一种制备丹酚酸a原料药的方法

文档序号:1206985阅读:154来源:国知局
专利名称:一种制备丹酚酸a原料药的方法
技术领域
本发明属于医药领域,具体地涉及一种从中药丹参中提取丹酚酸A的方法以及包含其的药物制剂的制备方法。
背景技术
丹酌 酸A (Salvianic acid A)是唇形科植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)的干燥根中所含的一种水溶性酚酸类化合物,最早是由中国医学科学院药物研究所黎莲娘教授于 1984 年从丹参中分离得至Ij (Li Lian-Niang, et al. Planta Medica. 1984, 50 227)。近年来,大量的药理试验表明丹酚酸A具有较强的心肌缺血保护(杜冠华,等.药学学报 1995, 30 (10) 731 ;ffang Shou-Bao, et al. Eur. J. Pharmacol. 2009,615 :125)、抗血栓(刘颖琳,等.药学学报 2002,37 (2) 81 ;Fan Hua-Ying, et al. Thromb. Res. 2010,126 el7 ; Huang Z S, et al. J. Thromb. Haemost. 2010,8 :1383)、神经保护(杜冠华,等.药学学 报.1995,30(3) 184 ;ffang XJ, et al. Neurosci. Res. 2005,51 :129)、抗肝纤维化(刘成,等.世界华人消化杂志.1999, 7 (7) 570 ;Lin Yun-Lian, et al. J. Pharm. Pharmacol. 2006,58 933)和防治糖尿病及并发症(杜冠华,等.药学学报,1995,30 (8) :561)等药理活性。丹酚酸A的化学结构如下
OH
2"
I"
7”W9'^WOH
、8”OCOOH
jT2'相比较丹参中其它水溶性酚酸类成份,如丹参素、迷迭香酸、丹酚酸B等在药材中有较高含量和提取分离相对容易等特点,不同产地的丹参药材中丹酚酸A的含量仅约为万分子一到万分之三,且提取分离步骤复杂,生产得率低,故多年以来科研工作者一直致力于找到一种高效的制备高纯度丹酚酸A的方法。如中国专利申请CN1397276、CN1513848、CN1830947A、CN1887849A、CN101480423A中均涉及丹酚酸A的制备,但上述这些专利中的制备方法,存在工艺流程复杂,生产成本高,不适合工业化生产或制备纯度达不到原料药的要求等不足。为了克服现有技术中存在的不足,本申请提供了一种从丹参中提取丹酚酸A的工艺,利用该工艺制备得到的丹酚酸A的纯度可以达到90%以上,可直接作为原料药
发明内容
本发明的一方面提供了一种从丹参中提取丹酚酸A的方法。本发明的另一方面涉及包含丹酚酸A的药物制剂。本发明的又一个方面涉及包含丹酚酸A的药物制剂的制备方法。为解决本发明的技术问题,本发明采用如下技术方案一种从丹参中提取丹酚酸A的方法,其特征在于包括以下步骤(I)将丹参干燥根粉碎,加入提取溶剂进行回流提取,合并提取液,过滤,减压浓缩,得浸膏;向浸膏中加入乙醇,静置过夜,取上清液,浓缩,得浓缩液;(2)将上述浓缩液用酸调节pH值为2. 