包含甘氨酸和乳铁蛋白的抗炎组合物及其应用的制作方法

专利名称：：包含甘氨酸和乳铁蛋白的抗炎组合物及其应用的制作方法包甜氨酸和乳铁蛋白的抗炎组糊及其細狱领域本发明涉及适用于患有炎性疾病的患者的具有抗炎活性的营养或药用组合物。
背景技术：
：WO98/33509描述了人乳铁蛋白在用于治疗炎症瞎况的应用。WO03/099323公开了人乳铁蛋白用于治疗高增殖f嫉病即类W显性关节炎和骨关节炎的应用。EP0810829公开了甘氮酸的肠道应用(与丙氨酸和丝氨酸联用)，其用于^1>炎性疾病如类风湿性关节炎和骨关节炎过程中的肿瘤坏死因子^K本发明的目的在于为用于治疗急性和慢性炎性疾病的抗炎营养组合物提供改进的可选方案。
发明内容本发明人出人意料地发现将乳铁蛋白和甘氨酸组合能协同地减轻体外和体内的炎症。由于文献中没有迹象暗祐两种成分能相互影响另夕卜物质的生物活性，即抗炎活性，因此这种协同作用是出人意料的。本发明可以用于肠道营养制剂中，且特别是用于患有炎性疾病的患者的临床营养物中。这些炎性疾病包括但不限于由细菌或病毒感染弓胞的急性炎症例如脑膜炎、败血症、疟疾，或者慢性炎性疾病例如类风湿性关节炎、骨关节炎、牛皮癣、慢性支气管炎、慢性阻塞性肺疾病、炎性肠病(溃疡性结肠炎和节段性肠炎(Crohn'sdisease》、多发性硬化等。根据本发明，本文中描述和要求保护的组合物包含适于抑制动物(包括人类)中的炎症反应的组分。特别地，本发明涉及包含甘氨酸和乳铁蛋白的抗炎组合物，其中所述甘氨酸以游离氨基酸的形式或蛋白源的形式或其组合存在，基于组合物中所含氨基酸的总重量，所述蛋白源中甘氮酸的含量至少为15重量％。乳铁蛋白乳铁蛋白或乳运铁蛋白，属于运铁蛋白家族的蛋白质，包括血清运铁蛋白、黑素运铁蛋白、卵运铁蛋白等，并且是具有抗微生物活性的球形多功能蛋白质。众所周知运铁蛋白家族的蛋白质成员具有相似的作用。乳銜传递虔白的7jC解或乳运铁蛋白的蛋白酶解会产生同样具有抗菌活性的乳铁蛋白肽kaliocin-l小肽。发现乳运铁蛋白存在于乳和多种粘膜分泌物例如眼泪和唾液中。乳运铁蛋白可以从乳中纯化或通过重组制备。其在人初乳中的浓度最高，其次是人乳，然后是牛乳。为达到本发明的目的，乳运铁蛋白可以富集乳铁蛋白的孚L组分的形式i顿，其中乳优选来源于哺乳动物，包括但不限于奶牛、山羊或绵羊。从经济的角度来看，在本发明中采用的乳铁蛋白特别雌牛乳铁蛋白。然而，在一个实施方案中，乳铁蛋白可以部分地或者完全地被运铁蛋白家族中的其他蛋白所替代。因而，在一个实施方案中，孕L铁蛋白部分i喊者完全地被血清运铁蛋白、黑素运铁蛋白、种或卵运铁蛋白替代，适宜地被卵运铁蛋白替代。在另一个实施方案中，也可以采用乳铁蛋白的肽，如乳铁蛋白肽(lactoferridn)，其具有能更快i魅圣肠吸輕血中的优点。1M地，《OT乳铁蛋白的日剂量范围为每天4.0mg至2000mg。另一个的实施方案基于如下发现乳铁蛋白具有其最佳的有益抗炎效果的剂量范围为0.5至30mg/kg体重之间，ifc^为0.5到6mg/kg体重。甘氨酸甘氨酸可以作为游离的纯氨基酸、富集的蛋白质级分或富集甘氨酸的蛋白质使用。应理解，当甘氨酸作为游离氨基酸使用时，可以作为无毒的金属盐或酸加成盐使用。例如，胶原蛋白是富含甘氨酸的蛋白质(胶原蛋白中大约三分之一的氨基酸为甘氨酸，相应的为蛋白质中总氨基酸含量的15-20重塾/0)0由于具有更好的品质例如水溶性和味道，因此，iOT胶原蛋白的7jC解产物。剂量选自10-500mg每千克体重的范围。