专利名称：白蛋白稳定的多西紫杉醇冻干制剂及其在治疗肿瘤方面的应用的制作方法
技术领域：
一种用白蛋白稳定的多西紫杉醇纳米颗粒的冷冻干燥粉末制剂以及该制剂在治疗对多 西紫杉醇敏感的治疗肿瘤方面的应用。
背景技术：
多烯紫杉醇(Docetaxel)英文名Docetaxel，是由罗纳普朗克*乐安公司开发的一 个半合成紫杉醇衍生物，属微管解聚抑制剂，本品通过促进小管聚合成稳定的微管并抑制 其解聚从而使游离小管的数量显著减少。本品已于1995年4月在墨西哥首次上市，并随即 在英、美、法、意、德、日等主要国家上市，目前批准的适应症有经蒽环类抗肿瘤药物治 疗无效或仍复发的晚期和转移性乳腺癌及曾经治疗无效的非小细胞肺癌。
多烯紫杉醇抗瘤谱广，抗肿瘤作用强，对难治性的乳腺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、 头颈部肿瘤等的疗效均较突出，临床应用潜力深厚。乳腺癌和肺癌是国内最为常见的两类 肿瘤，且其发病率还有上升趋向。Goldman公司估计多烯紫杉醇1998年的全球销售额可达 3亿美元。
多烯紫杉醇为白色或类白色粉末，具亲脂性，几乎不溶于水。其注射液为黄色或棕黄 色粘稠液体，规格有20mg， 80mg。每瓶20mg注射液为将无水多烯紫杉醇20mg溶于吐温80 0.5ml中制成；每瓶80mg注射液为将无水多烯紫杉醇80mg溶于吐温80 2ml中制成，溶剂 为13% w/w的注射用乙醇水溶液。
白蛋白分子本身具有两亲性，用高压均质乳化或超声乳化等技术可以制备纳米微球，
经过检索文献报道了用戊二醛交联固化法制备白蛋白微球的方法，该方法制备的白蛋白由 于戊二醛可以使白蛋白分子互相交联，也可以使白蛋白分子灭活变性，临床使用有致敏的 危险，不能作为药物制剂实现静脉给药。
发明内容
本发明的主要目的是提供一种用白蛋白稳定的多西紫杉醇纳米颗粒的冷冻干燥粉末制 剂以及该制剂在治疗对多西紫杉醇敏感的治疗肿瘤方面的应用，其中(按重量计)紫杉醇 的量在1-20%之间，白蛋白的量在60-98%之间，纳米颗粒的平均粒径小于lum，在纳米颗粒 的冷冻干燥粉末中含有至少一种生物相容性酸或酸性缓冲盐，重量在0. 5-20%之间。
用白蛋白稳定的多西紫杉醇纳米颗粒的冷冻干燥粉末制剂在治疗肿瘤方面的应用，其 特征在于所述肿瘤为实体瘤，主要包括乳腺癌和非小细胞癌。
本发明用白蛋白稳定的多西紫杉醇纳米颗粒的冷冻干燥粉末制剂，用注射用水或生理 盐水复溶后PH值在5. 0-7. 0之间，优选用注射用水或生理盐水复溶后PH值在5. 5-6. 5之 间，复溶后溶液中含有浓度为0. l-10mg/ml的多西紫杉醇，优选复溶后溶液中含有浓度为 l-5mg/ml的多西紫杉醇。
本发明制备白蛋白稳定的多西紫杉醇纳米颗粒中生物相容性酸或酸性缓冲盐，可以选 生物相容性有机酸或无机酸，其中生物相容性酸具体选自盐酸、拧檬酸、磷酸、醋酸、乳 酸、碳酸、琥珀酸中的一种或两种以上；酸性缓冲盐选自生物相容性酸的钠盐或钾盐。
本发明制备白蛋白稳定的多西紫杉醇纳米颗粒冻干粉末中可以加入冻干保护剂，选自 小分子氨基酸、海藻糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖中的一种或两种以上，其中小分子氨基酸包 括所有的已经发现和使用的20种a-氨基酸，比如
非极性氨基酸丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、色氨酸、苯丙氮酸、 甲硫氨酸(8种)；
极性、不带电荷氨基酸丝氨酸、甘氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、 酪氨酸(7种);
酸性氨基酸天门冬氨酸、谷氨酸(2种)；
碱性氨基酸精氨酸、赖氨酸、组氨酸(3种)
优选非极性、疏水性氨基酸甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨 酸和脯氨酸，最常使用的是甘氨酸，冻干保护剂的加入可以有效的避免白蛋白分子的聚集。
本发明制备白蛋白稳定的多西紫杉醇纳米颗粒冻干粉末，其中白蛋白可以选择人血清 白蛋白，通过基因工程的方法得到的白蛋白，也可以选择动物血清白蛋白，优选人血清白 蛋白。
