专利名称：益母草提取总生物碱治疗前列腺增生及前列腺炎的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及物质的医药用途，特别是一种益母草提取总生物碱治疗前列腺增生及前列腺炎的用途。
背景技术：
益母草为唇形科植物益母草的全草(包括果实)，夏秋间半花半子时，割下全草，阴干或果实秋季成熟时采收晒干、去净杂质。性味辛苦、凉，公知具有活血、祛瘀、调经、消水，可用于治疗月经不调、经前腹痛、胎漏难产、胞衣不下、产后血晕、瘀血腹痛、崩中漏下、尿血、泻血、痈肿疮疡、跌伤瘀作痛，益母草中含有益母草碱、水苏碱、益母草定、益母草宁等多种生物碱、苯甲酸、多量氯化钾、月桂酸、亚麻酸、油酸、甾酸、维生素A、芸香甙等黄酮类，又含精氨酸、4-胍基-1-丁醇、4-胍基-丁酸、水苏糖，但随着科学技术的发展和对中医药研究的深入，一些药物的新用途被发现，尤其是为了提高疗效，易于病人的服用，原来汤剂用药已逐步改为成品药，原生药中的成分被分别提出，用于制备治疗某种疾病的药物，产生了药物的新用途，为中医药学发展提供了新的生机，益母草的药用价值是被公认的，但从益母草中提取总生物碱一类物质用于治疗前列腺增生及前列腺炎未见有任何报导。
发明内容
针对上述情况，本发明之目的在于提供一种益母草提取总生物碱治疗前列腺增生及前列腺炎的用途，可有效用于制备治疗前列腺增生及前列腺炎的药物问题，其解决的技术方案是，益母草总生物碱是从益母草中提取的一种物质，其提取方法是益母草加水煎煮2次，过滤，合并滤液浓缩，加乙醇，并加盐酸调酸度，静置过夜，过滤，滤液挥干得干燥物，即益母草总生物碱，从而开拓了益母草药物的新用途，是益母草应用研究上的新突破，对中医药学发展有创造性贡献。
具体实施例方式
以下结合具体情况，对本发明的具体实施方式
作详细说明。
本发明所称的益母草总生物碱是从益母草中提得的物质，治疗前列腺增生及前列腺炎有良效。该物质是由益母草加10倍量水煎煮提取120min，再加8倍量水煎煮90min，过滤，合并滤液，浓缩滤液至1g(生药)/ml，加乙醇至含醇量达70％，加盐酸至盐酸浓度为0.2％，静置过夜，过滤除杂，滤液挥干即可得益母草总生物碱(该方法是常用的从中药物中提取活性成分的方法)，用于制备治疗前列腺增生及前列腺炎的药物，并经实验有良好的效果，开辟了药物的新用途，造益于人类，有关实验资料如下一、实验材料1、实验动物小鼠，昆明，雄性，20～23g；SD大鼠，雄性，清洁级，300g左右，许可证号SCXK(冀)2003-1-003，均由河北省医学实验动物中心提供。
2、试验药物益母草总生物碱、丙酸睾酮注射液；癃闭舒胶囊；睾酮(T)测定试剂盒；雌二醇(E2)测定试剂盒；IL-2测定试剂盒；IL-8测定试剂盒；戊巴比妥钠；注射用青霉素钠；0.9％氯化钠注射液；消痔灵注射液；前列康。
二、具体实验情况1.益母草总生物碱对丙酸睾酮致小鼠前列腺增生模型的影响取小鼠60只，雄性，20～23g，随机均匀分为6组，分别为空白对照组、模型组、癃闭舒胶囊组、益母草总生物碱低剂量组、中剂量组、高剂量组，模型组及各给药组每日按5mg/kg皮下注射丙酸睾酮(溶于液体石蜡中)，连续3周，空白对照组注射等量溶媒。空白对照组与模型组，从造模第1天起，按0.2ml/10g给予生理盐水灌胃，每日1次，连续3周。癃闭舒胶囊组从造模第1天起，按0.2ml/10g给予癃闭舒胶囊混悬液(275mg/ml、0.2ml/10g、500mg/kg相当于临床用量的15倍)灌胃，每日1次，连续3周；益母草总生物碱大、中、小剂量组从造模第1天起，按0.2ml/10g分别给予大、中、小(15mg/ml、7.5mg/ml、3.75mg/ml、0.2ml/10g、300mg/kg、150mg/kg、75mg/kg)浓度益母草总生物碱混悬液灌胃，每日1次，连续3周。