因为预期由于更高剂量导致的低顺应性而导致反而差的效果，因此最的齐懂范围为每千克体重10-100mg。特别地，为了在制备用于治疗类风湿性关节炎和骨关节炎的营养组合物中的应用，胶原蛋白、明胶或它们的水解产物可以用作甘氨酸源，这是由于胶原蛋白和/或明胶中存在的其他氨基酸在关节炎患者需要替换的软骨中也很丰富。一棘说，这些蛋白源中的甘氨酸的含量高于蛋白质中总氨基酸含量的15重量％。因此，本发明的组合物雌为包含甘氨酸和运铁蛋白的抗炎组合物，其中，a.基于组合物中蛋白质的总重量，存在的甘氨酸的浓度为每g蛋白质至少40mg，其中所述甘氨酸以游离氨基酸的形式或蛋白源的形式或其组合存在，基于蛋白源中的所，基酸的总重量，所述蛋白源中甘氨酸的含量为至少15重#%;和b.存在的运铁蛋白的浓度为每克蛋白质0.4-200mg，其中运铁蛋白乳铁蛋白，更ifctt自牛初乳的运铁蛋白。多不饱和脂肪酸(PUFA)某些多不饱和脂肪酸(PUFA)是已知的抗炎化合物。这些多不饱和脂肪酸能够改善甘氨酸和乳铁蛋白在营养组合物中的抗炎效果。因此，雌的实施方案除甘氨酸和乳铁蛋白外还包含有效量的抗炎多不饱柳旨肪酸。雌地，这些脂肪包含DHA和/或EPA，tt^为足以弓拨抗炎作用的量。本发明人发现多不饱和脂肪酸，特别是二十碳S^酸(EPA)、二十二a^烯酸(DHA)禾口r亚麻酸(GLA)能够有效地改善甘氨酸和乳铁蛋白的抗炎效果。戶腿脂肪酸包含以下组中的至少一种或多沐EPA、DHA和GLA。发现-3和co-6脂肪酸存在于冷水海鱼中。众所周知，海洋微生物，特别是沟IK爽dinoglageMes)中包含DHA。优选的GLA来源是琉璃苣油，但也可以采用其它来源例如亚麻子油。对本发明来说，4顿何种o>3月旨肪酸的来源并不重要。1地，日剂量为至少1克EPA+DHA，以达到显著的附加抗炎效果，并且^i为至少2g/天，因为该量能获得最佳的抗炎效果。产品中n-3/n-6的比例为至少0.5，最优选为1-3之间。发明人发现甘氨酸和乳铁蛋白的组合在^)>在以炎症为特征的疾病中发生的炎症过程的不利影响方面l^共了出人意料的有益效果。这些疾病包括但不限于以由细菌或病毒感染弓胞的急性炎症例如脑膜炎、败血症、症疾，或者慢性炎症例如类风湿性关节炎、骨关节炎、牛皮癣、慢性支气管炎、慢性PM倒市疾病、炎性肠病(溃疡性结肠炎和节段性肠炎(Crahn'sdisease))、多发性硬化等为特征的疾病。贫血症在患有类风湿性关节炎(RA)的个体中是常见的共病(co-morbidity)。轻度贫血的发病率估计在30到60%之间。在RA中炎症介质的生成增多与骨髓中促红细胞生成素响应过程中的细胞因子介导的减少有关，由此导致了红细胞生成的不足。因此，甘氮酸和/或乳铁蛋白的抗炎作用同样有禾盱减轻患有慢性炎性疾病的患者中常常观察到的贫血症。在一些情况下，添加铁可能也会改善贫血症。乳铁蛋白在处方中常作为容易吸收的有效的铁源。因此，4顿学L铁蛋白可以为患者掛共一把'双刃剑"，艮P乳铁蛋白的抗炎效果和容易吸收铁。根据本发明的组合物能够成功地用于患有炎性疾病的患者。不受理论约束，这些患者通常患有由促炎细胞因子例如白介素-l(IL-l)、白介素-6(IL-6)和TNF-诱导的，质(cachexia)的一种形式。MWU制炎症反应，对自质症状(cachexiasymptoms)产生积极影响是可以预期的。自质症状由蛋白质、月旨肪和碳水化合物的代谢异常导致，包括葡萄糖周,度增加、肝糖异生增加、葡萄糖耐受不良和血糖水平增高。