专利名称：一种微波辅助提取黄芪皂苷和黄芪多糖的工艺的制作方法
技术领域：
本发明提供了一种微波辅助提取黄芪皂苷和黄芪多糖的工艺。
背景技术：
黄苗为豆科多年生草本蒙古黄苗Astragalus membranaceus (Fisch. )Bge. var.mongholicus (Bge. ) Hsiao 或荚膜黄苗 Astragalus m embranaceus (Fisch.)的干燥根。经查阅相关文献，直到目前为止，对于黄芪提取工艺的研究主要集中在单提黄芪皂苷或黄芪多糖，对药材的合理化利用造成极大的浪费。目前检索的专利文献和非专利文献中有报道微波单独提取黄芪多糖或黄芪皂苷的文献，其中选择的溶剂和参数有区别，如胡如桂等(微波水提黄芪皂苷的工艺研究[J].时珍国医国药，2007，18 (5) :1074-1075)，利用微波辅助提取技术，对黄芪中黄芪皂苷的提取，以水为溶剂，得到的最佳提取工艺为黄芪60目，微波功率800W，20倍量水提取2次，15min/次，得到的黄芪皂苷的含量为3. 497mg/g ;龚盛昭等(微波提取黄芪皂苷的工艺研究[J]，中成药，2005，28 (8) :889-891 )，利用微波辅助提取技术，对黄芪中黄芪甲苷的提取，以95%的乙醇为溶剂，得到的最佳提取工艺为取黄芪粉50g，加入350mL 95%乙醇，用微波辐射30s，间隔Imin后再辐射30s，重复间隔辐射至总辐射时间为4min，过滤。按同样条件重复提取I次。产率2. 42%。许海燕等(微波提取黄芪中多糖的工艺研究[J]，中草药，2008. 39 (10) :1496-1499)，对黄芪中黄芪多糖的提取，以水为提取溶剂，得到的最佳提取条件为控温70°C，提取3次，每次lOmin，所得黄芪多糖的提取率为9. 44%。龚盛昭等(微波辅助提取黄芪多糖的工艺研究[J]，华南理工大学学报(自然科学版)，2004，32 (8)93-96)，对黄芪中黄芪多糖的提取，以pH=9的碱水为提取溶剂，液料质量比为12 I ;用饱和石灰水调节pH=9 ;微波功率300W时提取2次，每次提取lOmin，提取液真空浓缩后，加入乙醇使多糖沉淀，过滤，沉淀用乙醇洗涤多次，真空干燥后即得黄芪粗多糖，产率为14. 6%o目前检索的文献均是单独提取黄芪皂苷或黄芪多糖，还没有文献报道同时提取这两类有效成分的报道。
发明内容
本发明的技术方案是提供了一种微波辅助提取黄芪皂苷和黄芪多糖的工艺。本发明提供了一种微波辅助提取黄芪皂苷和黄芪多糖的工艺，它包括如下步骤a、称取黄芪药材；b、将药材置微波提取装置中，微波功率500W-900W，温度70°C，共提取3次，第I次加50%-90%的乙醇，提取10min-30min ;第2次加50%_90%乙醇，提取10min_30min ’第3次加蒸懼水，提取20min-40min ；C、将第1、2次的乙醇提取液浓缩，除去乙醇，再加入第3次的水提取液，混合，浓缩，即得本发明黄芪皂苷和黄芪多糖提取物。
其中，所述的黄芪药材为药材饮片或黄豆粒大小的饮片，或过1-3号筛的药粉。其中，a步骤所述的药材黄芪粉碎至24目以下。其中，b步骤所述的乙醇或水的用量为药材重量的10-14倍。其中，b步骤所述的乙醇为70%的乙醇。其中，b步骤所述的微波功率500-700W。本发明提取工艺的具体优点如下I、黄芪药材的有效物质利用率大大提高。本发明通过一套试验方案，同时提取黄 芪药材中的有效物质黄芪皂苷和黄芪多糖，大大提高了黄芪药材的有效物质利用率，并且通过此方法得到的黄芪皂苷和黄芪多糖的提取率都可稳定在90%以上。