专利名称：：一种用于抑制幽门螺旋杆菌的枞酸盐的制作方法
技术领域：
：本发明属于一种用于抑制幽门螺旋杆菌的天然改性化合物。
背景技术：
：幽门螺旋杆菌对人体胃肠器官的致病机理和严重危害已经得到医药科技人员的共识，在使用药物治疗根除的方法中，普遍使用甲硝唑、阿莫西林等消炎、抗菌素组合药物，治疗效果明显。但是，李爱芳等发现甲硝唑使用过程出现耐药性，经过医学统计已经占人群的70%(李爱芳等，幽门螺旋杆菌对常见治疗药物的敏感性实验，温州医学院学报，Vol.38No.4Jul.2008，371373)，另外，成虹等发现大量使用阿莫西林等抗菌素，也出现了抗药性、过敏性和抗菌素资源的短缺问题(成虹等，“第三次全国幽门螺杆菌感染若干问题共识意见会议”纪要，临床药物治疗杂志，Vol.5No.65859)。所以迫切需要寻找新的治疗药物。天然产物揪酸是松香的主要成分，是手性的环状双萜化合物含有4个手性碳和共轭双键，具有生物活性，是一个很好的新药开发资源。目前还没有关于揪酸用于抑制幽门螺旋杆菌的报道。
发明内容本发明针对上述问题，通过对揪酸的分子结构进行改造，经过对抑制幽门螺旋杆菌实验的筛选，得到了能有效抑制幽门螺旋杆菌的化合物揪酸盐。本发明技术方案为使用揪酸，然后经过成盐反应得到揪酸盐，使用揪酸盐用于抑制幽门螺旋杆菌，达到抑制最后根除幽门螺旋杆菌目的。本发明具体采用的技术方案如下步骤一揪酸盐的制备取1摩尔量的揪酸，100500ml的乙醇，在3070°C的水浴中加热溶解，待全部溶解后加入等摩尔量的碱，继续搅拌反应0.15h，停反应。蒸出50400ml的乙醇，放置待结晶，然后经过过滤得到结晶产物揪酸盐，最后将结晶物使用乙醇重结晶3次得到最终产物。在反应中使用的碱是氢氧化钠Na0H、氢氧化钾Κ0Η、氢氧化铋Bi(OH)3、氢氧化锌Zn(OH)2、氢氧化镁Mg(0H)2、三乙醇胺N(CH2CH20H)3这些无机碱和有机碱。经过对产物结构的结构分析确证得到它的分子结构式如说明书附1，图中M=Na、k、Bi、Zn、Mg、N(CH2CH2OH)3。步骤二对幽门螺旋杆菌的抑制实验。1.受试样品(1)揪酸钠；(2)揪酸钾；(3)揪酸铋；(4)揪酸锌；(5)揪酸镁；(6)揪酸胺；(7)揪酸铋50%；阿莫西林50%；(8)揪酸钠50%；阿莫西林50%；(9)阿莫西林；(10)甲硝唑。2.实验方法将受试样品化合物两倍比稀释成一系列浓度梯度后与含有7%羊血的Mueller-Hinton琼脂混勻铺板，每块板体积为10mL。用接种环将生长于平板的ATCC43504H.pylori刮下转入无菌生理盐水中，混勻后依照麦氏比浊管用生理盐水调比浊度至约107CFU/mL菌浓度，用多点接种仪将相应受试菌株接种于事先铺好的含有一系列化合物浓度梯度的平板，每株菌接种体积5μL。平板置于三气培养箱(含5%02，10%0)2及85%N2，相对湿度98%)中生长72小时后观察结果。能够完全抑制H.pylori生长的最低化合物浓度定义为该化合物的最小抑菌浓度。阿莫西林和甲硝唑作为阳性对照药物，空白平板及含同等浓度DMSO作为阴性对照，以确保细菌生长和全程操作处于无菌状态(1).3.参考文献(1)GuofeiDai,NiCheng,LeiDong,MutsumiMuramatsu,ShudongXiao,Ming-WeiWang,2,4andDe-XuZhui；BactericidalandMorphologicalEffectsofNE-2001,aNovelSyntheticAgentDirectedagainstHelicobacterpylori；ANTIMICROBIALAGENTSANDCHEMOTHERAPY,Aug.2005,p.3468-3473本发明获得如下技术效果①根据揪酸盐的制备方法，得到的揪酸盐的纯度都达到99.0%以上。②使用揪酸盐做对幽门螺旋杆菌抑制实验，实验结果见表1.表1.