专利名称：一种白芍制剂的质量控制方法
技术领域：
本发明属于药 物质量控制技术领域，特别涉及一种白芍制剂的质量控制方法，质 量控制方法包括含量测定方法、指纹图谱测定方法。
背景技术：
中药指纹图谱是近年来中药质量控制的热点话题，与以往的中药质量检测方法相 比，中药指纹图谱更具专属性，它不仅包括了对几个已知成分的分析，还包括了对已知成分 与各未知成分之间的相对含量分析。因此中药指纹图谱体现了对中药内在质量的综合评 价，尤其适用于有效成分不完全明确或不需要完全明确的情况下，对中药材及中药成品的 质量控制。中药指纹图谱必须以系统的化学成分和药理作用研究为基础，指纹图谱所反映的 化学成分应包含中药有效部位所含大部分成分的种类。中药指纹图谱获得和评价方法主要 通过以下途径实现的，在中医理论的指导下，选择能反映中药材药效的药理实验，获取药理 数据；在此基础上用现代分析技术对样品进行分析，获取化学数据；采用化学计量学的数 据处理方法，最终可以对上述选定的中药材质量作出客观评价，得出产地固定、品种明确的 (必要时固定采收季节和炮制方法等)的优质中药材。在药效学知道下进行指纹图谱研究， 能够保证指纹图谱反映的化学成分是中药材中有效部位所含绝大部分，或者有效成分的全 部。提取中药的特征性指纹信息严谨而科学的做法是以有效成分为指纹信息特征，从 复杂体系中寻找与特定药效具有正相关的有效分子群。但是，由于中药的多成分性和复杂 性，在不同处方中的作用各不相同，或者不同成分发挥着不同的药理作用，因此，我们必须 建立与之相对应，能够反映有效成分的指纹图谱。白芍为毛茛科植物芍药Paeonia Lacttiflora Pall.的干燥根。其味苦、酸，微 寒，归肝、脾经。具有平肝止痛，养血调经，敛阴止汗功效，用于头痛眩晕，肋痛腹痛，四肢挛 痛，血虚萎黄，月经不调，自汗，盗汗等病症。白芍根中主要含有芍药苷、芍药内酯苷、羟基 芍药苷、苯甲酰芍药苷等苷类成分。邹华彬等采用系统溶剂氯仿、无水乙醇、水依次分别提 取白芍不同极性区间的成分，测定了它们的紫外指纹图谱，根据其共有峰率和变异峰率双 指标序列分析法对它们进行了分析，对不同产地、不同采集年份的白芍样品进行了定量评 价，实验结果也表明相近产地的白芍具有最相近的关系，不同产地的白芍之间存在着较明 显的差异，同一地区不同年份的白芍之间有较明显的差异。李越峰等、杨柳等、王巧等采用 HPLD-DAD分别对多批白芍样品进行了指纹图谱研究，分别确定了共有峰14，11，8个，不同 程度的说明白芍的指纹图谱特征性及专属性，对于全面控制白芍的质量提供了重要依据。 李雅等采用HPLC十八烷基硅烷键合硅胶柱，乙腈-磷酸水溶液梯度洗脱，对10批白芍超微 饮片进行研究，发现色谱峰20个，共有峰10个，建立了其高效液相指纹图谱，并用于白芍超 微饮片的鉴别与评价。李冰岚等以外地产白芍为对照，对10批浙江磐安产杭白芍进行了系 统的色谱指纹图谱与芍药苷含量分析，且对粉红花品种标定了 19个共有指纹峰，建立了杭白芍的指纹图谱，并且发现杭白芍粉红花品种出现了明显的品种分化。关于白芍药材的指纹图谱有一些报道，但很少用于生产中中药材的质量控制。 同时近年来进一步的药理基础研究和临床研究表明，从其根中提取精制得到的白芍总苷 (TGP)，有抗炎、抗溃疡及免疫调节等多种药理作用。因此我们有必要建立体现白芍总苷成 分的指纹图谱。近年来，经过临床应用研究表明，以其为主要成分的白芍总苷胶囊用于治疗 类风湿关节炎具有确切疗效。因此，为了保证其质量，我们对白芍总苷制剂建立指纹图谱， 同时我们以有效成分群为指纹特征，采用同一液相色谱条件，建立与大生产中与之相对应 的白芍总苷(中间体)、白芍药材的指纹图谱。通过对大量样品的测定，建立白芍药材、白芍 总苷及制剂标准指纹图谱，并对三者指纹图谱相关性进行研究，确定三者指纹图谱相关联 的特征指纹峰，以及特征指纹峰比值范围，建立特征指纹峰评价标准。
