专利名称：：一种从油菜蜂花粉中提取总黄酮类的工艺的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种从油菜蜂花粉中提取生物活性物质黄酮类化合物的工艺方法。
背景技术：
：蜂花粉为蜜蜂采集的雄蕊花药的粉状物质，被称为"完全营养食品"，含有丰富的糖类，蛋白质，氨基酸，维生素，黄酮类、酯类等各种营养物质。现代药理实验证实，蜂花粉中的黄酮类成分具有抗动脉硬化、降低胆固醇等多种生理活性作用。黄酮类化合物的提取方法现在一般采用水煮提取、超临界C02流体提取等方法。水煮和超临界C02流体提取的方法存在诸多局限，没有被广泛应用。目前尚未发现采用有机溶剂提取油菜蜂花粉总黄酮类物质的工艺的报道。
发明内容本发明的目的是为了提供一种从油菜蜂花粉中提取总黄酮的工艺。本发明的技术方案是，其特点是包括以下步骤①将干燥、粉碎的油菜蜂花粉用65-95%的乙醇溶液在60-90'C下回流提取、合并提取液并回收乙醇、过滤得水溶液；②将所得水溶液经过经乙醇处理的弱极性大孔吸附树脂；③先用水洗脱弱极性大孔吸附树脂至流出的溶液为无色或淡棕色，再用50-95%的乙醇洗脱至无黄酮流出并收集洗脱液；④蒸发回收洗脱液中的乙醇得黄酮溶液；⑤浓縮、干燥得粉状黄酮产品。本发明的另一特点是步骤①中先将干燥、粉碎的油菜蜂花粉经超临界C02萃取提取油脂后，再用乙醇溶液进行回流提取。本发明的另一特点是步骤①所述的回流提取的料液比为1:6-1:12，提取次数为2-4次，每次提取0.5-2.0小时。本发明的另一特点是步骤②所述的弱极性大孔吸附树脂为AB-8型。本发明的另一特点是步骤②所述水溶液(提取液)通过弱极性大孔吸附树脂的流速为0.2-2.0BV/h。本发明的另一特点是步骤③所述水洗脱及乙醇洗脱的流速为0.5-2.0BV/h。本发明的另一特点是步骤①中，油菜蜂花粉与乙醇的料液比为1:12，乙醇的浓度为65%，提取温度为80-9CTC，回流提取4次，每次2小时。本发明具有如下优点和效果1、本发明首次对油菜蜂花粉的黄酮类化合物的提取制备过程进行了研究，对影响提取得率及黄酮含量的各个参数进行了优化，从而确定了最优条件；从而提高了黄酮类化合物得率，并减小了工业消耗、降低了生产成本。2、本发明采用乙醇为溶剂，安全可靠、易于工业化生产。3、本发明可广泛应用于各种黄酮类药物及保健食品开发需求。本发明对影响黄酮类化合物提取的各个因素进行了正交试验优化研究，通过分光光度法测定吸光度对各次提取制得的黄酮含量进行测定。选取了温度、料液比、乙醇浓度、提取时间和提取次数5个因素，每个因素4个水平，采用U(45)正交表进行实验。实验数据分析表明，各因素对提取效果的影响程度为提取次数〉乙醇浓度>料液比〉时间>温度。从实验结果可以看出，最佳提取条件是提取温度为9(TC，料液比为1:12，乙醇浓度为65%，提取时间为2h，提取次数为4次。但由于浸提温度对黄酮的提取影响并不大，考虑到实际工业化生产，宜采用8(TC的提取温度。这样即能提高黄酮类化合物的得率，又能节省能源，且易于操作。经综合分析，加热回流提取的最佳工艺条件为用1:12的65%乙醇溶液在80'C下，回流提取4次，每次2小时。表1为本发明中正交试验因素水平表表2为本发明中正交试验结果及数据分析表i因素水平表<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>表2正交试验结果及数据分析<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>164432kl31.2431.1132.5831.7828.50k230.4330.5131.7530.5831.77k331."30.4632.0330.4032.31k432.4833,2028.9132.5132.70R2.052.743.672.114.235.1具体实施例方式实施例一①将油菜蜂花粉干燥后粉碎，粉碎成粒度为20-80目，经超临界C02萃取提取油脂后，用6倍量的95%的乙醇溶液在90匸下回流提取4次，每次提取时间0.5小时，合并两次提取液，浓縮回收乙醇得水溶液并过滤，②将过滤液以0.2BV/h的流速经过乙醇处理的弱极性AB-8型大孔吸附树脂塔；③先用水以流速0.5BV/h洗脱至无色或淡棕色后，再用80%乙醇以2.OBV/h的流速洗脱至无黄酮流出时停止洗脱(用FeCl3溶液检测黄酮洗脱情况，如有黄酮化合物存在，加入FeCl3溶液时会显墨绿色，如果没有则不变色)，收集洗脱液；蒸发回收洗脱液中的乙醇得黄酮溶液，再减压浓縮至粘稠状，冷冻干燥，粉碎得到粉状黄酮产品。