于末次给药后(禁食12小时)，称重，眶静脉取血，离心，分离血清，测血清中睾酮(T)、雌二醇(E2)水平，结果见表1；然后脱颈椎处死小鼠，迅速取出前列腺组织，称其湿重，计算各组小鼠前列腺湿重的平均值及前列腺指数(前列腺指数＝前列腺湿重/鼠体重)，结果见表2。将前列腺组织固定于10％福尔马林溶液中，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜下观察各组前列腺组织的形态结构，结果见表3。
表1 益母草总生物碱对小鼠前列腺增生模型血清睾酮和雌二醇水平的影响(x±s)
*与模型组比P＜0.05，**与模型组比P＜0.01从上表可看出，与空白对照组比，模型组血清睾酮水平显著升高(p＜0.01)，血清雌二醇水平降低，说明造前列腺增生模型成功。与模型组比，大、中、小剂量益母草总生物碱均可使血清睾酮水平显著降低(p＜0.01)，大、中剂量益母草总生物碱均可使使血清雌二醇水平明显升高(p＜0.05)。
表2 益母草总生物碱对小鼠前列腺增生模型前列腺指数的影响(x±s)
*与模型组比P＜0.05，**与模型组比P＜0.01从上表可看出，与空白对照组比，模型组前列腺指数显著升高(p＜0.01)，说明造前列腺增生模型成功。与模型组比，中剂量益母草总生物碱组及癃闭舒胶囊组均可使前列腺指数明显降低(p＜0.05)。
对小鼠前列腺增生模型的病理观察结果为空白对照组小鼠前列腺腺体较均匀排列，大部分腺体处于静止状态，个别腺体腺腔增大，腺腔内有大量的前列腺分泌物；模型组小鼠的前列腺腺体出现明显不同程度的增生，腺体增大，间质明显减少；癃闭舒胶囊混悬液组小鼠的前列腺明显腺体减少，间质增多，腺体也明显减小；大剂量益母草总生物碱组小鼠的前列腺腺体明显减少，间质增多，腺体大部分明显减小；中剂量益母草总生物碱组小鼠的前列腺腺体出现明显的缩小，间质相对增多；小剂量益母草总生物碱组小鼠的前列腺腺体体积有所缩小，间质有所增生。对实验各组小鼠腺体进行立体剂量学测定，主要测定腺体的体密度(Vv)和比表面(S)，测得结果见表3。
表3 益母草总生物碱对小鼠前列腺腺体的体密度(Vv)和比表面S的影响(x±s)
**与模型组比P＜0.01从上表可看出，与空白对照组比，模型组前列腺腺体的体密度(Vv)显著增高(p＜0.01)，比表面S显著降低(p＜0.01)，说明造小鼠前列腺增生模型成功。与模型组比，大、中、小剂量益母草总生物碱组和癃闭舒胶囊组均可使前列腺腺体的体密度(Vv)显著降低(p＜0.01)，使前列腺腺体比表面S显著增高(p＜0.01)。
模型组显微观察可以看出主要表现为前列腺体明显扩张、密集、间质明显减少，腺体上皮细胞明显变薄呈扁平状，证明前列腺增生动物模型是成功的。从立体计量学的结果可以看出，前列腺体密度与空白组相比具有非常显著性差异(P＜0.01)，腺体明显扩张，比表面明显比值变小，与空白组相比也具有非常显著性差异(P＜0.01)。用药各组均具有抑制前列腺增生的作用，主要病理改变为使腺体体积缩小，数量减少，间质增宽为特征。通过立体计量学测定，抑制作用好表现在腺体的体密度就减少，比表面值就增大(比表面是表示球体越大比表面值就越小，球体越小比表面就越大)，反之，抑制作用效果不好腺体增生就大而多，腺体的体密度就高，比表面值就小。
