专利名称：用于臀果木属提取物提取的改进工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及植物化学领域。更具体地，本发明涉及采用可再生来源-“剪枝材料”或“细枝”代替“不可再生的来源”(即树皮)，从李属科的植物提取生物活性物质“臀果木属提取物”的新颖、创新且环境友好的工艺。
背景技术：
定义: 臀果木属提取物(pygeum):臀果木属提取物是从非洲臀果木树(也称为非洲李树)的树皮中提取的胶质物质。无论用于该专利申请中的任何地方，所述词臀果木属提取物是指通过从植物源材料，即非洲臀果木或国内李属(印度李)提取所获得的本草提取物。在该词“臀果木属提取物”被用于仅植物而不是提取物的文中的情况中，同样会适当地详尽说明。可再生的植物源:是指可天然再生的来源如叶子、花、种子、枝插或洋李干。由于植物仍然活着，该来源持续地“再生”。不可再生的植物源:是指如果使用该来源会导致植物死亡的来源如根、树皮。由于植物死亡，该来源不能获得再生。剪枝的枝插(stem cutting)/细枝(twig):这些是在剪枝或修枝工艺期间作为植物废料所获得的嫩枝或树枝(约6-18英寸)，在在剪枝或修枝工艺中，多余的树枝被剪掉以促进植物的良好生长以及结果实。这是定期进行的活动/工艺以确保植物的健康生长以及结果实。分析法确定的提取物或化学法确定的提取物:是指来自天然来源的提取物，其中，活性成分的含量是通过现代分析/科学的方法按照药典标准来确定。PAE (非洲臀果木属提取物(Pygeum africanum extract)):它是由非洲臀果木的树皮所获得的化学法确定的提取物。由于它是从非洲物种的李树获得的，所以获得的臀果木属提取物也被称作“非洲臀果木属提取物”。臀果木属提取物的来源臀果木属提取物是从非洲臀果木的树皮获得的提取物(胶质物)。非洲臀果木树是产自于非洲森林的常青树，且能够生长至大约45米的高度。该植物属于蔷薇科、杏仁族(tribe amygdales)、李属和非洲物种(species Africana)。叶子厚且为椭圆形状；花是小的且为白色。臀果木果实是红色浆果，类似于成熟时的樱桃。树皮(红色、褐色或灰色)是用于医疗目的的植物的一部分。相关的物种是Prunus domestica (Hook) F.Kalkm或 Pygeum stricasla (Hook),并且还包括兰蒂李(Prunus Latifolium)、柄草李(Prunusparviforum)、厚叶李(Prunus crassifolluni )、葡萄牙桂楼(Prunus Iusitanica)和云南桂楼(Primus Iaurocerasus)。臀果木属提取物的临床重要性臀果木属提取物具有临床重要性。它已经用于治疗和预防前列腺增大症(良性前列腺增生症或BPH)数十年。臀果木提取物中的有效成分是β_谷留醇。臀果木树的粉化后的树皮已经被非洲本地人用于治疗泌尿问题。近年来，不是简单地使用粉化后的树皮(其面临缺乏标准化的挑战)，焦点在于来自于臀果木树，即非洲臀果木(其也称为非洲臀果木，因为该树也是“臀果木属提取物”的来源)的“分析确定的提取物”的使用。按照网上信息(http://www.drugs, com/npc/pygeum.html),MΨ:.改善良性前列腺肥大(BPH)的症状，以及.改善性功能。在法国，非洲臀果木属提取物(PAE)已经成为用于治疗增大的前列腺的主要途径。相比之下，在其他西方国家中，手术是主要的选择。臀果木属提取物同样是如下的治疗剂: 用作抗炎.增加前列腺分泌物，以及.降低腺区域中的某些激素，这减少肥大(肿胀).臀果木属提取物的其他作用包括增加膀胱弹性和细胞修饰。.ΡΑΕ的“植物雌激素”的作用明显降低前列腺肥大。大多数试验结果报道BPH (良性前列腺增生症)的症状的改善。