专利名称：：山豆根非生物碱部分的制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种中药
技术领域：
的制备方法，特别是涉及一种山豆根非生物碱部分的制备方法。技术背景山豆根是豆科植物越南槐(S叩horatonkinensisGapn印.)的干燥根和根茎。其药性寒，味苦，归肺、胃经。中国药典2005年版记载山豆根具有清热解毒、消肿利咽的功效。山豆根中主要含有生物碱，黄酮，皂苷和多糖类化合物。药理实验表明，山豆根具有抗肿瘤、抗病毒、抗肝损伤、抗心律失常等多方面药理活性，且据研究报道其中所含的生物碱成分多为这些药理活性的物质基础。现代研究表明山豆根对肝炎治疗效果显著，如含山豆根总生物碱的制剂肝炎灵注射液经长期临床应用显示，能够降低转氨酶，提高机体免疫力，对慢性活动性肝炎具有较好疗效。比如中国专利CN85100392A公开了一种从植物山豆根中提取治疗肝炎用药的方法；中国专利CN1457778A公开了山豆根的口服制剂、制备方法及应用。这些专利中所涉及到的均为山豆根中的主要次生代谢产物-生物碱类成分。但目前临床上也发现，以山豆根主要生物碱成份苦参碱或氧化苦参碱单体制成的苦参碱注射液或苦参素注射液，其效果并没有用水直接提取制备而成的"肝炎灵注射液"明显，这说明山豆根中可能还含有更高效的保肝降酶的非生物碱成分存在。经对现有技术的文献检索发现，中国专利CN1306854A是一种山豆根的提取物，其提取方法及用途，该专利所指山豆根的提取物"是向山豆根水提液中加入乙醇所得的醇沉部分；或将山豆根醇提后的残渣再用水提取所得的水提部分"。该山豆根的提取物的提取方法为"取山豆根，用水浸泡后加热提取，再经0-3次热水提取后，过滤，合并水提液，浓缩，加乙醇，去醇沉部分即得。"该山豆根提取物可以用于制备护肝药。该专利提示了山豆根中的水提醇沉物(也是非生物碱成分，以多糖等大分子物质为主)能够显著降低急性肝损伤大鼠死亡率以及血清转氨酶水平，具较好的护肝作用。结合目前临床应用肝炎灵注射液的实际效果来看，因为直接水提取液制备的肝炎灵事实上除了包含山豆根中的主要生物碱成分外，同时也涵盖了很多非生物碱类的化学成分，其临床效果要优于仅含有生物碱成分的制剂效果。也就说临床效果提示非生物碱的活性成分很可能在整个功效中发挥了主导作用或至少对生物碱具有协同增效的作用。为了进一步研究更高疗效的保肝、降酶活性的药物，对其非生物碱成分深入研究具有十分重要的理论和应用价值。
发明内容本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种山豆根非生物碱部分的制备方法，具有简单、快速、成本低廉的特点，为从山豆根中提取非生物碱部分提供了一种新方法，非生物碱部分可作为降酶保肝方面的应用，同时可供进一步研究高效低毒的非生物碱活性成分提供物质基础。本发明通过以下技术方案实现的，本发明所述的山豆根非生物碱部分的制备方法，具体为在山豆根的水回流提液中加入乙醇，沉淀不溶性物质，过滤，滤液浓縮，经交联聚苯乙烯系的强酸型阳离子树脂进行柱色谱分离，用水洗脱，收集水洗脱部分，浓縮至浸膏状，减压干燥即得到非生物碱部分。本发明所述山豆根非生物碱部分的制备方法，包括如下步骤第一步，取山豆根药材粉末，加入615倍的水，回流提取，合并提取液，过滤，除去药渣；所述山豆根药材粉末是指40目~200目的山豆根药材粉末。所述回流提取13次，每次1小时2小时。第二步，取滤液，减压浓縮至原药材体积的1/21/4;第三步，于4。C30。C温度范围内，在浓縮液中加入95%(v/v)乙醇溶液，搅拌，调节溶液醇浓度为50%90%(v/v)，进行沉淀；静置610h，离心或过滤，除去残渣不溶物，滤液浓縮至原药材的量的1/4，备用。第四步，将第三步中浓縮液通过交联聚苯乙烯系的强酸型树脂，用去离子水洗脱，收集洗脱液，至洗脱液为中性无色。第五步，将第四步中水洗脱液减压浓縮，至浸膏状，经真空干燥或冷冻干燥成干粉，即得山豆根非生物碱部分。