发明内容
本发明的目的就是针对上述白芍制剂的质量控制现状，提供一种基于高效液相色 谱法的白芍制剂质量控制方法。本方法具体包括三种方法(1)芍药苷和芍药内酯苷的含 量测定方法；(2)建立白芍制剂标准指纹图谱；(3)建立白芍药材、白芍总苷(中间体)标准 指纹图谱；(4)建立三者指纹图谱相关联的特征指纹峰评价标准体系；可以通过以上方法 一种或几种对白芍制剂进行质量控制。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是(1)芍药苷和芍药内酯苷含量同步测定①液相色谱条件液相色谱条件色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂G.6mmX250mm， 5 μ m)；流动相乙腈(A)-O. 磷酸水溶液(B)，比例为(12 88)；流速1. OmL/min ；检测 波长:230nm;柱温:25°C。②对照品溶液的制备对照品溶液的制备取芍药苷约23mg，精密称定，置25ml量瓶中，用甲醇定容至刻 度，摇勻；取芍药内酯苷约7. 5mg，精密称定，置25ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇勻；分 别精密吸取芍药苷和芍药内酯苷各anl，置25ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇勻即得。③供试品溶液的制备白芍药材供试品溶液的制备取本品中粉约0. lg，精密称定，置50ml量瓶中，加稀 乙醇约35ml，超声处理30min，取出，放冷，加稀乙醇至刻度，摇勻，经0. 45um的微孔滤膜滤 过，即得。白芍总苷(制剂)供试品溶液的制备取白芍总苷(制剂)粉末约0. lg，精密称 定，置50ml量瓶中，加稀乙醇约35ml，超声处理15min，取出，放冷，加稀乙醇至刻度，摇勻。 精密吸取5ml，置50ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇勻，经0. 45 μ m的微孔滤膜滤过，即得。④测定法测定法精密吸取对照品和供试品溶液各10μ 1，注入高效液相色谱仪，测定。⑤测定结果测定结果白芍药材按干燥品计算，含芍药苷不少于2.0%，芍药内酯苷不少于 0. 5% ；
白芍总苷每克含芍药苷不少于410mg，芍药内酯苷不少于IlOmg ； 白芍制剂每粒含芍药苷不少于104mg，芍药内酯苷不少于30mg。(2) 一种白芍制剂指纹图谱测定①液相色谱条件液相色谱条件色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6mmX250mm， 5ym)；流动相乙腈(A)-O. 磷酸水溶液(B)，梯度洗脱，洗脱程序见表1 ；流速1.0mL/ min ；检测波长:230nm ；柱温25°C。表1液相系统洗脱程序
时间(min)乙腈(A) (%) 0.005%憐酸二氢钾水溶液(B) (%)
0793
51288
301288
401882
551882
754060
804060②供试品溶液的制备白芍药材供试品溶液的制备取本品中粉约0. lg，精密称定，置50ml量瓶中，加稀 乙醇约35ml，超声处理30min，取出，放冷，加稀乙醇至刻度，摇勻，经0. 45um的微孔滤膜滤 过，即得。白芍总苷(制剂)供试品溶液的制备取白芍总苷(制剂)粉末约0. lg，精密称 定，置50ml量瓶中，加稀乙醇约35ml，超声处理30min，取出，放冷，加稀乙醇至刻度，摇勻。 精密吸取5ml，置50ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇勻，经0. 45 μ m的微孔滤膜滤过，即得。