0-6.0,用有机溶剂萃取,合并萃取液,回收 有机溶剂,得萃取物I ;(3)将萃取物I用溶剂溶解,经大孔树脂色谱柱或聚酰胺树脂色谱柱吸附,用溶剂进行梯度洗脱,收集合并含有丹酚酸A的洗脱液,减压浓缩,得富含丹酚酸A的浓缩液;(4)将富含丹酚酸A的浓缩液,用有机溶剂萃取,合并有机相,回收有机溶剂,得萃取物II,干燥,即得丹酚酸A。在一个优选的实施方式中,步骤(I)中使用的提取溶剂选自水、乙醇、甲醇、丙酮或它们的混合物;提取溶剂的用量为丹参重量的6至12倍;提取温度为60°C至提取溶剂的沸点温度;提取次数为2至4次;每次的提取时间为I至4小时。在另一个优选的实施方式中,步骤(I)中得到的浸膏的密度为I. 05至1.30g/ml之间;向浸膏中加入乙醇,并使乙醇的浓度为40%至80% ;加入的乙醇优选为95%乙醇。在另一个优选的实施方式中,步骤(2)中调节pH值使用的酸选自盐酸、硫酸、磷酸、醋酸或甲酸等;步骤⑵中的有机溶剂选自二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸丙酯或正丁醇等。在另一个优选的实施方式中,步骤(3)中溶解萃取物I的溶剂选自水、乙醇、甲醇、丙酮或它们的混合物;优选为水与乙醇、甲醇或丙酮的混合溶剂;所述大孔吸附树脂类型选自 D101、AB-8、HP-20、HPD-100、X-5、DA-201、DM-301 或 NKA-8 等;优选为 D101、AB_8、HP-20 ;所述聚酰胺树脂选自苯溶性聚酰胺树脂或醇溶性聚酰胺树脂;其目数优选为60至120目;洗脱液选自不同浓度的醇与水的混合溶液或酮与水的混合溶液;优选为不同浓度的乙醇-水、甲醇-水或丙酮-水溶液;富含丹酚酸A的浓缩液的密度在I. 05至I. 20g/ml之间。在另一个优选的实施方式中,步骤(4)中使用的有机溶剂选自二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸丙酯或正丁醇;得到丹酚酸A的干燥方式选自减压干燥、真空干燥、冷冻干燥、喷雾干燥。本发明还涉及以丹酚酸A为原料药制备的药物制剂,所述制剂包括丹酚酸A以及药学上可接受的载体和/或辅料,所述制剂可以为片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、滴丸、微丸、注射剂等药学上可以接受的药物制剂形式。所述包含丹酚酸A的药物制剂可以利用本领域公知的方法制备得到。


附图I为实施例I制备得到的丹酚酸A的高效液相色谱图,其中测定方法为检测系统Aglient 1100 ;色谱柱Agilent Zorbax EclipseXDB_C18 (150 X 4. 6mm, 5 u m);流动相乙腈-磷酸水;进样量:IOiI L ;流速:1. OmL/min ;检测波长288nm ;柱温25°C。本发明取得的有益技术效果是I、本发明前后采用两次有机溶剂萃取第一次用有机溶剂萃取可富集丹酚酸类化合物,使色谱分离步骤的样品量大大减少,同时降低色谱填料的使用量,延长色谱柱的使用寿命;第二次使用有机溶剂萃取(即在色谱分离后)可去除残留在富含丹酚酸A浓缩液中的丹参素、咖啡酸、迷迭香酸、丹酚酸B等极性较大的水溶性酚酸类成分,从而进一步提高最终产品中丹酚酸A的含量。2、本发明的制备工艺流程简单、生产成本低、便于工业化。3、通过本发明的方法制备得到的丹酚酸A的纯度在90%以上,可直接作为原料药使用。
