专利名称：白蛋白稳定的阿霉素冻干制剂及其在治疗肿瘤方面的应用的制作方法
技术领域：
一种用白蛋白稳定的阿霉素纳米颗粒的冷冻干燥粉末制剂以及该制剂在治疗对阿霉素 敏感的治疗恶性肿瘤方面的应用。
背景技术：
恶性肿瘤(癌症)是我国仅次于心血管疾病死亡率占第二的疾病，化疗是治疗恶性肿 瘤的重要手段之一，阿霉素类药物在恶性肿瘤的治疗上有着重要的应用价值。由于恶性肿 瘤的发病率居高不下，以吡柔比星为代表的新的阿霉素制剂在肿瘤等疾病的治疗上受到新 的肯定，今后几年中阿霉素类药物的仍将会在肿瘤治疗药物中占据一席之地。由于新型高 效抗肿瘤治疗药物在很长一段时间内难有突破，而阿霉素类药物由于抗肿瘤谱广，疗效明 确，无论在用量还是金额上都将继续占有着举足轻重的地位。由于整个肿瘤药物领域竞争 相对缓和，市场成长空间大，利润较高，这为新的阿霉素类制剂占领市场创造了良好的发 展空间。
目前市售的阿霉素类药物有多柔比星、表柔比星、阿柔比星、吡柔比星和伊达比星等。 吡柔比星别名为吡喃阿霉素Th印rubicin，化学名(8S， 10S) -[[3-氨基-2，. 3， 6-三去 氧-4-0- (2-四氢吡喃基)-a-L-阿拉伯吡喃糖基]氧]-7， 8， 9， 10-四氢-6， 8， ll-三羟 基-8-羟乙酰基-1-甲氧基-5， 12-萘二酮；分子式C32H37N012;分子量627.6，表柔比 星和吡柔比星作为阿霉素类抗肿瘤药物的代表，在抗肿瘤药物市场中占有举足轻重的地位。 据肿瘤科大夫反应，阿霉素类盐酸盐抗肿瘤药物在临床使用时具有很强的刺激性，如果能 从制剂上改善该类药物的刺激性，作为一线用药的该品种具有更好的市场前景，必能带来 良好的经济效益。
白蛋白分子本身具有两亲性，文献中报道了通过蓖麻油或棉子油对阿霉素进行包裹的 方法，经过实验发现无法实现工业化生产，经过检索没有发现用高压均质乳化或超声乳化 等技术可以制备纳米微球制备阿霉素白蛋白微球的方法的相关文献报道，经过研究，该方 法可以实现规模化生产，具有非常重要的实用价值。
发明内容
本发明的主要目的是提供一种用白蛋白稳定的阿霉素纳米颗粒的冷冻干燥粉末制剂以 及该制剂在治疗对阿霉素敏感的治疗恶性肿瘤方面的应用，其中(按重量计)阿霉素的量 在1-20%之间，白蛋白的量在60-98%之间，生物相容性酸的盐的量在1-20%之间，纳米颗粒 的平均粒径小于lum，在纳米颗粒的冷冻干燥粉末中含有至少一种生物相容性酸或酸性缓冲
盐，重量在O. 5-20%之间。
用白蛋白稳定的阿霉素纳米颗粒的冷冻干燥粉末制剂在治疗肿瘤方面的应用，其特征 在于所述肿瘤为恶性肿瘤。
本发明用白蛋白稳定的阿霉素纳米颗粒的冷冻千燥粉末制剂，用注射用水或生理盐水 复溶后PH值在5. 0-7. 0之间，复溶后溶液中含有浓度为0.卜10mg/ml的阿霉素，优选复溶 后溶液中含有浓度为0. 1-3mg/ml的阿霉素。
本发明制备白蛋白稳定的阿霉素纳米颗粒中生物相容性酸或酸性缓冲盐，可以选生物 相容性有机酸或无机酸，其中生物相容性酸具体选自盐酸、柠檬酸、磷酸、醋酸、乳酸、 碳酸、琥珀酸中的一种或两种以上；酸性缓冲盐选自生物相容性酸的钠盐或钾盐。
