专利名称：：一种含异甘草素的温控缓释注射剂及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种含异甘草素的温控缓释注射剂，属于药物
技术领域：
。具体而言，该发明涉及一种能将异甘草素稳定释放于实体肿瘤局部的诱导癌分化的缓释凝胶制剂，主要为缓释凝胶注射剂，该缓释凝胶制剂在温室下为溶液，在热血动物体内可变为半固态或固态凝胶，因而能将所包涵的异甘草素在肿瘤局部缓慢释放，从数日至数周。
背景技术：
：化疗药物局部应用，特别是局部缓释，已经成为当前实体肿瘤化疗的研究方向和热点。然而，目前可生物降解的缓控释制剂多用固态聚合物如聚乙醇酸、聚乳酸或其共聚物等作为缓释载体。由于此类高分子载体的疏水性能，这些聚合物在缓释药物制备过程中需要有机溶剂，如二氯甲烷，氯仿，乙酸或二甲基甲酰胺等。为去除有毒的有机溶剂，必须广泛干燥。因此，在大多数情况下，最终缓释制剂多为固体形状(例如，微球，片状或棒状)，需要较复杂的植入过程，且易造成组织创伤甚至肿瘤细胞种植或播散。另外，有机溶剂或高热过程常导致许多抗瘤有效成份降解变性，固体植入剂也不能有效覆盖肿瘤切除后的不规则瘤腔，因此对术后残留肿瘤细胞不能有效清除，不能有效控制术后复发。因此，研究开发新的易于操作、环保、有效且适用广泛的缓释制剂便成为目前亟待解决的问题。异甘草素是甘草中的一种异黄酮化合物，它有着很强的药理活性，具有抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、抗病毒、抗自由基、松弛血管、抑制脂质过氧化等生物活性，其中抗肿瘤作用是近年来的研究热点。作为肿瘤细胞分化的诱导剂已有相关文献报道。
发明内容本发明针对现有技术的不足，提供一种含异甘草素的抗瘤药物缓释剂，具体而言，是一种含异甘草素的缓释凝胶注射剂。该缓释凝胶注射剂在室温下为溶液，在热血动物体内可变为半固态或固态凝胶；流动性好不仅能使缓释剂有效覆盖肿瘤切除后的不规则瘤腔从而对术后残留肿瘤细胞有效清除，对术后止血及预防瘤细胞扩散也有较好的预防效果。半固态或固态凝胶不仅能延长药物释放时间还可维持较高的药物浓度，并能增加药物的敏感性；该诱导癌分化药物缓释剂不仅具有好的释药特性，而且环保、剌激性小，应用方便，效果明显。研究表明疏水性聚酯与亲水性聚乙二醇所形成的两亲性共聚物具有独特的温度敏感性，在常温下为溶液，在体温条件下可变为半固态或固态凝胶，因此可以将所含的药用成分缓慢释放。本发明发现当疏水性聚酯与亲水性聚乙二醇所形成的两亲性共聚物溶液与一定量的异甘草素混合后可形成具有缓释功能的注射用水凝胶，该水凝胶在5°C_251:条件下为透明液态，在3(TC_371:左右可变为不流动的半固态或固态水凝胶。但此凝胶温度受多种因素影响，其中主要是水凝胶中药物种类、药物含量、两亲性共聚物的分子量、两亲性共聚物中疏水性聚酯与亲水性聚乙二醇的重量比、聚乙二醇的分子量、聚酯中单体的重量比。本发明还发现，含异甘草素的水凝胶可将其中的异甘草素缓慢释放，其释放的周期可为数日到数月，主要取决于所用两亲性共聚物的分子量、聚酯及聚乙二醇的分子量及其嵌段构型、两亲性共聚物中疏水性聚酯与亲水性聚乙二醇的重量比、异甘草素的种类及以上为重量百分比其中，缓释凝胶注射剂的制备有多种方法，本发明温控缓释注射剂可用下列方法和步骤制备(1)分别配制两亲性共聚物溶液和异甘草素，单独分装储存，注射前将两亲性共聚物溶液和异甘草素充分混匀后制成诱导癌分化缓释凝胶注射剂，然后储存在低温或冷冻状态，使用前升温复溶后使用；(2)先配制异甘草素制成药物注射剂，然后与一定量的两亲性共聚物混合成为诱导癌分化缓释凝胶注射剂。