有机二羧酸盐在防治白内障药物中的应用的制作方法

专利名称：：有机二羧酸盐在防治白内障药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一类有机二羧酸盐的用途，特别是涉及一类有机二羧酸盐在配制防治白内障的药物中的应用。
背景技术：
：苄达赖氨酸化学名L-赖氨酸[1_苄基_1H_吲哒唑_3_氧基]乙酸盐L_lysine_mono[[[(l_phenylmethyl)_lH_indazol_3_yl]oxy]acetat]英文名BendazacLysine(BDL)。BDL在国外经过广泛的动物实验和临床研究后，首先由Anglini制药集团，作为治疗白内障的有效药物在意大利上市(1983)，有O.5g的片剂和0.5X的滴眼液两种。该药已在意大利、阿根廷、西班牙、葡萄牙、菲律宾取得生产许可证，在希腊、巴西和韩国登记注册或进行临床研究。该药的原料和滴眼液(商品名莎普爱思)于1997年获得新药证书和生产批文，[(97)卫药准字X-219号]，[(97)卫药准字X-220号]。浙江莎普爱思药业股份有限公司(原浙江平湖制药厂)享有原料药和制剂的独家生产权，是国内用于眼科的第一个国家二类新药[国药准字(1998)X445(1)号]。苄达赖氨酸滴眼液是江苏省药物研究所和浙江莎普爱思药业股份有限公司研究开发的国家二类新药，为"八五"国家重点科技攻关项目，国家级火炬计划项目，曾荣获浙江省医药管理局科学技术进步奖科技成果二等奖，并于1998年被国家科学技术部等五部委认定为国家重点新产品，(项目编号98G041D7000007)主治早期老年性白内障。1999年列入国家中小型企业创新基金项目(计划编号991118519)。十年来，由于其与众不同的确切的疗效，越来越多的白内障患者欢迎此药，使本品在抗白内障市场物上的影响力以强劲的优势上升；由于50%的使用者反应有一过性灼烧感，部分患者不能耐受而放弃治疗，这就影响了其抗白内障药物优势的发挥；所以减少苄达赖氨酸滴眼液的剌激性，增加病人的顺应性，已成为该药迫切需要解决的问题，不仅为了解决减少苄达赖氨酸滴眼液的剌激性的问题，也为了期望改进化学结构后的新一代苄达赖氨酸滴眼液的新产品能进一步提高疗效，这样可具有更强大的竞争力和广阔市场，取得明显的社会效益和经济效益，为进一步开拓国内外市场打下坚实的基础。它的成功，必能为广大白内障患者带来福音。
发明内容技术问题本发明的目的在于提供一类有机二羧酸盐的用途，即在制药中的新应用，尤其是在作为配制防治白内障的药物中的应用。技术方案有机二羧酸盐障及糖代谢所致白内障的药物中的应用。有益效果从药理试验结果，可以看出本发明具有以下优点(1)本发明通过家兔和大鼠11202致白内障及大鼠木糖致白内障模型筛选发现了1、2、3、4、6、7、8、9号化合物中新的抗白内障活性成分，发现了这类化合物在制备抗氧化损伤及糖代谢障碍所致白内障药物中的新用途。(2)本发明的4号化合物的抗晶状体混浊作用，不仅作用强度大，而且效能也高。预示着有良好的药用前景。(3)本发明4号化合物具有显著的家兔晶状体水溶性蛋白(sol-pro)、抗总氧化能力(T-A0C)升高作用，和丙二醛(MDA)的下降作用。因此4号的抗11202致晶状体氧化损伤作用与其有较强的增强抗氧化能力有关。具体实施方式实施例1—类有机二羧酸盐是根据苄达赖氨酸衍生出来的八种单体化合物，其化学结构式及编号如下<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>，2苄达赖氨酸(BDL，5号)由浙江莎普爱思药业股份有限公司提供，纯度大于98.5%以上，l-9号化合物，根据不同的试验，用不同的溶液溶解制备，如急毒静脉注射试验，鸡胚尿囊膜剌激性试验，眼剌激性眨眼试验，用0.9%NaCl(WT)溶液、急毒灌胃试验用0.5%(WT)羧甲基纤维素液，清洗晶状体用pH7.2磷酸缓冲液，过敏试验用市售苄达赖氨酸滴眼液配方、和抗晶状体氧化试验用DMEM细胞培养液等。