本发明制备白蛋白稳定的阿霉素纳米颗粒冻干粉末中可以加入冻干保护剂，选自小分 子氨基酸、海藻糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖中的一种或两种以上，其中小分子氨基酸包括所 有的已经发现和使用的20种a-氨基酸，比如
非极性氨基酸丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、 甲硫氨酸(8种);
极性、不带电荷氨基酸丝氨酸、甘氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、 酪氨酸(7种)；
酸性氨基酸天门冬氨酸、谷氨酸(2种)；
碱性氨基酸精氨酸、赖氨酸、组氨酸(3种)
优选非极性、疏水性氨基酸甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨 酸和脯氨酸，最常使用的是甘氨酸，冻干保护剂的加入可以有效的避免白蛋白分子的聚集。
本发明制备白蛋白稳定的阿霉素纳米颗粒冻干粉末，其中白蛋白可以选择人血清白蛋 白，通过基因工程的方法得到的白蛋白，也可以选择动物血清白蛋白，优选人血清白蛋白。
本发明制备白蛋白稳定的阿霉素纳米颗粒冻干粉末，其中包括所有蒽环类抗生素，比 如目前市售的阿多柔比星、表柔比星、阿柔比星、吡柔比星和伊达比星等。 制备方法如下 一高压均质乳化法
取处方量的阿霉素用适量乙醇溶解，取处方量的白蛋白水溶液加入适量生物相容性酸
或酸性缓冲盐混合，调节ra值在5.0-7.0之间，将阿霉素用少量乙醇溶解和自蛋白酸性溶 液或酸性缓冲盐混合，在4(TC以下将混合物在高压均质机中反复均质乳化，得到纳米乳剂， 乳剂可以加入冻干保护剂，迅速冷冻到-5(TC以下，冷冻干燥至含水量小于5%。
二白蛋白变性复性法
取处方量的浓度为2_10%白蛋白溶液，加入少量二硫苏糖醇或二硫赤苏糖醇使白蛋白部
分开环，加入处方量的阿霉素乙醇溶液，4(TC以下搅拌减压蒸馏使乙醇挥发，用碱性缓冲 盐调节PH值使体系ra为7.0-8.0，在空气中搅拌使白蛋白复性，将阿霉素比较牢固的包入 其中，将复性后的白蛋白加入适量酸性溶液或酸性缓冲盐，调节PH为5.0-7.0之间，在40 'C以下将混合物在超声或适当的高压均质机中均质乳化，得到纳米乳剂，乳剂可以加入冻 干保护剂，迅速冷冻到-5(TC以下，冷冻干燥至含水量小于5%。
碱性缓冲盐可以选择强碱弱酸盐，其中强碱离子Na，K，Ca，弱酸离子碳酸根离子、 亚硫酸根离子、氢硫酸根离子(HS，S)、醋酸根和磷酸根，优选磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、 磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、柠檬酸、拧檬酸二钠、柠檬酸三钠。
具体实施例 实施例1
取25mg多柔比星用适量乙醇溶解，取50ml的人血清白蛋白水溶液(2.5%)加入适量 磷酸调节ra值在5.0-7.0之间，将多柔比星乙醇溶液和白蛋白磷酸溶液混合，在4(TC以下 将混合物在高压均质机中反复均质乳化，得到纳米乳剂，在无菌条件下迅速冷冻到-4(TC以 下，冷冻干燥至含水量小于5%。
为了使复溶迅速，得到的纳米乳剂可以加入10%蔗糖作为冻干保护剂，在无菌条件下迅 速冷冻到-4(TC以下，冷冻干燥至含水量小于5%。