具体实施例方式下面的实施例用于进一步说明本发明,但这并不意味着对本发明的保护范围的任何限制。实施例I将丹参干燥根粉碎,加入6倍的水回流提取4次,每次提取的时间依次为4,3,2,I小时,合并提取液,过滤,减压浓缩,使得浓缩液的比重在I. 20g/ml,加95 %乙醇,边加边搅拌,至乙醇浓度为50 %,静置过夜,取上清液,减压浓缩至无乙醇味,用浓盐酸调节pH值为
4.5,用等量乙酸乙酯萃取4次,合并萃取液,减压回收,得萃取物I。将萃取物I用10%乙醇溶解,上DlOI型大孔树脂色谱柱吸附,分别用10 %、30 %、50 %、70 %、95 %乙醇洗脱,收集含有丹酚酸A的洗脱液,减压浓缩,得比重为1.05g/ml的富含丹酚酸A浓缩液。再次用等量乙酸乙酯萃取4次,合并有机相,减压回收有机溶剂,得萃取物II,减压干燥,即得纯度为93. 5%丹酚酸A。实施例2将丹参干燥根粉碎,加入10倍的50%乙醇回流提取3次,每次提取的时间依次为4,3,2小时,合并提取液,过滤,减压浓缩,使得浓缩液的比重在I. 3g/ml,加95%乙醇,边加边搅拌,至乙醇浓度为70 %,静置过夜,取上清液,减压浓缩至无乙醇味,用浓硫酸调节pH值为4. 0,用等量二氯甲烷萃取4次,合并萃取液,减压回收,得萃取物I。将萃取物I用20%甲醇溶解,上AB-8型大孔树脂色谱柱吸附,分别用20 %、40 %、60 %、80 %、95 %甲醇洗脱,收集含有丹酚酸A的洗脱液,减压浓缩,得比重为1.08g/ml的富含丹酚酸A浓缩液。再次用等量二氯甲烷萃取4次,合并有机相,减压回收有机溶剂,得萃取物II,喷雾干燥,即得纯度为93. 8%丹酚酸A。实施例3将丹参干燥根粉碎,加入12倍的80%甲醇回流提取3次,每次提取的时间依次为4,3,2小时,合并提取液,过滤,减压浓缩,使得浓缩液的比重在I. 05g/ml,加95 %乙醇,边加边搅拌,至乙醇浓度为80 %,静置过夜,取上清液,减压浓缩至无乙醇味,用磷酸调节pH值为2. 5,用等量三氯甲烷萃取4次,合并萃取液,减压回收,得萃取物I。将萃取物I用15%丙酮溶解,上HP-20型大孔树脂色谱柱吸附,分别用15 %、35 %、55 %、75 %、95 %丙酮洗脱,收集含有丹酚酸A的洗脱液,减压浓缩,得比重为I. 10g/ml的富含丹酚酸A浓缩液。再次用等量三氯甲烷萃取4次,合并有机相,减压回收有机溶剂,得萃取物II,冷冻干燥,即得纯度为94. 5%的丹酚酸A。实施例4将丹参干燥根粉碎,加入6倍的水回流提取4次,每次提取的时间依次为4,3,2,I小时,合并提取液,过滤,减压浓缩,使得浓缩液的比重在I. 25g/ml,加95 %乙醇,边加边搅拌,至乙醇浓度为40 %,静置过夜,取上清液,减压浓缩至无乙醇味,用浓盐酸调节pH值为3.0,用等量乙酸乙酯萃取4次,合并萃取液,减 压回收,得萃取物I。将萃取物I用20%乙醇溶解,上60-100目聚酰胺树脂色谱柱吸附,分别用25 %、50 %、75 %、95 %乙醇洗脱,收集含有丹酚酸A的洗脱液,减压浓缩,得比重为I. 15g/ml的富含丹酚酸A浓缩液。再次用等量乙酸乙酯萃取4次,合并有机相,减压回收有机溶剂,得萃取物II,真空干燥,即得纯度为94. 6%的丹酚酸八。实施例5将丹参干燥根粉碎,加入10倍的60%乙醇回流提取3次,每次提取的时间依次为4,3,2小时,合并提取液,过滤,减压浓缩,使得浓缩液的比重在I. 15g/ml,加95%乙醇,边加边搅拌,至乙醇浓度为60 %,静置过夜,取上清液,减压浓缩至无乙醇味,用醋酸调节pH值为2. 