针对硬化蛋白的免疫结合剂的制作方法
【专利摘要】本发明描述了结合硬化蛋白或硬化蛋白和TNF的蛋白质，连同其在用于治疗、预防和诊断硬化蛋白相关疾病以及用于检测细胞、组织、样品和组合物中的硬化蛋白或硬化蛋白和TNF的组合物和方法中的用途。
【专利说明】针对硬化蛋白的免疫结合剂
[0001] 与相关申请的夺叉参考
[0002] 本专利申请要求于2011年10月24日提交的美国临时申请系列号61/550, 724的 优先权，所述美国临时申请全文以引用方式并入本文。
【技术领域】
[0003] 提供了硬化蛋白（sclerostin)结合蛋白及其具体的在急性和慢性免疫性疾病的 预防和/或治疗中的用途，所述急性和慢性免疫性疾病例如类风湿性关节炎、骨关节炎、牛 皮癣、多发性硬化及其他自身免疫疾病。
【背景技术】
[0004] S0ST基因编码称为硬化蛋白的24KD蛋白质，所述硬化蛋白基于序列相似性 被分类为含半胱氨酸结的糖蛋白的DNA家族成员（Avasian-Kretchmer (2004) Mol. Endocrinol. 8(1) :1-12)。硬化蛋白是骨形成的负调节物，其抑制成骨细胞增殖以及分化并 且阻抑体外成骨细胞矿化（Poole等人（2005) FASEB J. 19:1836-38 ;Winkler等人（2005) J. Biol. Chem. 280 (4) : 2498-2502)。
[0005] 硬化蛋白是经典Wnt信号传导途径的抑制剂。它与LRP4、LRP5和/或LRP6受体 结合，导致β -连环蛋白的稳定，导致通过转录调节物包括淋巴样增强因子1 (LEF)和T细 胞因子（TCF)的基因转录调控。硬化蛋白抑制允许通过Wnt途径的信号传导，导致骨形成 (van Bezooi jen 等人（2007) J. Bone Min. Res. 22 (1) : 19-28)。
[0006] 经典fct信号传导的增加导致增加的骨量（Li等人（2005) J. Biol. Chem. 280(20) :19883-7 ;Semenov 等人（2005)J. Biol. Chem. 280(29):26770-775)。LRP5 中的功能突变体的丧失导致在人和LRP5K0小鼠中的骨质疏松症-假神经胶质瘤综合征中 可见的低骨量表型，证实与在这些患者中可见的表型类似的表型（Balemans等人（2008) Calcif.Tissue Int.82:445-53)。已鉴定了 S0ST基因的两种人突变，所述突变导致硬 化性狭窄和Van Buchem' s病，两者均导致高骨量表型（Brunkow等人（2001)Am. J. Hum. Genet. 68:577-89 ;Balemans 等人（2001)Hum Mol Genetl0:537-43)。另外，硬化蛋白 K0 小 鼠证实高骨量表型，而硬化蛋白过生产Tg小鼠具有低骨量表型（Li等人（2008) J. Bone和 Min. Res. 23(6) :860-9)。
[0007] UCB Celltech(以前的Celltech)与AMGEN合作开发了用于治疗骨质疏松症和骨 折愈合的硬化蛋白中和fflAb。I期临床试验已完成。II期试验已在骨质疏松症中完成，并且 III期试验已开始。用于治疗骨折愈合的多重II期试验在进行中。TNF在关节炎中的致病 作用完全确定，因为TNF-α拮抗剂降低炎症且限制人疾病中的软骨损害和骨质侵蚀的进 展（van den Berg (2001) Arthritis Res. 3:18_26)。尽管 TNF 诘抗剂已改革 RA 治疗，但显 著部分的患者不足够响应这些药物。使用TNF-α和S0ST的临床前研究指向在关节炎病理 生理学中的独立和重叠作用两者。虽然硬化蛋白或TNF-a抑制单独仅对促炎基因表达发 挥适度作用，但S0ST抑制与TNF-a抑制的组合导致强协同应答。特别地，抑制硬化蛋白和 TNF-α的组合具有阻断炎症且促进骨愈合两者的潜力，给患者提供更大的临床益处。
[0008] 尽管自从该关键促炎细胞因子被发现，已有多种针对硬化蛋白的被介绍，但仍存 在对改善的抗体的需要，所述改善的抗体可有效介导或中和炎症应答或自身免疫障碍过程 中的硬化蛋白活性，同时保护或恢复骨矿物质密度、骨体积和骨强度。
【发明内容】
[0009] 提供了结合人硬化蛋白的蛋白质。提供了结合蛋白，其包括但不限于抗体、其抗原 结合部分、和多价多特异性结合蛋白例如DVD结合蛋白，其可结合人硬化蛋白和另一靶标 例如TNF-α。提供了制备且使用本文描述的硬化蛋白结合蛋白的方法以及多种组合物，所 述组合物可用于检测样品中的硬化蛋白的方法或者治疗或预防个体中的障碍的方法，所述 障碍与硬化蛋白活性相关或怀疑与硬化蛋白活性相关。
[0010] 在一个方面，提供了包含能够结合人硬化蛋白的抗原结合结构域的结合蛋白，所 述抗原结合结构域包括包含下述的至少一个CDR :
[0011] CDR-H1。X1-X2-X3-X4-X 5(SEQIDN0:15)，其中：
[0012] Xi是D或N或者不存在；
[0013] 父2是丫或心
[0014] X3 是 A 或 N;
[0015] 乂4是1^或心
[0016] 父5是!1 或N;
[0017] CDR-H2。
[0018] X! - x2 - x3 - x4 - x5 - x6 - x7 - x8 - x9 - x10 - xn - x12 - x13 - x14 - x15 - x16 - x17(seq ID NO: 16)，其中：
[0019] 父1是6或心
[0020] X2 是 I 或 N ;
[0021] X3 是 S 或 N;
[0022] X4 是 W 或 N ;
[0023] X5 是 H 或 N ;
[0024] X6 是 G 或 N ;
[0025] X7 是 D 或 N ;
[0026] X8 是 F 或 N ;
[0027] X9 是 I 或 N ;
[0028] X1Q 是 D 或 N ;
[0029] Xn 是 Y 或 N ;
[0030] X12 是 A 或 N ;
[0031] 乂13是0 或N;
[0032] X14 是 S 或 N ;
[0033] X15 是 V 或 N ;
[0034] X16 是 K 或 N ;和
[0035] X17 是 G 或 N ;
[0036] CDR-H3。X! - X2 - X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8 - X9 - X10 - Xn - X12 (SEQ ID NO: 17)，
[0037] 其中：
[0038] X!是 N 或 N ;
[0039] X2 是 N 或 N ;
[0040] X3 是 R 或 N ;
[0041] X4 是 G 或 N;
[0042] X5 是 Y 或 N ;
[0043] X6 是 G 或 N ;
[0044] X7 是 G 或 N ;
[0045] X8 是 L 或 N ;
[0046] X9 是 D 或 N;和
[0047] X1Q 是 V 或 N ;
[0048] CDR_L1。父工 _ X2 _ X3 _ X4 _ X5 _ X6 _ X7 _ X8 _ X9 _ X10 _ Xu _ X12 _ X13 _ X14 _ X15 _ X16(SEQIDN0:18)，其中：
[0049] Xi 是 S 或 N ;
[0050] X2 是 G 或 N ;
[0051] X3 是 S 或 N;
[0052] X4 是 S 或 N ;
[0053] X5 是 S 或 N ;
[0054] X6 是 N 或 N ;
[0055] X7 是 I 或 N ;
[0056] X8 是 G 或 N ;
[0057] X9 是 S 或 N ;
[0058] X1Q 是 N 或 N ;
[0059] Xn 是 T 或 N ;
[0060] X12 是 V 或 N ;和
[0061] X13是N或N;
[0062] CDR-L2。X! - X2 - X3 - X4 - X5 - X6 - X7 (SEQ ID NO: 19)，其中：
[0063] Xi 是 S 或 N ;
[0064] X2 是 N 或 N ;
[0065] X3 是 N 或 N ;
[0066] X4 是 Q 或 N ;
[0067] X5 是 R 或 N ;
[0068] 乂6是？或心和
[0069] X7 是 S 或 N ;
[0070] 或
[0071] CDR-L3。X! - X2 - X3 - X4 - X5 - X6 - X7 - X8 - X9(SEQ ID N0:20)，其中：
[0072] Xi 是 A 或 N ;
[0073] X2 是 A 或 N ;
[0074] X3 是 W 或 N ;
[0075] X4 是 D 或 N ;
[0076] X5 是 D 或 N ;
[0077] X6 是 S 或 N ;
[0078] X7 是 L 或 N ;
[0079] X8 是 N 或 N ;
[0080] X9 是 G 或 N ;
[0081] X1(l 是 S 或 N;
[0082] Xn 是 Y 或 N ;和
[0083] X12 是 V 或 N。