将所得到的多柔比星白蛋白纳米冻干粉末，溶于0. 9%NaCl水溶液中重制成含多柔比星 0. 5mg/ml的溶液，稳定性大于12小时。
用磷酸代替盐酸得到同样的结果。 实施例2
取25mg吡柔比星用适量无菌乙醇溶解，取50ml的人血清白蛋白无菌注射用水溶液(3%) 加入适量无菌柠檬酸，调节PH值在5.0-7.0之间，将吡柔比星乙醇溶液和白蛋白拧檬酸溶 液混合，在4(TC以下将混合物在高压均质机(无菌处理)中反复均质乳化，得到纳米乳剂， 在无菌条件下迅速冷冻到-4(TC以下，冷冻干燥至含水量小于5%，即得合格产品。
为了使复溶迅速，得到的纳米乳剂可以加入10%蔗糖作为冻干保护剂，在无菌条件下迅 速冷冻到-40'C以下，冷冻干燥至含水量小于5%，稳定性大于12小时。
将所得到的吡柔比星白蛋白纳米冻干粉末，溶于0. 9%NaCl水溶液中重制成含吡柔比星 0. 5mg/ml的溶液。
实施例3
取100mg吡柔比星用适量乙醇溶解，取50ml的牛血清白蛋白水溶液(5%)加入适量柠 檬酸混合，调节ra值在5.o-7.o之间，将吡柔比星乙醇溶液和白蛋白酸性溶液或酸性缓冲 盐混合，在4(TC以下将混合物在高压均质机中反复均质乳化，得到纳米乳剂，乳剂除菌过 滤，迅速冷冻到-5(TC以下，冷冻干燥至含水量小于5%。
为了使复溶迅速，得到的纳米乳剂可以加入10%海藻糖作为冻干保护剂，迅速冷冻到-40 'C以下，冷冻干燥至含水量小于5%。
将所得到的吡柔比星白蛋白纳米冻干粉末，溶于0. 9%NaCl水溶液中重制成含吡柔比星 2mg/ml的溶液，稳定性大于12小时。
用琥珀酸代替柠檬酸得到同样的结果。 实施例4
取50ml的人血白蛋白无菌水溶液(5%)加入适量柠檬酸混合，加入少量二硫苏糖醇或 二硫赤苏糖醇搅拌使白蛋白部分开环，加入50mg表柔比星无菌乙醇溶液，4(TC以下搅拌减 压蒸馏使乙醇挥发，用碱性缓冲盐调节ra值使体系PH为7-8，在无菌环境下搅拌使白蛋白 复性，将表柔比星比较牢固的包入其中，将复性后的白蛋白加入适量酸性溶液或酸性缓冲 盐，调节PH为5. 0-7. 0之间，在40°C以下将混合物在超声或适当的高压均质机中均质乳化， 得到纳米乳剂，乳剂可以加入冻干保护剂，迅速冷冻到-5CTC以下，冷冻干燥至含水量小于 5%。
为了使复溶迅速，得到的纳米乳剂可以加入10%蔗糖作为冻干保护剂，乳剂除菌过滤， 在无菌条件下迅速冷冻到-4(TC以下，冷冻干燥至含水量小于5%。
将所得到的表柔比星白蛋白纳米冻干粉末，溶于0. 9%NaCl水溶液中重制成含表柔比星 lmg/ml的溶液，稳定性大于12小时。
用琥珀酸代替柠檬酸得到同样的结果。 实施例5
取50ml的人血白蛋白无菌注射用水溶液(3%)加入适量柠檬酸混合，加入少量二硫苏 糖醇或二硫赤苏糖醇搅拌使白蛋白部分开环，加入50mg阿柔比星无菌乙醇溶液，4(TC以下 搅拌减压蒸馏使乙醇挥发，用碱性缓冲盐调节PH值使体系PH为7-8，在无菌条件下搅拌使 白蛋白复性，将阿柔比星比较牢固的包入其中，将复性后的白蛋白加入适量酸性溶液或酸 性缓冲盐，调节ra为5.0-7.之间，在4(TC以下将混合物在超声或适当的高压均质机中均 质乳化，得到纳米乳剂，乳剂可以加入冻干保护剂，迅速冷冻到-50'C以下，冷冻干燥至含 水量小于5%