2、益母草总生物碱对大鼠前列腺增生模型的影响取SD大鼠72只，雄性，300g左右，随机均匀分为6组，分别为空白对照组、模型组、癃闭舒胶囊组、益母草总生物碱低剂量组、中剂量组、高剂量组。将空白组做假手术，其余5组造大鼠前列腺增生模型，每只大鼠分别称重，按45mg/kg剂量，腹腔注射1％戊巴比妥钠，待麻醉成功后，常规消毒皮肤，于无菌条件下，空白组做假手术处理，造模5组经阴囊摘除双侧睾丸，残端处结扎，以确保止血，缝合皮肤，肌肉注射青霉素20万u/kg。从去势第8天起，每只大鼠皮下注射丙酸睾酮4mg/kg/d，连续30天。空白组与模型组，从去势第8天起，按2ml/100g体重给予生理盐水灌胃，每日1次，连续30天；癃闭舒胶囊组从去势第8天起，按1ml/100g体重给予癃闭舒胶囊混悬液(30mg/ml、1ml/100g相当于临床用量的10倍)灌胃，每日1次，连续30天。益母草总生物碱高、中、低剂量组从去势第8天起，按1ml/100g体重分别给予大、中、小(20mg/ml、10mg/ml、5mg/ml、1ml/100g、200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg)益母草总生物碱混悬液灌胃，每日1次，连续30天。于末次给药后(禁食12小时)，称重，然后处死，迅速取出前列腺组织，称其湿重，计算各组大鼠前列腺指数(前列腺指数＝前列腺湿重g/鼠体重100g)结果见表5；将前列腺分成两部分，左侧叶用电子天平称重，按重量加入冰生理盐水，低温匀浆，以5000rpm/分转速离心10分钟，取上清测前列腺组织睾酮、雌二醇和表皮生长因子(EGF)水平。取另一侧前列腺组织固定于10％福尔马林溶液中，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜下观察各组前列腺组织的细胞学形态。
表4 益母草总生物碱对大鼠前列腺增生模型前列腺匀浆中睾酮、雌二醇和EGF水平的影响(x±s)
**与模型组比P＜0.01从上表可看出，与空白对照组比，模型组前列腺匀浆中睾酮水平显著升高(P＜0.01)，雌二醇水平显著降低(P＜0.01)，表皮生长因子(EGF)水平显著升高(P＜0.01)，说明造大鼠前列腺增生模型成功，与模型组比，大、中、小剂量益母草总生物碱组和癃闭舒胶囊组均可使前列腺匀浆中睾酮水平显著降低(P＜0.01)，雌二醇水平显著升高(P＜0.01)，EGF水平显著降低(P＜0.01)。
表4 益母草总生物碱对大鼠前列腺增生模型前列腺指数的影响(x±s)
**与模型组比P＜0.01从上表可看出，与空白对照组比，模型组前列腺腺指数显著增高(p＜0.01)，说明造大鼠前列腺增生模型成功。与模型组比，大、中剂量益母草总生物碱组和癃闭舒胶囊混悬液组均可显著降低前列腺增生模型的前列腺指数(p＜0.01)。
对大鼠前列腺增生模型的病理观察结果为空白对照组大鼠前列腺腺上皮呈立方状排列，腔内含有少量的液体，腺腔上皮呈皱状，腺腔间隙不扩大；模型组大鼠前列腺明显增生，腺上皮呈扁平状排列，腺腔上皮皱壁消失，腺腔明显扩张，腔内含有大量的液体；癃闭舒胶囊混悬液组大鼠前列腺部分不扩张，部分明显扩张、增生；大剂量益母草总生物碱组大鼠前列腺上皮细胞呈立方状，腺腔有的扩张较明显，有的扩张不明显；中剂量益母草总生物碱组大鼠前列腺上皮细胞呈扁平状或呈立方状，腺腔有的扩张显著，有的扩张不明显；小剂量益母草总生物碱组大鼠部分前列腺上皮呈扁平状，腺腔明显扩张，部分前列腺上皮细胞呈立方状，腺腔不扩张而缩小。对实验各组动物前列腺进行立体计量学测定分析，主要选择前列腺体密度(Vv)和腺体比表面的(S)测定，测得结果如表6表6 益母草总生物碱对大鼠前列腺增生模型前列腺腺体密度Vv和比表面S的影响(x±s)