[0084] 在一个实施例中，提供了包含至少一个⑶R的结合蛋白，所述至少一个⑶R包含 SEQ ID N0:3 的残基 31-35 ;SEQ ID N0:3 的残基 50-66 ;SEQ ID N0:3 的残基 99-108 ;SEQ ID N0:4 的残基 23-34 ;SEQ ID N0:4 的残基 51-57 ;SEQ ID N0:4 的残基 90-101 ;SEQ ID N0:5 的残基 31-35 ;SEQ ID N0:5 的残基 50-66 ;SEQ ID N0:5 的残基 99-115 ;SEQ ID N0:6 的残基 23-33; SEQ ID NO :6 的残基 49-55; SEQ ID NO :6 的残基 88-96; SEQ ID NO :7 的残 基 31-35 ;SEQ ID N0:7 的残基 50-66 ;SEQ ID N0:7 的残基 99-107 ;SEQ ID N0:8 的残基 23-33 ;SEQ ID N0:8 的残基49-55 ;SEQ ID N0:8 的残基88-95 ;SEQ ID N0:9 的残基31-35; SEQ ID N0:9 的残基 50-66 ;SEQ ID N0:9 的残基 99-107 ;SEQ ID NO: 10 的残基 24-39 ;SEQ ID NO: 10 的残基55-61 ;SEQ ID NO: 10 的残基94-112 ;SEQ ID NO: 11 的残基31-35 ;SEQ ID NO: 11 的残基 50-66 ;SEQ ID NO: 11 的残基 99-111 ;SEQ ID NO: 12 的残基 24-39 ;SEQ ID NO: 12 的残基 55-61 ;SEQ ID NO: 12 的残基 94-113 ;SEQ ID NO: 13 的残基 31-37 ;SEQ ID NO: 13 的残基 52-69 ;SEQ ID NO: 13 的残基 102-122 ;SEQ ID NO: 14 的残基 24-34 ;SEQ ID NO: 14 的残基 50-56 ;SEQ ID NO: 14 的残基 89-97 ;SEQ ID NO: 1998 的残基 31-35 ;SEQ ID NO: 1998 的残基 50-66 ;SEQ ID NO: 1998 的残基 99-110 ;SEQ ID NO. : 1999 的残基 31-35 ; SEQ ID NO. :1999 的残基50-66 ;SEQ ID NO. :1999 的残基99-110 ;SEQ ID NO. :2000 的残基 31-35 ; SEQ ID NO. :2000 的残基 50-66 ; SEQ ID NO. :2000 的残基 99-110 ; SEQ ID NO. :2001 的残基 31-35 ;SEQ ID NO. :2001 的残基 50-66 ;SEQ ID NO. :2001 的残基 99-110 ;SEQ ID NO. :2002 的残基 31-35 ; SEQ ID NO. :2002 的残基 50-66 ; SEQ ID NO. :2002 的残基 99-110 ; SEQ ID NO. :2003 的残基 31-35 ;SEQ ID NO. :2003 的残基 50-66 ;SEQ ID NO. :2003 的残基 99-110 ;SEQ ID NO. :2004 的残基31-35 ;SEQ ID NO. :2004 的残基50-66 ;SEQ ID NO. :2004 的残基 99-110 ;SEQ ID NO. :2005 的残基 31-35 ;SEQ ID NO. :2005 的残基 50-66 ;SEQ ID NO. :2005 的残基 99-110 ;SEQ ID NO. :2006 的残基 31-35 ;SEQ ID NO. :2006 的残基 50-66 ; SEQ ID NO. :2006 的残基 99-110 ; SEQ ID NO. :2007 的残基 31-35 ; SEQ ID NO. :2007 的残基 50-66 ; SEQ ID NO. :2007 的残基 99-110 ; SEQ ID NO. :2008 的残基 23-36 ; SEQ ID NO. :2008 的残基 52 - 58 ;SEQ ID NO. :2008 的残基 101-109 ;SEQ ID NO. :2009 的残基 23-36 ;SEQ ID NO. :2009 的残基 52 - 58 ;SEQ ID NO. :2009 的残基 101 - 109 ;SEQ ID NO. :2008 的残 基 23-36 ;SEQ ID NO. :2010 的残基 52 - 58 ;SEQ ID NO. :2010 的残基 101-109 ;SEQ ID NO. :2011 的残基 23-36 ; SEQ ID NO. :2011 的残基 52 - 58 ; SEQ ID NO. :2011 的残基101_ 109 ;SEQ ID NO. :2012 的残基23-36 ;SEQ ID NO. :2012 的残基52 - 58 ;SEQ ID NO. :2012 的 残基 101 - 109 ;SEQ ID NO. :2013 的残基 23-36 ;SEQ ID NO. :2013 的残基 52 - 58 ;SEQ ID NO. : 2013 的残基 101 - 109 ;SEQ ID NO. : 2014 的残基 23-36 ;SEQ ID NO. : 2014 的残基52_ 58 ;SEQ ID NO. : 2014 的残基 101 - 109 ;SEQ ID NO. : 2015 的残基 23-36 ;SEQ ID NO. : 2015 的残基 52 - 58 ;SEQ ID NO. :2015 的残基 101-109 ;SEQ ID NO. :2016 的残基 23-36 ;SEQ ID NO. :2016 的残基 52 - 58 ;SEQ ID NO. :2016 的残基 101-109 ;SEQ ID NO. :2017 的残 基 23-36 ;SEQ ID NO. :2017 的残基 52 - 58 ;SEQ ID NO. :2017 的残基 101-109 ;SEQ ID N0:2020 的残基31-35 ;SEQ ID N0:2020 的残基50-66 ;SEQ ID N0:2020 的残基99-108 ;SEQ ID NO:2021 的残基31-35 ;SEQ ID NO:2021 的残基50-66 ;SEQ ID NO:2021 的残基99-108 ; SEQ ID N0:2022 的残基 31-35 ;SEQ ID N0:2022 的残基 50-66 ;SEQ ID N0:2022 的残基 99-108 ;SEQ ID N0:2023 的残基 31-35 ;SEQ ID N0:2023 的残基 50-66 ;SEQ ID N0:2023 的残基 99-108 ;SEQ ID N0:2024 的残基 31-35 ;SEQ ID N0:2024 的残基 50-66 ;SEQ ID N0:2024 的残基 99-108 ;SEQ ID N0:2025 的残基 31-35 ;SEQ ID N0:2025 的残基 50-66; SEQ ID N0:2025 的残基 99-108 ;SEQ ID N0:2026 的残基 31-35 ;SEQ ID N0:2026 的残基 50- 66 ;SEQ ID N0:2026 的残基 99-108 ;SEQ ID N0:2027 的残基 31-35 ;SEQ ID N0:2027 的残基 50-66 ;SEQ ID N0:2027 的残基 99-108 ;SEQ ID N0:2028 的残基 31-35 ;SEQ ID N0:2028 的残基50-66 ;SEQ ID N0:2028 的残基99-108 ;SEQ ID N0:2029 的残基31-35 ;SEQ ID N0:2029 的残基50-66 ;SEQ ID N0:2029 的残基99-108 ;SEQ ID N0:2030 的残基31-35; SEQ ID N0:2030 的残基 50-66 ;SEQ ID N0:2030 的残基 99-108 ;SEQ ID N0:2031 的残基 31-35 ;SEQ ID N0:2031 的残基 50-66 ;SEQ ID N0:2031 的残基 99-108 ;SEQ ID N0:2032 的残基 31-35 ;SEQ ID N0:2032 的残基 50-66 ;SEQ ID N0:2032 的残基 99-108 ;SEQ ID N0:2033 的残基31-35 ;SEQ ID N0:2033 的残基50-66 ;SEQ ID N0:2033 的残基99-108 ;SEQ ID N0:2034 的残基31-35 ;SEQ ID N0:2034 的残基50-66 ;SEQ ID N0:2034 的残基99-110; SEQ ID NO. :2035 的残基 31-35 ;SEQ ID NO. :2035 的残基 51-57 ;SEQ ID NO. :2035 的残基 90-101 ;SEQ ID NO. :2036 的残基31-35 ;SEQ ID NO. :2036 的残基 51-57 ;SEQ ID NO. :2036 的残基 90-101 ;SEQ ID NO. :2037 的残基 31-35 ;SEQ ID NO. :2035 的残基 51-57 ;SEQ ID NO. :2037 的残基90-101 ;SEQ ID NO. :2038 的残基 31-35 ;SEQ ID NO. :2038 的残基 51-57 ; SEQ ID NO. :2038 