专利名称：从人参须中同时提取和分离皂苷富集物和多糖富集物的方法
技术领域：
本发明涉及一种中草药有效成分的提取方法，尤其涉及一种微波辅助加热法从人参须中同时提取和分离皂苷富集物和多糖富集物的方法。
背景技术：
人参是世界上驰名的药用植物，应用历史久远，其药用价值为世人所公认。我国是世界上使用和记载人参最早的国家，早在两千多年以前，我们的祖先就发现人参，并利用人参防治疾病。在我国历代的医药典籍中，有许多关于人参的论述，甚至有人参专著问世。我国历史上的第一部药学典籍《神农本草经》就明确记载人参具有“补五脏、安精神、定魂魄、止惊悸、除邪气、明目开心益智、久服轻身延年”的功效。随着近代分析仪器技术和医学的发展，人参药理活性及其作用特点已逐渐被药理学和临床医学的实践所证实。目前，以人参为 原料生产的中成药和配制的汤剂，几乎应用到中医各科的临床，著名的成药有参苓白术散、人参再造丸、龟令集、人参养荣丸、参茸虎骨药酒、十全大补丸、乌鸡白凤丸、琥珀抱龙丸、八珍益母膏等。现代医学证明，人参皂苷与人参多糖为人参中主要活性成分，它们具有很好的药理活性。大量研究表明，人参皂甙具有调节中枢神经系统，改善心血管及造血系统，调节内分泌系统，提高免疫力，抗疲劳以及抗癌等药理作用。近些年来随着糖生物学研究的迅速发展，人参多糖也越来越多地引起了人们的关注。研究表明，人参多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、降血糖等药理作用。人参多糖的相对分子质量和组成与活性有着密切的关系。因此，对于人参中皂甙、多糖的提取研究在今天看来意义深远。它为阐明人参的生物活性与药理作用，进一步研究人参药理作用机制奠定了良好的前提基础。现有文献虽然报道了较为详细的将人参中部分有效成分进行分离的方法，但这些方法都仅针对一类人参有效成分进行提取，如仅提取皂苷或仅提取多糖，没有文献报道将人参多糖和人参皂苷从人参中同时进行分离和富集的过程。另外，本方法采用微波辅助加热法，该方法是近年来发展起来的一种新方法，较传统加热回流法具有选择性好、快速、高效、安全、节能等优点。微波加热是利用微波场中介质的偶极子转向极化和界面极化的时间与微波频率相吻合的特点，促使介质转动能级跃迁，加剧热运动，将电能转化为热能。从细胞破碎的微观角度看，微波加热导致细胞内的极性物质，尤其是水分子吸收微波能，产生大量的热量，使胞内温度迅速上升，水气化产生压力使细胞膜破裂，产生微孔或裂纹，从而使细胞内物质更容易被溶剂溶出，达到萃取的目的。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术而提供一种微波辅助加热法从人参须中同时提取和分离皂苷富集物和多糖富集物的方法，其工艺简单、成本低、损失小、
广品质量闻。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是从人参须中同时提取和分离皂苷富集物和多糖富集物的方法，其特征在于包括下述步骤
(O将人参须原料粉碎过2(Γ60目筛后放入容器，加入乙醇，放入微波萃取仪中，在4(T80°C下进行回流提取，控制微波功率，提取1(T30 min，取出后过滤药渣，反复提取疒3次，合并得到乙醇提取液；
(2)将步骤(I)得到的乙醇提取液冷却至室温，并静置2 天，有沉淀物析出，过滤得到沉淀物A和乙醇提取过滤液A ；