当在临床试验中与锯叶棕相比时，可以证明锯叶棕产生更多的症状下降并且是更能耐受的。然而，PAE对前列腺分泌可能有更大的作用。通过改善潜在的问题，PAE可以改善性功能。臀果木属提取物的临床试验(主要是欧洲)是令人鼓舞的，但是在美国需要更多的研究。通过改善尿流量和BPH的症状，单独臀果木提取物已经在一些双盲测试中显示出有利于男性的ΒΡΗ。它还成功地与荨麻根结合以治疗ΒΡΗ。然而，仍然缺乏对臀果木属提取物的长期BPH研究(6个月或更长)。在现有技术中可以获得有关臀果木属提取物在监控/治疗增大的前列腺中的应用的大量文献。下面列出了一些选择出的有关臀果木属提取物的临床重要性的参考资料:1.Andro MC，Riffaud JP，用于治疗良性前列腺增生症患者的非洲臀果木属提取物:25 年公开的经验的概览(Pygeum africanum extract for the treatment ofpatients with benign prostatic hyperplasia:a review of 25 years of publishedexperience), Curr Ther Res，1995 年；56:第 796-817 页。2.Carani C，Saivioli V，Scuteri A等人，以高剂量使用非洲臀果木治疗良性前列腺增生疾病的泌尿学和性学评估(Urological and sexual evaluation of treatmentof benign prostatic disease using Pygeum africanum at high doses)， Arch ItalUrol Nefrol Androl，1991 年；63:341-5[在意大利]。3.Menchin1-Fabris GF, Giorgi P，Andreini F 等人，用非洲臀果木治疗前列腺-多泡病的新展望(New perspectives on treatment of prostato-vesicularpathologies with Pygeum Africanum), Arch It Urol，1988 年；LX:313-22 [在意大利]。4.Murray MT，草药的康复能力(The Healing Power of Herbs)，Rocklin, CA: Prima Pub 1.，1995 年，286-93。5.Barlet A, Albrecht J，A ubert A等人，非洲臀果木属提取物在治疗由于良性前列腺肥大症所导致的排尿病的功效，主观和客观参数的评估:多通道、随机的双盲实验(Efficacy of Pygeum africanum extract in the treatment of micturationaldisorders due to benign prostatic hyperplasia, Evaluation of objective andsubjective parameters.A multicenter, randomized, double-blind trial), Wein KlinWochenschr,1990 年；102:667_73。
