专利名称：一种东风菜总皂苷的提取工艺的制作方法
技术领域：
本发明属于天然药物提取技术领域，具体涉及一种从东风菜中提取总皂苷的工 艺。
背景技术：
东风菜是民间常用药，又称仙白草、土白前等，为菊科(Compositae)东风菜 属(Doellingeria)植物东风 M Doellingeria scaber(Thunb. )Nees[Aster scaber Thunb.].的全草。广泛分布于我国东北部、北部、中部至南部各省，主治风毒壅热，头痛目 眩，肝热眼赤，民间将其作为抗癌药物使用，并用于治疗慢性支气管炎和毒蛇咬伤，效果良 好。味辛、甘，性寒。散风热，清头目。主治风热头痛，眩晕，目赤，咽痛，蛇咬伤。东风菜根 含东风菜皂苷A3，B5，foetidissimoside。刺囊酸_3，28_0_双链苷，东风菜苷Al、A2、A3、 A4，齐墩果酸苷，东风菜苷B1、B2、B3、B4、B5、B6、B7、B8、B9，刺囊酸糖苷，东风菜苷Ha、Hbl、 恥2、此1、此2、朋、肚、取、他、见，紫苑皂苷!1￡1、恥，恶臭味苷八，紫苑刺囊酸双链苷东风菜苷。 地上部分含酚酸，如咖啡酰奎宁酸、菠菜留醇。三萜皂苷以东风菜皂苷系列为主。现代药理研究表明，东风菜具有增强免疫、抗肿瘤、抗病毒及降脂等活性，在中药 临床及传统医学中有较大的应用价值。张腾等对东风菜皂甙生物活性进行了研究，结果证 明东风菜根总皂甙可明显抑制鼠肝癌肿瘤细胞的生长，主要表现在使瘤体组织坏死加重， 瘤周围淋巴细胞及巨噬细胞浸润增加，增生反应明显，以及有少量纤维包膜形成；其中前者 (指坏死)弱于环磷酰胺，而后者(细胞反应及包膜形成)则明显优于环磷酰胺，说明东风 菜总皂甙的抗肿瘤作用可能与增加机体免疫功能有关。匡海学等东风菜皂甙生物活性的研 究证明，东风菜总皂甙可增加荷瘤小鼠炭粒廓清速率，使吞噬活性A值明显增加，使荷瘤小 鼠T细胞总数及其亚群百分率明显增加；抑瘤实验证明，小鼠按150、300、600mg/kg 口服给 药，对S180和HAC实体瘤有明显的抑制作用；对肝癌腹水型荷瘤小鼠的生命延长率有明显 增加作用。肖洪彬等对东风菜总皂甙及其单体皂甙生物活性进行研究，结果证明，东风菜总 皂甙及单体S-I、S-II可显著促进小鼠脾淋巴细胞产生IL-2，以总皂甙作用最佳；在体外能 显著增强ConA对淋巴细胞的刺激作用，对免疫细胞有调节作用；可明显增加脾空斑形成细 胞的反应，对抗体形成细胞有刺激作用；对NK细胞的活性作用不明显，表明东风菜总皂甙 成份具有提高细胞免疫及体液免疫的作用。综上所述，东风菜中所含多种皂苷具增强免疫及抗肿瘤的活性，为更好的开发其 药用价值，本发明提供了一种东风菜总皂苷的提取工艺。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种东风菜总皂苷的提取工艺。本发明中，所述东风菜总皂苷提取物中，总皂苷的含量为50. 0-98. 0%。一种东风菜总皂苷的提取工艺，包括以下步骤(1)提取以东风菜干燥药材为原料，经粉碎后，按重量比加入4-10倍热水，超声提取，功率为100-700W，频率为30-50kHz，共提取2_4次，每次0. 5-2小时，合并提取液，(2)分离上述提取液通过大孔吸附树脂柱层析，以蒸馏水洗脱杂质，再用 30-80%甲醇或乙醇水溶液洗脱，并用薄层层析法检识，收集40-70%甲醇或乙醇水溶液洗 脱液，回收试剂，干燥即得东风菜总皂苷粗提物。(3)溶剂萃取将上述东风菜总皂苷粗提物加入0. 6-1. 8倍石油醚萃取，弃去石油 醚萃取液；萃取后的水相中加入乙酸乙酯萃取3-4次，再加入正丁醇萃取3-4次，乙酸乙酯 和正丁醇每次加入量分别为水提物体积的0. 6-1. 8倍，合并正丁醇萃取液，回收试剂，减压 浓缩干燥，得东风菜总皂苷提取物。所述步骤(1)中热水温度为40-100°C。步骤(2)所述大孔树脂型号可选AB-8、LSA-10, HP100、HPD300、NKA、D101、D180、 X-8、X-5、SP825、XAD-16、XAD-4、XSD-3 中的一种。本发明提取的东风菜总皂苷可用于制备增强免疫功能或抗肿瘤类药物。