专利名称：：神经酰胺合成促进剂、化妆品、皮肤外用剂、抗老化方法和皱纹改善方法
技术领域：
：本发明涉及可促进对于维持皮肤屏障功能是重要的神经酰胺的合成的神经酰胺合成促进剂，以及通过促进神经酰胺的合成而提高皮肤屏障功能的化妆品和皮肤外用剂。进而,本发明涉和铍紋改善方法。
背景技术：
：干性皮肤、老年性干皮症、特应姓皮炎等是由于皮肤的屏障功能异常所引起的皮肤障害。近年来，神经酰胺作为用于改善这些皮肤障害的保湿成分而受到人们的注目。神经酰胺是在人的肌肤表面(角质层)维系细胞与细胞的细胞间脂质，其占角质层全部脂质的40~65%。当该神经酰胺由于年龄增加或某种原因而减少时，肌肤变得不能保持水分，不仅干燥，而且屏障功能降低，引起各种皮肤障害。因此，提出了大量在化妆品中配合神经酰胺而从外部给予其的化妆品的提案(参考特开平7-165690号公报(以下称作为"文献r，)以及其英语同族专利美国专利第5,665,778号和美国专利第5，959,127号、特开平7-187987号公报(以下称作为"文献2")、特开平9-241143号公报(以下称作为"文献3"),它们的全部记载在这里特别作为公开的内容被引用)。除了上述皮肤化妆品以外，已知作为皮肤保湿性优异的化妆品，还有含有葡萄树液的化妆品(特开平10-45564号公报(以下称作为"文献4"),其全部记载在这里特别作为公开的内容被引用)。
发明内容在上述文献1~3记载的皮肤化妆品等中，神经酰胺由于是水不溶性的、且分子量也大，因此难以浸透肌肤，从而期待一种能够提高肌肤自身的神经酰胺合成能力的成分。但是，这些皮肤化妆品等的效果不充分，另外在使用合成品时有安全性方面的担心。另外，文献4中记栽的含有葡萄树液的化妆品虽然具有一定的保湿效果或肌肤粗糙的改善效果，但根据市场的需要，期待一种具有更优异效果的化妆品。在上述状况下，本发明的目的在于提供能够安全且有效地改善皮肤屏障功能的手段。本发明人们为了实现上述目的而进行了努力研究，结果令人惊奇地发现，从葡萄树采集的树液通过使对于维持皮肤的屏障功能最重要的神经酰胺合成酶体系亢奋而增加神经酰胺合成，从而完成了本发明。本发明涉及含有葡萄树液作为有效成分的神经酰胺合成促进剂。本发明的其他方案涉及含有葡萄树液和丝氨酸作为有效成分的神经酰胺合成促进剂。本发明的其他方案涉及含有上述神经酰胺合成促进剂的化妆品。根据一种方案，上述化妆品含有1质量％以上的葡萄树液。根据一种方案，上述化妆品含有1质量％以上的葡萄树液和0.1质量％以上的丝氨酸。根据一种方案，上述化妆品含有0.1~5质量％的丝氨酸。根据一种方案，上述化妆品是皮肤抗老化用化妆品。根据一种方案，上述化妆品是皱紋改善用化妆品。本发明的其他方案涉及含有上述记载的神经酰胺合成促进剂的皮肤外用剂。根据一种方案，上述皮肤外用剂含有1质量％以上的葡萄树液。根据一种方案，上述皮肤外用剂含有1质量％以上的葡萄树液和0.1质量％以上的丝氨酸。根据一种方案，上述皮肤外用剂含有0.1~5质量％的丝氨酸。根据一种方案，上述皮肤外用剂用于皮肤抗老化。根据一种方案，上述皮肤外用剂用于皱紋改善。本发明的其他方案涉及使用了上迷神经酰胺合成促进剂的皮肤抗老化方法。本发明的其他方案涉及使用了上述神经酰胺合成促进剂的皱紋改善方法。4本发明的神经酰胺合成促进剂和含有其的化妆品以及皮肤外用剂具有高的使对于维持皮肤的屏障功能最重要的神经酰胺合成酶体系亢奋的效果。本发明的神经酰胺合成促进剂和含有其的化妆品以及皮肤外用剂具有优异的保湿性，可防止肌肤粗糙，另外可以赋予使皱紋不显眼的改善效果。