制备方法如下
一高压均质乳化法
取处方量的多西紫杉醇用适量乙醇溶解，取处方量的白蛋白水溶液加入适量生物相容
性酸或酸性缓冲盐混合，调节ra值在5.0-7.0之间，优选PH值在5.5-6.5之间，将多西 紫杉醇用少量氯仿溶解和白蛋白酸性溶液或酸性缓冲盐混合，在40'C以下将混合物在高压 均质机中反复均质乳化，得到纳米乳剂，乳剂可以加入冻千保护剂，迅速冷冻到-50度以下， 冷冻千燥至含水量小于5%。
二白蛋白变性复性法
取处方量的白蛋白溶液，浓度(2-10%),加入少量二硫苏糖醇或二硫赤苏糖醇使白蛋 白部分开环，加入处方量的多西紫杉醇氯仿溶液，4(TC以下搅拌减压蒸馏使氯仿挥发，用 碱性缓冲盐调节PH值使体系ra为8-9，在无菌环境搅拌使白蛋白复性，将多西紫杉醇比较
牢固的包入其中，将复性后的白蛋白加入适量酸性溶液或酸性缓冲盐，调节PH为5.5-6.5 之间，在4(TC以下将混合物在超声或适当的高压均质机中均质乳化，得到纳米乳剂，乳剂 可以加入冻干保护剂，迅速冷冻到-50度以下，冷冻干燥至含水量小于5%。
碱性缓冲盐可以选择强碱弱酸盐，其中强碱离子Na，K，Ca，弱酸离子碳酸根离子、 亚硫酸根离子、氢硫酸根离子(HS，S)、醋酸根和磷酸根，优选磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、 磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、柠檬酸、柠檬酸二钠、柠檬酸三钠。
具体实施例 实施例l
取50mg多西紫杉醇用适量氯仿溶解，取50ml的人血清白蛋白水溶液(2.5%)加入适 量磷酸调节PH值在5.0-7.0之间，优选PH值在5.5-6.5之间，将多西紫杉醇氯仿溶液和 白蛋白磷酸溶液混合，在4(TC以下将混合物在高压均质机中反复均质乳化，得到纳米乳剂， 在无菌条件下迅速冷冻到-4(TC以下，冷冻干燥至含水量小于5%。
为了使复溶迅速，得到的纳米乳剂可以加入10%蔗糖作为冻干保护剂，在无菌条件下迅 速冷冻到-4(TC以下，冷冻干燥至含水量小于5%。
将所得到的多西紫杉醇白蛋白纳米冻干粉末，溶于0. 9%NaCl水溶液中重制成含多西紫 杉醇0. 5mg/ml的溶液，稳定性大于12小时。
用磷酸代替盐酸得到同样的结果。 实施例2
取50mg多西紫杉醇用适量无菌氯仿溶解，取50ml的人血清白蛋白无菌注射用水溶液 (2. 5%)加入适量无菌柠檬酸，调节PH值在5. 0-7. 0之间，优选ra值在5. 5-6. 5之间， 将多西紫杉醇氯仿溶液和白蛋白柠檬酸溶液混合，在40'C以下将混合物在高压均质机(无 菌处理)中反复均质乳化，得到纳米乳剂，在无菌条件下迅速冷冻到-40度以下，冷冻干燥 至含水量小于5%，即得合格产品。
为了使复溶迅速，得到的纳米乳剂可以加入10%蔗糖作为冻干保护剂，在无菌条件下迅 速冷冻到-40度以下，冷冻干燥至含水量小于5%，稳定性大于12小时。
将所得到的多西紫杉醇白蛋白纳米冻干粉末，溶于0. 9%NaCl水溶液中重制成含多西紫 杉醇O. 5mg/ml的溶液。
实施例3
取100mg多西紫杉醇用适量乙醇溶解，取50ml的牛血清白蛋白水溶液(5%)加入适量 柠檬酸混合，调节PH值在5.0-7.0之间，优选PH值在5.5-6.5之间，将多西紫杉醇乙醇 溶液和白蛋白酸性溶液或酸性缓冲盐混合，在4(TC以下将混合物在高压均质机中反复均质 乳化，得到纳米乳剂，乳剂除菌过滤，迅速冷冻到-5(TC以下，冷冻干燥至含水量小于5%。
为了使复溶迅速，得到的纳米乳剂可以加入10%海藻糖作为冻干保护剂，迅速冷冻到-40 °C以下，冷冻千燥至含水量小于5%。
将所得到的多西紫杉醇白蛋白纳米冻干粉末，溶于0. 9%NaCl水溶液中重制成含多西紫 杉醇2mg/ml的溶液，稳定性大于12小时。
用琥珀酸代替柠檬酸得到同样的结果。 实施例4