的残基90-101 ;SEQ ID NO. :2039 的残基31-35 ;SEQ ID NO. :2039 的残基 51- 57 ; SEQ ID NO. :2039 的残基 90-101 ; SEQ ID NO. :2040 的残基 31-35 ; SEQ ID NO. :2040 的残基 51-57 ;SEQ ID NO. :2040 的残基 90-101 ;SEQ ID NO. :2041 的残基 31-35 ;SEQ ID NO. :2041 的残基 51-57 ;SEQ ID NO. :2041 的残基90-101 ;SEQ ID NO. :2042 的残基 31-35 ; SEQ ID NO. :2042 的残基 51-57 ;SEQ ID NO. :2042 的残基90-101 ;SEQ ID NO. :2043 的残基 31-35 ;SEQ ID NO. :2043 的残基51-57 ;SEQ ID NO. :2043 的残基90-101 ;SEQ ID NO. :2044 的残基 31-35 ;SEQ ID NO. :2044 的残基 51-57 ;SEQ ID NO. :2044 的残基 90-101 ;SEQ ID NO. :2045 的残基 31-35 ; SEQ ID NO. :2045 的残基 51-57 ; SEQ ID NO. :2045 的残基 90-101 ; SEQ ID NO. :2046 的残基 31-35 ;SEQ ID NO. :2046 的残基 51-57 ;SEQ ID NO. :2046 的残基 90-101 ;SEQ ID NO. :2047 的残基31-35 ;SEQ ID NO. :2047 的残基51-57 ;SEQ ID NO. :2047 的残基 90-101 ;SEQ ID NO. :2048 的残基 31-35 ;SEQ ID NO. :2048 的残基 51-57 ;SEQ ID NO. :2048 的残基 90-101 ; SEQ ID NO. :2049 的残基 31-35 ; SEQ ID NO. :2049 的残基 51-57 ; 和 SEQ ID NO. :2049 的残基 90-101。
[0085] 在另一个实施例中，提供了包含上文描述的至少3个CDR的硬化蛋白结合蛋白。
[0086] 在另一个实施例中，提供了包含表1的至少3个⑶R的硬化蛋白结合蛋白：
[0087] 表 1
[0088]
【权利要求】
1. 一种包含能够结合人硬化蛋白的抗原结合结构域的结合蛋白，所述抗原结合结构域 包括包含氨基酸共有序列的至少一个CDR。
2. 根据权利要求1所述的结合蛋白，其中所述至少一个CDR包含选自下述的氨基酸序 列：SEQ ID N0:3 的残基 31-35 ;SEQ ID N0:3 的残基 50-66 ;SEQ ID N0:3 的残基 99-108; SEQ ID N0:4 的残基 23-34 ;SEQ ID N0:4 的残基 51-57 ;SEQ ID N0:4 的残基 90-101 ;SEQ ID NO:5 的残基 31-35 ;SEQ ID NO:5 的残基 50-66 ;SEQ ID NO:5 的残基 99-115 ;SEQ ID NO:6 的残基23-33 ;SEQ ID NO:6 的残基49-55 ;SEQ ID NO:6 的残基88-96 ;SEQ ID NO:7 的 残基 31-35 ;SEQ ID NO: 7 的残基 50-66 ;SEQ ID NO: 7 的残基 99-107 ;SEQ ID NO:8 的残基 23-33 ;SEQ ID N0:8 的残基49-55 ;SEQ ID N0:8 的残基88-95 ;SEQ ID N0:9 的残基31-35; SEQ ID N0:9 的残基 50-66 ;SEQ ID N0:9 的残基 99-107 ;SEQ ID NO: 10 的残基 24-39 ;SEQ ID NO: 10 的残基55-61 ;SEQ ID NO: 10 的残基94-112 ;SEQ ID NO: 11 的残基31-35 ;SEQ ID NO: 11 的残基 50-66 ;SEQ ID NO: 11 的残基 99-111 ;SEQ ID NO: 12 的残基 24-39 ;SEQ ID NO: 12 的残基 55-61 ;SEQ ID NO: 12 的残基 94-113 ;SEQ ID NO: 13 的残基 31-37 ;SEQ ID NO: 13 的残基 52-69 ;SEQ ID NO: 13 的残基 102-122 ;SEQ ID NO: 14 的残基 24-34 ;SEQ ID NO: 14 的残基 50-56 ;SEQ ID NO: 14 的残基 89-97 ;SEQ ID NO: 1998 的残基 31-35 ;SEQ ID NO: 1998 的残基 50-66 ;SEQ ID NO: 1998 的残基 99-110 ;SEQ ID NO. : 1999 的残基 31-35 ; SEQ ID NO. :1999 的残基50-66 ;SEQ ID NO. :1999 的残基99-110 ;SEQ ID NO. :2000 的残基 31-35 ;SEQ ID NO. :2000 的残基50-66 ;SEQ ID NO. :2000 的残基99-110 ;SEQ ID NO. :2001 的残基 31-35 ;SEQ ID NO. :2001 的残基 50-66 ;SEQ ID NO. :2001 的残基 99-110 ;SEQ ID NO. :2002 的残基 31-35 ; SEQ ID NO. :2002 的残基 50-66 ; SEQ ID NO. :2002 的残基 99-110 ; SEQ ID NO. :2003 的残基 31-35 ;SEQ ID NO. :2003 的残基 50-66 ;SEQ ID NO. :2003 的残基 99-110 ;SEQ ID NO. :2004 的残基31-35 ;SEQ ID NO. :2004 的残基50-66 ;SEQ ID NO. :2004 的残基 99-110 ;SEQ ID NO. :2005 的残基 31-35 ;SEQ ID NO. :2005 的残基 50-66 ;SEQ ID NO. :2005 的残基 99-110 ;SEQ ID NO. :2006 的残基 31-35 ;SEQ ID NO. :2006 的残基 50-66 ; SEQ ID NO. :2006 的残基 99-110 ; SEQ ID NO. :2007 的残基 31-35 ; SEQ ID NO. :2007 的残基 50-66 ;SEQ ID NO. :2007 的残基99-110 ;SEQ ID NO. :2008 的残基23-36 ;SEQ ID NO. :2008 的残基 52 - 58 ;SEQ ID NO. :2008 的残基 101-109 ;SEQ ID NO. :2009 的残基 23-36 ;SEQ ID NO. :2009 的残基 52 - 58 ;SEQ ID NO. :2009 的残基 101 - 109 ;SEQ ID NO. :2008 的残 基 23-36 ;SEQ ID NO. :2010 的残基 52 - 58 ;SEQ ID NO. :2010 的残基 101-109 ;SEQ ID NO. :2011 的残基 23-36 ; SEQ ID NO. :2011 的残基 52 - 58 ; SEQ ID NO. :2011 的残基101_ 109 ;SEQ ID NO. :2012 的残基 23-36 ;SEQ ID NO. :2012 的残基 52 - 58 ;SEQ ID NO. :2012 的 残基 101 - 109 ;SEQ ID NO. :2013 的残基 23-36 ;SEQ ID NO. :2013 的残基 52 - 58 ;SEQ ID NO. : 2013 的残基 101 - 109 ;SEQ ID NO. : 2014 的残基 23-36 ;SEQ ID NO. : 2014 的残基52_ 58 ;SEQ ID NO. : 2014 的残基 101 - 109 ;SEQ ID NO. : 2015 的残基 23-36 ;SEQ ID NO. : 2015 的残基 52 - 58 ;SEQ ID NO. :2015 的残基 101-109 ;SEQ ID NO. :2016 的残基 23-36 ;SEQ ID NO. :2016 的残基 52 - 58 ;SEQ ID NO. :2016 的残基 101-109 ;SEQ ID NO. :2017 的残 基 23-36 ;SEQ ID NO. :2017 的残基 52 - 58 ;SEQ ID NO. :2017 的残基 101-109 ;SEQ ID N0:2020 的残基 31-35 ;SEQ ID N0:2020 的残基 50-66 ;SEQ ID N0:2020 的残基 99-108; SEQ ID N0:2021 的残基 31-35 ;SEQ ID N0:2021 的残基 50-66 ;SEQ ID N0:2021 的残基 99-108 ;SEQ ID N0:2022 的残基 31-35 ;SEQ ID N0:2022 的残基 50-66 ;SEQ ID N0:2022 的残基 99-108 ;SEQ ID N0:2023 的残基 