为了使复溶迅速，得到的纳米乳剂可以加入重量比为10%的无菌蔗糖作为冻干保护剂， 在无菌条件下迅速冷冻到-4(TC以下，冷冻干燥至含水量小于5%。
将所得到的阿霉素白蛋白纳米冻干粉末，溶于0.9%NaCl水溶液中重制成含阿柔比星 lmg/ml的溶液，稳定性大于12小时。
用琥珀酸代替柠檬酸得到同样的结果。 实施例6
取30mg伊达比星用适量无菌乙醇溶解，取50ml的人血清白蛋白无菌注射用水溶液(3%) 加入适量无菌柠檬酸，调节PH值在5.0-7.0之间，将伊达比星乙醇溶液和白蛋白拧檬酸溶 液混合，在4(TC以下将混合物在高压均质机(无菌处理)中反复均质乳化，得到纳米乳剂， 在无菌条件下迅速冷冻到-4(TC以下，冷冻干燥至含水量小于5%，即得合格产品。
为了使复溶迅速，得到的纳米乳剂可以加入10%蔗糖作为冻干保护剂，在无菌条件下迅 速冷冻到-4(TC以下，冷冻干燥至含水量小于5%，稳定性大于12小时。
将所得到的伊达比星白蛋白纳米冻干粉末，溶于0. 9°/。NaCl水溶液中重制成含伊达比星 0. 3mg/ml的溶液。
权利要求
1、一种用白蛋白稳定的阿霉素纳米颗粒的冷冻干燥粉末制剂以及该制剂在治疗对阿霉素敏感的治疗肿瘤方面的应用，其中(按重量计)阿霉素的量在1-20％之间，白蛋白的量在60-98％之间，纳米颗粒的平均粒径小于1um，在纳米颗粒的冷冻干燥粉末中含有至少一种生物相容性酸或酸性缓冲盐，重量在1-20％之间。
2、 根据权力要求1中在对阿霉素敏感的治疗肿瘤方面的应用，其特征在于所述肿瘤为恶 性肿瘤。
3、 根据权力要求1中的冷冻干燥粉末制剂，用注射用水或生理盐水复溶后PH值在 5. 0-7.0之间。
4、 根据权力要求1-3中的冷冻干燥粉末制剂，其特征在于复溶后溶液中含有浓度为 0. 1-iOmg/ral的阿霉素。
5、 根据权力要求4中的冷冻干燥粉末制剂，其特征在于复溶后溶液中含有浓度为 0. 2-3rag/ml的阿霉素。
6、 根据权力要求3中的冷冻干燥粉末制剂，用注射用水或生理盐水复溶后PH值在 5. 0-7. 0之间。
7、 根据权力要求1中生物相容性酸或酸性缓沖盐，可以选生物相容性有机酸或无机酸， 其中生物相容性酸具体选自盐酸、柠檬酸、磷酸、醋酸、乳酸、碳酸、琥珀酸中的一种或两 种以上；酸性缓冲盐选自生物相容性酸的钠盐或钾盐。
8、 根据权力要求1中冷冻十燥粉末制剂，可以加入冻干保护剂，选自小分子氨基酸、 海藻糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖中的一种或两种以上。
9、 根据权力要求1中人血清白蛋白，可以选择人血清白蛋白，通过基因工程的方法得 到的白蛋白，也可以选择动物血清白蛋白(比如牛血清白蛋白、兔血清白蛋白)，优选人血 清白蛋白。
10、 根据权力要求l中的阿霉素，包括所有蒽环类抗生素，比如目前市售的阿多柔比星、 表柔比星、阿柔比星、吡柔比星和伊达比星等。
全文摘要
一种用白蛋白稳定的阿霉素纳米颗粒的冷冻干燥粉末制剂以及该制剂在治疗对阿霉素敏感的治疗恶性肿瘤方面的应用。
文档编号A61K31/7028GK101361747SQ20081014734
公开日2009年2月11日 申请日期2008年8月11日 优先权日2008年8月11日
发明者张文芳 申请人:张文芳