高良姜素在制备抗肿瘤转移药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明属天然药物领域，具体公开了一种高良姜素抑制FAK基因的转录、表达和磷酸化抑制FAK的功能，和在抑制细胞粘附、浸润、迁移、抑制肿瘤转移中的应用。本发明还涉及利用常规的药物制备和制剂方法制备高良姜素药物，高良姜素能与常规肿瘤治疗药物和治疗方法联合应用，利用常规口服、静脉、腹腔给药途径进行治疗应用，为高良姜素的进一步应用奠定了基础。
【专利说明】高良姜素在制备抗肿瘤转移药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明属天然药物领域，涉及高良姜素在抑制细胞粘附、浸润、迁移和抑制肿瘤转移中的药学用途和抑制粘着斑激酶(FAK)基因的转录、表达和蛋白质磷酸化中的药学用途。
【背景技术】 [0002]肿瘤转移是癌症患者最主要的死因，其中90%的癌症患者死于恶性肿瘤的转移。究其根本原因，目前仍缺少抑制肿瘤转移的有效药物。因此，发现抑制细胞迁移和恶性肿瘤转移的药物具有重要意义。
[0003]高良姜素为3，5，7-三羟基黄酮，是从姜科山姜属Alpinina植物的高良姜干燥根茎分离得到的黄酮类化合物单体，此外在蜂胶中也具有很高的含量(何瑞，王涛，李彩君等，1999，时珍国医国药，10: 788)。天然植物高良姜作为中药，收载于历届《中国药典》，味辛、性热，能温中散寒、理气止痛，常用于脘腹冷痛、胃寒呕吐、嗳气吞酸、改善微循环等(吴清和，荣向路，黄萍等，2000,中药材，23:699-701 )。蜂胶的主要化学成分为黄酮类，具有抗炎，抗过敏，抗致癌，抗病毒和抗细胞增生等作用(叶陆星，胡福良，2002，养蜂科技，2:9-11 )。二者在我国及亚洲邻国均有广泛的分布。在姜科高良姜根部的乙醇提取物中，粗提物含量可达10%，采取优化手段可以使高良姜素的纯度达到89.39% (康爱荣，闻明，彭英等，2011，中国中医药信息杂志，5:44-46 )。研究表明高良姜素具有镇痛、止呕等药理学作用(吴清和，荣向路，黄萍等，2000，中药材，23:699-701)。此外，国内外研究发现高良姜素还具有多种生物学活性，如抗突变、抗致畸(He0.M.Y., Yu, K.S.，Kim, K.H., et al.1992.Mutat Res.284:243-9; Sohn, S.J., Huh, 1.H., Au, ff.ff., et al.1998.Mutat Res.402:231-6)、抗氧化和自由基清除(Hyun, J., Woo, Y., Hwang, D.S., et al.2010.Bioorg Med ChemLett.20:5510-3),调节药物代谢酶(Shimada, T., Tanaka, K., Takenaka, S.，et al.2010.Chem Res Toxicol.23:1921-35),抗微生物活性(Afolayan, A.J., Meyer, J.J.1997.J Ethnopharmacol.57:177-81),联合使用高良姜素与β -内酰胺类抗生素能抑制对β -内酰胺类抗生素耐药性的菌株(Denny, B.J., Lambert, P.A., West, P.ff.2002.FEMS Microbiol Lett.208:21-4)。高良姜素也具有较强的抗病毒活性(Amoros，Μ.,Simoesj C.Μ.，Girrej L.，et al.1992.J Nat Prod.55:1732-1740 ；Meyer, J.J.，Afolayan, A.J., Taylor, M.B., et al.1997.J Ethnopharmaco1.56:165-9)。
[0004]近年来，高良姜素抗肿瘤活性越来越受到关注。高良姜素作为化学预防剂能有效抵抗外源致癌物进入体内和活化等关键环节。在耐药性的乳腺癌细胞株中，P糖蛋白的活性对外来的致癌物和药物跨膜转运至关重要，是机体防御机制之一。高良姜素通过调节P糖蛋白的转运活性，促进外来致癌物的排出，减少细胞的负荷(Phang，J.M.，Poore, C.Μ.，Lopaczynskaj J.，et al.1993.Cancer Res.53:5977-81)。此外，通过影响机体细胞色素P450酶系和氧化还原酶调节外来致癌物的代谢，也在癌症的预防中具有重要作用。在人白血病细胞株HL-60中，高良姜素(>50 μ Μ)损伤DNA，激活caspase-3 (Bestwick，