6.Krzeski T, Καζ η M, Borkowski A等人,大荨麻和非洲臀果木的组合提取物用于治疗良性前列腺增生症:两剂量的双盲比较(Combined extracts of Urtica dioica andPygeum africanum in the treatment of benign prostatic hyperplasia:DoubIe-blindcomparison of two doses), Clin Ther, 1993 年；15:1011_20o7.Chatelain C, Autet W, Brackman F,每天一剂量和两剂量非洲臀果木属提取物用于治疗良性前列腺增生症的患者的比较:具有长期开放的实验延伸的随机的、双盲的研究(Comparison of once and twice daily dosage forms of Pygeum africanum extractin patients with benign prostatic hyperplasia:a randomized, double-blind study,with long-term open label extension), Urology, 1999 年；54:473-8。所有有关臀果木属提取物的临床应用的现有技术报道都是基于从非洲臀果木的树皮中提取的臀果木属提取物。在现有技术中没有有关从“可再生来源”如在本发明中所描述的国内李的剪枝的枝插/细枝中提取的臀果木属提取物的报道。臀果木属提取物的剂量在欧洲用于治疗BPH的可接受的臀果木属提取物的形式是被标准化为13%总固醇(代表性地以β_谷留醇计)的非洲臀果木的亲脂性提取物。患有轻度到中等BPH的男性有时每天服用50-100mg两次。双盲试验发现每天服用IOOmg —次与每天服用50mg两次的效果是相同的。应该监测臀果木属提取物超过至少六个月以确定其疗效。使用臀果木属提取物的BPH男性患者应该受医生监督。在临床试验中已经研究臀果木属提取物以每天25-200mg的剂量用于良性前列腺肥大。它可以标准化的制剂通尿灵(Tadenan)和前列平(Pigenil)获得。两者都是胶囊的形式并包含50mg非洲臀果木属提取物(臀果木属)。建议的剂量是每天两次。臀果木属提取物的作用机理在下述网站链接中详细地描述了臀果木属提取物的作用机理:(http://www.evitamins.com/encyclopedia/assets/nutritional-supplement/pygeuni/how-1t-works)0简略地，化学分析和药理学研究已经确认了臀果木树皮的亲脂性提取物具有两类的活性组分:I)植物留醇，包括β -谷留醇:这些通过干扰体内的激素类物质(前列腺素)的形成而发挥抗炎作用，所述激素类物质趋向于集聚在患良性前列腺增生(BPH)的男性的前列腺中。2)阿魏酸酯:这些间接地控制前列腺中的睾丸激素活性，这可以降低患BPH的风险。按照美国药典，来自非洲臀果木的臀果木属提取物具有2个活性成分:β -谷甾醇和阿魏酸二十二酯。口服天然的臀果木属提取物通过减少增大的前列腺来提供缓解，并且已经使用相当的时间(Andro M-C, Riffaud J-P，用于治疗良性前列腺增生症患者的非洲臀果木属提取物:25 年公开的经验的概览(Pygeum africanum extract for the treatment ofpatients with benign prostatic hyperplasia: A review of 25 years of publishedexperience), Curr Ther Res, 1995年(56):796)。由于在增大的前列腺患者中证明其效用，所以臀果木属提取物具有相当大的治疗重要性和商业价值。事实上在法国，非洲臀果木属提取物(PAE)已经成为用于治疗增大的前列腺的主要途径。臀果木属提取物生产中的挑战技术问题有限的原材料供应，由于从“不可再生”的来源，即植物的树皮中提取，这会导致植物死亡。这引起对环境的担忧，并且植物“非洲臀果木”已经被宣布为涉临灭绝的物种。尽管其效用，但是多年以来臀果木属提取物的供应已经减少。最近，从其中提取臀果木属提取物的植物，即非洲臀果木被CITES (濒临绝种野生动植物国际贸易公约)放入涉临灭绝的植物列表中。