具体实施例方式以下，对于本发明进行详细地说明。葡萄树液是在葡萄(Vitis科)树木的生物体内流动的植物导管水。本发明中使用的葡萄树液只要是属于葡萄的植物的树液即可，对于其种属没有特别地限定，可以利用葡萄、山葡萄等的树液。例如，葡萄可以列举巨峰、曱州、甲变路、t只力少卜.乂卩一A、玫瑰露(^，力工7)、康尔早生(矢.7*—卩一)、皮奥奶(匕。才一净)、新玫瑰(才才.7只力少卜)、大^f:r方、，、3y3—卜'、^f工一K爻、赤霞珠(力《乂k才'乂一^<-3》)、黑比诺(匕。乂.乂々一^)、梅洛(乂a口一)、赛美蓉(七；、3>)、薏丝琳(i;一只卩》夕、、)、霞多丽(，:>弋^卜'矛)等的品种。另外，栽培的地域、栽培方法等也没有限定，但其中优选在初春的发芽期前，从修剪的葡萄的枝上溢出的树液。特别地，在初春的2周左右从葡萄的树木采集的葡萄树液特别有效且效果高。葡萄树液可以切开葡萄的茎而采集流出的树液来得到。树液的采集方法没有特别限定，例如，可以通过下述那样来进行，即，将小的容器等安装在树液将要流出的修剪的地方，采集开始流出的树液，并将其收集在加入了防腐剂等的大的保存容器中。使用可一次从各种位置采集树液的装置、例如特开平10-295207号公报记载的采集装置、特开2005-118035号公报记载的受液器来进行采集，这样具有高的工作效率，且可以防止品质恶化，从而是优选的。采集的葡萄树液根据需要可以与防腐剂等混合并作为液状物质来使用，或者作为冷冻干燥品来使用。另外，对于采集的葡萄树液，也可以根据需要进行加热处理、清澄处理。由此，可以防止树液的白浊或褐变。加热处理可以通过将葡萄树液在例如60~100°C、优选8090。C的温度下加热例如10分以上来进行。并且，加热处理可以对于釆集后的葡萄树液进行，或者也可以在形成产品后进行。另外，清澄处理可以使用公知的清澄剂，例如活性炭、膨润土、硅胶、硅溶胶、PVPP(聚乙稀聚吡咯烷酮)等来进行。本发明的神经酰胺合成促进剂含有葡萄树液作为有效成分，从有效得到神经酰胺合成促进效果的角度考虑，葡萄树液以未调节树液换算可以含有1质量％以上、更优选3质量％~100质量％、进而优选5质量%~80质量％。在本发明中，也可以将葡萄树液本身作为神经酰胺合成促进剂使用。本发明的神经酰胺合成促进剂可以将葡萄树液直接以液体的形式来含有，或者也可以作为冷冻干燥物来含有。剂型没有特别地限定，能够以洗剂、乳剂、凝胶剂、乳膏剂、软膏剂、粉末剂、颗粒剂等的各种剂型来提供。本发明的神经酰胺合成促进剂可以除了含有葡萄树液，还含有丝氨酸作为有效成分。通过进而含有丝氨酸，可以增加葡萄树液所具有的神经酰胺合成促进效果。丝氨酸的含量考虑到葡萄树液的含量来决定，从增加葡萄树液所具有的神经酰胺合成促进效果的角度考虑，该含量为葡萄树液(未调节树液换算)质量的0.1~1倍左右是合适的。本发明的神经酰胺合成促进剂可以在葡萄树液或者其冷冻干燥物中根据需要，适当配合在通常医药品、医药部外品、皮肤化妆品等中配合的油性成分、表面活性剂、保湿剂、颜料、紫外线吸收剂、抗氧化剂、香料、色素、抗菌剂、防霉剂、醇、水等。另外，在不损害本发明效果的范围下，也可以与其他的神经酰胺合成促进剂合用。也可以将本发明的神经酰胺合成促进剂作为粉末剂、颗粒剂等的口服药来使用，此时的服用量可以根据服用者的年龄、肌肤状态等的条件适当选择。服用量例如为成人每人100~1000mg(有效成分量(冷冻干燥品的重量换算))的范围。其中，上述服用量可以根据上述条件进行适当增减。