专利名称：含有牛蒡苷元的药物组合物及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种含有牛蒡苷元的药物组合物及其在制备治疗癌症的药物中的用途，尤其在制备治疗白血病的药物中的用途。
背景技术：
目前，癌症是当前严重影响人类健康、威胁人类生命的主要疾病之一。癌症与心脑血管疾病和意外事故一起，构成当今世界所有国家三大死亡原因。因此，世界卫生组织和各国政府卫生部门都把攻克癌症列为一项首要任务。世界上治疗癌症的方法主要有三种，一是采用手术切除法，切除病变组织，防止癌细胞扩散；二是采用化疗或放疗，以杀死癌细胞； 三是用药物治疗。采用手术切除的方法增加了病人的痛苦，伤其元气，费用巨大。用化疗或放疗的方法，在杀死癌细胞的同时，也伤及红细胞和白细胞，病人苦不堪言。白血病是严重危害人类生命健康的造血系统恶性肿瘤，是一类起源于造血(或淋巴)干细胞的恶性疾病。由于干细胞受损，白血病细胞失去进一步分化成熟的能力，或者增值与分化能力不平衡，而停止在细胞发育的不同阶段，具体表现为细胞在体内无限增值，而其分化成熟和凋亡受阻。因此，白血病的治疗可从三个方面入手诱导细胞凋亡、诱导细胞分化及干细胞移植重建造血功能。迄今白血病的治疗仍主要采用传统的联合化疗，但此疗法副作用甚大，复发率高，尤其对机体免疫与造血系统有较大的损害。牛蒡苷与牛蒡苷元(Arctigenin，AG)均来源于牛蒡的干燥成熟果实牛蒡子，牛蒡苷活性很小，必须经过代谢转化为牛蒡苷元才能被人体吸收，而牛蒡苷元是可以被人体直接吸收的有效成分。目前，已有文献报道牛蒡苷元具有如下药理活性1)抗炎及免疫调节作用；2)抗病毒作用，包括HIV-I与流感病毒；3)诱导肿瘤细胞凋亡的作用；4)肾病及糖尿病、糖尿病并发症治疗作用；5)热休克反应抑制作用；6)神经保护作用；7)扩张血管作用； 8)血小板活化因子拮抗作用；9)抗老年性痴呆的作用；10)抑制K+挛缩的作用等。比如， Cho J Y, et al. Immunomodulatory effect of arctigenin,a lignan compound ontumor necrosis factor-α and nitric oxide production,and lymphocyteproliferation[J]. J Pharm Pharmcol. 1999 ；51 (11) :1267-1273.公开了牛蒡苷元具有抗炎及免疫调节作用；Gao Y, et al. Activity of in vitro anti-influenza virus ofarctigenin[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs (中草药)· 2002 ;33 (8) :724-726.公开了牛蒡苷兀具有抗病毒的作用；Kim S H, et al. Hepatoprotectivedibenzylbutyrolactone lignans of Torreya nucifera against CC14-induced toxicityin primary cultured rat hepatocytes[J], Biol Pharm Bull. 2003 ；26 (8) :1202-1205.公开了牛蒡苷元具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用。维甲酸(retinoic acid,RA)属于维生素甲类化合物家族，基本结构或生物活性类似于维生素A，由环己烯、侧链及极性基团三部分组成，因为羧基方向不同而分为两种异构体，即全反式维甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)和顺式维甲酸(cis-RA)。ATRA具有广泛的生物活性，可以诱导肿瘤细胞凋亡，抑制多种肿瘤细胞的增殖及诱导肿瘤细胞的分化等。该药主要应用于血液系统肿瘤治疗。临床资料显示，单一使用ATRA疗效相对来说比较有限。