专利名称：地不容总生物碱提取纯化工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物碱提取技术领域，特别是一种地不容总生物碱提取纯化工艺。
背景技术：
地不容为防己科植物地不容(SepHaniadelavayi Diels)的块根。主要分布于云南及四川等地。具有清热解毒、消痰、截疟、止痛的功用，主要治疗痈疽疮肿、喉闭、疟疾、胃痛等症。生物碱(alkaloid)是指中药中一类含氮杂环的有机物，具有碱性和显著的生理 活性。目前从植物中分离出的生物碱有五六千种，一些生物碱因其抗癌抗肿瘤及低毒性、低成本成为近年来研究的热点。科学高效地从中药植物中提取、纯化其中的生物碱成分是提高中药质量的核心问题，因此生物碱提取与纯化技术成为人们关注的焦点。据现代研究报道，地不容总生物碱具有消肿止痛，抗肿瘤的作用，因此对其制备工艺研究具有重要的现实意义。现有提取工艺中并没有针对地不容中总生物碱的提取方法。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种地不容总生物碱提取纯化工艺。本发明的目的通过以下技术方案来实现地不容总生物碱提取纯化工艺，它包括提取、分离和纯化三个步骤，其中所述的提取包括以下子步骤al、称取地不容药材粗粉，先用重量为地不容药材0. 5 I倍量的0. I 2%的稀酸溶液进行溶胀，溶胀时间为I 3h ;a2、溶胀完毕后，将药材逐层放入渗漉筒中，缓慢加入重量为地不容药材3 5倍量的0. I 2%的稀酸溶液浸溃10 15h ；a3、浸溃完毕后开始渗漉，渗漉速度为3 7ml/min，当渗漉至渗漉液与碘化铋钾试剂反应无沉淀产生时，停止渗漉；a4、用浓氨水调渗漉液pH值至9 10，产生大量沉淀，抽滤，得沉淀于真空干燥器中在30 50°C下干燥至恒重，得到地不容总生物碱；所述的分离包括以下子步骤bl、将大孔树脂用适量无水乙醇浸泡20 30h，倾倒掉上层乙醇，然后湿法装柱，并不时用玻璃棒搅拌以除去气泡，再用树脂体积的两至三倍的乙醇与蒸馏水反复洗脱，以除去树脂中的残留物，至乙醇与蒸馏水混合不呈白色浑浊为止，再用大量蒸馏水以同样流速洗至流出液无醇味；b2、称取提取得到的地不容总生物碱，再用重量为地不容总生物碱200/3倍量的
0.5%的稀酸溶液溶解，然后用浓氨水调pH = 5，过滤除去不溶物向滤液中加入蒸馏水，得到异粉防己碱浓度为0. 400mg/ml 0. 433mg/ml的地不容样品液；b3、将地不容样品液按照I 5ml/min的吸附流速通过已处理好的装有大孔吸附树酯吸附柱进行动态吸附；所述的纯化操作方法为吸附好后依次用体积为地不容样品液25/8倍量的蒸馏水和体积为地不容样品液45/8倍量的百分含量为75%的乙醇溶液以I 5ml/min的流速进行洗脱，收集洗脱液，将洗脱液蒸干得到干膏。所述的大孔吸附树酯为D101、AB-8、S-8、D140、D141、HPD 系列、D1300、X_5、Sp825、D312、D20UNKA9大孔吸附树酯中的任意一种。所述的稀酸为稀盐酸或稀硫酸。本发明具有以下优点本发明一次可提取地不容中所有生物碱，并且提取率高，有利于宝贵的天然资源的综合利用；本发明所选用的大孔吸附树脂对生物碱的吸附能力强，洗脱容易、方便，洗脱率高，纯度高；本发明工艺步骤少，操作简单，方便应用于实际生产。
下面通过实验进一步说明本发明的效果I实验仪器与材料I. I实验药材地不容，为防己科植物地不容(SepHnama delavayi Diels)的块根。I. 2主要仪器及试剂仪器安捷伦1100高效液相色谱仪，卡玛格全自动双波长薄层扫描仪，Gilson分析制各多动能高效液相色谱仪，日本岛津IR-420红外分光光度计，美国贝克曼CS-700全自动生化测定仪，日本岛津RF-510映光光度计，瑞士 PAG-160电子天平，DZF-6021型真空干燥器，烧杯，量筒，胶头滴管等。材料及试剂地不容药材，无水乙醇，95%乙醇，氨水，浓盐酸，浓硫酸，以上试剂均为AR级。色谱甲醇，色谱乙腈，蒸馏水。2实验方法及结果2. I地不容总生物碱的提取工艺研究2. I. I异粉防己碱含量测定方法异粉防己碱对照品液的制备精密称取在真空干燥器中干燥至恒重的异粉防己碱对照品2mg,置于IOml容量瓶中，加无水乙醇定容至刻度，超声IOmin充无水乙醇至刻度,摇匀，即得浓度为0. 2mg/ml的异粉防己碱对照品溶液。2. I. 2标准曲线的测定精密吸取对照品溶液2111，4111，6111，8111，10111，12111进样，记录色谱图，测定峰面积，结果见表I。以峰面积对进样量进行回归，得回归方程。色谱柱DikmaDiamOnsil cl8250 X 4. 6mm, 5um柱温30°C流动相乙腈磷酸盐缓冲液=6 4流速1.Oml/min测定波长210nm理论塔板数不得低于1500表I异粉防己碱对照品测定结果