所述交联聚苯乙烯系的强酸型阳离子树脂，是指型号为001X1.1或001X4或001X7或001X14.5，或美国Rohm&Hass公司生产的AmberliteIR120,或Dow化学公司生产的Dowex50，或英国BDHChemicalLtd生产的Zerolit225。本发明所得的的山豆根非生物碱部分，含有糖类、有机酸、酚类和皂苷类等。采用试管试验，碘化铋钾和碘化汞生物碱显色试剂检验，均呈阴性；同时根据中国药典2005版中山豆根薄层检査生物碱项下，于硅胶G板上点样，三氯甲烷甲醇浓氨水(4:1:0.1)(V:v:v)展开，取出晾干，喷以碘化铋钾显色剂，也无生物碱显色斑点出现。对非生物碱部分进行定量测定，以重量百分比表示其含量如下采用苯酚一硫酸法，用分光光度法测定，以葡萄糖计，含糖量在52%58%;酸碱滴定法测得总有机酸含量在8%10%;采用Folin法，分光光度法测定，以没食子酸计总酚含量在4%6%;香草醛—浓硫酸法，分光光度法测定，以齐墩果酸计总皂苷含量在4%5%。本发明的制备工艺简单、快捷、成本低廉，所得产品含有的各类物质含量稳定可控。所得非生物碱部分作为降酶保肝方面的应用，同时为进一步在山豆根中寻找具有高效低毒的非生物碱活性成分提供物质基础。具体实施方式下面对本发明的实施例作详细说明本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。实施例1取40目~200目山豆根药材粉末1000g，第一次加入6倍药材量的水，回流提取lh，过滤。药渣再用4倍药材量的水回流提取lh，过滤。合并滤液减压浓縮至250mL。于4'C下，在浓縮液中加入95%乙醇，搅拌，调节溶液醇浓度为50%，静置6h;过滤，除去不溶物。滤液浓縮至250mL,上交联聚苯乙烯系的强酸型树脂进行分离，其型号为001X7，用去离子水洗脱；收集水洗脱液至洗脱液中性无色，减压浓縮洗脱液至浸膏状，经真空干燥或冷冻干燥成干粉，即得山豆根非生物碱部分。所得非生物碱部分用碘化铋钾和碘化汞试管反应和薄层展开检査生物碱均为阴性，且该部分含糖量为52%，总有机酸含量为8%，总酚含量为5%，皂苷含量为4%。实施例2取40目~200目山豆根药材粉末1000g，第一次加入10倍药材量的水，回流提取2h，过滤。药渣再用6倍药材量的水回流提取1.5h，过滤。重复操作一次，合并滤液减压浓缩至300mL。于20'C下，在浓縮液中加入95%乙醇，搅拌，调节溶液醇浓度为70%，静置8h;过滤，除去不溶物。滤液浓缩至250mL,上交联聚苯乙烯系的强酸型树脂进行分离，其型号为001X7，用去离子水洗脱；收集水洗脱液至洗脱液中性无色，减压浓缩洗脱液至浸膏状，经真空干燥或冷冻干燥成干粉，即得山豆根非生物碱部分。所得非生物碱部分用碘化铋钾和碘化汞试管反应和薄层展开检查生物碱均为阴性，且该部分含糖量为54%，总有机酸含量为9%，总酚含量为6%，皂苷含量为5%。实施例3取40目~200目山豆根药材粉末1000g，第一次加入15倍药材量的水，回流提取3h，过滤。药渣再用8倍药材量的水回流提取1.5h，过滤。重复操作2次，合并滤液减压浓缩至500mL。于30'C下，在浓縮液中加入95%乙醇，搅拌，调节溶液醇浓度为90%，静置10h;过滤，除去不溶物。滤液浓縮至250mL，上交联聚苯乙烯系的强酸型树脂进行分离，其型号为001X7，用去离子水洗脱；收集水洗脱液至洗脱液中性无色，减压浓縮洗脱液至浸膏状，经真空干燥或冷冻干燥成干粉，即得山豆根非生物碱部分。所得非生物碱部分用碘化铋钾和碘化汞试管反应和薄层展开检查生物碱均为阴性，且该部分含糖量为55%，总有机酸含量为10%，总酚含量为6%，皂苷含量为4%。实施例4实施步骤同实施例3，其中的交联聚苯乙烯系的强酸型树脂柱为AmberliteIR120。所得非生物碱部分用碘化铋钾和碘化汞试管反应和薄层展开检査生物碱均为阴性，且该部分含糖量为57%，总有机酸含量为9%，总酚含量为5%，皂苷含量为4%。实施例5实施步骤同实施例3，其中的交联聚苯乙烯系的强酸型树脂柱为Dowex50。