专利名称：水包油乳液的制备方法
技术领域：
本发明涉及改进的用于生产水包油乳液(具体地，包含角鲨烯的亚微米水包油乳液)的方法。
背景技术：
本发明涉及用于生产水包油乳液的方法。生产方法公开在Ott等人，2000(The Adjuvant MF59: A 10-year Perspective. Vaccine Adjuvants: Preparationmethods and Research Protocols [Methods in Molecular medicine,第 42 卷，弟 12章，第 211-228 页]，Ott 等人，1995 (MF59 - Design and Evaluation of a Safe andPotent Adjuvant for Human Vaccines: Vaccine Design, the Subunit and AdjuvantApproach [Pharmaceutical Biotechnology 第6卷]Powel I 和 Newman 编，W006/10011OA I,以及 Lidgate 等人,1992 (Sterile Filtration of a Parenteral Emulsion.Pharmaceuticals Research 9(7): 860-863)。水包油乳液可以作为佐剂用于疫苗/免疫原性组合物中。由于这些乳液被施用给人类，因而所述乳液必须是无菌的。用作佐剂的水包油乳液是亚微米乳液，且油微滴足够小以穿过0. 2Mffl过滤器进行无菌过滤。本发明的ー个目的是，提供一种用于生产亚微米水包油乳液的方法。
发明内容
本发明涉及一种用于生产水包油乳液的方法，具体地，涉及ー种用于生产水包油乳液的方法，所述方法包括下述步骤a)将表面活性剂溶解在一定体积的水或水溶液中，以生产表面活性剂溶液；和b)在大于所述表面活性剂溶液的体积的一定体积的水或水溶液中稀释所述表面活性剂溶液，以生产水相。
具体实施例方式通过将油相(其包含ー种或多种油和任选的ー种或多种表面活性剂)与包含表面活性剂的水相进行组合和混合，制备水包油乳液。所述表面活性剂允许形成稳定的乳液，即不会在短时期内分离成油相和水相的乳液。发明人已经证实，通过将表面活性剂溶解在小体积的液体中，然后将得到的表面活性剂溶液加入更大体积的液体中，它们会确保所述表面活性剂在水相中的完全溶解。如果直接将表面活性剂加入大体积的液体中，所述表面活性剂会聚集在包含大体积液体的容器(例如，罐)的底部，使它难以溶解。如果表面活性剂保持在罐的底部，可能影响所述乳液的组成和稳定性。因此，本发明提供了一种用于生产水包油乳液的方法，所述方法包括下述步骤a)将表面活性剂溶解在一定体积的水或水溶液中，以生产表面活性剂溶液；和b)在大于所述表面活性剂溶液的体积的一定体积的水或水溶液中稀释所述表面活性剂溶液，以生产水相。当生产大体积的水包油乳液并因而使用大体积的水相时，本发明的方法是特别有用的。因此，在本发明的ー个具体实施方案中，提供了如本文所述的方法，其中生产的水包油乳液的体积为大于约 10、15、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、200、250、300、350、400、450、500 或 550 升(L)，例如为 50L、280L 或 560L 規模。通过任意方式，例如倾倒，可以将表面活性剂溶液加入大于所述表面活性剂溶液的体积的一定体积的水或水溶液中。在ー个具体实施方案中，使用泵、尤其是蠕动泵或膜泵，将表面活性剂溶液加入大于所述表面活性剂溶液的体积的一定体积的水或水溶液中。当使用大体积的水相时，本发明的方法是特别有用的，因而，在一个实施方案中，提供了如本文所述的方法，其中所述水相占水包油乳液的约80%至约98%、约85%至约97%、89%至96%、或约90%至95%，例如约90%、或约95% (v/v)。本发明中的表面活性剂溶液[即步骤a)的产物]的体积小于在步骤b)中用于稀·释其的水或水溶液的体积。因此，在一个实施方案中，所述表面活性剂溶液占水相总体积的约0. 001%至约40%、约0. 01%至约20%、约0. 02%至约15%、约0. 03%至约10%、约0. 04至约5%，例如 0. 1,0. 2,0. 