本发明的神经酰胺合成促进剂可适用于化妆品和皮肤外用剂。进而，可以用于通过改善肌肤的干燥或张力来防止皮肤的老化，也可以用于铍紋的改善。特别地，本发明的神经酰胺合成促进剂具有优异的神经酰胺合成促进效果，因此除了目前单单作为化妆品的用途以外，也可以适用于作为皮肤外用剂的新的用途，所述皮肤外用剂用于改善由干性皮肤、老年性干皮症、特应姓皮炎等的皮肤屏障功能异常所引起的皮肤障害。本发明通过将神经酰胺合成促进效果高的葡萄树液与丝氨酸组合使用，能够提供可提高肌肤的保湿效果、改善肌肤粗糙、使皱紋不显眼效果更为优异的化妆品和皮肤外用剂。并且，在葡萄树液中，有微量(例如1030ppm左右)含有作为天然成分的丝氨酸的情况。但是，在本发明中，与在葡萄树液中作为天然成分本来含有的丝氨酸含量相比，添加了相当大的量的丝氨酸，由此加强了葡萄树液所具有的神经酰胺合成促进效果。当将含有葡萄树液的本发明的神经酰胺合成促进剂制成化妆品或者皮肤外用剂时，该葡萄树液配合量在添加丝氨酸或不添加的情况下，以未调节树液换算都优选为1质量％以上。葡萄树液配合量以未调节树液换算优选为2质量％~80质量％、更优选3~50质量％的范围。当将含有葡萄树液和丝氨酸的本发明的神经酰胺合成促进剂制成化妆品或者皮肤外用剂时，该丝氨酸配合量优选为0.1质量％以上。丝氨酸的含量与神经酰胺合成促进剂的情况一样，考虑葡萄树液的含量来决定，从增加葡萄树液所具有的神经酰胺合成促进效果的角度考虑，该含量为葡萄树液(未调节树液换算)质量的0.1~1倍左右是合适的。丝氨酸的配合效果逐次增加，因此没有明确的上限，但0.1~5质量％是常用的范围，优选0.3~3质量％,更优选0.5~2质量％的范围。葡萄树液和丝氨酸配合量是以化妆品或者皮肤外用剂全部成分的合计作为100质量％时所得出的比例。据外用剂的种类而适当选择、。一般地，、当作为调制成洗剂、乳剂:凝胶剂、乳膏剂、软膏剂的外用剂使用时，优选对于脸等的皮肤，1天涂布1~2次左右。本发明的神经酰胺合成促进剂也可以作为化妆品来利用，可以应用于洗液、乳液、美容液、乳膏、粉底液、粉底、口红等。实施例以下，对于本发明的实施例进行说明。本发明不限定于这些实施例。实施例1为了验证葡萄树液的神经酰胺合成促进效果，对于使用了人表皮细胞的神经酰胺合成限速酶(丝氨酸棕榈酰转移酶(SPT))mRNA表达量进行测定。SPT是催化由L-丝氨酸和棕榈酰CoA产生3-少卜只74>力'->的缩合反应的酶，该物质变换为神经酰胺。即，该SPT的量越多，越可以促进神经酰胺合成。因此将该SPT量用SPTmRNA表达量进行评价。表皮细胞中的神经酰胺合成限速酶(SPT)mRNA的表达量变化可以通过RT-PCR法进行评价。使用亲环素作为对照的持家基因。使用HuMediaKG2培养基将正常人表皮细胞在6孔板中以5.0x104细胞/孔的细胞密度播种。经过4天培养后，在含有规定浓度试样的不含有牛脑下垂体提取物的HuMeia-KG2培养基中交换，培养48小时。细胞利用PBS(-)洗涤后，使用500|LiL的TRIzol(注册商标)试剂(invitrogen社)将细胞破碎。添加100(xL的氯仿，充分混和后，通过离心操作得到上清的水层，利用2-丙醇沉淀法得到全RNA。RNA用冷的75%乙醇洗涤后，溶解于DEPC(焦碳酸二乙酯)水中并供给RT-PCR。逆專争录反应才艮4居SuperScriptFirst-StrandSynthesis^式剂盒(Invitrogen社)的协议，使用全RNAl(xg来实施。