2、黄芪多糖的提取率和产率大大提高。本发明方法得到的黄芪多糖的含量可稳定在260mg/g左右。杨义芳等(申请号200510026889. 1，发明名称微波提取黄芪多糖的方法)在实施例2中得到黄芪多糖的产率在20. 4%，本发明方法所得黄芪多糖的产率在26%左右，以水提5次黄芪多糖的含量为100%计，测得本发明方法得到的黄芪多糖的提取率均可稳定在91%左右。3、黄芪皂苷的提取率大大提高，产率相对提高。本发明方法得到的黄芪皂苷含量可稳定在llmg/g左右，黄芪皂苷的提取率可稳定在95%左右。王鑫等(黄芪提取工艺研究[J],中国实验方剂学，2010，16 (9):17-18)，以乙醇回流的传统方法进行提取，仅以黄芪皂苷得率为指标性成分，得到的黄芪皂苷的含量为1. 342mg/g。而胡如桂等(微波水提黄芪皂苷的工艺研究[J].时珍国医国药，2007，18 (5):1074-1075)，以微波辅助方法进行提取，仅以黄芪皂苷得率为指标性成分，得到的黄芪皂苷的含量为3. 497mg/g。龚盛昭等(微波提取黄芪皂苷的工艺研究[J]，中成药，2005，28 (8) :889-891 )，利用微波辅助提取技术，对黄芪中黄芪甲苷的提取，测得产率，以黄芪甲苷计，为2. 42%。虽然该文献报道的黄芪皂苷的产率较高，但未做药材有效成分提取率的考查。4、黄芪药材的提取时间缩短。本发明最优提取方案为不浸泡，共提取3次，每次提取30min，第4次40min，得到黄芪皂苷的含量为llmg/g左右，提取率为95%左右，而陈涛等(黄芪药材的微波提取工艺研究[J].时珍国医国药，2009，20 (2):349-350)，利用微波辅助提取技术，仅仅对黄芪中黄芪甲苷的提取，以水为溶剂，得到的最佳提取工艺为黄芪先浸泡6h后，然后提取3次，每次10倍量水、90min。5、提取工艺操作大大简化。同时要用到黄芪皂苷和黄芪多糖中药复方，就要分别提取黄芪皂苷和黄芪多糖，本发明方法不需要对提取溶剂进行PH处理。如龚盛昭等(微波辅助提取黄芪多糖的工艺研究[J]，华南理工大学学报(自然科学版)，2004，32 (8):93-96),对黄芪中黄芪多糖的提取，以PH=9的碱水为提取溶剂，产率也仅为14. 6%。本发明提取工艺，大大提高了黄芪药材中有效成分的利用率(使用本试验方案，可一次性提取出黄芪中的黄芪皂苷和黄芪多糖，并且两种有效成分提取率都可稳定在90%以上)，提高黄芪药材中黄芪多糖的产率(现有产率在20%左右，本发明提取方法黄芪多糖产率可稳定在24%-26%，黄芪多糖提取率可稳定在91%左右)；保证黄芪药材中黄芪皂苷稳定的产率(现有产率在0. 13%-2. 42%，通过本试验最优工艺提取的黄芪皂苷产率可稳定在1%-1. 1%，黄芪皂苷提取率可稳定在95%左右)；相对缩短了试验时间，简化提取工艺步骤。
图I黄芪药材粒径对提取工艺的影响(其中，1-5药材粒径分别为黄芪饮片、黄豆粒大小、通过I号筛、通过2号筛、通过3号筛)。
具体实施例方式实施例I本发明提取工艺参数筛选试验I仪器和试药I. I 仪器HWC-3型微波提取实验设备(天水华圆医疗设备有限公司);UV_6000紫外可见分光光度计(上海美谱达仪器有限公司)；摇摆式高速万能粉碎机(DFY-300型，温岭市林大机械有限公司)；旋转蒸发器(RE52CS-1型，上海亚荣生化仪器厂)；真空干燥箱(DZG-6020型，上海森信实验仪器有限公司);BP61型电子天平(万分之一，德国Satorius);电子天平(BP21ID型，十万分之一，德国Satorius) ;UPT-I_10T型超纯水器(成都超纯科技有限公司)；恒温水浴锅(金坛市鸿科仪器厂)；各型号移液枪。