**与模型组比P＜0.01从上表可看出，与空白对照组比，模型组前列腺腺体密度Vv显著增高(p＜0.01)，比表面S显著降低(p＜0.01)，说明造大鼠前列腺增生模型成功。与模型组比，大、中、小剂量益母草总生物碱组和癃闭舒胶囊混悬液组均可显著降低前列腺增生模型前列腺腺体密度Vv(p＜0.01)，中、小剂量益母草总生物碱组可显著增加前列腺增生模型前列腺腺体比表面S(p＜0.01)。
大鼠前列腺增生动物模型的主要病理改变为前列腺显著增生，腺体的体密度(Vv)增加，间质明显减少，腺腔明显扩张，比表面数值变小，腺上皮细胞呈扁平状态，实验病理组织学和计量学均证明，大鼠的前列腺显著增生，说明大鼠动物模型是成功的。益母草总生物碱具有抑制其大鼠前列腺增生，主要在病理组织学表现为腺体明显缩小，间质增多，腺腔不扩张，腺上皮呈立方状或柱状，立体计量学证明，腺体体密度下降，腺腔明显缩小，比表面数值增大。
3、益母草总生物碱对大鼠前列腺炎的影响取Wistar大鼠80只，雄性250～270g，随机均匀分为6组，其中1组为空白对照组，做假手术，其余5组造模，每只大鼠分别称重，按45mg/kg剂量腹腔注射1％戊巴比妥钠，待麻醉后，常规消毒皮肤，于无菌条件下，空白组做假手术处理，造模各组动物下腹正中切口达腹腔，暴露膀胱背侧前列腺(背侧叶)，分别注入25％消痔灵注射液0.2ml，分别缝合肌肉及皮肤，肌肉注射青霉素20万u/kg防感染。造模型5组再均分为大、中、小剂量的益母草总生物碱组、前列康混悬液组、模型组。空白对照组与模型组，从造模第8天起，按1ml/100g体重给予生理盐水灌胃；其他几组从造模第8天起，分别给以大、中、小剂量的益母草总生物碱(20mg/ml、10mg/ml、5mg/ml，1ml/100g，200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg)和前列康胶囊混悬液(100mg/ml，1ml/100g，1000mg/kg，剂量相当于临床用量的10倍)灌胃，每日1次，连续21天。每10天记录一次大鼠饮水情况，结果见表7。于末次给药1h后(禁食不禁水12小时)，称重，然后处死大鼠，迅速取出前列腺组织，称重，计算各组大鼠前列腺指数(前列腺指数＝前列腺湿重mg/鼠体重g)，结果见表8。取各组大鼠前列腺液，检查前列腺液中的白细胞水平，结果见表8。将前列腺称重后，取一部分前列腺组织按重量加入冰生理盐水，低温匀浆，以5000rpm/分转速离心10分钟，取上清液按试剂盒说明书方法测定前列腺组织IL-2和IL-8水平，结果见表9。再取一部分前列腺组织固定于10％福尔马林溶液中，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜下观察各组前列腺组织的形态学变化，结果见表10。
表7 益母草总生物碱对前列腺炎模型大鼠饮水量的影响(ml，x±s)
**与模型组比p＜0.01从上表可看出，与空白对照组比，模型组在第10天饮水略有减少，在第20天和第30天，饮水量显著减少(p＜0.01)，说明造大鼠前列腺炎模型成功。与模型组比，在第10天，各给药组饮水量略有增加，与空白对照组基本一致；在第20天，大、中、小剂量益母草总生物碱组和前列康混悬液组均可显著增加前列腺炎模型的饮水量(p＜0.01)，使其饮水良基本与空白对照组一致，说明前列腺炎情况显著改善。
表8 益母草总生物碱对前列腺炎大鼠前列腺指数和前列腺中白细胞水平的影响(x±s)