在-l(TC或以下储存备用。应用前复溶后体内注射。与两亲性共聚物的混合可在生产车间完成，也可将其单独分装运输储存，在临床应用前完成。若在临床应用前进行混合，最好在注射前1到3天完成并储存在低温最好冷冻状态，使用前升温复溶后使用。两亲性共聚物在注射性水凝胶中的含量可为5%到40%，但以10%到30%为优选，15%到28%为最优选。(3)分别配制异甘草素溶液和两亲性共聚物，单独分装储存，在注射前将异甘草素溶液和两亲性共聚物充分混匀后制成诱导癌分化缓释凝胶注射剂，然后储存在低温或冷冻状态，使用前升温复溶后使用；(4)将一定量的两亲性共聚物与一定量的异甘草素混合，然后加溶媒制成温控缓释注射剂。储存在低温或冷冻状态，使用前升温复溶后使用；凝胶过程可在生成车间完成，也可将两亲性共聚物与异甘草素可单独或混合后包装、运输、储存，在临床应用前加溶媒。若在临床应用前加溶媒，最好在注射前充分混合并储存在低温最好冷冻状态，使用前升温复溶后使用。异甘草素和缓释凝胶的包装及应用取决于生成工艺和临床应用要求。异甘草素和缓释凝胶可单独或组(混)合包装。组合包装指单独生产并分装后储存在统一个包装盒内，而混合包装指异甘草素均匀分散与缓释凝胶中。单独或组合包装与混合包装的不同之处是，当单独或组合包装时异甘草素在体内注射前与缓释凝胶混合，而混合包装则是在生产过程中已将异甘草素均匀分散于缓释凝胶中，用前只需在室温下升温后直接注射。或(5)将一定量的两亲性共聚物与一定量的异甘草素混合，单独或混合后包装、运输、储存，在临床应用前加溶媒充分混合并储存在低温至冷冻状态，使用前升温复溶后使用。A:异甘草素0.01-40%B:两亲性共聚物5%-40%C:溶媒60%-90%D:调节剂0-15%经过大量实验研究发现，本发明缓释凝胶注射剂由以下成分组成以上方法中可加入0_15%的调节剂。上述方法只是用于说明而非局限本发明。其中方法"(l)"为优选。缓释注射剂的制备方法是任意的，可用若干种方法制备。然而药物的种类与含量以及两亲性共聚物的组成与单体的重量比是决定缓释注射剂的凝胶化温度和药物释放行为的关键因素，须经大量试验和创造性劳动才可获得。缓释凝胶的黏度为10cp-3000cp(5°C-30°C时)，优选100cp-2000cp(5°C-30°C时)，最优选100cp-1000cp(5°C-30。C时)。异甘草素在缓释剂中的重量百分比从0.001%-40%，以0.1%_30%为佳，以1%_20%为最佳。适合于本发明的两亲性共聚物由聚酯及聚乙二醇组成，其中，聚酯及聚乙二醇嵌段构型聚酯_聚乙二醇_聚酯或聚乙二醇_聚酯_聚乙二醇，以聚酯_聚乙二醇_聚酯为首选；聚酯及聚乙二醇嵌段共聚物可为，但不限于，聚乳酸-聚乙二醇-聚乳酸、乙交酯丙交酯共聚物_聚乙二醇_乙交酯丙交酯、聚乙二醇_聚乳酸_聚乙二醇、聚乙二醇_乙交酯丙交酯_聚乙二醇，其中以乙交酯丙交酯共聚物_聚乙二醇_乙交酯丙交酯和聚乙二醇_乙交酯丙交酯_聚乙二醇为优选，以乙交酯丙交酯共聚物_聚乙二醇_乙交酯丙交酯为最优。聚酯可为，但不限于，聚乳酸、聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物、外消旋聚乳酸、外消旋聚乳酸/乙醇酸共聚物、端羧基聚乳酸、端羧基聚乳酸/乙醇酸共聚物中的任意一种或多种的共聚物。上述聚酯的平均分子量为500-30000，其中以800-20000为优选，1000-10000为最优选。