臀果木属提取物是从该植物的树皮中提取，这自然导致植物“死亡”，由此使该植物涉临灭绝。创造性的解决方案基于“可再生来源”的新工艺导致原材料的“无限供应”。新工艺不但不会引起植物的死亡，而且生产与由现有技术工艺所获得的相同质量的臀果木属提取物(就分析图谱和生物活性而言)，在该现有技术工艺中，使用“不可再生”的来源(即树皮)，并且植物会死亡。由于对臀果木属提取物的供应降低的担心，本专利申请的发明人开始探索臀果木属提取物的其它方法/来源。在相当多的研究和探索活动之后，惊奇地发现可以代替树皮从国内李(也称为李树)的剪枝的枝插/细枝中提取大量的臀果木属提取物。为了使这种树适当的生长，需要剪枝或“选 择性的切割”多余的树枝。这些切割的树枝构成“废植物品”，并且可以用作本发明的工艺中的臀果木属提取物的丰富来源。现有技术研究都没有指出从国内李以及还有从“废植物品”(即剪枝的枝插/细枝)中提取“臀果木属提取物”。几乎所有可商业获得的制品都是从为不可再生来源的非洲臀果木的树皮得到。相比之下，本发明的方法基于“可再生的”来源如枝插。另外，所述来源是在正常的季节活动(即剪枝)期间所得到的“废植物品”。下面讨论了本发明的新颖性、创造性和工业实用性(用于臀果木属提取物提取的改进工艺)。同样是为了纯粹说明的目的，以简化和容易的方式促进更好的理解本发明，而决不意味着限制在下面所述的描述或其他任何方式:新颖性:公开了一种用于从“可再生来源”而不是“不可再生来源”提取臀果木属提取物的新工艺。本发明的方法是基于使用“可再生的”来源(即在植物的剪枝期间所获得的剪枝的枝插/细枝)来提取臀果木属提取物。由于在本发明的草本植物中所使用的植物部分是“剪枝的枝插”而不是树皮，所以它不会破坏整个植物，由此可以反复地使用该植物。另外，臀果木属提取物的来源是“废植物品”，即在定期的植物国内李的剪枝期间所获得的剪枝后的枝插。使用废植物品(即植物国内李属的剪枝后的枝插/细枝)提取臀果木属提取物的方法在现有技术中没有报道。所有现有技术的方法都是基于从非洲臀果木(也称作非洲刺李)的树皮提取臀果木属提取物，并且没有公开基于国内李的剪枝后的枝插的方法。创造性开发用于从“可再生的来源”而不是“不可再生的来源”提取臀果木属提取物的新工艺以及显示出由该新工艺提取的臀果木属提取物具有与从“不可再生的来源”获得的臀果木属提取物可比较的生物活性且是没有毒的。因此，本发明的创造性在于开发用于提取/生产臀果木属提取物的新工艺，由于它涉及从“可再生的”来源而不是“不可再生的”来源提取臀果木属提起物，所以其更是生态环境友好的。在新工艺中， 存在用可再生来源(即剪枝后的枝插/细枝)代替不可再生的来源(即树皮)。现有的工艺使用导致植物的消耗的非洲臀果木的树皮，且它被分类为涉临灭绝的植物。相比之下，该新工艺使用臀果木属的可再生来源，即植物国内李的剪枝后的枝插/细枝。这没有破坏整个植物，由此可以反复使用该植物。另外，发明人通过详细的科学分析研究证明了，通过采用“不可再生的”来源(非洲臀果木树的树皮)的先前技术方法所获得的臀果木属提取物与通过采用“可再生的来源”(植物国内李的剪枝后的枝插/细枝而不是树皮)的本发明方法所得到的臀果木属提取物在组成和生物作用(减小前列腺)方面几乎相同。另外，它没有毒性。工业应用该提取物用于制造用于治疗增大的前列腺的药物组合物。目前的臀果木属提取物的药物组合物为50mg和IOOmg剂量的形式(胶囊)。由于证明了在增大的前列腺患者中的应用。臀果木属提取物具有相当大的治疗学重要性和商业价值。事实上，在法国，非洲臀果木属提取物(PAE)已成为用于治疗增大的前列腺的主要途径。本发明的方法具有工业应用，这是因为由于容易、长期且可持续的获得足够量的植物原材料(剪枝后的枝插)，其可以以“商业规模”实施。