取50ml的人血白蛋白水溶液(5°/。)加入适量柠檬酸混合，加入少量二硫苏糖醇或二硫 赤苏糖醇搅拌使白蛋白部分开环，加入150mg多西紫杉醇氯仿溶液，4(TC以下搅拌减压蒸 馏使氯仿挥发，用碱性缓冲盐调节PH值使体系PH为8-9，在无菌环境搅拌使白蛋白复性， 将多西紫杉醇比较牢固的包入其中，将复性后的白蛋白加入适量酸性溶液或酸性缓冲盐， 调节PH为5.5-6.5之间，在4(TC以下将混合物在超声或适当的高压均质机中均质乳化，得 到纳米乳剂，乳剂可以加入冻干保护剂，迅速冷冻到-5(TC以下，冷冻干燥至含水量小于5%。
为了使复溶迅速，得到的纳米乳剂可以加入10%庶糖作为冻干保护剂，乳剂除菌过滤， 在无菌条件下迅速冷冻到-40度以下，冷冻干燥至含水量小于5%。
将所得到的多西紫杉醇白蛋白纳米冻干粉末，溶于0. 9%NaCl水溶液中重制成含多西紫 杉醇3mg/ml的溶液，稳定性大于12小时。
用琥珀酸代替柠檬酸得到同样的结果。 实施例5
取50ml的人血白蛋白无菌注射用水溶液(3%)加入适量柠檬酸混合，加入少量二硫苏 糖醇或二硫赤苏糖醇搅拌使白蛋白部分开环，加入100mg多西紫杉醇的氯仿溶液，4(TC以 下搅拌减压蒸馏使氯仿挥发，用碱性缓冲盐调节PH值使体系ra为8-9，在无菌条件下搅拌 使白蛋白复性，将多西紫杉醇比较牢固的包入其中，将复性后的白蛋白加入适量酸性溶液 或酸性缓冲盐，调节PH为5.5-6.5之间，在4(TC以下将混合物在超声或适当的高压均质机 中均质乳化，得到纳米乳剂，乳剂可以加入冻干保护剂，迅速冷冻到-5(TC以下，冷冻干燥 至含水量小于5%
为了使复溶迅速，得到的纳米乳剂可以加入重量比为10%的无菌蔗糖作为冻干保护剂，
在无菌条件下迅速冷冻到-40度以下，冷冻干燥至含水量小于5%。
将所得到的多西紫杉醇白蛋白纳米冻干粉末，溶于0. 9%NaCl水溶液中重制成含多西紫 杉醇2rag/ml的溶液，稳定性大于12小时。
用琥珀酸代替柠檬酸得到同样的结果。
实施例6
取实施例2中制备的多西紫杉醇白蛋白纳米冻干粉末，溶于0. 9%NaCl水溶液中重制成 含多西紫杉醇0.5mg/ml的溶液，对一名乳腺癌患者进行了为期3个周期的治疗，每个周期 以250rag/m2的剂量、5mg/ml注入生理盐水瓶中静脉点滴，通过检查发现乳腺癌消失。
权利要求
1、一种用白蛋白稳定的多西紫杉醇纳米颗粒的冷冻干燥粉末制剂以及该制剂在治疗对多西紫杉醇敏感的治疗肿瘤方面的应用，其中(按重量计)紫杉醇的量在1-20％之间，白蛋白的量在60-98％之间，纳米颗粒的平均粒径小于1um，在纳米颗粒的冷冻干燥粉末中含有至少一种生物相容性酸或酸性缓冲盐，重量在0.5-20％之间。
2、 根据权力要求1中在对多西紫杉醇敏感的治疗肿瘤方面的应用，其特征在于所述肿 瘤为实体瘤，主要包括乳腺癌和非小细胞癌。
3、 根据权力要求i中的冷冻千燥粉末制剂，用注射用水或生理盐水复溶后ra值在5.0-7.0之间。
4、 根据权力要求卜3中的冷冻干燥粉末制剂，其特征在于复溶后溶液中含有浓度为 0. 1-10mg/ml的多西紫杉醇。
5、 根据权力要求4中的冷冻干燥粉末制剂，其特征在于复溶后溶液中含有浓度为 0. 5-3mg/ml的多西紫杉醇。
6、 根据权力要求3中的冷冻千燥粉末制剂，用注射用水或生理盐水复溶后PH值在 5. 5-6. 5之间。
7、 根据权力要求l中生物相容性酸或酸性缓冲盐，可以选生物相容性有机酸或无机酸， 其中生物相容性酸具体选自盐酸、柠檬酸、磷酸、醋酸、乳酸、琥珀酸中的一种或两种以上； 酸性缓冲盐选自生物相容性酸的钠盐或钾盐。
8、 根据权力要求1中冷冻干燥粉末制剂，可以加入冻干保护剂，选自小分子氨基酸、 海藻糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖中的一种或两种以上。
9、 根据权力要求1中人血清白蛋白，可以选择人血清白蛋白，通过基因工程的方法得 到的白蛋白，也可以选择动物血清白蛋白(比如牛血清白蛋白、兔血清白蛋白)，优选人血 清白蛋白。
全文摘要
一种用白蛋白稳定的多西紫杉醇纳米颗粒的冷冻干燥粉末制剂以及该制剂在治疗对多西紫杉醇敏感的治疗肿瘤方面的应用。
文档编号A61P35/00GK101361731SQ20081014734
公开日2009年2月11日 申请日期2008年8月11日 优先权日2008年8月11日
发明者张文芳 申请人:张文芳