另外PCR反应以由逆转录得到的cDNA为模板，使用TaqDNA聚合酶(Roche社)，并在下述所示的引物和反应条件下进行实施。表l表1使用了表皮细胞的SPTmRNA表达评价的PCR条件<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>PCR产物在利用琼脂糖胶进行电泳后，通过SYBRGold(注册商标)(invitrogen社)染色得到泳动图像。使用CS分析仪版本2.0(7卜一社)将所得泳动图像的各个带的辉度进行定量，作为各基因的表达量。通过SPT除以亲环素基因的表达量进行修正后，用将无添加培养细胞(对照)的修正值作为100时的百分率、比率(°/。)表示。各自的基因表达量使用斯氏t检验进行统计学意义的差异检验，评价与对照组的差异。结果示于表2。确认在葡萄树液冷冻干燥物为500|tig/mL以上时有依赖于试样浓度的有统计学意义的SPTmRNA的表达增加。并且，当将葡萄树液lOOOmL进行冷冻干燥处理时，可以得到冷冻干燥物3.6g。表2表2对于试样的SPTmRNA表达的作用(n=3)葡萄树液相对强度(胶原蛋白al/GAPDH)冻结干燥物浓度比率(%)±SDp(t-检验)d(jug/mL)0100.0±23.61.000P.C.2)214.9±57.00.032*500214.2±66.60.049*画267.4100.10.048*1)相对于试样未处理细胞的有统计学意义的差异(斯氏t-检验)2)阳性对照(P.C.):200pM尼克酰胺*:表示有统计学意义的表达量的增加。由表2所示的结果可知，葡萄树液具有神经酰胺合成促进效果，本发明的含有葡萄树液作为有效成分的神经酰胺合成促进剂对于神经酰胺合成促进是有用的。本发明的神经酰胺合成促进剂具有神经酰胺合成促进效果，因此除了目前单单作为化妆品的用途以外，其也可以适用于作为皮肤外用剂的新的用途，所述皮肤外用剂用于改善由干性皮肤、老年性干皮症、特应姓皮炎等的皮肤屏障功能异常所引起的皮肤障害。实施例2丝氨酸配合效果[试验样品的调制]为了确认含有本发明的神经酰胺合成促进剂的组合物的效果，调制表3所示处方的乳膏组合物，并对其进行下述所示的官能评价试验和小皱紋评价试验。表3所示的组合物的配合量全部用％表示。表3原料名比较例l例l例2例35.00葡萄树液0.005.005.00L-丝氨酸1.000.000.501.00黄原胶(2%水溶液)5.005.005.005.00聚乙二醇iooo2,502.502.502.50丙烯酸.曱基丙烯酸烷基酯共聚物(2%水溶液)15.0015.0015.0015.00羧基乙烯基聚合物(2%水溶液)20.0020.0020.0020.00精制水33,5029.5029,0028,50甘草酸二钟0.100.100.100.10双丙甘醇3.003眉3.003.001，3-丁二醇5.005.005.005.00浓甘油4.004.004.004.00苯氧基乙醇0.400.400.400.40一肉豆蔻酸十甘油酯0.500.500.500.50三2-乙基己酸甘油酯1.001.001.001.00植物性三十碳烷2.002.002.002.00十甲基环戊硅氧烷2.002.002.002.00聚曱基硅氧烷1.001.001.001.00氢氧化钾0,350.350.350.35精制水3.653.653.653.65合计100.00跳00L00.00100.00将诉说肌肤干燥或没有张力的30岁至50岁的60名女性作为受试者，以年龄均匀分布的方式分成4组，每组15人，对于各组的受试者，使用表3所示的比较例1、例l~3的4种处方例的乳膏，并且1天早晚使用2次，连续使用30天，进行针对使用感润湿感(湿润性)、张力感(弹性)、光滑感(润滑性)的官能评价试验。