在上述条件下，1-5号易溶解于水，6-9号不易水溶，尤以8号更不易水溶。以下实施例中各化合物质量浓度均以WT表示，体积浓度以VT表示。上述各化合物的制备方法为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>B2=3-CIB3=3-FC1=HC2=3-CIC3=3-FD1=HD2=3-CID3=3-F1:2-(l-苄基-1H-喷P坐-3-氧基)丙二酸酯(CI)在250mL三颈瓶中加入12g(0.09mol)3_羟基-卩引唑，3.94g(0.098mol)氢氧化钠，90mL水，4(TC下搅拌10min，滴加0.076mol苄氯，在7(TC反应2hr，有固体析出，过滤，滤饼用水洗涤，得1-苄基-1H-吲唑-3-醇(Bl)。在lOOmL的四颈瓶中，加入40mL乙二醇二甲醚溶剂，再加入l-苄基-lH-吲唑-3-醇(10.5mmo1)和3.6g(26.lmmol)的碳酸钾混合。所得混合液室温下搅拌10min，滴加3.0g(12.6mmo1)的溴代丙二酸二乙酯(百灵威公司)，然后加热回流4h，反应液由黄色变成红棕色，过滤。将滤液浓縮，柱层析(展开剂石油醚(60-9(TC):乙酸乙酯=1:1)，得到2-(l-苄基-lH-吲唑-3-氧基)丙二酸酯(Cl)。2:2-[l-(3-氯-苄基)-lH-吲唑-3-氧基]丙二酸酯(C2)以间氯苄氯为原料，方法同Cl的制备，得到2-[1_(3-氯_苄基)-1H-吲唑-3-氧基]丙二酸酯(C2)。3:2-[l-(3-氟-苄基)-lH-吲唑-3-氧基]丙二酸酯(C3)以间氟苄氯为原料，方法同Cl的制备，得到2-[1_(3-氟_苄基)-1H-吲唑-3-氧基]丙二酸酯(C3)。4:2-(1_苄基-1H-吲唑-3-氧基)丙二酸(Dl)将2-(l-苄基-lH-吲唑-3-氧基)丙二酸酯(Cl)(2.7mmo1)加入到含O.3g氢氧化钾(5.4mmo1)的10mL水溶液中，加热回流2h，然后用1M盐酸调节到pH=2，有白色固体析出，过滤，用少量水洗，干燥得白色固体2-(l-苄基-lH-吲唑-3-氧基)丙二酸(Dl)。5:2-[l-(3-氯-苄基)-lH-吲唑-3-氧基]丙二酸(D2)以2-[l-(3-氯-苄基)-lH-吲唑-3-氧基]丙二酸酯(C2)为原料，方法同D1的制备，得到2-[1-(3-氟_苄基)-1H-吲唑-3-氧基]丙二酸(D2)。6:2-[l-(3-氟-节基)-lH-喷唑-3-氧基]丙二酸(D3)以2-[l-(3-氟-苄基)-lH-吲唑-3-氧基]丙二酸酯(C3)为原料，方法同D1的制备，得到2-[1-(3-氟_苄基)-1H-吲唑-3-氧基]丙二酸(D3)。7:2-(1_苄基-1H-吲唑-3-氧基)丙二酸二钠盐的制备(3号化合物)将2-(l-苄基-lH-吲唑-3-氧基)丙二酸(Dl)2.Ommol加入到5mL水中，搅拌5min，滴加4.Ommol氢氧化钠的5mL水溶液，室温搅拌4h，减压浓縮除水，得到油状物，然后加入20mL无水乙醇，析出固体，过滤，用2mL无水乙醇洗涤，真空干燥，2-(1-苄基-1H-吲唑-3-氧基)丙二酸二钠盐。8:2-(1_苄基-1H-吲唑-3-氧基)丙二酸二钾盐的制备(2号化合物)将2-(l-苄基-lH-吲唑-3-氧基)丙二酸(Dl)2.0mmo1加入到5mL水中，搅拌5min，滴加4.Ommol氢氧化钾的5mL水溶液，室温搅拌4h，减压浓縮除水，得到油状物，然后加入20mL无水乙醇，析出固体，过滤，用2mL无水乙醇洗涤，真空干燥，2-(1-苄基-1H-吲唑-3-氧基)丙二酸二钾盐。9:2-(1_苄基-1H-吲唑-3-氧基)丙二酸二赖氨酸盐的制备(1号化合物)将2-(l-苄基-lH-吲唑-3-氧基)丙二酸(Dl)2.0mmo1加入到5mL水中，搅拌5min，滴加4.Ommol赖氨酸的5mL水溶液，室温搅拌4h，减压浓縮除水，得到油状物，然后加入20mL无水乙醇，析出固体，过滤，用2mL无水乙醇洗涤，真空干燥，2-(1-苄基-1H-吲唑-3-氧基)丙二酸二赖氨酸盐。