I. 2 试药黄芪药材(购自成都荷花池中药材市场，经成都中医药大学中药鉴定教研室老师鉴定为正品);黄芪甲苷对照品(批号H-013-110621)(购自成都瑞芬思生物科技有限公司)；D-无水葡萄糖对照品(批号I 10833-200302，供含量测定用，中国药品生物制品检定所提供)。5%苯酚溶液；5%香草醛-冰醋酸溶液；浓硫酸、高氯酸、氨水、苯酚、香草醛等皆为分析纯。2方法与结果2. I黄芪总皂苷的含量测定2. I. I黄芪皂苷标准曲线的制备精密称取黄芪甲苷对照品若干，置IOmL量瓶中，加甲醇溶解并稀至刻度，摇匀，SP得黄芪甲苷对照品溶液。分别取0. 0,0. 4,0. 8，I. 2，I. 6mL对照品溶液置于IOmL具塞刻度试管中，水浴蒸干，冷却，加5%香草醛-冰醋酸溶液0. 2mL及高氯酸0. 8mL，混匀，于60°C水浴加热15min，取出，立即冰浴冷却5min，再加冰醋酸5mL，充分混匀后，以“OmL”具塞刻度试管中的溶液为空白，于561nm测其吸收度。以黄芪甲苷对照品的质量浓度m为横坐标，吸收度A为纵坐标，建立回归方程C=O. 0010+0. 0474A (r=0. 9997)。黄芪甲苷在0. 0816 0. 3254mg吸收度有良好的线性关系。2. I. 2黄芪总皂苷供试品溶液的制备精密吸取黄芪提取液40mL (相当于4g原药材)，置蒸发皿中，水浴蒸干，残渣加水IOmL,微热使之溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗2次，每次40mL，弃去氨液，正丁醇蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至IOmL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。2. I. 3精密度试验取同一供试品溶液，按照2. I. 2项下制备供试品溶液，重复测定5次，得RSD为
0.52%。2. I. 4稳定性试验、
将同一对照品溶液显色后，时间扫描lh，Abs在0. 8031-0. 8033间变化，表明供试品溶液在显色后Ih内稳定。2. I. 5重复性试验取同一样品溶液5份,每份0. 2mL,按2. I. 2项下制备供试品，测定黄苗总阜苷含量，测定RSD为I. 30%，表明该方法的重复性良好。2. 2黄芪多糖的含量测定2. 2. I黄芪多糖标准曲线的制备精密称取105°C干燥至恒重的D-无水葡萄糖对照品若干，至50mL容量瓶中，加去离子水至刻度，摇匀，即得标准液。分别吸取配置好的葡萄糖标准液0. 0,0. 2,0. 4,0. 8,1. 2、 I.6、2. OmL于IOmL具塞刻度试管中，加去离子水至2mL,加入5%苯酹溶液ImL,摇勻,加5mL浓硫酸振摇5min，沸水浴加热15min，冷水浴冷却30min，以空白溶剂为参比，490处测定吸光度。以D-无水葡萄糖对照品的质量浓度m为横坐标，吸收度A为纵坐标，建立回归方程C=O. 0001+0. 0141A(r=0. 9995)。D-无水葡萄糖对照品在 0. 0025 0. 0250mg ml/1 吸收度有良好的线性关系。2. 2. 2黄芪多糖供试品溶液制备本实验采用苯酚-硫酸法测定黄芪多糖的含量，具体制备过程为取黄芪提取液0. 2mL至IOOmL容量瓶中，摇匀，取ImL溶液于IOmL具塞试管中，以下步骤按2. 