专利名称：：水罗伞总黄酮的提取方法
技术领域：
：本发明涉及植物有效成分的提取方法，更具体地说是植物水罗伞中总黄酮的提取方法。
背景技术：
：水罗伞系蝶形花科干花豆(FordiacaulifloraHemsl.)的干燥根或茎，又名虾须豆、土甘草、野京豆，是广西民间常用药材。味甘、微辛、性平、无毒，具有散瘀消肿，止痛宁神，益智之功效。主治跌打肿痛，肾虚腰痛，偏头痛，小儿疳积、智力低下、骨折、病后及产后虚弱等症。水罗伞为我国特有植物物种，主产于广西、广东。福建、海南、云南也有分布。本品在广西自然资源十分丰富，在壮、瑶民间应用悠久。其主含水黄皮素(karanjn)、3，3"-二甲氧基呋喃[4"，5"，8，7]黄酮和5，-甲氧基呋喃[4"，5〃，8，7]黄酮、2-[3-甲氧基苯基]-4H-呋喃[2，3-h]-l-苯并吡喃-4-酮、3-甲氧基-2-[3-羟基苯基]-4H-呋喃[2，3-h]-1-苯并吡喃-4-酮及水黄皮根素。还含有硬脂酸、棕榈酸、e-谷甾醇、氨基酸、多糖及多种微量元素。经实验发现，水罗伞醇提取物及其氯仿溶出部位具有益智(增强学习记忆能力)、抗炎、镇静及抗衰老作用。而氯仿溶出部位是水罗伞的主要生物活性成分。现有的提取水罗伞中黄酮化合物的成熟工艺主要是溶剂提取法，此方法不足之处是提取水罗伞中总黄酮的含量仅为1.242.24%;工艺耗时长，设备庞大，溶媒需用量大，操作烦琐，难以控制。而采用超临界C02流体萃取和回流提取技术对水罗伞中总黄酮提取的方法至今未见报道。
发明内容本发明为了克服现有技术的不足，提供一种能提高水罗伞药材的总黄酮提取率和总黄酮百分含量的超临界C02流体萃取和回流提取方法。为了解决上述技术问题，本发明通过下述技术方案予以实现用超临界C02流体萃取方法，并用乙醇作携带剂从水罗伞中提取含黄酮化合物的萃取物，再用回流提取的方法从萃取物中提取水罗伞总黄酮，本方法依次包括如下步骤(1)将水罗伞鲜根洗净、切片、烘干、粉碎，得到水罗伞干粉备用；(2)将水罗伞干粉进行超临界C02流体萃取，萃取在加入乙醇携带剂条件下进行，萃取的工艺条件萃取温度萃取釜温度为3540°C，解析釜温度为3540°C;萃取压力萃取釜压力为3035MPa,解析釜压力为6.06.2MPa;C02流量为2532L/h;携带剂乙醇的加入量是萃取物料量的30%;萃取时间为35h，经过35h的循环萃取，从解析釜得到含水罗伞黄酮化合物的萃取物；(3)用回流提取方法从含水罗伞黄酮化合物的萃取物中提取水罗伞总黄酮，提取方法是首先用氯仿溶解萃取物后，以萃取物硅胶二l:25的量加入硅胶，搅均匀后，低温烘干；再用石油醚将其在6090°C条件下回流提取58次，分离出石油醚溶解物，得到不溶于石油醚的固体物，将固体物用氯仿回流堤取多次，分离得到氯仿溶解物，回收氯仿后，得到本发明方法的产物橙黄色膏体水罗伞总黄酮。本发明与现有技术相比较的有益效果是l.提高了总黄酮含量，最高可达到3.99%,且提取过程用时短，仅为对比技术的1/6;2.提取用溶剂(乙醇)最少是对比技术的l/30;3.设备自动化，操作简便，节约能源，提高了经济效益和社会效益；4.含水罗伞总黄酮化合物的萃取物，经石油醚去酯，再经氯仿提取，得到较纯的总黄酮，其主要黄酮成分水黄皮素的含量高。具体实施例方式近年来，应用超临界C02流体萃取技术在提取天然产物中显示其独特的优势。该技术就是利用超临界流体的溶解能力与其密度的关系，即利用压力和温度对超临界流体溶解能力的影响而进行的。在超临界状态下，将超临界流体与待分离的物质接触，使其有选择性地把极性大小、沸点高低和分子量大小的成分依次萃取出来。本发明就是应用超临界C02流体萃取技术从水罗伞药材中提取水罗伞黄酮化合物，其有效药用成分是水黄皮素。由于C02本身的非极性特点，影响了它对水罗伞中黄酮化合物溶解。乙醇是极性溶剂，且易于回收利用。在超临界C02流体中加入少量乙醇，可以改变C02流体的极性，达到提高其溶解水罗伞黄酮化合物的目的，因此本发明采用90%95%乙醇作超临界C02流体萃取的携带剂。