权利要求
1.地不容总生物碱提取纯化工艺，其特征在于它包括提取、分离和纯化三个步骤，其中所述的提取包括以下子步骤 al、称取地不容药材粗粉，先用重量为地不容药材O. 5 I倍量的O. I 2%的稀酸溶液进行溶胀，溶胀时间为I 3h ; a2、溶胀完毕后，将药材逐层放入渗漉筒中，缓慢加入重量为地不容药材3 5倍量的.O.1 2%的稀酸溶液浸溃10 15h ； a3、浸溃完毕后开始渗漉，渗漉速度为3 7ml/min，当渗漉至渗漉液与碘化铋钾试剂反应无沉淀产生时，停止渗漉； a4、用浓氨水调渗漉液pH值至9 10，产生大量沉淀，抽滤，得沉淀于真空干燥器中在.30 50°C下干燥至恒重，得到地不容总生物碱； 所述的分离包括以下子步骤 bl、将大孔树脂用适量无水こ醇浸泡20 30h，倾倒掉上层こ醇，然后湿法装柱，并不时用玻璃棒搅拌以除去气泡，再用树脂体积的两至三倍的こ醇与蒸馏水反复洗脱，以除去树脂中的残留物，至こ醇与蒸馏水混合不呈白色浑浊为止，再用大量蒸馏水以同样流速洗至流出液无醇味； b2、称取提取得到的地不容总生物碱，再用重量为地不容总生物碱50 70倍量的.O.1 2%的稀酸溶液溶解，然后用浓氨水调pH=5，过滤除去不溶物向滤液中加入蒸馏水，得到异粉防己碱浓度为O. 400mg/ml O. 433mg/ml的地不容样品液； b3、将地不容样品液按照I 5ml/min的吸附流速通过已处理好的装有大孔吸附树酯吸附柱进行动态吸附； 所述的纯化操作方法为吸附好后依次用体积为地不容样品液2 4倍量的蒸馏水和体积为地不容样品液5 7倍量的百分含量为75%的こ醇溶液以I 5ml/min的流速进行洗脱，收集洗脱液，将洗脱液蒸干得到干膏。
2.根据权利要求I所述的地不容总生物碱提取纯化工艺，其特征在于它包括提取、分离和纯化三个步骤，其中所述的提取包括以下子步骤 al、称取地不容药材粗粉，先用重量为地不容药材O. 5倍量的O. 5%的稀酸溶液进行溶胀，溶胀时间为2h; a2、溶胀完毕后，将药材逐层放入渗漉筒中，缓慢加入重量为地不容药材4倍量的O. 5%的稀酸溶液浸溃12h ； a3、浸溃完毕后开始渗漉，渗漉速度为5ml/min，当渗漉至渗漉液与碘化铋钾试剂反应无沉淀产生时，停止渗漉； a4、用浓氨水调渗漉液pH值至9 10，产生大量沉淀，抽滤，得沉淀于真空干燥器中在.40°C下干燥至恒重，得到地不容总生物碱； 所述的分离包括以下子步骤 bl、将大孔树脂用适量无水こ醇浸泡24h，倾倒掉上层こ醇，然后湿法装柱，并不时用玻璃棒搅拌以除去气泡，再用树脂体积的两至三倍的こ醇与蒸馏水反复洗脱，以除去树脂中的残留物，至こ醇与蒸馏水混合不呈白色浑浊为止，再用大量蒸馏水以同样流速洗至流出液无醇味； b2、称取提取得到的地不容总生物碱，再用重量为地不容总生物200/3倍量的O. 5%的稀酸溶液溶解，然后用浓氨水调pH=5，过滤除去不溶物向滤液中加入蒸馏水，得到异粉防己碱浓度为O. 433mg/ml的地不容样品液； b3、将地不容样品液按照3ml/min的吸附流速通过已处理好的装有大孔吸附树酯吸附柱进行动态吸附； 所述的纯化操作方法为吸附好后依次用体积为地不容样品液25/8倍量的蒸馏水和体积为地不容样品液45/8倍量的百分含量为75%的こ醇溶液以3ml/min的流速进行洗脱，收集洗脱液，将洗脱液蒸干得到干膏。
3.根据权利要求I或2所述的地不容总生物碱提取纯化工艺，其特征在于所述的大孔吸附树酯为 D101、AB-8、S-8、D140、D141、HPD 系列、D1300、X_5、Sp825、D312、D201、NKA9大孔吸附树酯中的任意ー种。
4.根据权利要求I或2所述的地不容总生物碱提取纯化工艺，其特征在于所述的稀酸为稀盐酸或稀硫酸。
全文摘要
本发明公开了地不容总生物碱提取纯化工艺，它包括以下步骤提取，将地不容药材粗粉用稀酸渗漉，用浓氨水调渗漉液pH值，得沉淀于真空干燥器中干燥至恒重，得到地不容总生物碱；分离，将地不容总生物碱制成地不容样品液通过已处理好的装有大孔吸附树酯吸附柱进行吸附；纯化，吸附好后依次用蒸馏水和75%的乙醇溶液进行洗脱，收集洗脱液，将洗脱液蒸干得到干膏。本发明的有益效果是一次可提取地不容中所有生物碱，并且提取率高，有利于宝贵的天然资源的综合利用；选用的大孔吸附树脂对生物碱的吸附能力强，洗脱容易、方便，洗脱率高，纯度高；工艺步骤少，操作简单，方便应用于实际生产。
文档编号A61P35/00GK102631414SQ20121012457
公开日2012年8月15日 申请日期2012年4月25日 优先权日2012年4月25日
发明者彭腾 申请人:成都煜泉绿健科技有限公司