发现通过本发明的新方法所获得的臀果木属提取物的产量更多于由基于从非洲臀果木属的树皮提取的现有方法所获得的臀果木属提取物的产量(通过新工艺得到10g/kg，而通过先前技术方法得到5-6g/kg)。另外，根据详细的分析研究和对小鼠的预临床研究的科学成果，已经证明了通过新工艺获得的臀果木属提取物与通过先前技术方法获得的臀果木属提取物相当。该科学成果形成了通过新工艺所获得的臀果木属提取物的接受基础。在缺少关于组合物的相似性、安全和生物活性的证据下，通过新工艺得到的臀果木属提取物在工业标准上不会找到可接受性或者被调控用于治疗应用的天然产品的应用的官方批准。发明目的本发明的目的在于公开一种用于从“可再生的植物来源”而不是“不可再生的植物来源”提取臀果木属提取物的改进工艺。本发明的另一个目的在于公开一种用于提取臀果木属提取物的生态环境友的工艺，其不会导致从其中提取臀果木属提取物的植物死亡。本发明的另一个目的在于公开一种使用可再生植物部分(即细枝而不是树皮)从国内李(印度李)提取臀果木属提取物的改进工艺。本发明的另一个目的在于公开了通过新工艺且使用可再生植物来源所获得的臀果木属提取物与从“不可再生的”植物来源，即非洲臀果木的树皮得到的臀果木属提取物相比具有可比较的生物活性和组成。本发明的另一个目的在于公开了由可再生来源(即剪枝)所获得的臀果木属提取物与由不可再生的来源(即树皮)所得到的臀果木属提取物相当。本发明的另一目的是公开由可再生来源(即剪枝或枝插)所得到的臀果木属提取物具有与由不可再生资源获得的臀果木属提取物相同的药典成分。发明的详细描述现在详细描述通过本发明方法提取臀果木属提取物，其包含以下步骤:1.植物材料的繁殖2.收集从其中提取臀果木属提取物的可再生植物部分3.植物材料的清洗和干燥4.粉碎并缩小材料至形成粉末5.用有机溶剂提取6.浓缩并干燥以生产最终产品7.最终广品的分析和标准化每个步骤详细说明如下:1.植物材料的繁殖:在农田繁殖具体物种的国内李以确保天然植物材料的足够的可利用性，而在任何方式上没有缩减现有的天然资源或使现有植物涉临灭绝。该植物的成长周期非常短，即仅18-24月，其在原材料来源(修枝、枝插)以足够的量和长期、可持续为基础的可利用性方面来说使该工艺在商业上可行。2.收集从其中提取臀果木属提取物的具体部分:由在修枝过程中产生的国内李(印度李)的剪枝后的枝插/细枝中提取臀果木属提取物，所述修枝过程是为了植物的健壮生长和果实的最大产量，通常在每年的秋季进行。于是，用于提取的材料是“植物废料”。用于提取工艺的剪枝后的枝插/细枝是大小在6-8英寸范围内，而且是没有叶子的。3.植物材料的干燥:在阳光下风干细枝10-15天以上，直到含水量为约10-12%。4.粉碎:手工清洗干燥的植物材料且在粉碎机中进行粉碎。5.用有机溶剂提取:将粉化后的茎材料在35_40°C下用氯化的有机溶剂(1:4体积的溶剂)提取4次，每次提取2个小时。发现适合的溶剂是二氯甲烷(MDC)、三氯甲烷和甲醇/水混合物(80:20体积比)。MDC提供了最好的产量。6.浓缩并干燥以生产最终产品:一旦得到最终产品，同样进行浓缩和干燥。过滤并在30 V下且在真空下蒸发该提取物而获得浓缩的提取物。得到的所述最终产品是具有苦杏仁味的柔软的暗绿色物质。产量为约10g/kg，其有15-18%的总固醇(通常以β -谷甾醇来计算)。相比之下，从非洲臀果木(也叫做非洲刺李)报道的产量为5-6g/kg，其有13-15%的β_谷留醇含量。通过本发明的方法得到的臀果木属提取物在产量上更高、质量更好以及由于更高的产量而导致的更好的经济性，还 有采用更廉价的、容易可再生的资源(即枝插)而不是不可再生的资源(即树皮)。7.分析:臀果木树皮的亲脂性提取物具有2类活性组分:植物留醇，包括β_谷甾醇和阿魏酸酯。除了这些成分的定量比较研究，还进行了采用高效液相色谱详细分析的指纹识别法。从新发明的方法(基于可再生资源，即国内李的修枝/枝插)获得的臀果木属提取物和通过先前技术方法(基于不可再生资源，即非洲臀果木树皮)得到的臀果木属提取物的详细比较分析表明两者之间具有相当的类似性。其结果在下表I和表2中给出。表1:从非洲臀果木与从国内李属获得的臀果木属提取物的活性组分