31-35 ;SEQ ID N0:2023 的残基 50-66 ;SEQ ID N0:2023 的残基99-108 ;SEQ ID N0:2024 的残基31-35 ;SEQ ID N0:2024 的残基50-66 ;SEQ ID N0:2024 的残基99-108 ;SEQ ID N0:2025 的残基31-35 ;SEQ ID N0:2025 的残基50-66; SEQ ID N0:2025 的残基 99-108 ;SEQ ID N0:2026 的残基 31-35 ;SEQ ID N0:2026 的残基 50- 66 ;SEQ ID N0:2026 的残基 99-108 ;SEQ ID N0:2027 的残基 31-35 ;SEQ ID N0:2027 的残基 50-66 ;SEQ ID N0:2027 的残基 99-108 ;SEQ ID N0:2028 的残基 31-35 ;SEQ ID N0:2028 的残基50-66 ;SEQ ID N0:2028 的残基99-108 ;SEQ ID N0:2029 的残基31-35 ;SEQ ID N0:2029 的残基50-66 ;SEQ ID N0:2029 的残基99-108 ;SEQ ID N0:2030 的残基31-35; SEQ ID N0:2030 的残基 50-66 ;SEQ ID N0:2030 的残基 99-108 ;SEQ ID N0:2031 的残基 31-35 ;SEQ ID N0:2031 的残基 50-66 ;SEQ ID N0:2031 的残基 99-108 ;SEQ ID N0:2032 的残基 31-35 ;SEQ ID N0:2032 的残基 50-66 ;SEQ ID N0:2032 的残基 99-108 ;SEQ ID N0:2033 的残基31-35 ;SEQ ID N0:2033 的残基50-66 ;SEQ ID N0:2033 的残基99-108 ;SEQ ID N0:2034 的残基31-35 ;SEQ ID N0:2034 的残基50-66 ;SEQ ID N0:2034 的残基99-110; SEQ ID NO. :2035 的残基 31-35 ;SEQ ID NO. :2035 的残基 51-57 ;SEQ ID NO. :2035 的残基 90-101 ;SEQ ID NO. :2036 的残基31-35 ;SEQ ID NO. :2036 的残基51-57 ;SEQ ID NO. :2036 的残基 90-101 ;SEQ ID NO. :2037 的残基 31-35 ;SEQ ID NO. :2035 的残基 51-57 ;SEQ ID NO. :2037 的残基 90-101 ;SEQ ID NO. :2038 的残基 31-35 ;SEQ ID NO. :2038 的残基 51-57 ; SEQ ID NO. :2038 的残基90-101 ;SEQ ID NO. :2039 的残基31-35 ;SEQ ID NO. :2039 的残基 51- 57 ; SEQ ID NO. :2039 的残基 90-101 ; SEQ ID NO. :2040 的残基 31-35 ; SEQ ID NO. :2040 的残基 51-57 ;SEQ ID NO. :2040 的残基 90-101 ;SEQ ID NO. :2041 的残基 31-35 ;SEQ ID NO. :2041 的残基 51-57 ;SEQ ID NO. :2041 的残基90-101 ;SEQ ID NO. :2042 的残基 31-35 ; SEQ ID NO. :2042 的残基 51-57 ;SEQ ID NO. :2042 的残基90-101 ;SEQ ID NO. :2043 的残基 31-35 ;SEQ ID NO. :2043 的残基51-57 ;SEQ ID NO. :2043 的残基90-101 ;SEQ ID NO. :2044 的残基 31-35 ;SEQ ID NO. :2044 的残基 51-57 ;SEQ ID NO. :2044 的残基 90-101 ;SEQ ID NO. :2045 的残基 31-35 ; SEQ ID NO. :2045 的残基 51-57 ; SEQ ID NO. :2045 的残基 90-101 ; SEQ ID NO. :2046 的残基 31-35 ;SEQ ID NO. :2046 的残基 51-57 ;SEQ ID NO. :2046 的残基 90-101 ;SEQ ID NO. :2047 的残基31-35 ;SEQ ID NO. :2047 的残基51-57 ;SEQ ID NO. :2047 的残基 90-101 ;SEQ ID NO. :2048 的残基 31-35 ;SEQ ID NO. :2048 的残基 51-57 ;SEQ ID NO. :2048 的残基 90-101 ;SEQ ID NO. :2049 的残基 31-35 ;SEQ ID NO. :2049 的残基 51-57 ; 和 SEQ ID NO. :2049 的残基 90-101。
3. 根据权利要求2所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白包含至少3个CDR。
4. 根据权利要求3所述的结合蛋白，其中所述至少3个CDR包含选自下述的可变结构 域CDR组：
5. 根据权利要求4所述的结合蛋白，所述结合蛋白包含至少两个可变结构域CDR组。
6. 根据权利要求5所述的结合蛋白，其中所述至少两个可变结构域CDR组选自下述： VH MSL10CDR 组和 VL MSL10CDR 组；VH MSL17CDR 组和 VL MSL17CDR 组；VH MSL9-8CDR 组 和 VL MSL9-8CDR 组；VH MSK9CDR 组和 VL MSK9CDR 组；VH MSK13CDR 组和 VL MSK13CDR 组；VH MSK21CDR 组和 VL MSK21CDR 组；VH AE10-6AM1CDR 组和 VL AE10-6AM1CDR 组；VH AE10-6AM2CDR 组和 VL AE10-6AM2CDR 组；VH AE10-6AM3CDR 组和 VL AE10-6AM3CDR 组； VH AE10-6AM4CDR 组和 VL AE10-6AM4CDR 组；VH AE10-6AM5CDR 组和 VL AE10-6AM5CDR 组； VH AE10-6AM6CDR 组和 VL AE10-6AM6CDR 组；VH AE10-6AM7CDR 组和 VL AE10-6AM7CDR 组； VH AE10-6AM8CDR 组和 VL AE10-6AM8CDR 组；VH AE10-6AM9CDR 组和 VL AE10-6AM9CDR 组； VH AE10-6AM10CDR 组和 VL AE10-6AM10CDR 组；VH MSL10AM1CDR 组和 VL MSL10AM1CDR 组；VH MSL10AM2CDR 组和 VL MSL10AM2CDR 组；VH MSL10AM3CDR 组和 VL MSL10AM3CDR 组； VH MSL10AM4CDR 组和 VL MSL10AM4CDR 组；VH MSL10AM5CDR 组和 VL MSL10AM5CDR 组； VH MSL10AM6CDR 组和 VL MSL10AM6CDR 组；VH MSL10AM7CDR 组和 VL MSL10AM7CDR 组； VH MSL10AM8CDR 组和 VL MSL10AM8CDR 组；VH MSL10AM9CDR 组和 VL MSL10AM9CDR 组；VH MSL10AM10CDR 组和 VL MSL10AM10CDR 组；VH MSL10AM1. 2CDR 组和 VL MSL10AM1. 2CDR 组；VH MSL10AM2. 2CDR 组和 VL MSL10AM2. 2CDR 组；VH MSL10AM3. 2CDR 组和 VL MSL10AM3. 2CDR 组； 以及 VH MSL10AM4. 2CDR 组和 VL MSL10AM4. 2CDR 组。
7. 根据权利要求1所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白包含具有选自下述的氨基酸序 列的至少一个可变结构域：SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7, SEQ ID N0:8, SEQ ID N0:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID N0:1U SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID N0:14；SEQ ID N01719-1866 ；SEQ ID N01867-1997 ；SEQ ID N01998-2007 ； SEQ ID N02008-2017;SEQ ID N02020-2034;和 SEQ ID N02035-2049。
8. 根据权利要求1所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白包含两个可变结构域，其 中第一可变结构域包含选自 SEQ ID 勵3、5、7、9、11、13、1719-1866、1998-2007、2018和 2020-2034的序列，并且其中第二可变结构域包含选自SEQ ID N04、6、8、10、12、1867-1997、 2007-2017、2019 和 2035-2049 的序列。