10:2-(1_苄基-1H-吲唑-3-氧基)丙二酸二组氨酸的制备(4号化合物)将2-(l-苄基-lH-吲唑-3-氧基)丙二酸(Dl)2.0mmo1加入到5mL水中，搅拌5min，滴加4.Ommol组氨酸的5mL水溶液，室温搅拌4h，减压浓縮除水，得到油状物，然后加入20mL无水乙醇，析出固体，过滤，用2mL无水乙醇洗涤，真空干燥，2-(1-苄基-1H-吲唑-3-氧基)丙二酸二组氨酸盐。11:2-[1-(3_氯-苄基)-lH-吲唑-3-氧基]丙二酸盐二钠盐的制备(6号化合物)将2-[l-(3-氯-节基)-lH-喷唑-3-氧基]丙二酸(D2)2.0mmol加入到5mL水中，搅拌5min，滴加4.Ommol氢氧化钠的5mL水溶液，室温搅拌4h，减压浓縮除水，得到油状物，然后加入20mL无水乙醇，析出固体，过滤，用2mL无水乙醇洗涤，真空干燥，2-[1-(3-氯-苄基)-1H-吲唑-3-氧基]丙二酸二钠盐。12:2-[1-(3_氯-苄基)-lH-吲唑_3_氧基]丙二酸二赖氨酸盐的制备(7号化合物)将2-[l-(3-氯-节基)-lH-喷唑-3-氧基]丙二酸(D2)2.Ommol加入到5mL水中，搅拌5min，滴加4.Ommol赖氨酸的5mL水溶液，室温搅拌4h，减压浓縮除水，得到油状物，然后加入20mL无水乙醇，析出固体，过滤，用2mL无水乙醇洗涤，真空干燥，2-[1-(3-氯-苄基)-1H-吲唑-3-氧基]丙二酸二赖氨酸盐。13:2-[l-(3-氟-苄基)-lH-吲唑-3-氧基]丙二酸盐二钠盐的制备(8号化合物)将2-[l-(3-氟-节基)-lH-喷唑-3-氧基]丙二酸(D3)2.Ommol加入到5mL水中，搅拌5min，滴加4.Ommol氢氧化钠的5mL水溶液，室温搅拌4h，减压浓縮除水，得到油状物，然后加入20mL无水乙醇，析出固体，过滤，用2mL无水乙醇洗涤，真空干燥，2-[1-(3-氟-苄基)-1H-吲唑-3-氧基]丙二酸二钠盐。14:2-[1-(3_氟-苄基)-lH-吲唑_3_氧基]丙二酸二赖氨酸盐的制备(9号化合物)8将2-[l-(3-氟-节基)-lH-喷唑-3-氧基]丙二酸(D3)2.Ommol加入到5mL水中，搅拌5min，滴加4.Ommol赖氨酸的5mL水溶液，室温搅拌4h，减压浓縮除水，得到油状物，然后加入20mL无水乙醇，析出固体，过滤，用2mL无水乙醇洗涤，真空干燥，2_[1_(3-氟-苄基)-1H-吲唑-3-氧基]丙二酸二赖氨酸盐。实施例2抗晶状体氧化损伤的实验研究1.材料1.1.实验动物大鼠、豚鼠、家兔，雌雄兼用。1.2.主要试剂及药物DMEM/highglucose(高糖)培养液购自赛默飞司尔生物化学制品有限公司(北京)，维生素C、30%(VT)H202、FeCl3、NaCl、Na2HP04及NaH2P04等均为市售AR级试剂木糖(D+xylose)为市售HGB级试剂。1.3.主要仪器设备超净工作台、C02培养箱、匀浆器、低温高速离心机、可见分光光度计、12孔培养板。2.方法2.1.晶状体培养将大鼠、家兔处死，取出眼球用含500u/mL青霉素生理盐水漂洗后，仔细从后路剖开眼球除去球壁和玻璃体，剥离悬韧带，取出晶状体，用含500u/mL青霉素、0.5mg/mL链霉素PBS液漂洗5min后，实验前行解剖镜检查，确定晶状体无混浊及其他异常后。置于已装有2mLDMEM/highglucose灭菌培养液(含青霉素100u/mL、链霉素0.lmg/mL)的消毒12孔板中，分别加入不同的1-9号化合物在温度37t:，湿度95%，5%C02培养箱中预培养lh后，再在各孔中加入含H202及FeCl3{每孔总浓度家兔的H202为2%(VT)，大鼠的H202为0.5%(VT)，FeCl3均为0.02%(WT)}或木糖{每孔总浓度20,1/L(WT))灭菌培养液}，每孔共含有4mL培养液，用H202白内障模型的培养时间在上述在同等条件下培养24小时。