两亲性共聚物的平均分子量可为500-28000，其中以600-16000为优选，1000-8000为最优选；两亲性共聚物中，聚酯与聚乙二醇的重量比可为9-6:11-4，以9-7:l-3为优选，以9-7:l-2为最优选，即两亲性共聚物中聚乙二醇的重量百分比可为5%-40%，以7%-到30%为优选，以10%_25%为最优选，聚酯的重量百分比可为60%-95%，以70%_93%为优选，以75%_90%为最优选。两亲性共聚物的凝胶化温度，即变为不流动凝胶的温度，可为30°C_37°C，以31°C-36.5t:为优选，以32°C-36t:为最优选。聚乙二醇的平均分子量可为200-20000，其中以300-10000为优选，500-3000为最优选。缓释凝胶系统中的溶媒为灭菌后可体内注射的液体，如，但不限于，蒸馏水、注射用水、缓冲液、生理冲液、细胞培养液、体液、组织液。溶媒的制备取决于溶媒的种类，普通溶媒有市售，也可以自制，但必须严格按照有关标准操作。溶媒在缓释注射剂中的重量百分比为60%-90%，以70%_90%为优选，以75%_85%为最优选。本方面还发现，当缓释凝胶中加入甘露醇、山梨醇等物质时，凝胶化温度和药物释放速度可以发生一定程度的变化，此类可调节药物释放速度或凝胶化温度的物质称为调节剂。缓释凝胶中可加入的调节剂可为，但不限于，各种糖、盐、羧甲基纤维素钠、(碘)甘油、二甲基硅油、丙二醇、卡波姆、甘露醇、山梨醇、表面活性物质、吐温20、吐温40、吐温80、木糖醇、低聚糖、软骨素、甲克素、壳聚糖、胶原蛋白、明胶、蛋白胶中的一种或其组合。调节剂可为其它药用辅料，如但不限于，充填剂、增溶剂、吸收促进剂、成膜剂、凝胶剂、致孔剂，赋形剂或阻滞剂等。其在缓释凝胶中的重量比可为0.10%-15%。缓释注射剂的给药途径取决于多种因素，为在原发或转移肿瘤所在部位获得有效浓度，药物可经多种途径给予，如皮下，腔内、瘤内、瘤周注射或放置、选择性动脉注射、淋巴结内及骨髓内注射。以选择性动脉注射、腔内、瘤内、瘤周注射或放置为优选。本发明可以用于制备治疗人及动物的各种肿瘤的药物制剂，主要为缓释注射剂或缓释植入剂，所指肿瘤包括脑肿瘤、脑胶质瘤、肾癌、肝癌、胆囊癌、胆管癌、头颈部肿瘤、口腔癌、甲状腺癌、皮肤癌、血管癌、骨肉癌、淋巴癌、肺癌、胸腺癌、食管癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌、视网膜母细胞瘤、鼻咽癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、前列腺挨饿、膀胱癌、结肠癌、直肠癌、睾丸癌、何杰金淋巴结瘤、非何杰金淋巴结瘤、非小细胞肺癌或其转移的癌。缓释注射剂可用于肿瘤切除术后，可有效控制残存瘤细胞，因而可控制术后复发；可用于各种原因不能手术切除的病人；可用于控制转移病灶，如淋巴结等；用于晚期病人；控制晚期并发症；与其它抗癌药物或方法联用，如局部注射的抗癌药物与其它途径给药的化疗药物的联合、与放疗或免疫治疗的联合。异甘草素临床应用剂量取决于病人的具体情况，包括年龄、体重、性别、肿瘤类型、肿瘤部位、肿瘤大小及数目、治疗经历，可从0.001%-800mg/kg体重，以0.1%-6800mg/kg体重为优选，O.5%-500!1^/1^体重为最优选。对于以临床可全身给药的原料药制成的缓释凝胶注射剂，其用药总量可为其静脉用药最大耐受量的数倍甚至数十倍。本发明所制的缓释注射剂中还可加入其它药用成分，如，但不限于，抗菌素、止疼药、抗凝药、止血药、镇静药、抗抑郁药等。