常与恶病质相关的体重减轻不仅仅是由于身体脂肪储存减少导致，而且还由于身体蛋白质总量减少和骨骼肌大量消耗导致。由于炎症诱导的恶病质与患有炎性疾病的患者的高死亡率的和低恢复率有关，因ltm恶病质的抑制是非常期望的。甘氨酸与乳铁蛋白的抗炎作用育,改善炎症诱导的恶病质。因此，在一个实施方案中，将本发明的组合物用于治疗患有炎性疾病的患者中的恶病质症状(用于生产用于治疗患有炎性疾病的患者中的质症状的制剂)。本发明的组合物，可进一步用于制备用于治疗COPD的药物，其中组合物任选土皿一步包含辅酶QIO、甜，、鱼油和色氨酸中的一种或多种。丰艮据本发明的组合物可进一步用于制备用于治疗炎性肠病例如节段性肠炎和溃疡'性结肠炎的药物，其中所述组合物任选iW—步包含益生素(prebiotics)、益生菌(probiotics)、初乳和鱼油中的一种或多种。本发明的组合物可进一步用于制备用于治疗阿尔茨海默氏症的药物，其中所述组合物任选i腿一步包含UMP胆碱、磷脂、鱼油、维生素B1、维生素B6和维生素B12中的一种或多种。阿尔茨海默氏症患者患有脑部的炎症。甘氨酸和乳铁蛋白都能够在大脑中检测到，表明这些化合物都能够穿ML脑屏障。这使得这些成分成为治疗这个受保护的环境中的炎症反应的极佳化合物。抗炎药物如非甾体抗炎药(NSAID)通常在胃肠粘膜产生严重的有害的炎性副作用。长期使用这些药物往往导致消化性溃疡和十二指肠溃疡。发明人发现本发明的组合物能够抑制由NSAID吲哚美辛诱导的消化性溃疡的形成。本发明的包含乳铁蛋白和甘氨酸的组合物可以有益地用于治疗和预防胃肠道中NSAID诱导的溃疡。对于人类来说，乳铁蛋白的日齐懂为至少50mg，雌50至5000mg，最优选50至1000mg。在某些情况下，乳铁蛋白的剂量可以增加至tj此量的两倍。这取决于个体患者的营,况。铁缺乏状况也可以是增大乳铁蛋白剂量的原因。营养组合物在优选的实施方案中，乳铁蛋白和甘氮酸存在于营养基质中，所述营养基质包含至少一种下述成分月旨肪、碳7夂化合物、蛋白质、维生素、矿物质和水。可以加入附加的营养成分以增働辨寺定目标群的抗炎作用。例如，氨基葡萄糖和/或软骨素可以加入到针对关节炎患者的营养产品中。氨基葡萄糖除了具有体外抗炎作用以外，还是软骨的重要成份，有助于形成新的软骨。另一个优选的实施方案包含支链氨基酸的应用。这些氨基酸在处理常伴随炎性疾病发生的肌肉萎敏musdewasting)中起到重要作用。因此，本发明的营养组合物优选富含一种或多种支链氨基酸亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸。以组合物中存在的氨基酸的总重量计，包含15-50M%，，2040重*%，最,25-35重量%的BCAA的蛋白源将最好地支持肌肉萎縮的治疗和预防。MS酸可以以完整的蛋白、肽、游离氨^^或它们的组合的形式给予。另一个雌的实施方案包含辅酶Q10禾口/或甜菜碱。这两种化合物对肌细胞(以糖原的形式)储存能量的能力具有有益作用。这有助于患有由炎症诱导的肌肉萎縮例如在慢性阻塞性肺疾病(COPD)中发生的由炎症诱导的肌肉萎縮的患者的活动性咴复正常水平。因此，本发明的营养组合物ttit包含辅酶Q10和/或甜菜碱。甜皿的优选的剂量为每天50至50000mg，更,每天100至10000mg，最i^每天1000至10000mg。Q10的，剂量范围为10到2000mg/天，更优选20至1000mg/天，最1M90至390mg/天。