*与模型组比p＜0.05，**与模型组比p＜0.01从上表可看出，与空白对照组比，模型组前列腺腺体指数有所增高，前列腺液中白细胞数显著升高(p＜0.01)，说明造大鼠前列腺炎模型成功。与模型组比，中剂量益母草总生物碱组和前列康混悬液组均可明显降低前列腺炎模型前列腺指数(p＜0.05)，大、中、小剂量益母草总生物碱组和前列康混悬液组均可显著降低前列腺炎模型前列腺液中白细胞水平(p＜0.01)，说明可显著改善前列腺炎症状。
表9 益母草总生物碱对前列腺炎大鼠前列腺匀浆中IL-2、IL-8水平的影响(x±s)
**与模型组比P＜0.01从上表可看出，与空白对照组比，模型组前列腺匀浆中IL-2水平和IL-8水平显著升高(p＜0.01)，说明造大鼠前列腺炎模型成功。与模型组比，大、中、小剂量益母草总生物碱组和前列康混悬液组均可显著降低前列腺炎模型前列腺匀浆中IL-2水平和IL-8水平(p＜0.01)，说明可显著改善前列腺炎症状。
取各组大鼠前列腺，福尔马林固定，切片镜检，结果为空白对照组大鼠的前列腺多数腺体处于静止状态，腺体缩小，腺上皮皱折排列，腺腔内无分泌物，腺腔明显缩小；模型组大鼠前列腺呈显著扩张状态，腺体增大1-3倍，腺上皮呈扁平状，腺腔内充满着大量红色分泌物，腺腔明显扩张，周围可见散在炎症细胞(淋巴细胞)；前列康片混悬液组少部分腺体显著缩小，大部腺体处扩张状态，分泌物减少，周围可见炎症细胞淋马细胞；大剂量益母草总生物碱组大鼠前列腺部分腺显著缩小，腺腔有分泌物存在，而大部腺体处于扩张状态，分泌物减少，周围可见少量的炎症细胞淋巴细胞；中剂量益母草总生物碱组大鼠前列腺大部分腺全缩小，腺上皮呈皱缩状态，腺腔明显缩小，腔内有分泌物明显缩小，少数腺体扩大，腔内充满大量的红色分泌物；小剂量益母草总生物碱组大鼠前列腺腺体处于明显的扩张状态，腺上皮变薄呈扁平状，腺腔内充满着大量红色的分泌物。各用药组对前列腺炎模型均有不同程度的抑制作用，以大、中剂量益母草总生物碱组对前列腺炎热抑制作用最好。
根据实验各组动物前列腺出现不同程度的腺体、大小差异和腺上皮皱折的不同程度差异，采用立体计量学定量测定，可以客观地反映其病理变化的量，按照每组动物10只，每只拍三张照片即30张，求X数。观测指标为比膜面(Sm)Sm＝腺上皮交叉点数/腺体体密度(Vv)，测得结果见表10表10 益母草总生物碱对前列腺炎模型大鼠前列腺体的比膜面(Sm)的影响单位％
**与模型组比P＜0.01从上表可看出，与空白对照组比，模型组前列腺Sm显著降低(P＜0.01)，说明造大鼠前列腺炎模型成功，与模型组比，大、中、小剂量益母草总生物碱组和前列康片混悬液组均可显著增加前列腺炎模型的Sm(P＜0.01)，以大、中剂量益母草总生物碱组对前列腺炎的抑制作用最好。
总之，以上情况清楚表明益母草总生物碱对前列腺增生及前列腺炎有显著的影响，可有效用于制备治疗前列腺增生及前列腺炎的药物，提高了药物的应用价值和经济价值，是药物应用及生产上的创造性贡献，并有显著的经济和社会效益。
权利要求
1.益母草提取的总生物碱的用途为在制备治疗前列腺增生及前列腺炎药物的应用。
全文摘要
本发明涉及一种益母草提取总生物碱治疗前列腺增生及前列腺炎的用途，可有效用于制备治疗前列腺增生及前列腺炎的药物问题，其解决的技术方案是，益母草总生物碱是从益母草中提取的一种物质，其提取方法是益母草加水煎煮2次，过滤，合并滤液浓缩，加乙醇，并加盐酸调酸度，静置过夜，过滤，滤液挥干得干燥物，即益母草总生物碱，从而开拓了益母草药物的新用途，是益母草应用研究上的新突破，对中医药学发展有创造性贡献。
文档编号A61P13/08GK101040902SQ200710054309
公开日2007年9月26日 申请日期2007年4月27日 优先权日2007年4月27日
发明者苗明三 申请人:苗明三