具体实施方式实施例1.将4、2g两亲性嵌段共聚物乙交酯丙交酯_聚乙二醇_乙交酯丙交酯分别放入一号、二号、两个容器中，然后分别向两个容器中加入注射用水6、8毫升，配制成40%、20%水凝胶。两亲性嵌段共聚物中聚乙二醇的分子量为800-1200，占两亲性嵌段共聚物重量的20%;乙交酯丙交酯共聚物中，乙交酯丙交酯的摩尔比为6:1。实施例2.测定实施例1中水凝胶的凝胶化温度，结果显示40%和20%的水凝胶的凝胶化温度分别为28t:和35°C。实施例3.将4、2g两亲性嵌段共聚物乙交酯丙交酯_聚乙二醇_乙交酯丙交酯分别放入一号、二号、两个容器中，然后分别向两个容器中加入注射用水6、8毫升，配制成40%、20%水凝胶。两亲性嵌段共聚物中聚乙二醇的分子量为1200-1600，占两亲性嵌段共聚物重量的15%;乙交酯丙交酯共聚物中，乙交酯丙交酯的摩尔比为4:1。实施例4.测定实施例3中水凝胶的凝胶化温度，结果显示40%和20%的水凝胶的凝胶化温度分别为29。C和36°C。以上试验结果显示，当凝胶水溶液浓度介于30%_40%之间时，凝胶化反应受药物影响明显，且黏度过大，不利于注射。实施例5.将2.5g两亲性嵌段共聚物(两亲性嵌段共聚物乙交酯丙交酯_聚乙二醇_乙交酯丙交酯中聚乙二醇的分子量为1500，占两亲性嵌段共聚物重量的15%;乙交酯丙交酯共聚物中，乙交酯与丙交酯的摩尔比为5:1)放入容器中，然后加入生理盐水7.5毫升，配制成25%共聚物水凝胶。然后平均分装到5个分别盛有400、200、100、20和2mg异甘草素的容器中，制的含20%、10%、5%、1%和0.1%异甘草素的诱导癌分化的缓释凝胶注射剂。测得其凝胶化温度分别为37"、35"、34"、33"和31.5°C。实施例6.测定实施例5中的不同浓度异甘草素的小鼠体内(皮下)释药周期，结果发现20%、10%、5%、1%和0.1%异甘草素体内释放的平均时间(以血液中可测到时间估计)分别为55±7、48±6、40±8、38±6天。实施例7.按照方法"(1)"配制的异甘草素诱导癌分化缓释注射剂应用较方便，结合实施例1-5制得多种诱导癌分化缓释注射剂，经凝胶化温度和体内释放测定发现，优选的诱导癌分化缓释注射剂的含药浓度、组成成分和重量百分比如下0.1%-25%异甘草素，由l-250mg异甘草素，200-260mg两亲性嵌段共聚物，0-70mg甘露醇或0-20mg山梨醇和690-780y1溶媒配制而成。以上两亲性共聚物为聚乙二醇-乙交酯丙交酯共聚物-聚乙二醇，其中聚乙二醇的分子量为800-1200，占两亲性嵌段共聚物重量的15%，乙交酯丙交酯共聚物中，乙交酯丙交酯的摩尔比为6-9:1。研究表明，上述诱导癌分化缓释凝胶注射剂的凝胶化温度为31°C_37°〇，动物体内释放时间为1-9周。诱导癌分化缓释凝胶注射剂的治疗效果可通过如下试验和治疗实施例进一步说明实施例8以大鼠为试验对象，将2X105个前列腺癌细胞皮下注射于其季肋部位，等肿瘤长至直径为lcm后将其分成四组，分别瘤内注射O.lml实施例5中含20%、10%、0.1%和0%异甘草素的诱导癌分化缓释凝胶注射剂。每天测定肿瘤体积，结果显示(表l)，异甘草素诱导癌分化缓释注射剂可显著抑制肿瘤生长，其抑瘤作用呈明显剂量依赖性，安全可靠。瘤内注射缓释注射剂操作最简便易行。表1异甘草素缓释凝胶注射剂对前列腺癌的抑瘤作用<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>实施例9以大鼠为试验对象，将2乂105个肺癌细胞皮下注射于其季肋部位，等肿瘤长至直径为l.Ocm后将其分成四组，分别瘤内注射O.lml实施例5中含20%、10%、0.1%和0%异甘草素的诱导癌分化缓释凝胶注射剂。