3,0. 4,0. 5,0. 6,0. 7,0. 8,0. 9、1、2、3、4、5、6、7、8、9 或 10% (v/v)。将所述表面活性剂溶解在水或水溶液中。具体地，所述水可以是注射用水(WFI)，即适合肠胃外使用的水。或者，将所述表面活性剂溶解在水溶液(诸如缓冲液)中。所述缓冲液也适用于肠胃外使用。合适的缓冲液是本领域技术人员众所周知的，包括、但不限于磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、Tris缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、马来酸盐缓冲液或硼酸盐缓冲液。在ー个具体实施方案中，所述缓冲液选自磷酸盐缓冲盐水(PBS)、改进的PBS (PBS-mod)和柠檬酸盐缓冲液。如果在步骤a)中使用缓冲液，那么，在ー个具体实施方案中，所述缓冲液可以相对于在水相中的终浓度进行浓缩，例如，所述缓冲液可以浓缩约5-25倍，例如浓缩5、10、
15、20、25、30倍。如果在步骤a)中使用水，那么，在ー个具体实施方案中，使用缓冲液来稀释表面活性剂溶液，所述缓冲液可以是或不是浓缩的。在本发明的ー个具体实施方案中，提供了一种用于生产水包油乳液的方法，所述方法包括下述步骤a)将表面活性剂聚氧こ烯脱水山梨糖醇单油酸酷)溶解在一定体积的浓缩缓冲液(例如PBS-mod)中，以生产表面活性剂溶液；和b)在大于所述表面活性剂溶液的体积的一定体积的注射用水(WFI)中稀释所述所述表面活性剂溶液，以生产水相。在本发明的ー个具体实施方案中，提供了一种用于生产水包油乳液的方法，所述方法包括下述步骤a)将表面活性剂(例如聚氧こ烯脱水山梨糖醇单油酸酷)溶解在一定体积的WFI中，以生产表面活性剂溶液；和b)在大于所述表面活性剂溶液的体积的一定体积的缓冲液(例如柠檬酸盐缓冲液)、任选地浓缩缓冲液中稀释所述表面活性剂溶液，以生产水相。在一个实施方案中，可以在步骤a)和b)中使用缓冲液，在ー个具体实施方案中，在步骤a)和b)中使用相同的缓冲液。在这样的情况下，所述缓冲液通常不是浓缩的；但是，在一个实施方案中，在步骤a)中的缓冲液是浓缩的，而在步骤b)中的缓冲液是稀释的缓冲液。
合适的表面活性剂是技术人员众所周知的，包括，但不限干聚氧こ烯脱水山梨糖醇单油酸酯(吐温80、聚山梨酯80)、脱水山梨糖醇三油酸酯(司盘85)、磷脂酰胆碱(卵磷脂)和辛苯昔醇-9 (TRITON X-100)。在本发明的ー个具体实施方案中，在步骤a)中使用的表面活性剂是聚氧こ烯脱水山梨糖醇单油酸酯(吐温80、聚山梨酯80)。在本发明的一个实施方案中，要混合进水相中的表面活性剂的量是这样的量其使所述表面活性剂在所述水包油乳液中的终浓度为约0. I至约I. 5%、例如约0. 5%至约1%(w/v)。应当指出，可以将ー种或多种其它的表面活性剂加入油相中，例如，可以将脱水山梨糖醇三油酸酯加入油相(其包含例如角鲨烯)中，然后将油相和水相混合到一起。在本发明的另ー个实施方案中，提供了如本文所述的方法，所述方法进ー步包括步骤c):将所述水相[即步骤b)的产物]引 入混合装置中。本文使用的术语“混合装置”是指，适用于混合油相和水相以形成乳液的装置。在本发明的ー个具体实施方案中，所述混合装置是高剪切混合装置。合适的高剪切混合装置是技术人员已知的，包括但不限于高速桨叶勻衆器、直列勻衆器(inline homogenizer)、胶体磨或声谱显示仪(sonolator)。在本发明的ー个具体实施方案中，所述混合装置是高压匀浆器。合适的高压匀浆器是技术人员已知的，包括但不限于固定几何形状的微射流机(microfluidiser)或可变几何形状的高压勻衆器。在本发明的另ー个实施方案中，提供了如本文所述的方法，所述方法进ー步包括步骤d):将油相引入本文所述的混合装置中。在本发明的ー个具体实施方案中，水相的引入[步骤C)]和油相的引入[步骤d)]基本上同时地进行。在ー个具体实施方案中，通过在含有油相和/或水相的罐中施加正压，进行步骤c)和/或d)。所述油相可以包含ー种或多种可代谢的油。在ー个具体实施方案中，所述油相包含角鲨烯或角鲨烷，尤其是角鲨烯。在本发明的另ー个实施方案中，所述油相包含母育酚，在本发明的ー个具体实施方案中，所述油相包含Ct -生育酹。