③以芍药苷为参照峰的标准指纹图谱的制定测定法精密吸取上述对照品和供试品溶液各20 μ 1，分别注入高效液相色谱仪， 照上述色谱条件测定，记录色谱图；依据所得的10批样品的指纹图谱，制定标准指纹图谱。④指纹图谱的质量控制测定结果将白芍待测样品指纹图谱与制定的标准指纹图谱进行比较，计算相似 度，识别两者所具有的共同吸收峰的数量，以确定样品是否合格。其中待测品指纹图谱与标 准指纹图谱比对，其相似度应为0. 99 1. 00。将白芍总苷(制剂)待测产品指纹图谱与制定的标准指纹图谱进行比较，计算相 似度，识别两者所具有的共同吸收峰的数量，以确定产品是否合格。其中待测品指纹图谱与 标准指纹图谱比对，其相似度应为0. 90 1. 00。本发明所述的含量测定方法采用同一液相色谱条件对白芍药材、白芍总苷(中 间体)、白芍制剂中芍药苷和芍药内酯苷含量同步测定，建立从药材到制剂的整体的质量 控制体系，进一步保证制剂的质量和疗效。该测定方法另一特别之处是将药材中芍药内酯苷与旁小峰分离，并达到分离度要求，能够准确测定药材中芍药内酯苷的含量。通过测定， 制定含量要求标准白芍药材按干燥品计算，含芍药苷不少于2.0%，芍药内酯苷不少于 0.5% ；白芍总苷每克含芍药苷不少于410mg，芍药内酯苷不少于IlOmg;白芍制剂每粒含芍 药苷不少于l(Mmg，芍药内酯苷不少于30mg。本发明所述的指纹图谱研究通过建立白芍药材、白芍总苷(中间体)、白芍制剂 标准指纹图谱，将待测样品指纹图谱与制定的标准指纹图谱进行比较，计算相似度，通过共 有峰的数量和相似度确定产品是否合格，全面的控制白芍药材、白芍总苷(中间体)、白芍 制剂的质量，建立从药材到制剂的整体的质量控制体系，进一步保证制剂的质量和疗效。该 指纹图谱测定方法另一特别之处是在对白芍药材、白芍总苷(中间体)、白芍制剂指纹图谱 相关性研究的基础上，发现白芍药材发挥药效作用成分集中指纹图谱25分钟以后部分，因 此在对白芍药材制定了标准指纹图谱；可以运用国家药典委员会制定《中药指纹图谱相似 度计算软件》(2004)，通过谱图处理中的数据剪切，保留20 80分钟之间的峰，建立白芍 药材标准指纹图谱(见图7)，科学的严格的控制药材质量，同时也可以白芍药材优选进一 步提供依据。该指纹图谱测定方法第三要点是在对白芍药材、白芍总苷(中间体)、白芍制 剂指纹图谱相关性研究的基础上，对三者进行指纹图谱研究，并通过软件分析，确定白芍药 材、白芍总苷及制剂指纹谱相关联的特征指纹峰，以及特征峰指纹峰比值范围，建立特征指 纹峰评价标准(见表2)。表2特征指纹峰评价体系表
0039
权利要求
1. 一种白芍制剂的质量控制方法，其特征在于步骤和条件如下(1)芍药苷和芍药内酯苷含量同步测定①液相色谱条件液相色谱条件色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相乙腈(A)-O. 磷 酸水溶液(B)，比例为12 88 ；流速1. OmL/min ；检测波长:230nm ；柱温:25°C ；②对照品溶液的制备对照品溶液的制备取芍药苷约2;3mg，精密称定，置25ml量瓶中，用甲醇定容至刻度， 摇勻；取芍药内酯苷约7. 5mg，精密称定，置25ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇勻；分别 精密吸取芍药苷和芍药内酯苷各anl，置25ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇勻即得；③供试品溶液的制备白芍药材供试品溶液的制备取本品中粉约0. lg，精密称定，置50ml量瓶中，加稀乙醇 约35ml，超声处理30min，取出，放冷，加稀乙醇至刻度，摇勻，经0. 45um的微孔滤膜滤过，即 得；白芍总苷供试品溶液的制备取白芍总苷粉末约0. lg，精密称定，置50ml量瓶中，加稀 乙醇约35ml，超声处理15min，取出，放冷，加稀乙醇至刻度，摇勻，精密吸取5ml，置50ml量 瓶中，加稀乙醇至刻度，摇勻，经0. 