评价标准示于表4。进而，官能试验的评价结果示于表5。10表4<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>*各例15名的平均评价分数值，和3个评价项目的总平均值将在意肌肤皱紋(特别眼角的小皱紋)的40岁至60岁的40名女性作为受试者，以年龄均匀分布的方式分成4组，每組10人，对于各组的受试者，使用表3所示的比较例1和例1~3的4种处方例的乳膏，并且l天早晚使用2次，以易于产生缺紋的眼周边为中心连续使用30天，通过2维图像解析法测定涂布前后的眼角的小皱紋，比较小皱紋率。其结果示于表6。2维图像解析法可以根据以下文献中记载的方法来实施[武田克之他监修r化妆品有用性-评价技术进步与将来展望-」药事日报社pl70(2001)]表6平均小皱紋率(％)改善率涂布前涂布后比较例l171512%例l181233%例2191142%例318856%O)平均小皱紋率受试者各IO名的小皱紋率的平均值O)改善率(涂布前的小皱紋率-涂布后的小皱紋率)/涂布前的小皱紋率x訓(％)在表5所示的官能评价试验结果、以及表6所示的小皱紋评价试验结果中，与仅含有丝氨酸的处方的乳膏(比较例l)相比，含有葡萄树液的处方的乳膏(例l)对于干燥、张力、皱紋等的改善效果较高，进而，组合了葡萄树液和丝氨酸的处方的乳膏(例2和3)与将它们各自单独使用时相比，可以进而提高对于干燥、张力、皱紋等的改善效果。本发明可以用于化妆品或皮肤外用剂等的领域。1权利要求1.神经酰胺合成促进剂，其含有葡萄树液作为有效成分。2.神经酰胺合成促进剂，其含有葡萄树液和丝氨酸作为有效成分。3.化妆品，其含有如权利要求1或2所述的神经酰胺合成促进剂。4.如权利要求3所述的化妆品，其含有1质量％以上的葡萄树液。5.如权利要求3所述的化妆品，其含有1质量％以上的葡萄树液和0.1质量％以上的丝氨酸。6.如权利要求5所述的化妆品，其含有0.1~5质量％的丝氨酸。7.如权利要求3~6中任一项所述的化妆品，其是皮肤抗老化用化妆品。8.如权利要求3~6中任一项所述的化妆品，其是皱紋改善用化妆口口o9.皮肤外用剂，其含有如权利要求1或2所述的神经酰胺合成促进剂。10.如权利要求9所述的皮肤外用剂，其含有1质量％以上的葡萄树液。11.如权利要求9所述的皮肤外用剂，其含有1质量％以上的葡萄树液和0.1质量％以上的丝氨酸。12.如权利要求11所述的皮肤外用剂，其含有0.1~5质量％的丝氨酸。13.如权利要求9~12中任一项所述的皮肤外用剂，其用于皮肤抗老化。14.如权利要求9~12中任一项所述的皮肤外用剂，其用于皱紋改善。15.皮肤抗老化方法，其使用如权利要求1或2所述的神经酰胺合成促进剂。16.铍紋改善方法，其使用如权利要求1或2所述的神经酰胺合成促进剂。全文摘要本发明涉及含有葡萄树液作为有效成分的神经酰胺合成促进剂、含有葡萄树液和丝氨酸作为有效成分的神经酰胺合成促进剂、含有这些神经酰胺合成促进剂的化妆品和皮肤外用剂以及它们的使用方法。根据本发明，可以提供能够安全且有效地改善皮肤屏障功能的手段。文档编号A61K8/97GK101583345SQ200780040739公开日2009年11月18日申请日期2007年11月1日优先权日2006年11月2日发明者今村一幸,町田茂申请人:美露香株式会社