C.S.，Milne, L.2006.Cancer Lett.243:80-9)。高良姜素在细胞周期水平抑制细胞的恶性增殖(Murray, T.J.，Yang, X.，Sherr, D.H..2006.Breast Cancer Res.8:R17 ；王竹君吗，张强，赵新淮，2009,6:563-569)。 Luo等发现高良姜素在多种肝癌细胞株中通过诱导线粒体凋亡通路激活caspases和引起Bcl_2水平的变化，诱导细胞凋亡，提示高良姜素对肝癌具有重要的治疗价值(Luo，H., Ma, C.，Wang, Y.J.，et al.2008.Zhong Yao Ca1.31:1204-7.; Zhang, H.T., Luo, H., ffu, J., et al.2010.World JGastroenterol.16:3377-84)。新近研究发现高良姜素促进β-catenin的降解,进而抑制β-catenin依赖的细胞周期素Dl及c-myc的转录表达(Gwak J, Oh J, Cho M, et al.2011.Mol Pharmacol.79:1014-22)。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供传统中药活性化合物高良姜素一种新的用途，即能够显著抑制细胞粘附、浸润、迁移和抑制肿瘤转移，及其在制备抑制细胞粘附、浸润、迁移相关疾病和抑制肿瘤转移药物上的应用；高良姜素能显著抑制粘着斑激酶(FAK)基因的转录、表达和磷酸化发挥其抑制细胞粘附、浸润、迁移和抑制肿瘤转移的功能。
[0006]本发明公开的高良姜素在制备抑制细胞粘附、浸润、迁移相关疾病和抑制肿瘤转移药物上的应用通过以下技术解决措施来进一步实现:高良姜素通过常规药物制备方法和药物制剂方法，制备能够显著抑制细胞粘附、浸润、迁移相关疾病和抑制肿瘤转移的药物；高良姜素通过文献已经报导的常规口服、静脉、腹腔给药途径存在体内外抑制细胞粘附、浸润、迁移相关疾病和抑制肿瘤转移；高良姜素能够像常规的抗肿瘤药物一样，通过与常规肿瘤治疗药物和治疗方法(如化疗、放疗、生物治疗、中药辅助治疗等)联合应用，进一步提高肿瘤治疗效果。高良姜素通过显著抑制粘着斑激酶(FAK)基因的转录、表达和磷酸化发挥其抑制细胞粘附、浸润、迁移和抑制肿瘤转移的功能。
[0007]本发明的有益效果:(1)发现高良姜素除了已知的生物功能之外，还具有抑制细胞粘附、浸润、迁移和抑制肿瘤转移的作用；因此，能够制备抑制细胞粘附、浸润、迁移和抑制肿瘤转移的药物，并且通过常规的药物制备和药物制剂方法，通过常规的口服、静脉、腹腔等给药途径，进行肿瘤转移以及其它一些与细胞粘附、浸润、迁移异常相关疾病，并且能够通过与常规肿瘤治疗药物和治疗方法(如化疗、放疗、生物治疗、中药辅助治疗等)联合应用，进一步提高治疗效果。(2)高良姜素能够显著抑制粘着斑激酶(FAK)基因的转录、表达及其磷酸化等翻译后修饰，因此，对于FAK功能异常相关的疾病具有重要的治疗作用。
【专利附图】
【附图说明】
[0008]图1高良姜素对B16F10细胞黏附的影响。定量统计高良姜素对B16F10细胞在细胞外基质FN上黏附的效率，50和100 μ M高良姜素相对于对照组显著抑制细胞的黏附，差异具有统计学意义，**ρ〈0.01 ;***ρ〈0.001。
[0009]图2高良姜素对B16F10细胞铺展的影响。1:铺展细胞；2:中间型细胞；3:圆形细胞。高良姜素用量:0 ΟμΜ ，.25μΜ ,m 50 μΜ，關100 μΜ。
[0010]图3高良姜素对B16F10细胞F_actin的影响。1:无血清培养基；2:10%含血清培养基；3:高良姜素50 μ M和10%含血清培养基。实验重复三次。
[0011]图4高良姜素对B16F10划痕实验中细胞运动的影响。细胞长满后，采用200 μ L的枪头在中央造成伤口，O和50 μ M高良姜素处理细胞，分别与损伤后O小时，12小时和24小时进行显微镜(Χ10倍)下拍摄观察细胞运动情况。定量统计损伤区域的面积来反映细胞运动的程度，此实验重复三次。*Ρ〈0.05为12小时50 μ M高良姜素与药物未处理组相比较，*#ρ〈0.001为24小时50 μ M高良姜素与药物未处理组相比较。高良姜素用量:
【权利要求】
1.一种高良姜素的应用，其特征是抑制细胞粘附、浸润、迁移和抑制肿瘤转移。
2.一种高良姜素的应用，其特征是通过抑制FAK基因的转录、表达和磷酸化抑制FAK的功能。
3.权利要求1所述的一种高良姜素的应用，其特征在于:在制备抑制细胞粘附、浸润、迁移相关疾病和抑制肿瘤转移药物中的应用。
4.权利要求2所述的一种高良姜素的应用，其特征在于:在制备FAK转录、表达和磷酸化相关疾病的治疗药物中的应用。
5.权利要求1所述的一种高良姜素的应用，其特征在于:在与常规肿瘤治疗药物和治疗方法联合应用制备抑制细胞粘附、浸润、迁移相关疾病和抑制肿瘤转移药物中的应用，所述的常规肿瘤治疗药物和治疗方法指常用的化疗、放疗、生物治疗、中药辅助治疗药物和方法。
6.权利要求2所述的一种高良姜素的应用，其特征在于:在与常规治疗药物和治疗方法联合应用制备FAK转录、表达和磷酸化相关疾病的治疗药物中的应用，所述的常规肿瘤治疗药物和治疗方法指常用的化疗、放疗、生物治疗、中药辅助治疗药物和方法。
7.权利要求1所述的一种高良姜素的应用，其特征在于:利用常规的药物制备和药物制剂方法，在制备细胞粘附、浸润、迁移相关疾病和肿瘤转移治疗药物中的应用。
8.权利要求3所述的一种高良姜素的应用，其特征在于:利用常规的药物制备和药物制剂方法，在制备FAK转录、表达和磷酸化相关疾病的治疗药物中的应用。
9.权利要求3或4所制备的高良姜素的治疗药物的应用，其特征在于:利用常规口服、静脉、腹腔给药途径进行治疗应用。`
【文档编号】A61P35/04GK103565789SQ201210272165
【公开日】2014年2月12日 申请日期:2012年7月31日 优先权日:2012年7月31日
【发明者】华子春, 张文静, 黄启来, 唐波 申请人:江苏靶标生物医药研究所有限公司, 常州南京大学高新技术研究院