专利名称：赫替新型二萜生物碱在制备治疗或预防房颤药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一类从毛茛科乌头属植物黄花乌头中分离得到的赫替新型 二萜生物碱的用途，尤其涉及在制备治疗或预防房颤药物中的应用。
技术背景赫替新型二萜生物碱具有如下化学结构黄花乌头是主产于我国北方的药用植物，其块根称为关白附，属常用中 药。现代药理学研究表明关白附中主要活性成分为一类C加赫替新型二萜生 物碱，其中盐酸关附甲素已开发成我国的原创新药，是一种疗效显著的新型 抗心律失常药物。房颤为临床常见病，本发明为临床提供价格低廉、安全有效、服用方便 的抗心律失常药物，具有很好的开发前景。 发明内容本发明的目的在于提供从黄花乌头中分离得到的赫替新型二萜生物碱的 新的医学用途。实际上，本发明涉及赫替新型二萜生物碱在制备治疗或预防 房颤(扑)药物中的应用。本发明所述的赫替新型二萜生物碱中，优选了活性较高的几种赫替新型 二萜生物碱，母环结构上的各取代基分别如下化合物AC-1: R,-R产COCH3， R3=R4=H化合物AC-2: RfRfCOCHp R2=R4=H化合物AC-3: R2=R3=COCH3， R产R^H化合物AC-4: R产R尸R^COCH3， Rt=H化合物AC-5: R产RfR^R4-COCH3 。本发明还优化了赫替新型二萜生物碱的制备方法以有机溶剂浸提黄花乌头块根的粗粉，回收溶剂，得总浸膏，'总浸膏用 酸水捏溶，分散，萃取后上大孔树脂进行提纯得总生物碱提取物，再经高速 逆流色谱分离得到赫替新型二萜生物碱各化合物。具体方法为取黄花乌头[^co""廳cwe朋画(Levi.) Rapaics]的干燥块 根，粉碎，用有机溶剂回流提取至少3次，合并提取液，回收溶剂并浓縮至 稠浸膏，加酸捏溶，分散至pH2-5的酸水溶液，乙酸乙酯萃取2-5次，得提 取物A和酸水液B，酸水液B加碱碱化至pH9-11，再用乙酸乙酯萃取3次， 得提取物C。将提取物C加于已处理好的大孔吸附树脂柱上，依次用水、25-95 %的乙醇洗脱，收集50-90%乙醇洗脱液，减压蒸馏至干，得总生物碱提取物； 将总生物碱提取物用高速逆流色谱分离(正己烷-乙酸乙酯-甲醇-酸水)，得化 合物ACl-5。提取用的有机溶剂可以是乙醇、乙酸乙酯、丙酮、石油醚或乙醚。 酸化的溶剂可以是盐酸、硝酸、硫酸、磷酸、甲酸、醋酸、丁酸或它们 的混合物。大孔树脂可以是D101等非极性树脂。高速逆流色谱仪为制备型或半制备型逆流色谱仪，分离所用溶剂为正已烷-乙酸乙酯-甲醇-酸水的两相混合溶液，混合比约为l:2:4:i，比例不仅限于上述比例，可根据仪器的型号适当调整。仪器的转速约为800转/分钟。化合物1-5分别用盐酸溶解，调pH值3 4后，用生理盐水稀释为五个 剂量组，静脉注射给药，用心电图机记录小鼠正常心电图、给药后心电图及 ivCaCl2 — ACh液后的心电图。ECGII导联，标准电压10mm/mV，纸速 50mm/s。结果表明，对照组iv CaCb—ACh混合液引起的房颤(扑)率为81.1%, 5种化合物对此房颤(扑)均有一定的对抗作用，其中有明显抗房颤(扑)作用的 化合物优选为三乙酰(AC-4)和四乙酰化赫替新(AC-5)。
本发明赫替新型二萜生物碱在制备治疗或预防房颤(扑)药物中的应用，其 可与药学上可接受的载体(辅料)混合，制成各种剂型，用于制备治疗或预 防房颤的药物。
本发明所述的赫替新型二萜生物碱可单独、或与其它药物或其它中药提 取物组配，用于制备治疗或预防房颤的药物，或作为治疗或预防房颤的药物 的前体药物和先导化合物。
房颤为临床常见病，本发明的应用为临床提供价格低廉、安全有效、服 用方便的抗心律失常药物，具有很好的开发前景。