9. 根据权利要求1所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白： (a) 能够调节硬化蛋白的生物学功能； (b) 能够中和硬化蛋白； (c) 其中所述硬化蛋白是前人硬化蛋白；成熟人硬化蛋白或截短的人硬化蛋白； (d) 其中所述结合蛋白降低硬化蛋白与其受体结合的能力；和/或 (e)其中中和结合蛋白能够降低下述中的一种或多种：Thl调节；Th2调节；Nk调节；嗜 中性粒细胞调节；单核细胞-巨噬细胞谱系调节；嗜中性粒细胞调节；嗜酸性粒细胞调节； B细胞调节；细胞因子调节；趋化因子调节；粘附分子调节；和细胞募集调节。
10. 根据权利要求1所述的结合蛋白，其中通过表面等离子共振测量，所述结合蛋白具 有至少约io2m S 1 ;至少约103M S 1 ;至少约104M S 1 ;至少约105M S 1 ;或至少约106M S 1的 与硬化蛋白的结合速率常数（U。
11. 根据权利要求1所述的结合蛋白，其中通过表面等离子共振测量，所述结合蛋白具 有至多约ΚΓΥ1;至多约ΚΓΥ 1;至多约ΚΓΥ1;或至多约ιο?的与硬化蛋白的分离速率 常数<Xff)。
12. 根据权利要求1所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白具有至多约1(Γ7Μ ;至多约 1(Γ8Μ ;至多约1(Γ9Μ ;至多约ΚΓ、；至多约1(ΓηΜ ;至多约1(Γ12Μ ;和至多约1(Γ13Μ的与硬化 蛋白的解离常数（KD)。
13. -种编码根据权利要求1所述的结合蛋白氨基酸序列的分离的核酸。
14. 一种包含根据权利要求13所述的分离的核酸的载体。
15. -种包含根据权利要求15所述的载体的宿主细胞。
16. -种产生能够结合硬化蛋白的蛋白质的方法，所述方法包括在足以产生能够结合 硬化蛋白的结合蛋白的条件下，在培养基中培养根据权利要求16所述的宿主细胞。
17. -种由根据权利要求16所述的方法产生的蛋白质。
18. -种用于处理哺乳动物的方法，所述方法包括给所述哺乳动物施用有效量的根据 权利要求17所述的蛋白质的步骤。
19. 一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1所述的结合蛋白和药学可 接受的载体。
20. 根据权利要求19所述的药物组合物，所述药物组合物还包含用于治疗硬化蛋白活 性有害的疾病的至少一种另外的治疗剂。
21. 根据权利要求20所述的药物组合物，其中所述另外的试剂选自治疗剂、显像剂、细 胞毒性剂、血管生成抑制剂；激酶抑制剂；共刺激分子阻滞剂；粘附分子阻滞剂；抗细胞因 子抗体或其功能片段；氨甲蝶呤；环孢素；雷帕霉素；FK506 ;可检测标记或报道物；TNF拮 抗剂；抗风湿药；肌肉松弛剂、麻醉药、非类固醇抗炎药（NSAID)、止痛剂、麻醉剂、镇静剂、 局部麻醉剂、神经肌肉阻滞剂、抗微生物剂、抗牛皮癣药、皮质类固醇、同化类固醇、促红细 胞生成素、免疫接种、免疫球蛋白、免疫抑制剂、生长激素、激素替代药物、放射性药物、抗抑 郁药、抗精神病药物、刺激物、哮喘药物、β激动剂、吸入类固醇、口服类固醇、肾上腺素或类 似物、细胞因子和细胞因子拮抗剂。
22. -种用于降低人硬化蛋白活性的方法，所述方法包括使人硬化蛋白与根据权利要 求1所述的结合蛋白接触，使得人硬化蛋白活性降低。
23. -种用于降低患有硬化蛋白活性有害的疾病的人受试者的人硬化蛋白活性的方 法，所述方法包括给所述人受试者施用根据权利要求1所述的结合蛋白，使得所述人受试 者的人硬化蛋白活性降低。
24. -种治疗患有硬化蛋白活性有害的疾病或障碍的受试者的方法，所述方法通过给 所述受试者施用根据权利要求1所述的结合蛋白，来实现治疗。
25. 根据权利要求24所述的方法，其中所述疾病选自下述：呼吸障碍；哮喘；变态反应 性和非变态反应性哮喘；感染引起的哮喘；呼吸道合胞病毒（RSV)感染引起的哮喘；慢性阻 塞性肺疾病（COPD)、涉及气道炎症的病症；嗜酸性细胞增多症；纤维化和/或粘液产生过 多；囊性纤维化；肺纤维化；特应性障碍；特应性皮炎；荨麻疹；湿疹；变应性鼻炎；变应性 肠胃炎；皮肤的炎症和/或自身免疫性病症；胃肠道器官的炎症和/或自身免疫性病症；炎 性肠病（IBD);溃疡性结肠炎；克罗恩氏病；肝的炎性和/或自身免疫性病症；肝硬化；肝纤 维化；由乙型肝炎和/或丙型肝炎病毒引起的肝纤维化；硬皮病；肿瘤；癌症；肝细胞癌；成 胶质细胞瘤；淋巴瘤；霍奇金氏淋巴瘤；病毒感染；HTLV-1感染（例如来自HTLV-1);保护性 1型免疫应答表达的阻抑、和在疫苗接种过程中保护性1型免疫应答表达的阻抑。
26. -种治疗患有硬化蛋白有害的疾病的患者的方法，所述方法包括在施用第二试剂 之前、同时或之后施用根据权利要求1所述的结合蛋白的步骤，其中所述第二试剂选自吸 入型类固醇；β -激动剂；短效或长效β -激动剂；白三烯或白三烯受体的拮抗剂；ADVAIR ; IgE抑制剂；抗IgE抗体；XOLAIR ;磷酸二酯酶抑制剂；PDE4抑制剂；黄嘌呤；抗胆碱能药； 肥大细胞稳定剂；色甘酸；IL-4抑制剂；IL-5抑制剂；嗜酸细胞活化趋化因子/CCR3抑制 齐U ;组胺或其受体包括HI、H2、H3和H4的拮抗剂；前列腺素 D或其受体DPI和CRTH2的拮抗 剂；TNF拮抗剂；TNF受体的可溶片段；ENBREL ;TNF酶拮抗剂；TNF转换酶（TACE)抑制剂；毒 蕈碱受体拮抗剂；TGF-β拮抗剂；干扰素 γ ;吡非尼酮；化学治疗剂、氨甲蝶呤；来氟米特； 西罗莫司（雷帕霉素）或其类似物、CCI-779 ;C0X2或cPLA2抑制剂；NSAID ;免疫调节剂； P38抑制剂；TPL-2、MK-2和NFkB抑制剂；布地奈德；表皮生长因子；皮质类固醇；环孢菌素； 柳氮磺吡啶；氨基水杨酸盐；6-巯嘌呤；硫唑嘌呤；甲硝唑；脂氧合酶抑制剂；美沙拉嗪；奥 沙拉嗪；巴柳氮；抗氧化剂；血栓烷抑制剂；IL-1受体拮抗剂；抗IL-1 β抗体；抗IL-6抗 体；生长因子；弹性蛋白酶抑制剂；吡啶基-咪唑化合物；TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、 IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、 IL-19、 IL-20、 IL-21、 IL-22、 IL-23、 IL-24、 IL-25、 IL-26、 IL-27、 IL-28、 IL-29、 IL-30、 IL-31、IL-32、IL-33、EMAP-II、GM-CSF、FGF 或 PDGF 的抗体或激动剂；CD2、CD3、CD4、CD8、 CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD90或其配体的抗体；FK506 ;雷帕霉素；霉酚酸酯；布 洛芬；泼尼松龙；磷酸二酯酶抑制剂；腺苷激动剂；抗血栓药；补体抑制剂；肾上腺素能剂； IRAK、NIK、IKK、p38或MAP激酶抑制剂；IL-1 β转换酶抑制剂；TNF- α转换酶抑制剂；T细 胞信号传导抑制剂；金属蛋白酶抑制剂；6_巯嘌呤；血管紧张素转换酶抑制剂；可溶性细胞 因子受体；可溶性P55TNF受体；可溶性p75TNF受体；sIL-lRI ;sIL-lRII ;sIL-6R ;抗炎细 胞因子；IL-4 ;IL-10 ;IL-11 ;SOST ;和 TGF-β。
27. -种包含多肽链的结合蛋白，其中所述多肽链包含VD1- (XI) n-VD2-C- (X2) n，其中 VD1是第一重链可变结构域； VD2是第二重链可变结构域； C是重链恒定结构域； XI是接头，条件是它不是CH1 ; X2是Fc区； (XI) η 是（XI) 0 或（XI) 1 ; (Χ2)η 是（Χ2)0 或（X2)l ;和 其中 (a) VDl 或 VD2 包含选自下述的三个 CDR:SEQ ID N0:24、34、44、54、64、74、84、94、104、 114、124、134、144、154、164、174、184、194、204、214、224、234、244、254、264、274、284、294、 304、314、324、334、344、354、364、374、384、394、404、414、424、434、444、454、464、474、484、 494、504、514、524、534、544、554、564、574、584、594、604、614、624、634、644、654、664、674、 684、694、704、714、724、734、744、754、764、774、784、794、804、814、824、834、844、854、864、 874、884、894、904、914、924、934、944、954、964、974、984、994、1004、1014、1024、1034、1044、 1054、1064、1074、1084、1094、1114、1124、1134、1144、1154、1164、1174、1184、1194、1204、 1214、1224、1234、1244、1254、1264、1274、1284、1294、1304、1314、1324、1334、1344、1354、 