液，室温下搅拌反应，减压回收，放置结晶，滤过，干燥，即得。3.根据权利要求2所述的雷公藤红素盐的制备方法，其特征在于所述的雷公藤红素与碱性氨基酸或有机胺或无机碱的摩尔配比为1:0.5~3。4.根据权利要求3所述的雷公藤红素盐的制备方法，其特征在于所述的雷公藤红素与碱性氨基酸或有机胺或无机碱的摩尔配比为1:1。5.根据权利要求2所述的雷公藤红素盐的制备方法，其特征在于所述的碱性氨基酸可以选自L-精氨酸、D-精氨酸、D、L-精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸、组氨酸中的任何一种。6.根据权利要求2所述的雷公藤红素盐的制备方法，其特征在于所述的有机胺可以选自葡甲胺、叔丁胺中的任何一种。7.根据权利要求2所述的雷公藤红素盐的制备方法，其特征在于所述的无机碱可以选自碱金属的氢氧化物、碱土金属的氢氧化物如氢氧化钠、氢氧化钾中的任何一种。8.根据权利要求1所述的雷公藤红素盐，其特征在于所述雷公藤红素盐与药学载体组合，可制成药学可以接受的各种剂型，包括注射剂、口服固体制剂。9.权利要求1所述的雷公藤红素盐在制备抗肿瘤药物的应用。10.权利要求1所述的雷公藤红素盐在制备抗炎药物的应用。全文摘要本发明提供了一种雷公藤红素盐。具体为雷公藤红素与医学上可接受的碱性氨基酸(如精氨酸、赖氨酸等)或有机胺(如葡甲胺等)或无机碱(如氢氧化钠、氢氧化钾等)中的一种所成的盐。该盐可以解决雷公藤红素的溶解性，制成稳定的以水为载体的制剂，而且口服生物利用度亦获得提高。其结构通式如上其中结构式中的R为碱性氨基酸、有机胺、无机碱。文档编号A61P31/04GK101279995SQ20071001415公开日2008年10月8日申请日期2007年4月3日优先权日2007年4月3日发明者关玉昆,珂刘,刘军锋,卉许,烽赵,萌邵申请人:烟台靶点药物研究有限公司