本发明方法所用化学原料均为分析纯级本发明方法所用设备、仪器的名称、型号、产地如下<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>本发明方法如下:水罗伞鲜根洗净，切片，6crc以下烘干，万能粉碎机粉碎(不加筛网)后备用。将干燥药材粗粉投入萃取釜中，进行超临界C02流体萃取。萃取条件经热交换器分别加热萃取釜至354(TC，解析釜I、n至354(TC。通过制冷设备冷却C02贮罐，开启C02钢瓶(流量为2532L/h)，打开加压泵升高萃取釜压力至3035MPa、解析釜I和II的压力至6.06.2MPa,关闭0)2钢瓶阀门。打开循环，加入乙醇携带剂(药材量的30%)至携带剂储罐中，打开携带剂高压泵阀门，使携带剂泵入萃取釜，保持恒压、恒温，萃取3h5h。打开解析釜I、II的出料口，收集放出的萃取物。萃取物用适量氯仿使溶解，加硅胶(萃取物硅胶=1:3)搅匀，低温烘干。并用石油醚(609(TC)回流提取58次，分离出石油醚溶解物，得到固体物，将固体物用氯仿回流提取多次，以薄层层析检査是否提取完全，分离得到氯仿溶解物，回收氯仿后，得到橙黄色膏状的水罗伞总黄酮。萃取条件对提取率的影响(1)0)2流量的影响C02流量对萃取的影响较为复杂，在压力、温度、携带剂用量、原料粒度、萃取时间和投料量一定的条件下，改变C02流量考察其流量。结果，随着C(V流量增加，提取率逐渐提高，当C(V流量超过32L/h时，提取率增加，但能耗增加，生产成本提高，所以选择C02流量为32L/h为最佳流量。(2)萃取温度的影响温度是萃取过程的另一个重要参数，萃取温度提高，分子的扩散系数增大，流体的黏度下降，从而使传质效率增加。实验结果表明，升高萃取温度，有利于总黄酮化合物的超临界C02萃取。但温度上升，杂质溶解度也增大，萃取选择性下降，萃取物中杂质含量也随之升高，增加了提纯总黄酮精制的难度。因此，萃取温度不宜过高，萃取温度为35"C较为合适。(3)萃取压力的影响萃取压力是一个关键因素，对萃取率和萃取选择性有重要影响。随着压力的增大，超临界C02的相对密度和扩散能力也增加，其溶解能力就提高，萃取率也就越高。但是，压力越高萃取设备的费用和动力消耗会大大增加。同时，萃取压力增加，杂质在超临界C(V流体中的溶解度也增加，导致萃取选择性下降，提取物中杂质含量高，影响产品后续处理精制。因此，综合萃取率、萃取选择性、设备费用和能耗几个方而的因素考虑35MPa为较佳的萃取压力。(4)萃取时间的影响随着萃取时间的延长，萃取率增加。萃取5h己基木萃取完全(萃取率达95%)，再增加萃取时间，萃取率提高不大。从工业化的角度，萃取时间5h较为适宜。(5)携带剂的选择超临界C02是非极性溶剂，对有一定极性的物质溶解性较差，通过加入一定量的极性成分(携带剂)可显著改变超临界C02极性以提高其溶解度。水罗伞药材中主含黄酮类化合物，经实验证明，超临界C02中添加水罗伞药材量的30%乙醇(浓度90°/。95%)可增加其溶解度。本发明方法是用紫外分光光度法测定水罗伞总黄酮含量。具体实验方式实施例1:(1)水罗伞鲜根洗净，切片，6(TC以下烘干，万能粉碎机粉碎(不加筛网)后备用。(2)取200g干燥药材粗粉投入1L萃取釜中，经热交换器分别加热萃取釜至4(TC、解析釜I、n使达到4(TC。通过制冷设备冷却贮罐，开启C02钢瓶(流量为25L/h)，打开加压泵升高萃取釜压力至30MPa、解析釜I和II的压力至6.0MPa，关闭C02钢瓶阀门。打开循环，加入乙醇携带剂(药材量的30%)至携带剂储罐中，打开携带剂高压泵阀门，使携带剂泵入萃取釜，保持恒压、恒温，萃取3h。(3)收集从解析釜I、II出料口放出的萃取物。萃取物为橙色膏状。(4)萃取物用适量氯仿使溶解，加硅胶(萃取物硅胶二l:3)搅匀，低温烘干。加用石油醚(609(TC)回流提取58次；分离出石油醚溶解物后，得到不溶于石油醚的固体物，再将固体物用氯仿加热回流提取多次，用薄层色谱检识提取是否完全。合并氯仿液溶解物，回收氯仿，得到水罗伞总黄酮为橙色膏状物3.04g，其对原药材的提取率为1。