1364、1374、1384、1394、1404、1414、1424、1434、1444、1454、1464、1474、1484、1494、1504、 1514、1524、1534、1544、1554、1564、1574、1584、1594、1604、1614、1624、1634、1644、1654、 1664、1674和1684,并且所述结合蛋白能够结合硬化蛋白和另一靶标； (b) VDl和VD2独立地包含选自下述的三个CDR:SEQIDNO:24、34、44、54、64、74、84、 94、104、114、124、134、144、154、164、174、184、194、204、214、224、234、244、254、264、274、 284、294、304、314、324、334、344、354、364、374、384、394、404、414、424、434、444、454、464、 474、484、494、504、514、524、534、544、554、564、574、584、594、604、614、624、634、644、654、 664、674、684、694、704、714、724、734、744、754、764、774、784、794、804、814、824、834、844、 854、864、874、884、894、904、914、924、934、944、954、964、974、984、994、1004、1014、1024、 1034、1044、1054、1064、1074、1084、1094、1114、1124、1134、1144、1154、1164、1174、1184、 1194、1204、1214、1224、1234、1244、1254、1264、1274、1284、1294、1304、1314、1324、1334、 1344、1354、1364、1374、1384、1394、1404、1414、1424、1434、1444、1454、1464、1474、1484、 1494、1504、1514、1524、1534、1544、1554、1564、1574、1584、1594、1604、1614、1624、1634、 1644、1654、1664、1674和1684,并且所述结合蛋白能够结合硬化蛋白和硬化蛋白； (c) VDl 包含选自下述的三个 CDR:SEQ ID N0:24、34、44、54、64、74、84、94、104、114、 124、134、144、154、164、174、184、194、204、214、224、234、244、254、264、274、284、294、304、 314、324、334、344、354、364、374、384、394、404、414、424、434、444、454、464、474、484、494、 504、514、524、534、544、554、564、574、584、594、604、614、624、634、644、654、664、674、684、 694、704、714、724、734、744、754、764、774、784、794、804、814、824、834、844、854、864、874、 884、894、904、914、924、934、944、954、964、974、984、994、1004、1014、1024、1034、1044、 1054、1064、1074、1084、1094、1114、1124、1134、1144、1154、1164、1174、1184、1194、1204、 1214、1224、1234、1244、1254、1264、1274、1284、1294、1304、1314、1324、1334、1344、1354、 1364、1374、1384、1394、1404、1414、1424、1434、1444、1454、1464、1474、1484、1494、1504、 1514、1524、1534、1544、1554、1564、1574、1584、1594、1604、1614、1624、1634、1644、1654、 1664U674 和 1684, VD2 包含选自下述的三个 CDR :SEQ ID NO:22、32、42、52、62、72、82、92、 102、112、122、132、142、152、162、172、182、192、202、212、222、232、242、252、262、272、282、 292、302、312、322、332、342、352、362、372、382、392、402、412、422、432、442、452、462、472、 482、492、502、512、522、532、542、552、562、572、582、592、602、612、622、632、642、652、662、 672、682、692、702、712、722、732、742、752、762、772、782、792、802、812、822、832、842、852、 862、872、882、892、902、912、922、932、942、952、962、972、982、992、1002、1012、1022、1032、 1042、1052、1062、1072、1082、1092、1102、1112、1122、1132、1142、1152、1162、1172、1182、 1192、1202、1212、1222、1232、1242、1252、1262、1272、1282、1292、1302、1312、1322、1332、 1242、1252、1262、1272、1282、1292、1302、1312、1322、1332、1342、1352、1362、1372、1382、 1392、1402、1412、1422、1432、1442、1452、1462、1472、1482、1492、1502、1512、1522、1532、 1542、1552、1562、1572、1582、1592、1602、1612、1622、1632、1642、1652、1662、1672 和 1682， 并且所述结合蛋白能够结合硬化蛋白和TNF-α ;或 (d)VD2 包含选自下述的三个 CDR:SEQ ID N0:24、34、44、54、64、74、84、94、104、114、 124、134、144、154、164、174、184、194、204、214、224、234、244、254、264、274、284、294、304、 314、324、334、344、354、364、374、384、394、404、414、424、434、444、454、464、474、484、494、 504、514、524、534、544、554、564、574、584、594、604、614、624、634、644、654、664、674、684、 694、704、714、724、734、744、754、764、774、784、794、804、814、824、834、844、854、864、874、 884、894、904、914、924、934、944、954、964、974、984、994、1004、1014、1024、1034、1044、 1054、1064、1074、1084、1094、1114、1124、1134、1144、1154、1164、1174、1184、1194、1204、 1214、1224、1234、1244、1254、1264、1274、1284、1294、1304、1314、1324、1334、1344、1354、 1364、1374、1384、1394、1404、1414、1424、1434、1444、1454、1464、1474、1484、1494、1504、 1514、1524、1534、1544、1554、1564、1574、1584、1594、1604、1614、1624、1634、1644、1654、 1664U674 和 1684, VD1 包含选自下述的三个 CDR :SEQ ID NO:22、32、42、52、62、72、82、92、 102、112、122、132、142、152、162、172、182、192、202、212、222、232、242、252、262、272、282、 292、302、312、322、332、342、352、362、372、382、392、402、412、422、432、442、452、462、472、 482、492、502、512、522、532、542、552、562、572、582、592、602、612、622、632、642、652、662、 672、682、692、702、712、722、732、742、752、762、772、782、792、802、812、822、832、842、852、 862、872、882、892、902、912、922、932、942、952、962、972、982、992、1002、1012、1022、1032、 1042、1052、1062、1072、1082、1092、1102、1112、1122、1132、1142、1152、1162、1172、1182、 1192、1202、1212、1222、1232、1242、1252、1262、1272、1282、1292、1302、1312、1322、1332、 1242、1252、1262、1272、1282、1292、1302、1312、1322、1332、1342、1352、1362、1372、1382、 1392、1402、1412、1422、1432、1442、1452、1462、1472、1482、1492、1502、1512、1522、1532、 1542、1552、1562、1572、1582、1592、1602、1612、1622、1632、1642、1652、1662、1672 和 1682， 并且所述结合蛋白能够结合TNF-α和硬化蛋白。