树脂酸盐对幽门螺旋杆菌抑制实验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>③通过对幽门螺旋杆菌抑制实验(见表1)得到如下效果使用的全部筛选样品揪酸盐的抑制幽门螺旋杆菌的效果全部好于阳性对照物甲硝唑，甲硝唑是目前治疗幽门螺旋杆菌的一线用药，即用于根除治疗“三联剂”中的一种，部分与阳性对照物阿莫西林相同，其中揪酸铋50%、阿莫西林50%的组合样和揪酸钠50%、阿莫西林50%的组合样测试结果好于阳性对照物阿莫西林，说明揪酸盐与阿莫西林有协同效应，由此可见本发明揪酸盐有希望成为治疗幽门螺旋杆菌的治疗药物。具体实施例方式实施例1揪酸的制备取100质量份松香、30质量份大孔强酸性阳离子交换树脂催化剂，300质量份乙酸，在水浴中加热，加热至90°C，搅拌反应3hs停反应，将反应物过滤进行固、液分离，回收大孔强酸性阳离子交换树脂催化剂，得到液相异构反应产物，将该反应产物放置，待结晶析出后过滤得到揪酸粗结晶，再用乙醇重结晶3次，减压干燥，得到最终产物结晶体揪酸。揪酸钠的制备取1摩尔量的揪酸，500ml的乙醇，在70°C的水浴中加热溶解，待全部溶解后加入等摩尔量的氢氧化钠，继续搅拌反应5h，停反应。蒸出300ml的乙醇，放置待结晶，然后经过过滤得到结晶产物揪酸钠，最后将结晶物使用乙醇重结晶3次得到最终产物。实施例2揪酸钾的制备取1摩尔量的揪酸，IOOml的乙醇，在50°C的水浴中加热溶解，待全部溶解后加入等摩尔量的氢氧化钾，继续搅拌反应4h，停反应。蒸出乙醇，放置待结晶，然后经过过滤得到结晶产物揪酸钾，最后将结晶物使用乙醇重结晶3次得到最终产物。实施例3揪酸铋的制备取1摩尔量的揪酸，500ml的乙醇，在70°C的水浴中加热溶解，待全部溶解后加入0.4摩尔量的氢氧化铋，继续搅拌反应3h，停反应。蒸出200ml的乙醇，放置待结晶，然后经过过滤得到结晶产物揪酸铋，最后将结晶物使用乙醇重结晶3次得到最终产物。实施例4揪酸锌的制备取1摩尔量的揪酸，500ml的乙醇，在70°C的水浴中加热溶解，待全部溶解后加入0.5摩尔量的氢氧化锌，继续搅拌反应5h，停反应。蒸出300ml的乙醇，放置待结晶，然后经过过滤得到结晶产物揪酸锌，最后将结晶物使用乙醇重结晶3次得到最终产物。实施例5揪酸镁的制备取1摩尔量的揪酸，500ml的乙醇，在70°C的水浴中加热溶解，待全部溶解后加入0.5摩尔量的氢氧化镁，继续搅拌反应5h，停反应。蒸出400ml的乙醇，放置待结晶，然后经过过滤得到结晶产物揪酸镁，最后将结晶物使用乙醇重结晶3次得到最终产物。实施例6揪酸镁的制备取1摩尔量的揪酸，300ml的乙醇，在60°C的水浴中加热溶解，待全部溶解后加入0.5摩尔量的氢氧化镁，继续搅拌反应4h，停反应。蒸出200ml的乙醇，放置待结晶，然后经过过滤得到结晶产物揪酸镁，最后将结晶物使用乙醇重结晶3次得到最终产物。实施例7揪酸胺的制备取1摩尔量的揪酸，500ml的乙醇，在30°C的水浴中加热溶解，待全部溶解后加入0.4摩尔量的三乙醇胺，继续搅拌反应3h，停反应。蒸出300ml的乙醇，放置待结晶，然后经过过滤得到结晶产物揪酸胺，最后将结晶物使用乙醇重结晶3次得到最终产物。实施例8使用揪酸盐用于对幽门螺旋杆菌的抑制实验。1.受试样品(1)揪酸钠；(2)揪酸钾(3)揪酸铋；(4)揪酸锌；(5)揪酸镁；(6)揪酸胺；(7)揪酸铋50%；阿莫西林50%；(8)揪酸钠50%；阿莫西林50%；(9)阿莫西林；(10)甲硝唑。2.实验方法将受试样品化合物两倍比稀释成一系列浓度梯度后与含有7%羊血的Mueller-Hinton琼脂混勻铺板，每块板体积为10mL。用接种环将生长于平板的ATCC43504H.pylori刮下转入无菌生理盐水中，混勻后依照麦氏比浊管用生理盐水调比浊度至约107CFU/mL菌浓度，用多点接种仪将相应受试菌株接种于事先铺好的含有一系列化合物浓度梯度的平板，每株菌接种体积5μL。平板置于三气培养箱(含5%02，10%0)2及85%N2，相对湿度98%)中生长72小时后观察结果。能够完全抑制H.pylori生长的最低化合物浓度定义为该化合物的最小抑菌浓度。