52%，用紫外分光光度法测得总黄酮的百分含量为3.28%。实施例2:(1)水罗伞鲜根洗净，切片，6(TC以下烘干，万能粉碎机粉碎(不加筛网)后备用。(2)取200g干燥药材粗粉投入1L萃取釜中，经热交换器分别加热萃取釜至35°C、解析釜I、II使达到35°C。通过制冷设备冷却贮罐，开启C02钢瓶(流量为32L/h)，打开加压泵升高萃取釜压力至30MPa、解析釜I和II的压力至6.2MPa，关闭C02钢瓶阀门。打开循环，加入乙醇携带剂(药材量的30%)至携带剂储罐中，打开携带剂高压泵阀门，使携带剂泵入萃取釜，保持恒压、恒温，萃取5h。(3)收集从解析釜I、II出料口放出的萃取物。萃取物为橙色膏状。(4)萃取物用适量氯仿使溶解，加硅胶(萃取物层析用硅胶二l:3)搅匀，低温烘干。加用石油醚(6090°C)回流提取58次；分离出石油醚溶解物后，得到不溶于石油醚的固体物，再将固体物用氯仿加热回流提取，用薄层色谱检识提取是否完全。合并氯仿液，回收氯仿，得到水罗伞总黄酮为橙色膏状3.57g，其对原药材提取率为1.79%，用紫外分光度法测得总黄酮的百分含量为3.69%。实施例3:(1)水罗伞鲜根洗净，切片，6(TC以下烘干，万能粉碎机粉碎(不加筛网)后备用。(2)取200g干燥药材粗粉投入1L萃取釜中，经热交换器分别加热萃取釜至35°C、解析釜I、II使达到4(TC。通过制冷设备冷却贮罐，开启C02钢瓶(流量为32L/h)，打开加压泵升高萃取釜压力至35MPa、解析釜I和II的压力至6.1MPa，关闭C02钢瓶阔门。打开循环，加入乙醇携带剂(药材量的30%)至携带剂储罐中，打开携带剂高压泵阀门，使携带剂泵入萃取釜，保持恒压、恒温，萃取5h。(3)收集从解析釜I、II出料口放出的萃取物。萃取物为橙色膏状。(4)萃取物用适量氯仿使溶解，加硅胶(萃取物层析用硅胶=1:3)搅匀，低温烘干。加用石油醚(6090°C)回流提取58次，分离出石油醚溶解物后，得到不溶于石油醚的固体物，再将固体物用氯仿加热回流提取，用薄层色谱检识提取是否完全。合并氯仿液，回收氯仿，得到水罗伞总黄酮粗品萃取物为橙色膏状3.95g，其对原药材的提取率为1.98%，用紫外分光光度法测得总黄酮百分含量为3.99%。权利要求1.一种水罗伞总黄酮的提取方法，其特征在于，所述的提取方法是用超临界CO2流体萃取方法，并用乙醇作携带剂，从水罗伞药材中萃取含黄酮化合物的萃取物；再用回流提取方法从萃取物中提取总黄酮，本方法按以下次序的几个步骤进行(1)将水罗伞鲜根洗净、切片、烘干、粉碎，得到水罗伞干粉备用；(2)将水罗伞干粉进行超临界CO2流体萃取，萃取在加入乙醇携带剂条件下进行，萃取的工艺条件萃取温度萃取釜温度为35～40℃，解析釜温度为35～40℃；萃取压力萃取釜压力为30～35MPa，解析釜压力为6.0～6.2MPa；CO2流量为25～32L/h；携带剂乙醇的加入量是萃取物料量的30％；萃取时间为3～5h，经过3～5h的循环萃取，从解析釜得到含水罗伞黄酮化合物的萃取物；(3)用回流提取方法从含水罗伞黄酮化合物的萃取物中提取水罗伞总黄酮，提取方法是首先用氯仿溶解萃取物后，以萃取物∶硅胶＝1∶2～5的量加入硅胶，搅均匀后，低温烘干；再用石油醚将其在60～90℃条件下回流提取5～8次，分离出石油醚溶解物，得到不溶于石油醚的固体物，将固体物用氯仿回流提取多次，分离得到氯仿溶解物，回收氯仿后，得到本发明方法的产物橙黄色膏体水罗伞总黄酮。全文摘要本发明公开了一种水罗伞总黄酮的提取方法，利用本方法可以提高水罗伞中总黄酮的提取率和总黄酮含量。本发明是用超临界二氧化碳流体萃取方法，并用乙醇作携带剂，从水罗伞药材中提取含水罗伞黄酮化合物的萃取物，再用回流提取的方法从萃取物中提取水罗伞总黄酮。文档编号A61K36/185GK101167786SQ20071005017公开日2008年4月30日申请日期2007年9月26日优先权日2007年9月26日发明者尹显洪,石清东申请人:北海开元生物科技有限公司;广西民族大学