在本发明的另ー个实施方案中，所述油相包含角鲨烯和a-生育酚。所述油相可以另外包含本文所述的表面活性剤。在本发明的ー个具体实施方案中，所述油相包含脱水山梨糖醇三油酸酯(司盘85)，且在本发明的ー个具体实施方案中，所述油相包含角鲨烯和脱水山梨糖醇三油酸酯(司盘85)。在本发明的另ー个实施方案中，本文所述的水相和油相以约90:10或约95:5 (v/V百分比)的比例引入。在本发明的另ー个实施方案中，提供了如本文所述的方法，所述方法进ー步包括步骤e):混合所述油相和水相，以形成水包油乳液。在步骤e)中混合以后，如果在例如高剪切混合装置中混合的话，所述水包油乳液可以是粗的水包油乳液。为了减小水包油乳液中的油微滴的尺寸使得它适合无菌过滤，例如，可以在例如高压匀浆器中进ー步加工得自步骤e)的乳液。因此，在本发明的另ー个实施方案中，提供了本文所述的方法，所述方法进ー步包括步骤f):对步骤e)的水包油乳液进行高压匀浆化，以形成亚微米水包油乳液。通过改变乳液穿过高压匀浆器的次数，技术人员可以实现所需的油微滴尺寸，因为油微滴大小在每个循环以后都会减小。因此，在本发明的一个实施方案中，提供了如本文所述的方法，其中对所述乳液进行高压匀浆化[步骤f)] 1、2、3、4、5、6、7、8或更多次。在本发明的另ー个实施方案中，所述高压匀浆化是在约10000至约20000、约12000至约18000、约14000至约16000或约15000±1000 psi的压カ进行。在高压匀浆化过程中，所述水包油乳液的温度通常升高，因而，在本发明的ー个实施方案中，在对所述乳液进行高压匀浆化一次或多次以后，但是至少在最后一次以后，将所述水包油乳液冷却至约15°C至约30°C、约16°C至约29°C、约17°C至约28°C、约16°C至约27°C、或约 16°C 至约 28 °C。在每种情况下，本发明人在本文中意图任选地用术语“由……组成”、“由……构成”分别替代术语“包含”、“包括”。词语“基本上”不排除“完全”，例如“基本上不含有” Y的组合物可以完全不含有Y。在必要吋，词语“基本上”可以从本发明的定义中省棹。与数字值z有关的术语“约”是指z±5或10%。现在将通过參考下述的非限制性实施例来进ー步描述本发明。
实施例I. I水相制备
在使用之前，用氮(N2)惰性化用于生产水相(称作罐I)和用于乳液循环(circuit)(称作罐2)的不锈钢罐。分2步制备水相
a.将聚山梨酯80溶解于装在瓶子或塑料袋中的浓缩的等渗的磷酸盐缓冲盐水溶液(PBS-mod缓冲液20 X [參见下面表I])中。b.将注射用水(WFI)装入不锈钢罐(罐I)中，并在使用前用N2惰性化。就小规模エ艺(最多70L)而言，然后通过在顶板中的开ロ，将PBS-mod缓冲液20 x/聚山梨酯80混合物倒入该罐中，在罐I内装的WFI中稀释，并搅拌至达到均质。或者，在更大的规模(超过70L)，在放入罐I中的约5L水中，进ー步稀释在磷酸盐缓冲盐水溶液中稀释的聚山梨酯80，然后用蠕动泵将稀释的溶液抽吸至罐I中。在该情况下，为了得到可抽吸的更低粘度的溶液，在WFI中的稀释是必要的。表 I: PBS-mod 缓冲液(20 X 浓缩)。
权利要求
1.一种用于生产水包油乳液的方法，所述方法包括下述步骤a)将表面活性剂溶解在一定体积的水或水溶液中，以生产表面活性剂溶液；和b)在大于所述表面活性剂溶液的体积的一定体积的水或水溶液中稀释所述表面活性剂溶液，以生产水相。
2.根据权利要求I所述的方法，其中所述表面活性剂溶液的体积占水相总体积的约.0.001% 至约 40%、约 0. 01% 至约 20%、约 0. 02% 至约 15%、约 0. 03% 至约 10%、约 0. 04 至约 5%、或约 0. 05% (v/v) o
3.根据权利要求I或2所述的方法，其中要生产的水包油乳液的体积为大于约10、15、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、200、250、300、350、400、450、500或550 升(L)，例如为 50L、280L 或 560L 規模。
4.根据任ー项前述权利要求所述的方法，其中使用泵、尤其是蠕动泵或膜泵，将所述表面活性剂溶液加入大于所述表面活性剂溶液的体积的一定体积的水或水溶液中。