每天测定肿瘤体积，结果显示(表2)，异甘草素诱导癌分化缓释注射剂可显著抑制肿瘤生长，其抑瘤作用呈明显剂量依赖性，安全可靠。瘤内注射缓释注射剂操作最简便易行。表2异甘草素缓释凝胶注射剂对肺癌的抑瘤作用组别药物浓度肿瘤抑制率a)P值对照组—异甘草素组20%86%<0.001%异甘草素组10%79%<0.001%异甘草素组0.P/o鄉<0.05°/0总而言之，所用异甘草素诱导癌分化缓释凝胶注射剂对多种肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用，上述实施例及以下实施例只是对本发明作进一步说明，并非对其内容和使用作任何限制。实施例10以60只小鼠为试验对象，将2乂105个肝癌细胞皮下注射于右腋部皮下，等肿瘤长至直径为l.Ocm后将其随机分成四组，分别瘤内注射O.lml实施例5中含20%、10%、0.1%和0%异甘草素的诱导癌分化缓释凝胶注射剂。每天测定肿瘤体积，结果显示(表3)，异甘草素诱导癌分化缓释注射剂可显著抑制肿瘤生长，其抑瘤作用呈明显剂量依赖性，安全可靠。瘤内注射缓释注射剂操作最简便易行。表2异甘草素缓释凝胶注射剂对肝癌的抑瘤作用9<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>总而言之，所用异甘草素诱导癌分化缓释凝胶注射剂对多种肿瘤生长均有明显的抑制作用，上述实施例及以下实施例只是对本发明作进一步说明，并非对其内容和使用作任何限制。本发明所公开和保护的内容见权利要求。权利要求一种含异甘草素的温控缓释注射剂，其特征在于温控缓释注射剂由以下成分组成A异甘草素0.01％-40％B两亲性共聚物5％-40％C溶媒50％-90％D调节剂0-15％以上为重量百分比其中，两亲性嵌段共聚物和溶媒的混合物具有温度敏感的凝胶化特性，在低于体温的环境中为可流动性液体，在热血动物体内可自动转变成不流动的且可生物降解吸收的水不溶性凝胶，后者能将所含异甘草素在实体瘤局部缓慢释放并维持有效药物浓度数周到数月；温控缓释注射剂的黏度为10cp-3000cp(5℃-30℃)；两亲性共聚物选自聚乳酸-聚乙二醇-聚乳酸、乙交酯丙交酯共聚物-聚乙二醇-乙交酯丙交酯、聚乙二醇-聚乳酸-聚乙二醇或聚乙二醇-乙交酯丙交酯-聚乙二醇的嵌段共聚物；溶媒为灭菌后可体内注射的溶液，选自蒸馏水、注射用水、缓冲液、生理冲液、细胞培养液、体液、组织液。其中，溶媒在两亲性嵌段共聚物与溶煤组成的水凝胶中的百分比为60％-99％。2.根据权利要求1所述之温控缓释注射剂，其特征在于异甘草素在温控缓释注射剂中的重量百分比为0.001%-40%。3.根据权利要求1所述之温控缓释注射剂，其特征在于两亲性嵌段共聚物的平均分子量选自500-5000、5000-20000、20000-30000。4.根据权利要求1所述之温控缓释注射剂，其特征在于乙交酯丙交酯共聚物中乙交酯与丙交酯的摩尔比选自i-i5:i。5.根据权利要求1所述之温控缓释注射剂，其特征在于聚乙二醇的平均分子量可为200-20000。6.根据权利要求1所述之温控缓释注射剂，其特征在于所用的药物释放调节剂选自糖、盐、羧甲基纤维素钠、(碘)甘油、二甲基硅油、丙二醇、卡波姆、甘露醇、山梨醇、表面活性物质、吐温20、吐温40、吐温80、木糖醇、低聚糖、软骨素、甲克素、壳聚糖、胶原蛋白、明胶、蛋白胶中的一种或其组合；药物释放调节剂在缓释注射剂的质量百分比为0-15%。