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种药物组合物，所述药物组合物可以抑制肿瘤细胞生长，从而达到更好地治疗癌症的作用。本发明的药物组合物包含活性成分牛蒡苷元和全反式维甲酸。优选地，按物质的量计，本发明的药物组合物中，牛蒡苷元和全反式维甲酸的摩尔比为1 0.01 100。本发明的药物组合物，其中活性成分牛蒡苷元与全反式维甲酸联合后具有抗肿瘤的协同作用，即不仅可以抑制人急性早幼粒白血病NK4细胞和慢性粒细胞白血病K562细胞的生长，更令人惊喜的是，其可以抑制维甲酸耐药早幼粒白血病MR-2细胞的生长，这个结果对于临床上急性早幼粒白血病、慢性粒细胞白血病和维甲酸耐药早幼粒白血病有着深刻的指导意义。需要说明的是，通过以上体外试验证实了本发明的药物组合物中，牛蒡苷元和全反式维甲酸表现出了惊人的协同性抗肿瘤作用。由于本发明的药物组合物在相当宽的范围内(牛蒡苷元和全反式维甲酸的摩尔比为1 0.01 100)具有抗肿瘤的协同作用，因此， 可认为本发明的改进在于组分本身。另外，本领域的技术人员也可以预期，本发明的药物组合物在牛蒡苷元和全反式维甲酸的摩尔比为1 0.01 100的范围内，均可以实现本发明的目的。本发明的目的之二是提供化合物的医药用途，具体地说是，活性成分由牛蒡苷元和全反式维甲酸组成的组合物在制备治疗癌症的药物中的用途。优选的一种技术方案是活性成分由牛蒡苷元和全反式维甲酸组成的组合物在制备治疗白血病的药物中的用途。更优选地一种技术方案是活性成分由牛蒡苷元和全反式维甲酸组成的组合物在制备治疗急性早幼粒白血病的药物中的用途。更优选地另一种技术方案是活性成分由牛蒡苷元和全反式维甲酸组成的组合物在制备治疗慢性粒细胞白血病的药物中的用途。更优选地另一种技术方案是活性成分由牛蒡苷元和全反式维甲酸组成的组合物在制备治疗维甲酸耐药早幼粒白血病的药物中的用途。上述优选的医药用途的技术方案中，按物质的量计，牛蒡苷元和全反式维甲酸的摩尔比为1 0. 01 100。为了清楚地阐明本发明的技术效果，发明人通过以下试验例进一步阐述本发明的药物组合物在抑制肿瘤细胞生长的作用试验例组合物对白血病细胞生长影响的试验1.试验分组与给药给药终浓度如下空白对照组等体积的赋形剂牛蒡苷元(AG)低量组0. 1 μ mol/L牛蒡苷元牛蒡苷元(AG)高量组10 μ mol/L牛蒡苷元全反式维甲酸(ATRA)低量组0. 1 μ mol/L全反式维甲酸
全反式维甲酸(ATRA)高量组dOymol/L全反式维甲酸组合物A组10. 0 μ mol/L牛蒡苷元+0. 1 μ mol/L全反式维甲酸组合物B组1.0 μ mol/L牛蒡苷元+1.0 μ mol/L全反式维甲酸组合物C组0. 1 μ mol/L牛蒡苷元+10.0 μ mol/L全反式维甲酸2.试验方案与结果统计如下将人急性早幼粒白血病NK4细胞，慢性粒细胞白血病K562细胞，维甲酸耐药早幼粒白血病MR-2细胞分别接种于RPMI-1640培养液中，于37°C含5% CO2的培养箱内培养传代，接种于96孔培养板，接种时按组别加入相应浓度的药物，每浓度平行5孔，48h后MTT还原反应测定肿瘤生长抑制率，试验数据用Excel系统进行统计学分析，具体参见表1。表1组合物对白血病细胞生长的影响
组别NK4细胞抑制率(%)K562细胞抑制率(％)MR-2 细胞(％)空白对照组0. 52 ±0. 060. 13 ±0. 020. 22 ±0. 02AG低量组27. 26±6. 3110. 45±4. 5828. 56 ±5. 68AG高量组36. 54 ±5. 3840. 26±9. 5422. 48 ±3. 25ATRA低量组42. 36±8. 569. 89 士2. 123.21±1.52ATRA高量组59. 4±8. 2147. 67±8· 339. 25 ±2. 58组合物A组77. 65 ±16. 03^**5^79. 62 ±10.64. letu.se^"1"^组合物B组71. 06 ±13. 40m**$80. 13±18. 51—叫$59. 34 土 10. 23m**yyS$组合物C组81. 