45 μ m的微孔滤膜滤过，即得；④测定法测定法精密吸取对照品和供试品溶液各10μ 1，注入高效液相色谱仪，测定；⑤测定结果测定结果白芍药材按干燥品计算，含芍药苷不少于2. 0%，芍药内酯苷不少于0. 5% ； 白芍总苷每克含芍药苷不少于410mg，芍药内酯苷不少于IlOmg ； 白芍制剂每粒含芍药苷不少于l(Mmg，芍药内酯苷不少于30mg ；(2)一种白芍制剂指纹图谱测定①液相色谱条件液相色谱条件色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相乙腈(A)-O. 磷 酸水溶液(B)，梯度洗脱，洗脱程序见表1 ；流速1. OmL/min ；检测波长230nm ；柱温25°C ；②供试品溶液的制备白芍药材供试品溶液的制备取本品中粉约0. lg，精密称定，置50ml量瓶中，加稀乙醇 约35ml，超声处理30min，取出，放冷，加稀乙醇至刻度，摇勻，经0. 45um的微孔滤膜滤过，即 得；白芍总苷供试品溶液的制备取白芍总苷粉末约0. lg，精密称定，置50ml量瓶中，加稀 乙醇约35ml，超声处理30min，取出，放冷，加稀乙醇至刻度，摇勻；精密吸取5ml，置50ml量 瓶中，加稀乙醇至刻度，摇勻，经0. 45 μ m的微孔滤膜滤过，即得；③以芍药苷为参照峰的标准指纹图谱的制定测定法精密吸取上述对照品和供试品溶液各20 μ 1，分别注入高效液相色谱仪，照上 述色谱条件测定，记录色谱图；依据所得的10批样品的指纹图谱，制定标准指纹图谱；④指纹图谱的质量控制测定结果将白芍待测样品指纹图谱与制定的标准指纹图谱进行比较，计算相似度，识 别两者所具有的共同吸收峰的数量，以确定样品是否合格，其中待测品指纹图谱与标准指纹图谱比对，其相似度应为0. 99 1. 00 ；将白芍总苷待测产品指纹图谱与制定的标准指纹图谱进行比较，计算相似度，识别两 者所具有的共同吸收峰的数量，以确定产品是否合格，其中待测品指纹图谱与标准指纹图 谱比对，其相似度应为0. 90 1. 00。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于(1)芍药苷和芍药内酯苷含量同步测定①液相色谱条件液相色谱条件色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相乙腈(A)-O. 磷 酸水溶液(B)，比例为12 88 ；流速1. OmL/min ；检测波长:230nm ；柱温:25°C ；②对照品溶液的制备对照品溶液的制备取芍药苷约23mg，精密称定，置25ml量瓶中，用甲醇定容至刻度， 摇勻；取芍药内酯苷约7. 5mg，精密称定，置25ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇勻；分别 精密吸取芍药苷和芍药内酯苷各2ml，置25ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇勻即得；③供试品溶液的制备白芍药材供试品溶液的制备取本品中粉约0. lg，精密称定，置50ml量瓶中，加稀乙醇 约35ml，超声处理30min，取出，放冷，加稀乙醇至刻度，摇勻，经0. 45 μ m的微孔滤膜滤过， 即得；白芍总苷供试品溶液的制备取白芍总苷粉末约0. lg，精密称定，置50ml量瓶中，加稀 乙醇约35ml，超声处理15min，取出，放冷，加稀乙醇至刻度，摇勻。精密吸取5ml，置50ml量 瓶中，加稀乙醇至刻度，摇勻，经0. 45 μ m的微孔滤膜滤过，即得；④测定法测定法精密吸取对照品和供试品溶液各ΙΟμ 1，注入高效液相色谱仪，测定；⑤测定结果测定结果白芍药材按干燥品计算，含芍药苷不少于2. 0%，芍药内酯苷不少于0. 