7.根据权利要求1所述之温控缓释注射剂，其特征在于所述温控缓释注射剂的制备方法选自下列之一分别配制两亲性共聚物溶液和异甘草素，单独分装储存，注射前将两亲性共聚物溶液和异甘草素充分混匀后制成诱导癌分化缓释凝胶注射剂，然后储存在低温或冷冻状态，使用前升温复溶后使用；先配制异甘草素制成药物注射液，然后与一定量的两亲性共聚物混合成为诱导癌分化缓释凝胶注射剂；在-l(TC或以下储存备用；应用前复溶后体内注射；分别配制两亲性共聚物和异甘草素溶液，单独分装储存，注射前将异甘草素溶液和两亲性共聚物充分混匀后制成诱导癌分化缓释凝胶注射剂，然后储存在低温或冷冻状态，使用前升温复溶后使用；将一定量的两亲性共聚物与一定量的异甘草素混合，然后加入溶媒制成温控缓释注射剂。储存在低温或冷冻状态，使用前升温复溶后使用；将一定量的两亲性共聚物与一定量的异甘草素混合，单独或混合后包装、运输、储存，在临床应用前加入溶媒充分混合并储存在低温至冷冻状态，使用前升温复溶后使用；以上方法中可加入0-15%的调节剂。8.根据权利要求1所述之温控缓释注射剂，其特征在于所述温控缓释注射剂含有下列成分9%_32%的嵌段共聚物溶液，含0.005%_30%异甘草素。9.根据权利要求1所述之温控缓释注射剂，其特征在于所述温控缓释注射剂含有下列成分0.1%-25%异甘草素，由l-250mg异甘草素，200-260mg两亲性嵌段共聚物，0-70mg甘露醇或0-20mg山梨醇和690-780y1溶媒配制而成；以上两亲性共聚物为聚乙二醇-乙交酯丙交酯共聚物-聚乙二醇，其中聚乙二醇的分子量为800-1200，占两亲性嵌段共聚物重量的20%，乙交酯丙交酯共聚物中，乙交酯丙交酯的摩尔比为4-9:1。10.根据权利要求8所述之温控缓释注射剂，其特征在于所述诱导癌分化缓释注射剂用于制备治疗包括脑肿瘤、脑胶质瘤、肾癌、肝癌、胆囊癌、胆管癌、头颈部肿瘤、口腔癌、甲状腺癌、皮肤癌、血管癌、骨肉癌、淋巴癌、肺癌、胸腺癌、食管癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌、视网膜母细胞瘤、鼻咽癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、前列腺癌、膀胱癌、结肠癌、直肠癌、睾丸癌、何杰金淋巴结瘤、非何杰金淋巴结瘤、非小细胞肺癌的药物中的应用，可作为手术和化疗的辅助治疗药物，增强手术和化疗的疗药，减轻其毒性，可抑制肿瘤的复发或转移。全文摘要一种含有异甘草素的温控缓释注射剂，由异甘草素、两亲性嵌段共聚物、溶媒和一定量的药物释放调节剂组成；其中，两亲性嵌段共聚物和不含有机溶剂的溶媒的混合物具有温度敏感的凝胶化特性，在低于体温的环境中为可流动性液体，在热血动物体内可自动转变成不流动的且可生物降解吸收的水不溶性凝胶，后者能将所含异甘草素在实体瘤局部缓慢释放并维持有效药物浓度数周到数月；温控缓释注射剂的黏度为10cp-3000cp(5℃-30℃)，凝胶化温度为35℃-37℃。异甘草素缓释注射剂，配合化疗或手术治疗，瘤内或瘤周注射或术后瘤腔内放置，能够明显诱导癌细胞分化，降低肿瘤转移和复发的风险，改善患者预后，提高生存质量。文档编号A61K47/30GK101756888SQ20081007303公开日2010年6月30日申请日期2008年12月25日优先权日2008年12月25日发明者刘婷,李德芳,王婷,王振华,赵文彬,郑秋生,郭雷,陈红梅申请人:石河子大学