5,用等量乙酸丙酯萃取4次,合并萃取液,减压回收,得萃取物I。将萃取物I用25%甲醇溶解,上80-100目聚酰胺树脂色谱柱吸附,分别用30 %、60 %、80 %、95 %甲醇洗脱,收集含有丹酚酸A的洗脱液,减压浓缩,得比重为I. 18g/ml的富含丹酚酸A浓缩液。再次用等量乙酸丙酯萃取4次,合并有机相,减压回收有机溶剂,得萃取物II,喷雾干燥,即得纯度为95. 4%的丹酚酸A。实施例6将丹参干燥根粉碎,加入12倍的30%丙酮回流提取3次,每次提取的时间依次为4,3,2小时,合并提取液,过滤,减压浓缩,使得浓缩液的比重在I. lg/ml,加95%乙醇,边加边搅拌,至乙醇浓度为80%,静置过夜,取上清液,减压浓缩至无乙醇味,用甲酸调节pH值为2.0,用等量正丁醇萃取4次,合并萃取液,减压回收,得萃取物I。将萃取物I用15%丙酮溶解,上100-120目聚酰胺树脂色谱柱吸附,分别用15%、30%、60%、95%丙酮洗脱,收集含有丹酚酸A的洗脱液,减压浓缩,得比重为I. 20g/ml的富含丹酚酸A浓缩液。再次用等量正丁醇萃取4次,合并有机相,减压回收有机溶剂,得萃取物II,冷冻干燥,即得纯度为96. 6%的丹酚酸A。实施例7以丹酚酸A为原料药的片剂丹酚酸A30g
微晶纤维素30g
滑石粉2.0g
维生素CI.Og
硬脂酸镁I.Og
无水乙醇适量
制成1000片取丹酚酸A与微晶纤维素、滑石粉、维生素C混合均匀,加无水乙醇制成软材,过24 目筛,制成颗粒,干燥,加入硬脂酸镁,混匀,压片。实施例8以丹酚酸A为原料药的胶囊剂
丹酚酸A30g
淀粉3 Og
焦亚硫酸氢钠I.Og
硬脂酸镁I.Og
无水乙醇适量
制成1000粒取丹酚酸A与淀粉、微晶纤维素、焦亚硫酸氢钠混合均匀,加无水乙醇制成软材,过24目筛,制成颗粒,干燥,加入硬脂酸镁,混匀,装入胶囊。实施例9以丹酚酸A为原料药的颗粒剂
丹酚酸A30g
淀粉3 Og
亚硫酸氢钠I.Og
硬脂酸镁I.Og
无水乙醇适量
制成1000袋取丹酚酸A与淀粉、亚硫酸氢钠混合均匀,加无水乙醇制成软材,过24目筛,制成颗粒,干燥,加入硬脂酸镁,混匀,装袋。实施例10以丹酚酸A为原料药的口服液剂丹酚酸A30g 蔗糖IOg 亚硫酸氢钠I.Og 对羟基苯甲酸甲酯I.Og
碳酸氢钠适量
注射用水IOOOOmL制成1000支上述组分混匀后,采用口服液常规 制备方法,分装即可。实施例11以丹酚酸A为原料药的滴丸剂
丹酚酸A30g
维生素C0.5g
聚乙二醇6000200g 共制成1000粒取丹酚酸A、维生素C与聚乙二醇6000混合,融溶,滴入低温二甲基硅油中,选丸,除去二甲基硅油,即得。实施例12以丹酚酸A为原料药的微丸剂
丹酚酸A30g 蔗糖5.0g 亚硫酸氢钠I.Og 羟丙甲基纤维素IOg
滑石粉2.0g
共制成1000粒取丹酚酸A、蔗糖、亚硫酸氢钠、羟丙甲基纤维素与滑石粉混合,采用微丸常规制备方法,即得。实施例13以丹酚酸A为原料药的注射剂
丹酚酸A30g 维生素CI.Og 氯化钠30g
碳酸氢钠适量
注射用水IOOOOmL上述组分混匀后,采用注射剂常规制备方法,即可得1000支。
权利要求