28.根据权利要求27所述的结合蛋白，其中VD1-(XI)n-VD2包含选自下述的氨基酸序 列：SEQ ID N0:21、31、41、51、61、71、81、91、101、lll、121、131、141、151、161、171、181、191、 201、211、221、231、241、251、261、271、281、291、301、311、321、331、341、351、361、371、381、 391、401、411、421、431、441、451、461、471、481、491、501、511、521、531、541、551、561、571、 581、591、601、611、621、631、641、651、661、671、681、691、701、711、721、731、741、751、761、 771、781、791、801、811、821、831、841、851、861、871、881、891、901、911、921、931、941、951、 961、971、981、991、1001、1011、1021、1031、1041、1051、1061、1071、1081、1091、1101、1111、 1121、1131、1141、1151、1161、1171、1181、1191、1201、1211、1221、1231、1241、1251、1261、 1271、1281、1291、1301、1311、1321、1331、1341、1351、1361、1371、1381、1391、1401、1411、 1421、1431、1441、1451、1461、1471、1481、1491、1501、1511、1521、1531、1541、1551、1561、 1571、1581、1591、1601、1611、1621、1631、1641、1651、1661、1671 和 1681。
29. -种包含多肽链的结合蛋白，其中所述多肽链包含VD1- (XI) n-VD2-C- (X2) n，其中 VD1是第一轻链可变结构域； VD2是第二轻链可变结构域； C是轻链恒定结构域； XI是接头，条件是它不是CL ; X2不包含Fc区； (XI) η 是（XI) 0 或（XI) 1 ; (Χ2)η 是（Χ2)0 或（X2)l ;和 其中 (a) VDl 或 VD2 包含选自下述的三个 CDR:SEQ ID Ν0:29、39、49、59、69、79、89、99、109、 119、129、139、149、159、169、179、189、199、209、219、229、239、249、259、269、279、289、299、 309、319、329、339、349、359、369、379、389、399、409、419、429、439、449、459、469、479、489、 499、509、519、529、539、549、559、569、579、589、599、609、619、629、639、649、659、669、679、 689、699、709、719、729、739、749、759、769、779、789、799、809、819、829、839、849、859、869、 879、889、899、909、919、929、939、949、959、969、979、989、999、1009、1019、1029、1039、1049、 1059、1069、1079、1089、1099、1109、1119、1129、1139、1149、1159、1169、1179、1189、1199、 1209、1219、1229、1239、1249、1259、1269、1279、1289、1299、1309、1319、1329、1339、1349、 1359、1369、1379、1389、1399、1409、1419、1429、1439、1449、1459、1469、1479、1489、1499、 1509、1519、1529、1539、1549、1559、1569、1579、1589、1599、1609、1619、1629、1639、1649、 1659、1669、1679和1689,并且所述结合蛋白能够结合硬化蛋白和另一靶标； (b) VDl 和 VD2 独立地包含选自下述的三个 CDR:SEQ ID ΝΟ:29、39、49、59、69、79、89、 99、109、119、129、139、149、159、169、179、189、199、209、219、229、239、249、259、269、279、 289、299、309、319、329、339、349、359、369、379、389、399、409、419、429、439、449、459、469、 479、489、499、509、519、529、539、549、559、569、579、589、599、609、619、629、639、649、659、 669、679、689、699、709、719、729、739、749、759、769、779、789、799、809、819、829、839、849、 859、869、879、889、899、909、919、929、939、949、959、969、979、989、999、1009、1019、1029、 1039、1049、1059、1069、1079、1089、1099、1109、1119、1129、1139、1149、1159、1169、1179、 1189、1199、1209、1219、1229、1239、1249、1259、1269、1279、1289、1299、1309、1319、1329、 1339、1349、1359、1369、1379、1389、1399、1409、1419、1429、1439、1449、1459、1469、1479、 1489、1499、1509、1519、1529、1539、1549、1559、1569、1579、1589、1599、1609、1619、1629、 1639、1649、1659、1669、1679和1689,并且所述结合蛋白能够结合硬化蛋白和硬化蛋白； (c) VDl 包含选自下述的三个 CDR:SEQ ID Ν0:29、39、49、59、69、79、89、99、109、119、 129、139、149、159、169、179、189、199、209、219、229、239、249、259、269、279、289、299、309、 319、329、339、349、359、369、379、389、399、409、419、429、439、449、459、469、479、489、499、 509、519、529、539、549、559、569、579、589、599、609、619、629、639、649、659、669、679、689、 699、709、719、729、739、749、759、769、779、789、799、809、819、829、839、849、859、869、879、 889、899、909、919、929、939、949、959、969、979、989、999、1009、1019、1029、1039、1049、 1059、1069、1079、1089、1099、1109、1119、1129、1139、1149、1159、1169、1179、1189、1199、 1209、1219、1229、1239、1249、1259、1269、1279、1289、1299、1309、1319、1329、1339、1349、 1359、1369、1379、1389、1399、1409、1419、1429、1439、1449、1459、1469、1479、1489、1499、 1509、1519、1529、1539、1549、1559、1569、1579、1589、1599、1609、1619、1629、1639、1649、 1659、1669、1679 和 1689, VD2 包含选自下述的三个 CDR:SEQ ID NO:27、37、47、57、67、77、 87、97、107、117、127、137、147、157、167、177、187、197、207、217、227、237、247、257、267、 277、287、297、307、317、327、337、347、357、367、377、387、397、407、417、427、437、447、457、 467、477、487、497、507、517、527、537、547、557、567、577、587、597、607、617、627 和 637，并 且所述结合蛋白能够结合硬化蛋白和TNF-α ;或 (d)VD2 包含选自下述的三个 CDR:SEQ ID N0:29、39、49、59、69、79、89、99、109、119、 129、139、149、159、169、179、189、199、209、219、229、239、249、259、269、279、289、299、309、 319、329、339、349、359、369、379、389、399、409、419、429、439、449、459、469、479、489、499、 