(3)将步骤(I)所得药渣挥去溶剂之后，加入蒸馏水，放入微波萃取仪中，控制微波功率，在6(Γ100 下进行回流提取，提取1(T30 min，反复提取2 3次，过滤药渣后，合并得到水提取液，旋转蒸发浓缩后，得到水提浓缩液；
(4)将步骤(3)所得水提浓缩液中加入无水乙醇，得到的醇沉溶液环境乙醇浓度为40^95. wt%,静置f 4天，有沉淀物析出，过滤得到的沉淀物B与过滤液B，将沉淀物B与沉淀·物A合并，真空干燥研磨成粉，即得到人参多糖富集物；
(5)将步骤(2)得到的乙醇提取过滤液A和步骤(4)中得到的过滤液B合并，进行旋转蒸发回收有机溶剂，浓缩后的母液室温放置沉降，离心得到淡黄色沉淀，将其真空干燥研磨成粉，得到人参总皂苷富集物。按上述方案，步骤(I)所述的乙醇浓度是40 95· wt%。按上述方案，步骤(I)所述的人参须与乙醇的投料比为I : 5 40 (m/v)，步骤3)所述的挥去溶剂之后的药渣与水的投料比为I : 5 40 (m/v)。按上述方案，步骤(I)和步骤(3)中所述的控制微波功率在30(Γ1000 W。按上述方案，步骤(3)所述的旋转蒸发浓缩后体积为水提取液原体积的1/2 1/10，步骤(5)所述的浓缩后母液体积为原体积的1/2 1/10。
本发明所得产品的分析方法
I、人参总皂苷的含量测定
以人参皂甙Rgl为对照品，香草酸-冰醋酸显色后，用分光光度法在波长为552 nm处进行吸光度测定，计算得到标准曲线方程Y=2. 1191Χ-0. 2644(Y为吸光度；X为浓度g /L)，相关系数R=O. 9964，由回归方程求出待测样品中总皂苷的浓度。2、人参多糖的含量测定
以葡萄糖为标准品，苯酚-浓硫酸显色后，用分光光度法在波长为489 nm处进行吸光度测定，计算得到标准曲线方程Y=0. 3215Χ +0. 0004 (Y为吸光度；Χ为浓度g /L)，相关系数R=O. 9979，由回归方程求出待测样品中多糖含量。本方法的优点在于在微波辅助加热提取的优化工艺条件下，得到的皂甙或多糖含量高于水浴加热提取所得产物的含量，并能明显缩短提取时间，提高提取效率。同时，本方法还将醇提法与水提法中得到的滤液和沉淀分别交叉合并，使得提取液中的不同有效成分充分保留，提高了有效成分的提取率。该方法与现有技术相比具有成本低、提取速度快、无有机溶剂残留、能量消耗小以及生产过程中无环境污染等。
图I为本发明的工艺流程图。
具体实施例方式以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。实施例I :
(1)称取经粉碎至20目的40g人参须原料，放入1000 mL的三口烧瓶中，固液比为I 30，加入质量百分比浓度为70%的乙醇，控制提取温度80°C，微波功率400 W下，乙醇回流提取25 min进行一次提取，过滤得到一次乙醇提取液，滤渣用于二次提取；二次提取的固液比为I : 30，在相同温度下提取时间为25 min，过滤药渣后，得到二次乙醇提取液，合并得到乙醇提取液；
(2)将步骤(I)得到的乙醇提取液冷却至室温静置3天，过滤得到沉淀物A和乙醇提取过滤液A ；
(3)待步骤(I)所得药渣挥去溶剂之后，加蒸馏水后放入微波萃取仪中，控制提取温度80°C，微波功率400W下，用水回流提取25 min，停止加热和搅拌，过滤后得到水提取液，滤渣备用，所述的挥去溶剂之后的药渣与水的投料比为I : 30。重复上述水提操作一次，合并两次水提取液，旋转蒸发浓缩后体积为水提取液原体积的1/3，冷却后得到水提浓缩液；