5.根据任ー项前述权利要求所述的方法，其中所述水相占所述水包油乳液的约80%至约98%、约85%至约97%,89%至96%、或约90%至95%,例如约90%或约95% (v/v)。
6.根据任ー项前述权利要求所述的方法，其中所述表面活性剂是聚氧こ烯脱水山梨糖醇单油酸酯(吐温80/聚山梨酯80)。
7.根据任ー项前述权利要求所述的方法，其中步骤a)的水溶液包括缓冲液，任选为浓缩缓冲液。
8.根据权利要求7所述的方法，其中在步骤b)中使用了水。
9.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中在步骤a)中使用了水。
10.根据权利要求9所述的方法，其中步骤b)中的水溶液包括缓冲液，任选为浓缩缓冲液。
11.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中在步骤a)和步骤b)中使用水溶液，该水溶液包括缓冲液。
12.根据权利要求7-11中任一项所述的方法，其中所述缓冲液或浓缩缓冲液包括柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液。
13.根据权利要求7-11中任一项所述的方法，其中所述缓冲液或浓缩缓冲液是磷酸盐缓冲盐水(PBS)溶液。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述PBS是改进的PBS。
15.根据任ー项前述权利要求所述的方法，所述方法进ー步包括步骤c):将所述水相引入混合装置中。
16.根据权利要求15所述的方法，所述方法包括步骤d):将油相引入混合装置中。
17.根据权利要求16所述的方法，其中步骤c)和d)基本上同时地进行。
18.根据权利要求15-17中任一项所述的方法，其中通过在含有油相和/或水相的罐中施加正压，进行步骤c)和或d)。
19.根据权利要求16-18中任一项所述的方法，其中以约90:10(v/v百分比)的比例引入所述水相和油相。
20.根据权利要求15-19中任一项所述的方法，其中所述混合装置是高剪切匀浆器或高压匀浆器。
21.根据权利要求16-20中任一项所述的方法，所述方法包括步骤e):混合所述油相和水相，以形成水包油乳液。
22.根据权利要求21所述的方法，所述方法进ー步包括步骤f):对步骤e)的水包油乳液进行高压匀浆化，以形成亚微米水包油乳液。
23.根据权利要求22所述的方法，其中步骤f)进行2、3、4、5或6次。
24.根据权利要求22或23所述的方法，其中在约10000至约20000、约12000至约18000、约14000至约16000、或约15000±1000 psi，进行所述高压匀浆化。
25.根据权利要求22-24中任一项所述的方法，其中在每次进行步骤f)以后，将水包油亚微米乳液冷却至约15°C至约30°C、约16°C至约29°C、约17°C至约28°C、约16°C至约27°C、或约 16°C 至约 28 °C。
26.根据权利要求16-25中任一项所述的方法，其中所述油相包含角鲨烯。
27.根据权利要求16-26中任一项所述的方法，其中所述油相包含表面活性剤。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述表面活性剂是脱水山梨糖醇三油酸酯(司盘 85)。
29.根据权利要求16-26中任一项所述的方法，其中所述油相包含母育酚。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述母育酚是a-生育酚。
全文摘要
本发明提供一种用于生产水包油乳液的方法，所述方法包括下述步骤a)将表面活性剂溶解在一定体积的水或水溶液中，以生产表面活性剂溶液；和b)在大于所述表面活性剂溶液的体积的一定体积的水或水溶液中稀释所述表面活性剂溶液，以生产水相。
文档编号A61K31/00GK102970976SQ201180028601
公开日2013年3月13日 申请日期2011年6月8日 优先权日2010年6月10日
发明者J.科龙瓦尔 申请人:葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司