25 土 11. 67,"^3^73. 65 ±16. 45m**YY$$51.64±6.与牛蒡苷元低量组相比，##p <0.01 ；与牛蒡苷元高量组相比，**p <0.01 ；与全反式维甲酸低量组相比，$p < 0. 05, $$p < 0. 01 ；与全反式维甲酸高量组相比，Yp <0.05，<0.01通过上述表1的结果可以看出，组合物A组、B组和C组与牛蒡苷元低剂量组相比具有极显著性差异(P <0.01)，与牛蒡苷元高剂量组相比也具有极显著性差异(P < 0.01)，与全反式维甲酸的两个剂量组相比具有显著性差异或极显著性差异。这表明，牛蒡苷元与全反式维甲酸联合后具有抗肿瘤的协同作用，即不仅可以抑制人急性早幼粒白血病NK4细胞和慢性粒细胞白血病K562细胞的生长，更令人惊喜的是，其可以抑制维甲酸耐药早幼粒白血病MR-2细胞的生长，这个结果对于临床上急性早幼粒白血病、慢性粒细胞白血病和维甲酸耐药早幼粒白血病有着深刻的指导意义。另外，与阴性对照组相比，与药物作用后的各种白血病细胞，无论是K562细胞、NK4细胞，还是MR-2细胞，可明显出现细胞凋亡后所特有的形态学特征，即细胞核折皱，染色质凝集，裂解成碎片后形成由模包绕的凋亡小体。再者，组合物B组还有一部分细胞形态向成熟方向转化，细胞表现出核固缩，核浆比降
5低，核仁减少等特征。
具体实施例方式以下通过具体实施方式
进一步描述本发明，本发明不仅仅限于以下实施例。实施例1微乳剂牛蒡苷元0. Ig全反式维甲酸 5g薄荷油35g聚氧乙烯-23-月桂基醚60g1，2-丙二醇30g制备工艺称取处方量薄荷油、聚氧乙烯-23-月桂基醚、1，2-丙二醇，混合后搅拌均勻，然后加入牛蒡苷元、全反式维甲酸溶解，也可以超声波处理以加速溶解，得澄清浓缩液，即为牛蒡苷元与全反式维甲酸微乳浓缩物。激光粒度测定仪测定其粒径，平均粒径为 15nm。实施例2微乳剂牛蒡苷元2g全反式维甲酸2g留兰香油30g十甘油单硬脂酸酯55g1，2-丙二醇25g制备工艺称取处方量留兰香油、十甘油单硬脂酸酯、1，2-丙二醇，混合后搅拌均勻，然后加入牛蒡苷元、全反式维甲酸溶解，也可以超声波处理以加速溶解，得澄清浓缩液， 即为牛蒡苷元与全反式维甲酸微乳浓缩物。激光粒度测定仪测定其粒径，平均粒径为15nm。实施例3微乳剂牛蒡苷元IOg全反式维甲酸0. 5g薄荷油40g辛酸油酸乙酯55g1，2-丙二醇45g聚乙二醇800055g制备工艺称取处方量薄荷油、辛酸油酸乙酯、1，2-丙二醇、聚乙二醇8000，混合后搅拌均勻，然后加入牛蒡苷元溶解，也可以超声波处理以加速溶解，得澄清浓缩液，即为牛蒡苷元与全反式维甲酸微乳浓缩物。激光粒度测定仪测定其粒径，平均粒径为40nm。实施例4微乳剂牛蒡苷元5g全反式维甲酸Ig薄荷油40g辛酸油酸乙酯55g1，2-丙二醇45g
聚乙二醇335040g制备工艺称取处方量薄荷油、辛酸油酸乙酯、1，2-丙二醇、聚乙二醇3350，混合后搅拌均勻，然后加入牛蒡苷元溶解，也可以超声波处理以加速溶解，得澄清浓缩液，即为牛蒡苷元与全反式维甲酸微乳浓缩物。激光粒度测定仪测定其粒径，平均粒径为40nm。实施例5微乳剂牛蒡苷元Ig全反式维甲酸0. Ig氢化椰油甘油酯5g月桂酰基聚乙二醇-32-甘油酯20g1，2-丙二醇5g聚乙二醇335020g 制备工艺称取处方量氢化椰油甘油脂、月桂酰基聚乙二醇-32-甘油酯、1，2-丙二醇、聚乙二醇3350，混合后搅拌均勻，然后加入牛蒡苷元溶解，也可以超声波处理以加速溶解，得澄清浓缩液，即为牛蒡苷元与全反式维甲酸微乳浓缩物。激光粒度测定仪测定其粒
径，平均粒径为40nm。实施例6微乳剂牛蒡苷元0. 6g全反式维甲酸0. 4g月桂酰基聚乙二醇-32-甘油酯20g聚氧乙烯蓖麻油EL-4035g1，2-丙二醇15g制备工艺称取处方量月桂酰基聚乙二醇-32-甘油酯、聚氧乙烯蓖麻油EL-40、1， 2-丙二醇，混合后搅拌均勻，然后加入牛蒡苷元、全反式维甲酸溶解，也可以超声波处理以加速溶解，得澄清浓缩液，即为牛蒡苷元与全反式维甲酸微乳浓缩物。激光粒度测定仪测定其粒径，平均粒径为15nm。实施例7注射剂牛蒡苷元0. Ig全反式维甲酸Ig注射用大豆油18g甘油2. 6g大豆卵磷脂1. 5g注射用水加至IOOml制备工艺将大豆卵磷脂、甘油、分散于60ml注射用水中，再将牛蒡苷元、全反式维甲酸和注射用大豆油混合均勻，配制成油相，然后将油相加入到水相中，边加边搅拌，均勻后超声lh，之后用注射用水定容至100ml，后转入高压乳勻机，乳化30min，灌装，灭菌，即得。实施例8注射剂牛蒡苷元2. Og全反式维甲酸0. 5g