用木糖致白内障模型的培养时间在上述同等条件下培养72小时，两种模型试验时均分为下述几组，分批试验，每批设有阴性对照组和模型组。1.阴性对照组不含H202或木糖的DMEM培养液。2.模型组(氧化损伤组)含H202及FeCl3的DMEM培养液，或含木糖的DMEM培养液。3.维生素C组除模型组各成分外，另加维生素C(最终浓度为lmmol/L)。4.苄达赖氨酸(BDL，5号)组除模型组各成分外，另加BDL(最终浓度0.5mmo1/L)。5.分为1-9号样品各组除模型组各成分外，各组分别另加1-9号样品(最终浓度0.5mmol/U。2.2.形态学观察培养24h后，大体观察晶体混浊情况，在12孔板下衬以白色底上画有不同粗细的黑色+状背景拍照并计分，分为4个级别-为正常透明晶体；无混浊+为轻度混浊(l号+字略有模糊，但是可见，2号+字清晰可见)；I度++为中度混浊(2号+字略有模糊但是可见，3号+字清晰可见)；11度+++为整个晶体混浊(3号+字不能清晰可见)；III度3.结果3.1晶状体混浊情况表2-1—类有机二羧酸盐(0.5mmol/L)抗H202致白内障筛选总结(invitro兔眼)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>本实验评价标准根据模型组大量试验，将各组产生晶状体混浊各度的百分率和模型组产生晶状体混浊各度的百分率比，定为轻度好转(V):++(即11111度)的百分率％应<67%，+(1度)的百分率％应>33%;中度好转(VV):++(11111度)的百分率％进一步降低；并出现0(-)的百分率％;明显好转(VVV):++(11111度)及+(I度)的百分率％消失，晶状体基本透明。上述结果说明除7，8，号未进行筛选外，其余化合物在所用剂量0.5mmol/L的浓度下，根据上述标准判断，对白内障有抑制作用的化合物有4、5、6号，1、2、3、9号作用不明显。表2-2—类有机二羧酸盐(0.5mmol/L)抗H202致白内障筛选总结(invitro大鼠眼)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>评价标准根据模型组大量试验，将各组产生晶状体混浊各度的百分率和模型组产生晶状体混浊各度的百分率比，定为轻度好转(V):++(即11111度)应<72%.+(1度)应>20%;中度好转(VV):++(11111度)的百分率％进一步降低，出现0(_)的百分率％;明显好转(VVV)++(11111度)及+(I度)的百分率％消失，晶状体基本透明。上述结果说明，除8号未进行筛选外，其余化合物在所用剂量0.5mmol/L的浓度下，根据上述标准判断，对白内障有抑制作用的化合物有3，4，5，6，7，9号。1，2号作用不明显。表2-3—类有机二羧酸盐(0.5mmol/L)抗木糖致白内障筛选总结(invitro大鼠眼)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>评价标准根据模型组大量试验，将各组产生晶状体混浊各度的百分率和模型组产生晶状体混浊各度的百分率比，定为轻度好转(V):++(11111度)应<64%，+(I)应>30%;中度好转(VV):++(11111度)的百分率％进一步降低，出现0(_)的百分率％;明显好转(VVV):++(11111度)及.+(I度)的百分率％消失，晶状体基本透明。上述结果说明；除1，2号未进行筛选外，7号作用不明显，其余化合物在所用剂量0.5mmol/L的浓度下，根据上述标准判断，对白内障有抑制作用的化合物有3，4，5，6，8，9号。4.结论:用大鼠、家兔的离体晶状体经抗11202及木糖致白内障三种筛选模型证明了(1).—类有机二羧酸盐(0.5mmol/L)l-9号中的4，5，6号化合物，对家兔和大鼠H202致白内障及大鼠木糖致白内障均有对抗作用。(2).—类有机二羧酸盐(0.5mmol/L)中的9号化合物，仅对大鼠H202致白内障及大鼠木糖致白内障有对抗作用。