2. I项下制备过程制备。2. 2. 3精密度试验取同一供试品溶液，按照2. 2. 2项下制备供试品溶液，重复测定5次，得RSD为0. 49%o2. 2. 4稳定性试验将同一对照品溶液显色后，时间扫描lh, Abs在0. 6151-0. 6154间变化,表明供试品溶液在显色后Ih内稳定。2. 2. 5重复性试验取同一样品溶液5份,每份0. 2mL,按2. I. 2项下制备供试品，测定黄苗总阜苷含量，测定RSD为I. 17%，表明该方法的重复性良好。2. 3单因素考查本试验方案首先对黄芪的粒径，浸泡时间进行了单因素考查；经查阅相关文献资料，粒径主要影响的是黄芪总皂苷，所以在单因素考查中，只以黄芪总皂苷为指标成分进行筛选。2. 3. I黄芪药材粒径对提取工艺的影响此单因素考查共考查5种粒径，分别为黄芪饮片、黄豆粒大小、过I号筛，过二号筛，过三号筛，具体结果见图I。由上图可知，随着药材粒径的减小，黄芪总皂苷的提取量逐渐增大，到粒径4时，总皂苷的提取量基本趋于稳定，而随着药材粒径的减少，对提取工艺的要求就越高，所以本试验选取通过2号筛的药材粒径。2. 3. 2黄芪药材浸泡时间对提取工艺的影响本试验选取的浸泡时间为0、30、60min 3个梯度进行考查，仍选择黄芪皂苷为指标性成分，结果见表I。
权利要求
1.一种微波辅助提取黄芪皂苷和黄芪多糖的工艺，它包括如下步骤 a、称取黄芪药材； b、将药材置微波提取装置中，微波功率500W-900W，温度70°C，共提取3次，第I次加50%-90%的乙醇，提取10min-30min ;第2次加50%_90%乙醇，提取10min_30min ’第3次加蒸懼水，提取20min-40min ； C、将第1、2次的乙醇提取液浓缩，除去乙醇，再加入第3次的水提取液，混合，浓缩，SP得本发明黄芪皂苷和黄芪多糖提取物。
2.根据权利要求I所述的微波辅助提取黄芪皂苷和黄芪多糖的工艺，其特征在于所述的黄芪药材为药材饮片或黄豆粒大小的饮片，或过1-3号筛的药粉。
3.根据权利要求2所述的微波辅助提取黄芪皂苷和黄芪多糖的工艺，其特征在于a步骤所述的黄芪药材粉碎至24目以下。
4.根据权利要求I所述的微波辅助提取黄芪皂苷和黄芪多糖的工艺，其特征在于b步骤所述的乙醇或水的用量为药材重量的10-14倍。
5.根据权利要求I所述的微波辅助提取黄芪皂苷和黄芪多糖的工艺，其特征在于b步骤所述的乙醇为70%的乙醇。
6.根据权利要求I所述的微波辅助提取黄芪皂苷和黄芪多糖的工艺，其特征在于b步骤所述的微波功率500-700W。
全文摘要
本发明公开了一种微波辅助提取黄芪皂苷和黄芪多糖的工艺，它包括如下步骤a、称取黄芪药材；b、将药材置微波提取装置中，微波功率500W-900W，温度70℃，共提取3次，第1次加50%-90%的乙醇，提取10min-30min；第2次加50%-90%乙醇，提取10min-30min；第3次加蒸馏水，提取20min-40min；c、将第1、2次的乙醇提取液浓缩，除去乙醇，再加入第3次的水提取液，混合，浓缩，即得本发明黄芪皂苷和黄芪多糖提取物。本发明提取工艺提高了黄芪药材中有效成分的利用率，同时提高黄芪药材中黄芪多糖和黄芪总皂苷的产率，缩短提取时间，提取工艺步骤简化。
文档编号A61K36/481GK102727566SQ201210218449
公开日2012年10月17日 申请日期2012年6月28日 优先权日2012年6月28日
发明者李小芳, 李航 申请人:成都中医药大学