5% ； 白芍总苷每克含芍药苷不少于410mg，芍药内酯苷不少于IlOmg; 白芍制剂每粒含芍药苷不少于104mg，芍药内酯苷不少于30mg。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于①液相色谱条件液相色谱条件色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相乙腈(A)-O. 磷 酸水溶液(B)，梯度洗脱，流速1. OmL/min ；检测波长:230nm ；柱温:25°C ；②供试品溶液的制备白芍药材供试品溶液的制备取本品中粉约0. lg，精密称定，置50ml量瓶中，加稀乙醇 约35ml，超声处理30min，取出，放冷，加稀乙醇至刻度，摇勻，经0. 45um的微孔滤膜滤过，即 得；白芍总苷供试品溶液的制备取白芍总苷(制剂)粉末约O.lg，精密称定，置50ml量 瓶中，加稀乙醇约35ml，超声处理30min，取出，放冷，加稀乙醇至刻度，摇勻，精密吸取5ml， 置50ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇勻，经0. 45 μ m的微孔滤膜滤过，即得；③以芍药苷为参照峰的标准指纹图谱的制定测定法精密吸取上述对照品和供试品溶液各20 μ 1，分别注入高效液相色谱仪，照上述色谱条件测定，记录色谱图；依据所得的10批样品的指纹图谱，制定标准指纹图谱；④指纹图谱的质量控制测定结果将白芍待测样品指纹图谱与制定的标准指纹图谱进行比较，计算相似度，识 别两者所具有的共同吸收峰的数量，以确定样品是否合格，其中待测品指纹图谱与标准指 纹图谱比对，其相似度应为0. 99 1. 00 ；将白芍总苷待测产品指纹图谱与制定的标准指纹图谱进行比较，计算相似度，识别两 者所具有的共同吸收峰的数量，以确定产品是否合格，其中待测品指纹图谱与标准指纹图 谱比对，其相似度应为0. 90 1. 00。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的含量同步测定方法中，白芍药材中 芍药内酯苷与旁小峰的分离度应大于1. 5。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的白芍药材标准指纹图谱的制定，是 运用国家药典委员会制定《中药指纹图谱相似度计算软件》，通过谱图处理中的数据剪切， 保留20 80分钟之间的峰，建立白芍药材标准指纹图谱。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在对白芍药材、白芍总苷、白芍制剂指纹 图谱相关性研究的基础上，对三者进行指纹图谱研究，并通过软件分析，确定白芍药材、白 芍总苷及制剂指纹谱相关联的特征指纹峰，以及特征峰指纹峰比值范围，建立特征指纹峰 评价标准。
全文摘要
本发明提供了一种白芍总苷单方制剂的质量控制方法，该方法包括采用同一液相色谱条件建立了白芍药材、白芍总苷、白芍制剂中芍药苷和芍药内酯苷的含量同步测定方法；能准确测定芍药苷和芍药内酯苷的含量，控制白芍制剂的质量。该方法对样品的前处理方法简单，特征性成分保留完整，供试品溶液稳定；且精密度较高，重现性良好，具有一定的专属性；所得指纹图谱中各特征峰分离效果良好，白芍药材、白芍总苷、制剂的指纹图谱有良好的相关性；利用指纹图谱相关性研究从新角度建立白芍药材标准指纹图谱，可用于鉴别白芍药材的伪劣，提高白芍制剂在生产过程的可控性，有利于保证白芍制剂的质量稳定和临床疗效。
文档编号A61K36/71GK102138985SQ201110072539
公开日2011年8月3日 申请日期2011年3月22日 优先权日2011年3月22日
发明者俞伟, 周海滨, 夏川川, 张新明, 杨海玲, 江海龙, 饶毅 申请人:宁波立华制药有限公司