1.一种从丹参中提取丹酚酸A的方法,其特征在于包括以下步骤 (1)将丹参干燥根粉碎,加入提取溶剂进行回流提取,合并提取液,过滤,减压浓缩,得浸膏;向浸膏中加入乙醇,静置过夜,取上清液,浓缩,得浓缩液; (2)将上述浓缩液用酸调节pH值为2.0-6. 0,用有机溶剂萃取,合并萃取液,回收有机溶剂,得萃取物I ; (3)将萃取物I用溶剂溶解,经大孔树脂色谱柱或聚酰胺树脂色谱柱吸附,用溶剂进行梯度洗脱,收集合并含有丹酚酸A的洗脱液,减压浓缩,得富含丹酚酸A的浓缩液; (4)将富含丹酚酸A的浓缩液,用有机溶剂萃取,合并有机相,回收有机溶剂,得萃取物II,干燥,即得丹酚酸A。
2.根据权利要求I所述的方法,其中步骤(I)中使用的提取溶剂选自水、乙醇、甲醇、丙酮或它们的混合物;提取溶剂的用量为丹参重量的6至12倍;提取温度为60°C至提取溶剂的沸点温度;提取次数为2至4次;每次的提取时间为I至4小时。
3.根据权利要求I所述的方法,其中步骤(I)中得到的浸膏密度为I.05至I. 30g/ml之间;向浸膏中加入乙醇,并使乙醇的浓度为40%至80%。
4.根据权利要求I所述的方法,其中步骤(2)中调节pH值使用的酸选自盐酸、硫酸、磷酸、醋酸或甲酸;步骤⑵中的有机溶剂选自二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸丙酯或正丁醇。
5.根据权利要求I所述的方法,其中步骤(3)中溶解萃取物I的溶剂选自水、乙醇、甲醇、丙酮或它们的混合物;所述大孔吸附树脂类型选自D101、AB-8、HP-20、HPD-100, X-5、DA-201、DM-301或NKA-8 ;所述聚酰胺树脂选自苯溶性聚酰胺树脂或醇溶性聚酰胺树脂;洗脱液选自醇与水的混合溶液或酮与水的混合溶液;富含丹酚酸A的浓缩液的密度在I. 05至I. 20g/ml 之间。
6.根据权利要求5所述的方法,其中步骤(3)中溶解萃取物I的溶剂为水与乙醇、甲醇或丙酮的混合溶剂;所述大孔吸附树脂类型为D101、AB-8、HP-20 ;所述聚酰胺树脂的目数为60至120目;洗脱液为乙醇-水、甲醇-水或丙酮-水溶液。
7.根据权利要求I所述的方法,其中步骤(4)中使用的有机溶剂选自二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸丙酯或正丁醇;萃取物II的干燥方式选自减压干燥、真空干燥、冷冻干燥、喷雾干燥。
8.根据权利要求I至7任意一项所述的方法,其中得到的丹酚酸A的纯度在90%以上。
全文摘要
本发明涉及一种丹酚酸A原料药及其药物制剂的制备方法。本发明是采用唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根为原料,经过粉碎、溶剂提取、有机溶剂萃取、大孔树脂或聚酰胺树脂色谱柱层析、有机溶剂萃取、干燥等工序,最终获得丹酚酸A。较以往丹酚酸A制备方法比,该方法具有工艺流程简单,成本低廉,产品纯度高,工业化适应性好等特点。以该工艺生产制备的丹酚酸A可作为原料药制备包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、滴丸、微丸、注射剂等药学上可以接受的药物制剂形式。
文档编号A61P3/10GK102731308SQ20111008392
公开日2012年10月17日 申请日期2011年4月2日 优先权日2011年4月2日
发明者张维库, 张莉, 杜冠华, 杨海光, 王夙博, 田硕, 赵莹 申请人:中国医学科学院药物研究所
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