注射用大豆油甘油丙二醇大豆卵磷脂注射用水
加至IOOml
18g 2. Og 5. Og 1.5g制备工艺先将大豆卵磷脂、甘油、丙二醇分散于60ml注射用水中，再将牛蒡苷元、全反式维甲酸和注射用大豆油混合均勻，配制成油相，然后将油相加入到水相中，边加边搅拌，均勻后超声lh，之后用注射用水定容至100ml，后转入高压乳勻机，乳化30min，灌装，灭菌，即得。实施例9片剂牛蒡苷元8. Og全反式维甲酸5. Og淀粉80g糊精150. Og低取代羟丙基纤维素10. Og60%乙醇适量硬脂酸镁2. Og制备工艺称取牛蒡苷元、全反式维甲酸、淀粉、糊精、低取代羟丙基纤维素混合均勻。另取适量60%乙醇加入混合粉末中，混合均勻，制软材，通过18目筛制成湿颗粒，60°C 左右干燥，用20目筛整粒，加入硬脂酸镁，混勻，压片，即得。实施例10片剂牛蒡苷元0. Ig全反式维甲酸IOg淀粉80g糊精150. Og低取代羟丙基纤维素10. Og60%乙醇适量硬脂酸镁2. Og制备工艺先称取全反式维甲酸、淀粉、糊精、低取代羟丙基纤维素混合均勻，然后用等量递增法把牛蒡苷元和以上粉末混合均勻。另取适量60%乙醇加入混合粉末中，混合均勻，制软材，通过18目筛制成湿颗粒，60°C左右干燥，用20目筛整粒，加入硬脂酸镁，混勻，压片，即得。实施例11胶囊牛蒡苷元50g全反式维甲酸Ig淀粉80g微粉硅胶IOg制备工艺先称取牛蒡苷元、淀粉、微粉硅胶混合均勻，然后用等量递增法把全反式维甲酸和以上粉末混合均勻，装填胶囊，即得。
实施例12颗粒剂
牛蒡苷元50g
全反式维甲酸Ig
乳糖160g
蔗糖60g
可溶性淀粉450g
8%淀粉浆适量
制备工艺将处方中的各辅料过100目筛，称取牛蒡苷元和全反式维甲酉髮与可溶
性淀粉、乳糖和蔗糖混合均勻后，加入8%淀粉浆制软材，18目筛制粒，于60°C干燥，16目筛整粒，装袋，即得。
权利要求
1.一种药物组合物，其特征在于它含有活性成分牛蒡苷元和全反式维甲酸。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于按物质的量计，牛蒡苷元和全反式维甲酸的摩尔比为1 0.01 100。
3.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于它是微乳剂、注射剂、片剂、胶囊、颗粒剂。
4.活性成分由牛蒡苷元和全反式维甲酸组成的组合物在制备治疗癌症的药物中的用途。
5.如权利要求4所述的用途，其特征在于所述的癌症为白血病。
6.如权利要求5所述的用途，其特征在于所述的白血病为急性早幼粒白血病。
7.如权利要求5所述的用途，其特征在于所述的白血病为慢性粒细胞白血病。
8.如权利要求5所述的用途，其特征在于所述的白血病为维甲酸耐药早幼粒白血病。
9.如权利要求5-8任一所述的用途，其特征在于按物质的量计，牛蒡苷元和全反式维甲酸的摩尔比为1 0.01 100。
全文摘要
本发明涉及一种含有牛蒡苷元的药物组合物及其在制备治疗癌症的药物中的用途，尤其在制备治疗白血病的药物中的用途。本发明的药物组合物包含活性成分牛蒡苷元和全反式维甲酸。优选地，按物质的量计，本发明的药物组合物中，牛蒡苷元和全反式维甲酸的摩尔比为1∶0.01～100。本发明的药物组合物，其中活性成分牛蒡苷元与全反式维甲酸联合后具有抗白血病的协同作用。
文档编号A61K9/00GK102335166SQ20101023581
公开日2012年2月1日 申请日期2010年7月15日 优先权日2010年7月15日
发明者刘松燕, 赵志全 申请人:山东新时代药业有限公司