(3).—类有机二羧酸盐(0.5mmol/L)中的8号化合物仅对大鼠木糖致白内障有对抗作用。(4).—类有机二羧酸盐(0.5mmol/L)中的1，2号化合物对家兔和大鼠H202致白内障无明显对抗作用。(5).—类有机二羧酸盐(0.5mmol/L)中，除1，2号对家兔和大鼠H202致白内障无明显对抗作用外，1-9号中的大部分化合物对家兔和大鼠H202致白内障及大鼠木糖致白内障均有不同程度的对抗作用。实施例3与市售苄达赖氨酸滴眼液(5号)对眼剌激性比较试验1材料与方法11受试样品与试剂体外试验受试样品1-9号化合物，其中包括苄达赖氨酸为对照品，均用0.9%wtNaCl配成70mmol/L的浓度。用0.9%wtNaCl溶液作对照试验，所用化学试剂均为分析纯。体内试验1-5号化合物均用0.9%wtNaCl配制成无色澄明、规格为5mL:25mg的滴眼液。6-9号未做体内试验。12动物与仪器用10天的鸡胚龄，由南京市南郊种鸡厂提供。新西兰种大耳白家兔21只，体重2.5±3.0kg，雌雄均有。由南京医科大学实验动物中心提供。OLYMPUS倒置显微镜、Queue二氧化碳培养箱。2试验方法2.1体内试验肉眼观察角膜无混浊，结膜无充血、水肿及分泌物，瞳孔圆形，两侧等大，对光反射良好者的家兔入选。2.2眨眼次数测定入选健康家兔分为5组每组3只，每只动物右侧眼结膜囊内均滴受试物(0.lmL/眼)，左侧眼结膜囊内滴0.9%wtNaCl作对照。每次给药时压迫鼻泪管，并使眼被动闭合510s，随后立即记录10min内眨眼次数，分别计算3只动物左、右眼平均眨眼次数，评价药物对眼的剌激性(眨眼次数多则剌激性大)。2.2.体外试验鸡胚绒毛膜尿囊膜试验(HET-CAM试验)在10天龄的受精鸡卵的种蛋孵育于C02培养箱。温度37.0±0.5°C，培养箱中放入水盘以保持湿度在40%60%，要有通气孔。在10天龄的受精鸡卵上用碘伏和酒精消毒蛋壳表面2X3cm区域，用砂轮在蛋壳表面划刻出凹痕，用尖针在蛋气室表面扎1小洞，在凹痕处滴少量生理盐水，用针轻揭凹陷处蛋皮，轻轻撕掉内壳膜，此时该处CAM下陷，形成假气室(区别于蛋自身的气室)。备假气室时切勿损伤CAM。用透明胶带纸封贴假气室，形成透明观察窗，可供观察和加药操作。制备假气室后准备好各种被测物，轻轻撕开透明胶带纸，由此入1X1cm滤纸作载体。于载体上加100ii1(70mmol/L)的浓度受试物，作用20秒后用5mL蒸馏水滴冲。观察5min内CAM的反应变化，用解剖镜观察法观察.经化合物作用后不同时间段CAM血管的损伤情况，以出现溶血(hemolysis)、出血(haemorrhage)和凝血(coagulation)为指标进行评分(表1)。经评分并判断剌激强度.结束后将观察到的血管变化进行照相保存。每个受试样品用3只鸡卵进行检测。表3-1HET-CAM解剖镜观察法评分表Effect0-5min2min5minHemolysis531Haemorrhage753Coagulation9753.结果分析3.1体内试验表3-2对兔眨眼试验的影响(滴药后10min内眨眼次数±SD)，n=3<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>*闪眼次数^5次/10min示对眼剌激性比5号没有降低V闪眼次数《5次/10min示对眼剌激性比5号有降低3.2体外试验表3-31-9号化合物HET-CAM解剖镜观察法评分给药量阴性出血溶血溶血，凝血0.9%wtNaClV1V2V3V4V53-56V7V8V97554.结论(1)家兔体内一次性给药剌激性试验表明与苄达赖氨酸(5号)比较，剌激性降低的为3、4号。(2)体外HET-CAM剌激性试验表明与苄达赖氨酸(5号)比较，剌激性降低的为1、2、3、4、6、7、8号。