另一个优选的实施方案除包含本发明的乳铁蛋白和甘氨酸外，还包含益生素和/，生菌，以用于制备用于治疗和/或预防炎tffi病的营养组合物。tt^地，所述组合物进一步包含包含EPA/DHA的混合油。益生素i^^自低聚半乳糖、低9聚果糖、低聚糊、果胶、黄原胶、半乳甘露聚糖和葡甘露聚糖。营养组合物可为不同形式，例如条形、粉末、液体啜树sipfeed)、增稠的饮料、管饲等。尤其需要提及的是管饲，因为目标群体往往缺乏食欲。可以用作管饲的液体营养物的粘度优选为l-20Pa.s.。管饲,的逾逸范围为0.5到1.5kcal/ml。为了提供均衡的营养，营养基质通常包含维生素、矿物质、微量元素等。雌地，这些组分的含量参照"特殊医疗用食品"(FoodforSpecialMedicalPuiposes，FSMP)的规定。然而，由于发炎组织中的高氧ttJS激，雌使用附加的抗氧化化合物。可以使用抗氧化剂例如N-乙酰半胱氨酸以改善患有炎性疾病的患者的抗氧化状态。浓度尽管浓度不属于本发明的内容，f蹈寸浓度的某對蹄l」魏用的。在液体组合物中孚L铁蛋白i^的存在范围为0.1-25mg/ml，地，为了最佳的顺应性，浓度可以更高，范围为0.5-10mg/ml。甘氮酸优选的存在范围为0.5-50mg/ml。当存在PUFA时，优选的浓度范围为每毫升2-30mg的PUFA，更优选为每毫升2-20mgEPA+D亂在本发明的完整的营养产品中，蛋白质的含量范围为8-60etf/。或者例如845en°/。，忧选为10-35en%，且迸一步包含10-30en。/。的脂肪、10-70en。/。的碳7jC化合物，每100§产品的总干重中包含至少2^的维生素和矿物质的混合物，所述混合物中包含维生素D、维生素E、维生素B6、叶酸、辅酶QIO、甜菜碱、钙和硒中的至少一种。蛋白质被定义为基本上由产品标签上标示的氨基酸组成的蛋白质物质。例如乳、孚L清、酪蛋白、其他动物性和植物性的蛋白质以及它们的水解产物，游离氨基酸及其盐也在蛋白质的定义的范围之内。实施例以下实施例证明本发明的甘氨酸和乳铁蛋白的组合能协同抑制炎症反应的结论。给出的一些实施例是适于不同炎性疾病的营养组合物。它们都包含甘氨酸和孚傲蛋白，但根据所指出的炎性疾病的子群的特殊附瞎要加入了特定的其它特殊成分。^S例1乳铁蛋白和甘氨酸在炎症小鼠模型中的协同作用物质和方法将Balb/C小鼠(8周龄，CharlesRiver，Masstricht,TheNetherlands)随机分为两个对照组和三^H^组，在三天内每^1过强饲补充O.lmg乳铁蛋白(DMV，Veghel，TheNetherlands),50mg甘氨酸(Sigm4Zwijndrecht,TheNetheriands)或^i^两个组分的组合(分别为试验组3、4和5)或能载俠对照组1和2)。在补充的第二天，用千分尺(MitutoyoDigimatic，Veenendaal，TheNetherlands)测量耳朵厚度。随后向双耳内SI寸25^1的0.5。/。的酵母聚徵Sigma)PBS溶敏组2-5)或运载爛组1)。在注射后3小时、6小时和24小时测量耳朵厚度(实施例1)，随后处死动物。移除脾脏并使之穿过细胞滤网。红细胞在5ml细胞裂解液(每升水中4.15g的NH4Cl，0.5g的KHC03和18.6mg的Na2EDTA，pH值7.3)中翻军5分钟。细胞在RPMI(Invitrogen,Merelbeke，Belgium)中洗涤两次，离心后稀释至1.107细鹏11110在不存在或存在1吗/ml脂多徵Sigma)的情况下通过ELISpot分析检测TNF-a产生细胞(实施例2)。