实施例二①将油菜蜂花粉干燥后粉碎，粉碎成粒度为20-80目，用12倍量的65%的乙醇溶液在80。C下回流提取2次，每次提取时间1.5小时，合并两次提取液，浓縮回收乙醇得水溶液并过滤，②将过滤液以2.0BV/h的流速经过乙醇处理的弱极性AB-8型大孔吸附树脂塔；③先用水以流速0.5BV/h洗脱至无色或淡棕色后，再用95%乙醇以2.0BV/h的流速洗脱至无黄酮流出时停止洗脱(用FeCl3溶液检测黄酮洗脱情况，如有黄酮化合物存在，加入FeCl3溶液时会显墨绿色，如果没有则不变色)，收集洗脱液；④蒸发回收洗脱液中的乙醇得黄酮溶液，再减压浓縮至粘稠状，冷冻干燥，粉碎得到粉状黄酮产品。实施例三①将油菜蜂花粉干燥后粉碎，粉碎成粒度为20-80目，经超临界C02萃取提取油脂后，用8倍量的7(m的乙醇溶液在7(TC下回流提取3次，每次提取时间2小时，合并三次提取液，浓縮回收乙醇得水溶液并过滤，②将过滤液以0.8BV/h的流速经过乙醇处理好的弱极性AB-8型大孔吸附树脂塔；③先用水以流速2.OBV/h洗脱至无色或淡棕色后，再用50%乙醇以2.0BV/h的流速洗脱至无黄酮流出时停止洗脱(用FeCl3溶液检测黄酮洗脱情况，如有黄酮化合物存在，加入FeCl3溶液时会显墨绿色，如果没有则不变色)，收集洗脱液；④蒸发回收洗脱液中的乙醇得黄酮溶液，再减压浓縮至粘稠状，冷冻干燥，粉碎得到粉状黄酮产品。实施例四①将油菜蜂花粉干燥后粉碎，粉碎成粒度为20-80目，用10倍量的8(m的乙醇溶液在6(TC下回流提取4次，每次提取时间0.5小时，合并四次提取液，浓縮回收乙醇得水溶液并过滤，②将过滤液以1.0BV/h的流速经过乙醇处理的弱极性AB-8型大孔吸附树脂塔；③先用水以流速1.0BV/h洗脱至无色或淡棕色后，再用70%乙醇以0.8BV/h的流速洗脱至无黄酮流出时停止洗脱(用FeCl3溶液检测黄酮洗脱情况，如有黄酮化合物存在，加入FeCl3溶液时会显墨绿色，如果没有则不变色)，收集洗脱液；④蒸发回收洗脱液中的乙醇得黄酮溶液，再减压浓縮至粘稠状，冷冻干燥，粉碎得到粉状黄酮产品。权利要求1、一种从油菜蜂花粉中提取总黄酮类的工艺，其特征在于包括如下步骤①将干燥、粉碎的油菜蜂花粉用65-95％的乙醇溶液在60-90℃下回流提取、合并提取液并回收乙醇、过滤得水溶液；②将所得水溶液经过经乙醇处理的弱极性大孔吸附树脂；③先用水洗脱弱极性大孔吸附树脂至流出的溶液为无色或淡棕色，再用50-95％的乙醇洗脱至无黄酮流出并收集洗脱液；④蒸发回收洗脱液中的乙醇得黄酮溶液；⑤浓缩、干燥得粉状黄酮产品。2、如权利要求1所述的一种从油菜蜂花粉中提取总黄酮类的工艺，其特征在于所述步骤①中先将干燥、粉碎的油菜蜂花粉经超临界C02萃取提取油脂后，再用乙醇溶液进行回流提取。3、根据权利要求1或2所述的一种从油菜蜂花粉中提取总黄酮类的工艺，其特征在于步骤①所述的回流提取的料液比为1:6-1:12，提取次数为2_4次，每次提取0.5-2.0小时。4、如权利要求1或2所述的一种从油菜蜂花粉中提取总黄酮类的工艺，其特征在于步骤②所述的弱极性大孔吸附树脂为AB-8型。5、如权利要求1或2所述的一种从油菜蜂花粉中提取总黄酮类的工艺，其特征在于步骤②所述提取液通过弱极性大孔吸附树脂的流速为0.2-2.OBV/h。6、如权利要求1或2所述的一种从油菜蜂花粉中提取总黄酮类的工艺，其特征在于:步骤③所述水洗脱及乙醇洗脱的流速为0.5-2.0BV/h。7、如权利要求1所述的一种从油菜蜂花粉中提取总黄酮类的工艺，其特征在于所述步骤①中，油菜蜂花粉与乙醇的料液比为1:12，乙醇的浓度为65%，提取温度为80-9(TC，回流提取4次，每次2小时。全文摘要一种从油菜蜂花粉中提取总黄酮类的工艺，涉及一种从油菜蜂花粉中提取生物活性物质黄酮类化合物的工艺方法。其特点是包括如下步骤①将干燥、粉碎的油菜蜂花粉用65-95％的乙醇溶液在60-90℃下回流提取、合并提取液并回收乙醇、过滤得水溶液；②将所得水溶液经过经乙醇处理的弱极性大孔吸附树脂；③先用水洗脱弱极性大孔吸附树脂至流出的溶液为无色或淡棕色，再用50-95％的乙醇洗脱至无黄酮流出并收集洗脱液；④蒸发回收洗脱液中的乙醇得黄酮溶液；⑤浓缩、干燥得粉状黄酮产品。文档编号A61P9/00GK101554394SQ20081001796公开日2009年10月14日申请日期2008年4月8日优先权日2008年4月8日发明者刘永军,王小艳,王洪伦,索有瑞申请人:中国科学院西北高原生物研究所