(3)本实施例中降低眼剌激性的化合物中，本实施例中降低剌激性的化合物中1、2、3号虽在对眼或HET-CAM试验上，其剌激性评分均低于5号，但1、2、3号化合物在实施例2上抗白内障疗效不强于5号，因而可以认为4号是本试验中降低剌激性化合物中最具有价值的筛选目标。实施例44号与市售苄达赖氨酸滴眼液(5号)对抗晶状体氧化损伤的的比较试验1.材料1.1.实验动物豚鼠、家兔，雌雄兼用。1.2.主要试剂及药物DMEM/highglucose(高糖)培养液购自赛默飞司尔生物化学制品有限公司(北京)，4号化合物(纯度97.4%)由本课题协作组提供，即东南大学药物研究中心苟少华教授课题组提供，苄达赖氨酸(纯度98.5%BDL，5号)由浙江莎普爱思药业股份有限公司提供。维生素C、30%H202、FeCl3、NaCl，Na2HP04及NaH2P04等均为市售AR级试剂.晶状体水溶性蛋白(sol-pro)、抗总氧化能力(T-A0C)、丙二醛(MDA)试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。2.方法2.1.晶状体培养同实施例2，各孔中加入2mL含H202及FeCl3(每孔总浓度家兔的11202为2%，豚鼠的11202为1.5%，FeCls均为0.02%)试验分为下述几组，分批试验，每批设阴性对照组和模型组。A.阴性对照组不含H202的DMEM培养液。B.模型组(氧化损伤组)含H202及FeCl3的DMEM培养液。C.维生素C组除模型组各成分外，另加维生素C(最终浓度为0.5mmol/L)。D.苄达赖氨酸(BDL，5号)组设不同浓度，除模型组各成分外，另加BDL(最终浓度0.5-25,1/L)。E.4号样品组设不同浓度组，除模型组各成分外，另加4号样品(最终浓度0.635-25,1/L)2.2.形态学观察同实施例22.3.家兔晶状体水溶性蛋白(sol-pro)、抗总氧化能力(T-A0C)、丙二醛(MDA)测定将各组晶状体从培养液中取出，用0.9%wt的生理盐水漂洗后，滤纸檫干称重，在低温下操作，冰浴下匀浆，制成10%wt的匀浆液，低温离心机下12000转/分离心lOmin，取上清液，-7(TC保存。测定时，按试剂盒操作规程进行。3.结果3.l晶状体混浊情况表4-14号与5号对抗H202致晶状体氧化损伤的比较试验(invitro兔眼)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>评价标准根据模型组大量试验，将各组产生晶状体混浊各度的百分率和模型组产生晶状体混浊各度的百分率比，定为轻度好转(V):++(11111度)应<80%+(1度)应>20%;中度好转(VV):++(11111度)的百分率％进一步降低，出现0(-)的百分率％;明显好转(VVV):++(11111度)及.+(I度)的百分率％消失，晶状体基本透明。以上资料证明1.4，5号其疗效均随浓度增高而加强的趋势。2.5号在浓度达1.5-5mmol/L其疗效较模型组虽加强，但仍出现晶状体(IIIII)度混浊；3.4号在浓度达0.625-2.5mmol/L其疗效明显增强，但仍出现晶状体(IIIII)度混浊。在浓度达5mmol/L(1)晶状体(IIIII)度不出现。在浓度达10mmol/L时，晶状体仅出现(I)度混浊，有25%不出现混浊。4.4号的抗晶状体混浊作用，与5号相比，不仅作用强度大，而且效能也高。3.2家兔晶状体水溶性蛋白(sol-pro)、抗总氧化能力(T-A0C)、丙二醛(MDA)测定表4-34号对抗H202致晶状体氧化损伤的生化指标测定结果<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>组别mmol/L可溶性蛋白mg/mL(n=8)MDA(nmol/mg蛋白)(n=6)T-AOCu/mg蛋白(n=6)VC-58.59±1.135-59.34±1.650.22±0.100.17±0.05**4-512.99±1.95**0.04±0.02**0.21±0.12**4-1016.78±5.96**0.03±0.02**0.64±0.3(T4-1519.04±1.03**0.08±0.04**0.34±0.16****comparedwith模型组，P<0.01##comparedwith对照组，P<0.014.