具体实施方式
实例1
取黄花乌头[^co"f^w2 corea"ww (Levi.) Rapaics]的干燥块根10公斤，粉 碎，用95%乙醇回流提取3-5次，合并提取液，回收乙醇并浓縮至无醇味， 得浸膏约0.5公斤，加盐酸捏溶，酸化至pH2-5，乙酸乙酯萃取3-5次，得提 取物A和酸水液B，酸水液B加碱碱化至pH9-ll，再用乙酸乙酯萃取3-5次， 得提取物C (约0.1公斤)。将提取物C加于已处理好的D101大孔吸附树脂 柱上，依次用水、25-95%乙醇洗脱，收集50-90%乙醇洗脱液，减压蒸馏至 干，得总生物碱提取物约60克；将总生物碱提取物用高速逆流色谱分离，高 速逆流色谱仪为制备型或半制备型逆流色谱仪，分离所用溶剂为正己垸-乙酸
乙酯-甲醇-酸水的两相混合溶液，混合比约为1: 2: 4: 1，比例不仅限于
上述比例，可根据仪器的型号适当调整。仪器的转速约为800转/分钟。得化 合物AC-1 (约6克)，AC-2 (11克)，AC-3 (2.5克)，AC匿4(17克),AC-5(1.5克)。
实例2
取黄花乌头[」co""ww cowawww (Levi.) Rapaics]的干燥块根10公斤，粉 碎，用丙酮回流提取3-5次，合并提取液，回收丙酮并浓縮，得浸膏约0.4 公斤，加盐酸捏溶，醋酸酸化至pH2-5，乙酸乙酯萃取3-5次，得提取物A 和酸水液B，酸水液B加碱碱化至pH9-11，再用乙酸乙酯萃取3-5次，得提 取物C (约0.11公斤)。将提取物C加于已处理好的D101大孔吸附树脂柱 上，依次用水、25-95%乙醇洗脱，收集50-90%乙醇洗脱液，减压蒸馏至干， 得总生物碱提取物约65克；将总生物碱提取物用高速逆流色谱分离，高速逆 流色谱仪为制备型或半制备型逆流色谱仪，分离所用溶剂为正己烷-乙酸乙酯
-甲醇-酸水的两相混合溶液，混合比约为1: 2: 4: 1，比例不仅限于上述
比例，可根据仪器的型号适当调整。仪器的转速约为800转/分钟。得化合物 AC-1 (约6克),AC-2 (11克)，AC-3 (2.5克),AC-4(18克)，AC画5(2克)。
药效实验
动物实验小鼠，25g左右，9d兼用，由中国药科大学实验动物中心提
供；CaCI广ACh混合液:含CaCI2 3mg/ml， Ach 15ug/ml，临用前用蒸馏水 配制。
对照溶液盐酸普罗帕酮用生理盐水稀释，浓度分别为0.175%， 0.027
%;
实验方法小鼠，体重25g左右，？3兼用，ip戊巴比妥钠60mg/kg麻 醉。每药分五个剂量组给药(剂量比为0.8),其中AC-1:0.11%，0.09%，0.069%， 0.054%， 0.046%; AC-2: 0.1%， 0.08%, 0.063%, 0,051%， 0.042%; AC-3: 0.12%， 0.09%, 0.07%, 0.057%， 0.048%; AC-4: 0,05%， 0.04%, 0.032%， 0.026%, 0.021%; AC-5: 0.03%, 0.02%, 0.015%， 0.013%， 0.011% (质 量百分比)。
化合物1-5分别用盐酸溶解，调pH值3 4后，用生理盐水稀释为五个剂量组(剂量比为0.8),同盐酸普罗帕酮尾iv给药，给药容量为0.2ml/l0g， 于10s内注完，给药后1.5minivCaCI2—ACh混合液0.2ml/10g， 10s内注完。 用心电图机记录小鼠正常心电图、给药后心电图及ivCaCl2—ACh液后的心 电图。ECGII导联，标准电压10mm/mV，纸速50mm/s。以心电图出现f或F 波作为房颤(扑)的阳性指标，用药后完全不出现为有效。各药的抗房颤(扑) 率与对照组比较进行XS检验，用Bliss's法计算ED5。，结果列入表l。