本发明的提取工艺首先采用水对东风菜中总皂苷进行提取，提取液经有机溶剂萃 取后用大孔吸附树脂法进行纯化处理，收集不同浓度乙醇的洗脱物，获得总皂苷提取物，具 有步骤简单、得率高、成本低的优点。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明，但不以任何方式限制本发明。实施例一(1)以东风菜根作为原料，原料经粉碎成粗粉后，取1. 5kg投入超声提取罐中，加 入7. 5L热水(60°C)超声提取，功率为300W，频率为30kHz，共提取4次，每次0. 5小时，合 并提取液；(2)将上述提取液通过XAD-16大孔吸附树脂柱层析，以蒸馏水洗脱杂质，再用
30%乙醇、40%乙醇、50%乙醇.....80%乙醇水溶液洗脱，并用硅胶薄层层析法检识，收集
40-70%乙醇水溶液洗脱液，减压回收乙醇，即得东风菜总皂苷粗提物；(3)上述东风菜总皂苷粗提物中加入石油醚萃取，每次加入量为粗提物体积的 1. 5倍，弃去石油醚萃取液；萃取后的水相中加入乙酸乙酯萃取4次，再加入正丁醇萃取4 次，乙酸乙酯和正丁醇每次加入量分别为水提物体积的1. 5倍，合并正丁醇萃取液，回收试 剂，减压浓缩干燥，得东风菜总皂苷提取物；实施例二 (1)以东风菜根作为原料，原料经粉碎成粗粉后，取1. 5kg投入超声提取罐中，加 入6L热水(80°C )超声提取，功率为700W，频率为40kHz，共提取3次，每次1. 5小时，合并 提取液；(2)将上述提取液通过X-5大孔吸附树脂柱层析，以蒸馏水洗脱杂质，再用30%
甲醇、40%甲醇、50%甲醇.....80%甲醇水溶液洗脱，并用硅胶薄层层析法检识，收集
40-70%甲醇水溶液洗脱液，减压回收甲醇，即得东风菜总皂苷粗提物；(3)上述东风菜总皂苷粗提物中加入石油醚萃取，每次加入量为粗提物体积的 1. 5倍，弃去石油醚萃取液；萃取后的水相中加入乙酸乙酯萃取4次，再加入正丁醇萃取4 次，乙酸乙酯和正丁醇每次加入量分别为水提物体积的1. 5倍，合并正丁醇萃取液，回收试剂，减压浓缩干燥，得东风菜总皂苷提取物。实施例三(1)以东风菜根作为原料，原料经粉碎成粗粉后，取2. 5kg投入超声提取罐中，加 入13L热水(70°C)超声提取，功率为600W，频率为35kHz，共提取4次，每次2小时，合并提 取液；(2)将上述提取液通过HP100大孔吸附树脂柱层析，以蒸馏水洗脱杂质，再用
30%乙醇、40%乙醇、50%乙醇.....80%乙醇水溶液洗脱，并用硅胶薄层层析法检识，收集
40-70%乙醇水溶液洗脱液，减压回收乙醇，即得东风菜总皂苷粗提物；(3)上述东风菜总皂苷粗提物中加入石油醚萃取，每次加入量为粗提物体积的
0.6倍，弃去石油醚萃取液；萃取后的水相中加入乙酸乙酯萃取4次，再加入正丁醇萃取4 次，乙酸乙酯和正丁醇每次加入量分别为水提物体积的0. 6倍，合并正丁醇萃取液，回收试 剂，减压浓缩干燥，得东风菜总皂苷提取物。实施例四(1)以东风菜根作为原料，原料经粉碎成粗粉后，取5kg投入超声提取罐中，加入 30L热水(90°C)超声提取，功率为500W，频率为30kHz，共提取3次，每次1. 0小时，合并提 取液；(2)将上述提取液通过XAD-4大孔吸附树脂柱层析，以蒸馏水洗脱杂质，再用
30%乙醇、40%乙醇、50%乙醇.....80%乙醇水溶液洗脱，并用硅胶薄层层析法检识，收集
40-70%乙醇水溶液洗脱液，减压回收乙醇，即得东风菜总皂苷粗提物；(3)上述东风菜总皂苷粗提物中加入石油醚萃取，每次加入量为粗提物体积的
1.6倍，弃去石油醚萃取液；萃取后的水相中加入乙酸乙酯萃取4次，再加入正丁醇萃取4 次，乙酸乙酯和正丁醇每次加入量分别为水提物体积的1. 6倍，合并正丁醇萃取液，回收试 剂，减压浓缩干燥，得东风菜总皂苷提取物。实施例五(1)以东风菜根作为原料，原料经粉碎成粗粉后，取IOkg投入超声提取罐中，加入 80L热水(60°C)超声提取，功率为550W，频率为40kHz，共提取4次，每次1小时，合并提取 液；(2)将上述提取液通过DlOl大孔吸附树脂柱层析，以蒸馏水洗脱杂质，再用30%
甲醇、40%甲醇、50%甲醇.....80%甲醇水溶液洗脱，并用硅胶薄层层析法检识，收集