总结1.4号的抗11202致晶状体氧化损伤的作用，与5号相比，不仅作用强度大，而且效能也高。2.4号的抗H202致晶状体氧化损伤作用强于5号，与其有较强的增强抗氧化能力有关。实施例54号过敏试验1、试验材料1.1供试药物4号化合物，东南大学药物研究中心苟少华教授课题组提供，按市售苄达赖氨酸滴眼液配方，浓度1%。1.2动物豚鼠，总数16只，体重350-400g，雌雄各半，由南京医科大学实验动物中心提供，许可证号SCXK(苏)2008-0004。2.试验项目2.l主动过敏方法取豚鼠6只，分别在实验第1，3，5天腹腔注射给药，每日一次，每次0.5mL/只，进行致敏；在末次给药的第14天后，以2mL/只静脉注射，进行攻击。观察3小时。剂量与分组见表5-l，观察指标及评判标准见表5-2表5-3。表5-14号对豚鼠过敏试验剂量与分组<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>皮肤反应分值红斑形成无红斑轻度红斑0中度红斑1重度红斑23水肿性红斑4水肿形成无水肿轻度水肿0中度水肿1重度水肿23总积分(满分)7结果在致敏阶段，实验豚鼠未见原发性剌激反应；在激发阶段，也未见红斑、水肿过敏反应。结果见表5-5，5-6表5-54号对豚鼠过敏反应试验结果组别动物数红斑积分水肿积分最高分平均值反应率致敏率012340123X±SD%%破损皮肤组000000000O士O.O0/50.0完整皮肤组5000000000O士O.O0/50.0表5-64号对豚鼠眼黏膜试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>表5-9BDL(5号)灌胃途径剂量及死亡结果<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>5号灌胃LD50为2.091g/kg，95%可信限上限为2.271g/kg，95%可信限下限为1.925g/kg总结4号和BDL(5号)在接近等摩尔剂量条件下静脉注射(4号0.73g/kg，5号1.069g/kg)，4号的毒性均低于BDL。4号口服最大耐受剂量为4.16g/kg，5号灌胃LD5。为2.091g/kg，95X可信限上限为2.271g/kg，95X可信限下限为1.925g/kg。可见，在静脉注射和灌胃两种途径下，4号的毒性均低于BDL(5号)。权利要求有机二羧酸盐上述八种化合物在制备预防和治疗氧化损伤白内障及糖代谢所致白内障的药物中的应用。F2009102126910C0000011.tif,F2009102126910C0000012.tif全文摘要本发明的目的在于提供一类有机二羧酸盐的用途，即在制药中的新应用，尤其是在作为配制防治白内障的药物中的应用。本发明通过家兔和大鼠H2O2致白内障及大鼠木糖致白内障模型筛选发现了1、2、3、4、6、7、8、9号化合物中新的抗白内障活性成分，发现了这类化合物在制备抗氧化损伤及糖代谢障碍所致白内障药物的医疗用途。本发明的4号化合物的抗晶状体混浊作用，不仅作用强度大，而且效能也高。预示着有良好的药用前景。本发明4号化合物具有显著的家兔晶状体水溶性蛋白(sol-pro)、抗总氧化能力(T-AOC)升高作用，和丙二醛(MDA)的下降作用。因此4号的抗H2O2致晶状体氧化损伤作用与其有较强的增强抗氧化能力有关。文档编号A61K31/416GK101703503SQ20091021269公开日2010年5月12日申请日期2009年11月16日优先权日2009年11月16日发明者冯鲁中,吴建伟,张银娣,朱延勤,沈宏,沈建平,胡正国,苟少华,陈德康申请人:南京医科大学;浙江莎普爱思药业股份有限公司;东南大学