在耳朵中被注射了酵母聚糖的小鼠中，补充乳铁蛋白(LF)和甘氨酸(Gly)的小鼠与没有给予戶腿化合物的小鼠相比耳朵的肿胀大大降低，见表l。观察到明显的LF和Gly的协同作用。在6小时的时间点，Gly和LF的组合完全抑制了耳朵肿胀的增加，这与^^虫补充LF和Gly的组相比具有统计学上显著的差异。时间耳朵肿胀的降低(小时)乳铁蛋白甘氣酸乳铁蛋白+甘氛酸33^12腿663±22657±1728±20111±14##最大鄉，耳朵的肿胀没有增加^!i例2LF和甘氨,体外炎症^H己物TNF的加合作用对耳朵患有酵母聚糖诱导的炎症的小鼠口服补充水(=对照)、孚L铁蛋白(LF)、甘氨酸或联LF和甘氨酸的组合三天后1^脾脏细胞0MELISpot分析TNF-a产生细胞的数量。结果显示在附图1中。LF和甘氨M)寸LPS刺激的TNF产生细胞的数量的抑希U(相对于没有被酵母聚糖处理的对照组的7jC平)分别为92%和97%。甘氮酸和乳铁蛋白的组合抑制TNF-a阳性细胞的数量，使其比未翻寸PBS的对照低50%。该意想不至啲高抑制率使糊甘氨酸和乳铁蛋白成为炎性疾病治疗的极好选择。^M例3乳铁蛋白在炎症小鼠模型中的剂量响应方法和物质将Balb/C小鼠(8周斷随机分到2个对照组和3^i離组，在3天内每^M5！强饲补充0.1mg、lmg或5mg乳铁蛋白(分别为i離组3、4和5)或能载辨对照组1和2)。在补充的第二天用千分尺测量耳朵厚度。随后向双耳内、湖寸25|al的0.5。/o的酵母聚糖PBS溶液(组2-5)或运载俠组l)。在注射后3小时、6小时和24小时测量耳朵厚激实施例3)，随后处死动物。乳铁蛋白在炎症小鼠^M中的剂量响应时间1小时时间2小时时间4小时<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>最佳剂量为大于0且小于5mg乳铁蛋白。5mg乳铁蛋白对酵母聚糖诱导的肿胀的抑制明显地少于O.lmg和l.Omg剂量的乳铁蛋白对酵母聚糖诱导的肿胀的抑制，表明乳铁蛋白与甘氨酸的组合的最佳剂量也具有类似的最优值。实施例4液体营养组合物每100ml7.6g蛋白质3.0g酪蛋白3.0g乳清50mg乳铁蛋白+2.0g游离氨基酸形式的甘氨酸22.5g碳水化合物葡萄糖乳糖麦芽糖scharosc多糖其它3.3g脂肪饱和脂肪MUFAPUFA根据FSMP规定的矿物质根据FSMP规定的维生素渗透压400-800mOsmol/L^S例5用于关节炎患者的包含LF+Gly的营养组合物每謹cal9g蛋白质2.7g酪蛋白5g胶原蛋白7拙军产物(添加l.OgTO酸)1.0-2.0g添加甘氨酸的氨基酸0.050-0.1g乳铁蛋白7.5g碳水化合物3.9g脂肪2gEPA/DHA油1.9g其它油根据FSMP标准的矿物质和维生素+0.5-5克氨基葡萄糖+0-5克软骨素+转+维生素0实施例6用于COPD的包含LF+Gly的营养组合物5g蛋白质1.8g酪蛋白1.8g乳清1.3g添加的甘氨酸0.05-5g添加的色氨酸15g碳水化合物2.2g脂肪1.5gEPA/DHA油0.7g其它脂肪90mg辅酶Q10750mg甜魏例7用于IBD的包含LF+Gly的营养组合物每150kcal6g蛋白质l,lg酪蛋白3.3g乳清1.2g甘氨酸150mg乳铁蛋白1418.7g碳^C化合物5.8g脂肪2gEPA/DHA油3.8g其它油其它可以存在的成分+益生敦例如低聚半乳糖、低聚果糖和减多銜+益生菌(例如乳酸杆菌或双歧杆節^S例8用于阿尔茨海默氏症的包含LFK31y的营养组合物每100mlUMP0.05-2.0克胆碱0.1-2.0克鱼油0.5-8克憐月旨0.05-2.0克以下范围的维生素Bll、B6、B12中的至少两种Bll0.1-0.5mgB60,5画2.0mgB120.5-1OOpg权利要求1、抗炎组合物，其包含甘氨酸和运铁蛋白，其中a.