40-70%甲醇水溶液洗脱液，减压回收甲醇，真空干燥即得东风菜总皂苷粗提物；(3)上述东风菜总皂苷粗提物中加入石油醚萃取，每次加入量为粗提物体积的 1. 2倍，弃去石油醚萃取液；萃取后的水相中加入乙酸乙酯萃取4次，再加入正丁醇萃取4 次，乙酸乙酯和正丁醇每次加入量分别为水提物体积的1. 2倍，合并正丁醇萃取液，回收试 剂，减压浓缩干燥，得东风菜总皂苷提取物。实施例六(1)以东风菜根作为原料，原料经粉碎成粗粉后，取15kg投入超声提取罐中，加入 105L热水(50°C )超声提取，功率为280W，频率为45kHz，共提取3次，每次1. 5小时，合并 提取液；(2)将上述总皂苷提取液通过LSA-10大孔吸附树脂柱层析，以蒸馏水洗脱杂质，再用30%乙醇、40%乙醇、50%乙醇.....80%乙醇水溶液洗脱，并用硅胶薄层层析法检识，
收集40-70%乙醇水溶液洗脱液，减压回收乙醇，即得东风菜总皂苷粗提物；(3)上述东风菜总皂苷粗提物中加入石油醚萃取，每次加入量为粗提物体积的
0.8倍，弃去石油醚萃取液；萃取后的水相中加入乙酸乙酯萃取4次，再加入正丁醇萃取4 次，乙酸乙酯和正丁醇每次加入量分别为水提物体积的0. 8倍，合并正丁醇萃取液，回收试 剂，减压浓缩干燥，得东风菜总皂苷提取物。实施例七(1)以东风菜根作为原料，原料经粉碎成粗粉后，取50kg投入超声提取罐中，加入 200L热水(55°C )超声提取，功率为400W，频率为50kHz，共提取4次，每次2小时，合并提 取液；(2)将上述总皂苷提取液通过AB-8大孔吸附树脂柱层析，以蒸馏水洗脱杂质，再
用30%甲醇、40%甲醇、50%甲醇.....80%甲醇水溶液洗脱，并用硅胶薄层层析法检识，收
集40-70%甲醇水溶液洗脱液，减压回收甲醇，即得东风菜总皂苷粗提物；(3)上述东风菜总皂苷粗提物中加入石油醚萃取，每次加入量为粗提物体积的
1.0倍，弃去石油醚萃取液；萃取后的水相中加入乙酸乙酯萃取4次，再加入正丁醇萃取4 次，乙酸乙酯和正丁醇每次加入量分别为水提物体积的1. 0倍，合并正丁醇萃取液，回收试 剂，减压浓缩干燥，得东风菜总皂苷提取物。
权利要求
一种东风菜总皂苷的提取工艺，其特征在于包括以下步骤(1)提取以东风菜干燥药材为原料，经粉碎后，按重量比加入4 10倍热水，超声提取，功率为100 700W，频率为30 50kHz，共提取2 4次，每次0.5 2小时，合并提取液，(2)分离上述提取液通过大孔吸附树脂柱层析，以蒸馏水洗脱杂质，再用30 80％甲醇或乙醇水溶液洗脱，并用薄层层析法检识，收集40 70％甲醇或乙醇水溶液洗脱液，回收试剂，干燥即得东风菜总皂苷粗提物。(3)溶剂萃取将上述东风菜总皂苷粗提物加入0.6 1.8倍石油醚萃取，弃去石油醚萃取液；萃取后的水相中加入乙酸乙酯萃取3 4次，再加入正丁醇萃取3 4次，乙酸乙酯和正丁醇每次加入量分别为水提物体积的0.6 1.8倍，合并正丁醇萃取液，回收试剂，减压浓缩干燥，得东风菜总皂苷提取物。
2.权利要求1所述的一种东风菜总皂苷的提取工艺，其特征在于所述步骤(1)中热 水温度为40-100°C。
3.权利要求1所述的一种东风菜总皂苷的提取工艺，其特征在于步骤(2)所述大孔树 脂型号可选六8-8、1^六-10、昍100、昍0300、^^、0101、0180、1-8、1-5、5卩825、1六0-16、父六0-4、 XSD-3中的一种。
全文摘要
本发明涉及一种东风菜总皂苷的提取工艺，其工艺具体包括取东风菜干燥药材，以热水为提取溶媒超声提取2-3次，大孔吸附树脂柱进行吸附分离，并将洗脱液减压浓缩干燥，洗脱液为甲醇或乙醇水溶液，并用薄层层析法检识，收集40-70％甲醇或乙醇水溶液洗脱液，回收试剂，浓缩，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，将萃取液浓缩干燥即得东风菜总皂苷提取物。本发明的优点在于所提取的化合物具有增强免疫和抗肿瘤活性，提取方法简单。
文档编号A61P37/04GK101972290SQ201010235888
公开日2011年2月16日 申请日期2010年7月26日 优先权日2010年7月26日
发明者刘东锋, 杨成东, 郭琴 申请人:南京泽朗医药科技有限公司