(4)往水提浓缩液中加入无水乙醇，使溶液成为质量百分比浓度为70%的乙醇，醇沉，静置24小时之后，过滤得到沉淀物B和过滤液B ;合并沉淀A和沉淀B，将其真空干燥研磨成粉，即得到人参多糖富集物；
(5)合并步骤(2)得到的乙醇提取过滤液A和步骤(4)中过滤液B，旋转蒸发浓缩，进行旋转蒸发回收有机溶剂，浓缩后的母液室温放置沉降，浓缩后母液体积为清液原体积的1/3，离心得到淡黄色沉淀，将其真空干燥研磨成粉，即得到人参总皂苷富集物；
干燥后滤渣称重为23. 846 g ;人参粗多糖10. 084 g，得率为25. 21%，纯度为54. 7% ;人参总皂苷富集物6. 065 g，得率为15. 16%，纯度为47. 6%。
实施例2
(1)称取经粉碎至40目的30g人参根茎原料，放入1000 mL的三口烧瓶中，固液比为I 20，加入质量百分比浓度为75%的乙醇，放入微波萃取仪，控制提取温度60°C，微波功率600W下，回流提取20 min进行一次提取，过滤得到一次乙醇提取液，滤渣用于二次提取。二次提取的固液比为I : 20，在相同温度下提取时间仍为20 min，过滤药渣后，得到二次乙醇提取液，合并乙醇提取液；
(2)将步骤(I)得到的乙醇提取液冷却至室温静置4天，过滤得到沉淀A和乙醇提取过滤液A ；
(3)步骤(I)所得药渣挥去溶剂之后，加入蒸馏水后放入微波萃取仪，控制提取温度IOO0C，微波功率600W下，用水回流提取20 min,停止加热和搅拌，过滤后得到水提取液，滤渣备用，所述的挥去溶剂之后的药渣与水的投料比为I : 20。重复上述水提取操作一次，合并两次水提取液，旋转蒸发浓缩后体积为水提取液原体积的1/5，冷却后得到水提浓缩液；
(4)往水提浓缩液中加入无水乙醇，使溶液成为质量百分比浓度为70%的乙醇，醇沉，静置36小时之后，过滤得到沉淀物B和过滤液B，合并沉淀物A和沉淀物B，将其真空干燥研磨成粉，即得到人参多糖富集物；(5)合并步骤(2)得到的乙醇提取液过滤液A和步骤(4)中过滤液B，旋转蒸发浓缩，进行旋转蒸发回收有机溶剂，浓缩后的母液室温放置沉降，浓缩后母液体积为清液原体积的1/3，离心得到淡黄色沉淀，将其真空干燥研磨成粉，即得到人参总皂苷富集物。上述实施例提取的结果为
干燥后滤渣称重为16. 952 g ;人参粗多糖7. 832 g，得率为26. 11%，纯度为50. 1% ;人参总皂苷5. 169 g，得率为17. 23%，纯度为40. 2%。
实施例3
(1)称取经粉碎至60目的40g人参根茎原料，放入1000 mL的三口烧瓶中，以固液比为I : 15，加入质量百分比浓度为85%的乙醇，放入微波萃取仪，控制提取温度70°C，微波功率700W下，回流提取10 min进行一次提取，过滤得到一次乙醇提取液，滤渣用于二次提取。二次提取补加质量百分比浓度为85%的乙醇，二次提取的固液比为I : 15，在相同温度下提取时间仍为10 min，过滤药渣后，得到二次乙醇提取液，合并乙醇提取液；
(2)将步骤(I)得到的乙醇提取液冷却至室温静置4天，过滤得到沉淀A和乙醇提取过滤液A ；
(3)待步骤(I)所得药渣挥去溶剂之后，加蒸馏水后放入微波萃取仪中，控制提取温度900C，微波功率700W下，水回流提取12 min,停止加热和搅拌，过滤后得到水提取液，滤渣备用，所述的挥去溶剂之后的药渣与水的投料比为I : 15。重复上述水提取操作一次，合并两次水提取液，旋转蒸发浓缩后体积为水提取液原体积的1/6，冷却后得到水提浓缩液；
(4)往水提浓缩液中加入无水乙醇，使溶液成为质量百分比浓度为70%的乙醇，醇沉，静置48小时之后，过滤得到沉淀物B和过滤液B，合并沉淀A和沉淀B，将其真空干燥研磨成粉，即得到人参多糖富集物；