所得非生物碱部分用碘化铋钾和碘化汞试管反应和薄层展开检査生物碱均为阴性，且该部分含糖量为58%，总有机酸含量为10%，总酚含量为4%，皂苷含量为5%。实施例6实施步骤同实施例3，其中的交联聚苯乙烯系的强酸型树脂柱为Zerolit225。所得非生物碱部分用碘化铋钾和碘化汞试管反应和薄层展开检查生物碱均为阴性，且该部分含糖量为58%，总有机酸含量为10%,总酚含量为4%，皂苷含量为5%。实施例7所得非生物碱部分，在实验动物大鼠上，分别灌胃给予50、25mg*kg—'高低两个剂量的山豆根非生物碱部分，连续14天，每日一次；正常对照组和模型对照组动物分别给予同等剂量纯水。除正常对照组外，第13天给药2小时后给予CCL1.5mLkg—'进行腹腔注射染毒，造成急性肝损伤模型。于染毒24h后，眼眶取血，分离血清，测定谷丙转氨酶ALT、谷草转氨酶AST生化指标水平；结果如表1所示。从实验结果可看出非生物碱部分的高低两个剂量组与模型对照组相比ALT和AST均有显著性降低，表现出较好的降酶保肝作用。表l.非生物碱部分对CCl4急性肝损伤大鼠血清ALT、AST的影响(n=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>573.20±64.53'注与正常组比较*P<0.01;与造模组比较'P<0.05,''P<0.0权利要求1、一种山豆根非生物碱部分的制备方法，其特征在于，在山豆根的水回流提液中加入乙醇，沉淀不溶性物质，过滤，滤液浓缩，经交联聚苯乙烯系的强酸型阳离子树脂进行柱色谱分离，用水洗脱，收集水洗脱部分，浓缩至浸膏状，减压干燥即得到非生物碱部分。2、根据权利要求l所述的山豆根非生物碱部分的制备方法，其特征是，包括如下步骤第一步，取山豆根药材粉末，加入615倍的水，回流提取，合并提取液，过滤，除去药渣；第二步，取滤液，减压浓縮至原药材体积的1/21/4;第三步，于4'C30'C温度范围内，在浓縮液中加入体积浓度为95%的乙醇溶液，搅拌，调节溶液醇体积浓度为50%90%，进行沉淀，静置6h10h，离心或过滤，除去残渣不溶物，滤液浓缩至原药材的量的1/4，备用；第四步，将第三步中浓縮液通过交联聚苯乙烯系的强酸型树脂，用去离子水洗脱，收集洗脱液，至洗脱液为中性无色；第五步，将第四步中水洗脱液减压浓縮，至浸膏状，经真空干燥或冷冻干燥成干粉，即得山豆根非生物碱部分。3、根据权利要求2所述的山豆根非生物碱部分的制备方法，其特征是，所述山豆根药材粉末是指40目~200目的山豆根药材粉末。4、根据权利要求2所述的山豆根非生物碱部分的制备方法，其特征是，所述回流提取13次，每次1小时2小时。5、根据权利要求1或2所述的山豆根非生物碱部分的制备方法，其特征是，所述非生物碱部分，其糖重量百分比含量在52%58%。6、根据权利要求1或2所述的山豆根非生物碱部分的制备方法，其特征是，所述非生物碱部分，其总有机酸重量百分比含量在8%10%。7、根据权利要求1或2所述的山豆根非生物碱部分的制备方法，其特征是，所述非生物碱部分，其总酚重量百分比含量在4%~6%。8、根据权利要求1或2所述的山豆根非生物碱部分的制备方法，其特征是，所述非生物碱部分，其总皂苷重量百分比含量在4%5%。全文摘要本发明公开了一种中药
技术领域：
的山豆根非生物碱部分的制备方法，具体为在山豆根的水回流提液中加入乙醇，沉淀不溶性物质，过滤，滤液浓缩，经交联聚苯乙烯系的强酸型阳离子树脂进行柱色谱分离，用水洗脱，收集水洗脱部分，浓缩至浸膏状，减压干燥即得到非生物碱部分。该生物碱部分主要含有糖类、有机酸、酚类和皂苷类等。本发明的制备工艺简单、快捷、成本低廉，所得产品含有的各类物质含量稳定可控。所得非生物碱部分可做为降酶保肝方面的应用，并为从中寻找更高效的非生物碱活性成分提供物质基础。文档编号A61P1/00GK101278969SQ20081003741公开日2008年10月8日申请日期2008年5月15日优先权日2008年5月15日发明者张媛媛,伟贾,赵爱华,高月求申请人:上海交通大学