阿莫西林和甲硝唑作为阳性对照药物，空白平板及含同等浓度DMSO作为阴性对照，以确保细菌生长和全程操作处于无菌状态(1).3.参考文献(1)GuofeiDai,NiCheng,LeiDong,MutsumiMuramatsu,ShudongXiao,Ming-WeiWang,2,4andDe_XuZhui；BactericidalandMorphologicalEffectsofNE—2001,aNovelSyntheticAgentDirectedagainstHelicobacterpylori；ANTIMICROBIALAGENTSANDCHEMOTHERAPY,Aug.2005,p.3468-34734.使用揪酸盐做对幽门螺旋杆菌抑制实验测试数据如下(1)揪酸钠<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>+肉眼可见生长-肉眼不可见生长样品重复2次试验(2)揪酸钾<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>+肉眼可见生长-肉眼不可见生长样品重复2次试验(3)揪酸铋<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>+肉眼可见生长-肉眼不可见生长样品重复2次试验(4)揪酸锌<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>+肉眼可见生长-肉眼不可见生长样品重复2次试验(5)揪酸镁<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>+肉眼可见生长-肉眼不可见生长样品重复2次试验(6)揪酸胺<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>+肉眼可见生长-肉眼不可见生长样品重复2次试验(7)揪酸铋50%、阿莫西林5O%<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>+肉眼可见生长-肉眼不可见生长样品重复2次试验(8)揪酸钠50%、阿莫西林5O%<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>+肉眼可见生长-肉眼不可见生长样品重复2次试验(9)阿莫西林(阳性对照物)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>+肉眼可见生长-肉眼不可见生长样品重复2次试验(10)甲硝唑(阳性对照物)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>+肉眼可见生长-肉眼不可见生长样品重复2次试验权利要求使用枞酸盐，或/和抗菌素联合使用，用于抑制幽门螺旋杆菌，枞酸盐的分子式C19H29COOM，枞酸盐分子结构式如说明书附1所示，在枞酸的成盐制备反应中使用的碱是氢氧化钠NaOH、氢氧化钾KOH、氢氧化铋Bi(OH)3、氢氧化锌Zn(OH)2、氢氧化镁Mg(OH)2、三乙醇胺N(CH2CH2OH)3这些无机碱和有机碱。2.权利要求1中所述的揪酸盐和抗菌素联合使用，用于抑制幽门螺旋杆菌，使用的比例，使用的效果和最小用量见下表<table>tableseeoriginaldocumentpage2</column></row><table>全文摘要本发明涉及一种用于抑制幽门螺旋杆菌的枞酸盐，其抑制效果好于阳性对照物甲硝唑，部分与阳性对照物阿莫西林相同，其中枞酸铋50％、阿莫西林50％的组合样和枞酸钠50％、阿莫西林50％的组合样测试结果好于阳性对照物阿莫西林，说明枞酸盐与阿莫西林有协同效应。文档编号A61P31/04GK101804044SQ20091021278公开日2010年8月18日申请日期2009年11月9日优先权日2009年11月9日发明者刘红军,周永红申请人:中国林业科学研究院林产化学工业研究所