(5)合并步骤(2)得到的乙醇提取过滤液A和步骤(4)中过滤液B，旋转蒸发浓缩，进行旋转蒸发回收有机溶剂，浓缩后的母液室温放置沉降，浓缩后母液体积为清液原体积的1/2，离心得到淡黄色沉淀，将其真空干燥研磨成粉，即得到人参总皂苷富集物；
上述实施例提取的结果为
干燥后滤渣称重为23. 460 g;人参粗多糖9. 744 g，得率为24. 36%，纯度为48. 7% ;人参总皂苷6. 789 g，得率为16. 97%，纯度为41. 3%。
权利要求
1.从人参须中同时提取和分离皂苷富集物和多糖富集物的方法，其特征在于包括下述步骤 (O将人参须原料粉碎过2(Γ60目筛后放入容器，加入乙醇，放入微波萃取仪中，在4(T80°C下进行回流提取，控制微波功率，提取1(T30 min，取出后过滤药渣，反复提取疒3次，合并得到乙醇提取液； (2)将步骤(I)得到的乙醇提取液冷却至室温，并静置2 7天，有沉淀物析出，过滤得到沉淀物A和乙醇提取过滤液A ； (3)将步骤(I)所得药渣挥去溶剂之后，加入蒸馏水，放入微波萃取仪中，控制微波功率，在6(Γ100 下进行回流提取，提取1(T30 min，反复提取2 3次，过滤药渣后，合并得到水提取液，旋转蒸发浓缩后，得到水提浓缩液； (4)将步骤(3)所得水提浓缩液中加入无水乙醇，得到的醇沉溶液环境乙醇浓度为40^95. wt%,静置f 4天，有沉淀物析出，过滤得到的沉淀物B与过滤液B，将沉淀物B与沉淀物A合并，真空干燥研磨成粉，即得到人参多糖富集物； (5)将步骤(2)得到的乙醇提取过滤液A和步骤(4)中得到的过滤液B合并，进行旋转蒸发回收有机溶剂，浓缩后的母液室温放置沉降，离心得到淡黄色沉淀，将其真空干燥研磨成粉，得到人参总皂苷富集物。
2.按照权利要求I所述的从人参须中同时提取和分离皂苷富集物和多糖富集物的方法，其特征在于步骤(I)所述的乙醇浓度是4(T95. wt%。
3.按照权利要求I所述的从人参须中同时提取和分离皂苷富集物和多糖富集物的方法，其特征在于步骤(I)所述的人参须与乙醇的投料比为I : 5 40 (m/v)，步骤3)所述的挥去溶剂之后的药渣与水的投料比为I : 5 40 (m/v)。
4.按照权利要求I所述的从人参须中同时提取和分离皂苷富集物和多糖富集物的方法，其特征在于步骤(I)和步骤(3)中所述的控制微波功率在30(Γ1000 W。
5.按照权利要求I所述的从人参须中同时提取和分离皂苷富集物和多糖富集物的方法，其特征在于步骤(3)所述的旋转蒸发浓缩后体积为水提取液原体积的1/2 1/10，步骤(5)所述的浓缩后母液体积为原体积的1/2 1/10。
全文摘要
本发明涉及一种从人参须中同时提取和分离得到皂甙富集物和多糖富集物的方法，先用一定浓度的乙醇采用微波辅助加热法提取后，进一步才用水提。其中乙醇提取液进行浓缩，挥发乙醇溶剂后得到人参皂甙富集物，水提取液与乙醇提取液析出的沉淀合并，浓缩挥发溶剂得到人参多糖富集物。本方法的优点在于该方法与现有技术相比具有成本低、提取速度快、无有机溶剂残留、能量消耗小以及生产过程中无环境污染等。
文档编号A61K36/258GK102908375SQ201210440570
公开日2013年2月6日 申请日期2012年11月7日 优先权日2012年11月7日
发明者池汝安, 张越非, 钟玲, 李倩漪, 余军霞, 徐志高, 肖春桥 申请人:武汉工程大学