结果表明，对照组ivCaCl2—ACh混合液引起的房颤(扑)率为8UX， 5 种药物对此房颤(扑)均有一定的对抗作用，其中有明显抗房颤(扑)作用的药物 为AC-l:16mg/kg，抗房颤(扑)率分别为73.3%(P<0.01)， AC-2: 13mg/kg，抗 房颤(扑)率分别为65%(p<0.05); AC-3: 14mg/kg，抗房颤(扑)率分别为67 X(p〈0.05);AC-4:9mg/kg，抗房颤(扑)率分别为90X(pO.01);AC-5:5.4mg/kg, 抗房颤(扑)率分别为80%(p<0.01)。
AC-1， AC-2， AC-3的抗房颤(扑)药效作用基本相同，无显著性差异， EDso分别为AC-1 : 13.0±2.7mg/kg， AC-2: 11.6士1.8mg/kg ， AC-3 : 13.2±L2mg/kg; AC-4的EDso为6.4±1.3 mg/kg，与AC-1， AC-2， AC-3比较 有显著性差异(p<0.05);结果见表l。
表l:五种化合物ED5Q的比较
组另U 动物数(只) ED50(mg/kg， i±s)
化合物AC-15313.2±2.7
化合物AC-25811.6±1.8
化合物AC-35513.0±1.2
化合物AC-4636.4±1.3
化合物AC-5613.3±1.1
从实验结果中看出，ivCaCIrACh混合液引起小鼠房颤(扑)的阳性率为 81.1%(43 / 53)，具有较好的对照性。阳性对照药盐酸普罗帕酮抗颤(扑)率达 到84.6%，与对照组比较有显著性差异(pO.Ol)。关白附中提取的有效成分均有抗房颤(扑)的作用。其中化合物AC-1， AC-2， AC-3， AC-4， AC-5用药量 合适，有临床应用价值。其LD^见表2。
表2:五种化合物LDso组另lj动物数(只)LD50(mg/kg， i±s)
化合物AC-121477.2±29.7
化合物AC-225519.6±19.8
化合物AC-322413.0±21,4
化合物AC-423186.4±19.3
化合物AC-521123.3±21.权利要求
1. 赫替新型二萜生物碱在制备治疗或预防房颤药物中的应用。
2、 根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的赫替新型二萜生物碱具有如下化学结构<formula>formula see original document page 2</formula>其中，化合物AC-1: R产RfCOCH3， R3=R4=H化合物AC-2: R尸R产COCH3， R2=R4=H化合物AC-3: R2=R3=COCH3， R「R^H化合物AC-4: R^R尸R3KX)CH3， RrH化合物AC-5: R尸R尸R产R4K:OCH全文摘要
本发明公开了一类从毛莨科乌头属植物黄花乌头中分离得到的赫替新型二萜生物碱在制备治疗或预防房颤药物中的应用。以毛莨科乌头属植物黄花乌头为原料，经溶剂提取和色谱方法分离并鉴定了五个C<sub>20</sub>赫替新型二萜生物碱。动物实验表明，这类化合物对小鼠尾静脉注射CaCl<sub>2</sub>-ACh混合液，造成房颤(扑)模型，均有一定的对抗作用，并随着酰基数目的增加，活性增强，可应用于临床作为预防和治疗房颤的新药。本发明为房颤的临床治疗提供价格低廉、安全有效、服用方便的抗心律失常药物，具有很好的开发前景。
文档编号A61P9/00GK101273990SQ20071002110
公开日2008年10月1日 申请日期2007年3月28日 优先权日2007年3月28日
发明者刘静涵, 杨春华 申请人:刘静涵;杨春华