基于组合物中蛋白质的总重量，存在的甘氨酸的浓度为每克蛋白质至少40mg，其中所述甘氨酸以游离氨基酸的形式或蛋白源的形式或其组合存在，基于蛋白源中所含氨基酸的总重量，所述蛋白源中甘氨酸的含量为至少15重量％；和b.存在的运铁蛋白的浓度为每克蛋白质0.4-200mg。2、如权利要求1戶脱的组合物，其中戶;f^ii铁蛋白是乳铁蛋白或其具有生物学活性的肽。3、如权利要求2戶脱的组，，其中所述乳铁蛋白是牛乳铁蛋白。4、如权利要求1-3之一戶脱的组合物，其中戶皿组合物进一步包含多不饱和脂肪酸。5、如权利要求4所述的组合物，其中所述产品中多不饱和脂肪酸n-3/n-6的比例至少为l。6、如权利要求1-5之一所述的组合物，其中所述蛋白源选自胶原蛋白、明胶或它们的^C解产物。7、如权利要求1-6之一所述的液体组合物，其中甘氨酸的浓度范围为0.5-50mg/ml。8、如权利要求7所述的液体组合物，其中乳铁蛋白的浓度范围为0.1-25mg/ml。9、如权利要求1-8之一所述的营养组合物，其包含8-60en。/。蛋白质、10-30en%月旨肪、10-70enn/。碳水化合物，以及每100g产品的总干重至少2.5g的维生素和矿物质的混合物，所述混合物中包含维生素D、维生素E、维生素B6、叶酸、辅酶QIO、甜菜碱、钙和硒中的至少一种。10、如前述权利要fe—所述的组合物作为药物的应用。11、如权禾腰求1-9之一所述的组合物在制备用于治疗和预防炎性疾病的营养组合物中的应用。12、如权利要求1-9之一所述的组合物在制备用于治疗患有炎性疾病的患者中的恶病质症状的制剂中的应用。13、如权禾腰求ll戶脱的应用，其中戶腿炎性疾病是关节炎。14、如权利要求10-13之一戶脱的应用，其中甘氨酸的日齐懂范围为每千克体重10-500mg。15、如权利要求10-14之一戶皿的应用，其中运铁蛋白的曰剂量范围为每千克体重0.5至30mg。16、如权利要求1-9之一所述的组合物在制备用于治疗关节炎患者的药物中的应用，其中所述组合物任选i腿一步包含选自色氨酸、氨基葡萄糖、软骨素、包含EPA的油、^和维生素D中的一种或多种。17、如权利要求1-9之一所述的组合物在制备用于治疗COPD的药物中的应用，其中所述组合物任选i鹏一步包含选自辅酶QIO、甜菜碱、鱼油和色氨酸中的一种或多种。18、如权利要求1-9之一所述的组^在制备用于治疗肠道炎性疾病的药物中的应用，其中所述组合物任选地进一步包含选自益生素、益生菌、初乳和鱼油中的一种或多种。19、如权利要求1-9之一所述的组合物在制备用于治疗阿尔茨海默氏症的药物中的应用，其中所述组合物任选iikS—步包含选自UMP胆碱、磷脂、鱼油、维生素Bl、维生素B6和维生素B12中的一种或多种。全文摘要本发明涉及适用于患有炎性疾病的患者的具有抗炎活性的营养或药用组合物，所述组合物包含乳铁蛋白和甘氨酸。文档编号A61K45/06GK101472612SQ200780021833公开日2009年7月1日申请日期2007年6月14日优先权日2006年6月14日发明者A·哈尔托赫申请人:纽崔西亚公司