权利要求
1.一种用于从蔷薇科、杏仁族、国内李属物种(印度李属)及相关物种(如本文所定义的)的植物中提取臀果木属提取物的改进工艺，包括如下步骤: -收集和干燥植物材料直到含水量为约10-15% -通过粉碎使所述植物材料粉化 -用氯化的有机物溶剂以及比例为1:4的水-醇混合物来提取粉化后的茎材料 -在真空下于30°C下过滤和干燥提取物以获得具有苦杏仁味的绿色物质，该物质被称作为“臀果木属提取物” 其中 -在所述改进工艺中，“可再生的植物来源”被用于臀果木属提取物的提取 -从可再生的植物来源所获得的提取物具有与从非洲臀果木属的树皮所获得的产品“臀果木属提取物”相似的药典形态 -所述提取物是无毒的 -所述提取物显示出抗BPH (良性前列腺增生症)活性。
2.根据权利要求1所述的改进工艺，其中，“相关物种”意指兰蒂李(PrimusLatifolium)、柄草李(Prunus parviforum)> 厚叶李(Prunus crassifolluni)、葡萄牙桂楼(Prunus Iusitanica)和云南桂楼(Primus Iaurocerasus)以及非洲刺李(Pygeumafricanum(Hook) F.Kalkm)或者 Pygeum stricasla (Hook)。
3.根据权利要求1所述的改进工艺，其中，所述“可再生的植物来源”包括国内李属和相关物种的去叶的枝插/细枝。
4.根据权利要求1和权利要求3所述的改进工艺，其中，在提取中所使用的枝插/细枝是在植物的常规“剪枝”或修枝工艺期间所获得的“生物废料”。
5.根据权利要求1和权利要求3所述的改进工艺，其中，所述枝插/细枝为约6-18英寸长。
6.根据权利要求1所述的改进工艺，其中，在所述提取工艺中所使用的氯化的有机溶剂是二氯甲烷(MDC)、三氯甲烷和甲醇/水混合物(体积比80:20 )，优选为MDC。
7.一种功能性食品或饮料或药物组合物，包含权利要求1所述的具有抗BPH (良性前列腺增生症)活性的提取物。
8.一种包含权利 要求1所述的提取物的药物组合物，其中，典型地以谷留醇计算的所述提取物中总固醇的浓度按照用于产品应用的药典标准被标准化。
9.一种用于从国内李属(印度李属)和相关物种提取臀果木属提取物的改进工艺，其中，所述改进工艺如参考详细的描述和实施例在本文中所充分描述的。
全文摘要
一种用于从蔷薇科、杏仁族、本国内李属物种(印度李属)及相关物种(如本文中所定义的)的植物中提取臀果木属提取物的改进工艺，所述工艺包含如下步骤收集植物材料，即枝插/细枝；除去叶子和进行干燥直到含水量为约10-15%；粉化茎材料；用氯化的有机物溶剂和混合比例为1:4的水-醇混合物来提取粉化后的茎材料；在真空下在30℃下过滤并干燥提取物以得到具有苦杏仁味的绿色物质，所述物质被称为“臀果木属提取物”，其中，在该改进工艺中，“可再生的植物来源”用于臀果木属提取物的提取，而不是“不可再生的来源”如树的树皮。由该新工艺所获得的臀果木属提取物与从“不可再生的来源”(即非洲臀果木的树皮)得到的产品“臀果木属提取物”具有相似的药典形态。另外，它是没有毒的，且显示出与由不可再生的来源(即非洲臀果木的树皮)得到的臀果木属提取物可比较的抗-BPH(良性前列腺增生症)活性。
文档编号A61K36/736GK103153324SQ201280002914
公开日2013年6月12日 申请日期2012年7月19日 优先权日2011年7月22日
发明者基兰·蒂瓦里, 阿肖克·夏尔马 申请人:帕万·库马·戈埃尔