509、519、529、539、549、559、569、579、589、599、609、619、629、639、649、659、669、679、689、 699、709、719、729、739、749、759、769、779、789、799、809、819、829、839、849、859、869、879、 889、899、909、919、929、939、949、959、969、979、989、999、1009、1019、1029、1039、1049、 1059、1069、1079、1089、1099、1109、1119、1129、1139、1149、1159、1169、1179、1189、1199、 1209、1219、1229、1239、1249、1259、1269、1279、1289、1299、1309、1319、1329、1339、1349、 1359、1369、1379、1389、1399、1409、1419、1429、1439、1449、1459、1469、1479、1489、1499、 1509、1519、1529、1539、1549、1559、1569、1579、1589、1599、1609、1619、1629、1639、1649、 1659、1669、1679 和 1689, VD1 包含选自下述的三个 CDR:SEQ ID NO:27、37、47、57、67、77、 87、97、107、117、127、137、147、157、167、177、187、197、207、217、227、237、247、257、267、 277、287、297、307、317、327、337、347、357、367、377、387、397、407、417、427、437、447、457、 467、477、487、497、507、517、527、537、547、557、567、577、587、597、607、617、627、637、647、 657、667、677、687、697、707、717、727、737、747、757、767、777、787、797、807、817、827、837、 847、857、867、877、887、897、907、917、927、937、947、957、967、977、987、997、1007、1017、 1027、1037、1047、1057、1067、1077、1087、1097、1107、1117、1127、1137、1147、1157、1167、 1177、1187、1197、1207、1217、1227、1237、1247、1257、1267、1277、1287、1297、1307、1317、 1327、1337、1347、1357、1367、1377、1387、1397、1407、1417、1427、1437、1447、1457、1467、 1477、1487、1497、1507、1517、1527、1537、1547、1557、1567、1577、1587、1597、1607、1617、 1627、1637、1647、1657、1667、1677和1687,并且所述结合蛋白能够结合TNF-α和硬化蛋 白。
30.根据权利要求29所述的结合蛋白，其中所述VD1-(XI) n-VD2包含选自下述的氨基 酸序列：SEQ ID N0:26、36、46、56、66、76、86、96、106、116、126、136、146、156、166、176、186、 196、206、216、226、236、246、256、266、276、286、296、306、316、326、336、346、356、366、376、 386、396、406、416、426、436、446、456、466、476、486、496、506、516、526、536、546、556、566、 576、586、596、606、616、626、636、646、656、666、676、686、696、706、716、726、736、746、756、 766、776、786、796、806、816、826、836、846、856、866、876、886、896、906、916、926、936、946、 956、966、976、986、996、1006、1116、1126、1136、1146、1156、1166、1176、1186、1196、1206、 1216、1226、1236、1246、1256、1266、1276、1286、1296、1306、1316、1326、1336、1346、1356、 1366、1376、1386、1396、1406、1416、1426、1436、1446、1456、1466、1476、1486、1496、1506、 1516、1526、1536、1546、1556、1566、1576、1586、1596、1606、1616、1626、1636、1646、1656、 1666、1676 和 1686。
31. 根据权利要求28或29所述的结合蛋白，其中（Xl)n是（X1)0和/或（X2)n是 (X2)0。
32. -种包含第一多肽链和第二多肽链的结合蛋白，其中所述第一多肽链包含第一 VD1- (XI) n-VD2-C- (X2) n，其中 VD1是第一重链可变结构域； VD2是第二重链可变结构域； C是重链恒定结构域； XI是第一接头； X2是Fc区； (XI) η 是（XI) 0 或（XI) 1 ; (Χ2)η 是（Χ2)0 或（X2)l ;和 其中所述第二多肽链包含第二VD1-(XI)n-VD2-C-(Χ2)η，其中 VD1是第一轻链可变结构域； VD2是第二轻链可变结构域； C是轻链恒定结构域； XI是第二接头； Χ2不包含Fc区； (XI) η 是（XI) 0 或（XI) 1 ; (Χ2)η 是（Χ2)0 或（X2)l ;和 其中所述第一 XI接头和第二XI接头是相同或不同的； 其中所述第一 XI接头不是CH1和/或所述第二XI接头不是CL，和 其中 (a)VDl或VD2重链可变结构域包含选自下述的三个CDR:SEQIDN0:24、34、44、54、64、 74、84、94、104、114、124、134、144、154、164、174、184、194、204、214、224、234、244、254、264、 274、284、294、304、314、324、334、344、354、364、374、384、394、404、414、424、434、444、454、 464、474、484、494、504、514、524、534、544、554、564、574、584、594、604、614、624、634、644、 654、664、674、684、694、704、714、724、734、744、754、764、774、784、794、804、814、824、834、 844、854、864、874、884、894、904、914、924、934、944、954、964、974、984、994、1004、1014、 1024、1034、1044、1054、1064、1074、1084、1094、1114、1124、1134、1144、1154、1164、1174、 1184、1194、1204、1214、1224、1234、1244、1254、1264、1274、1284、1294、1304、1314、1324、 1334、1344、1354、1364、1374、1384、1394、1404、1414、1424、1434、1444、1454、1464、1474、 1484、1494、1504、1514、1524、1534、1544、1554、1564、1574、1584、1594、1604、1614、1624、 1634、1644、1654、1664、1674和1684, VD1或VD2轻链可变结构域包含选自下述的三个CDR : SEQ ID Ν0:29、39、49、59、69、79、89、99、109、119、129、139、149、159、169、179、189、199、 209、219、229、239、249、259、269、279、289、299、309、319、329、339、349、359、369、379、389、 399、409、419、429、439、449、459、469、479、489、499、509、519、529、539、549、559、569、579、 589、599、609、619、629、639、649、659、669、679、689、699、709、719、729、739、749、759、769、 779、789、799、809、819、829、839、849、859、869、879、889、899、909、919、929、939、949、959、 969、979、989、999、1009、1019、1029、1039、1049、1059、1069、1079、1089、1099、1109、1119、 1129、1139、1149、1159、1169、1179、1189、1199、1209、1219、1229、1239、1249、1259、1269、 1279、1289、1299、1309、1319、1329、1339、1349、1359、1369、1379、1389、1399、1409、1419、 1429、1439、1449、1459、1469、1479、1489、1499、1509、1519、1529、1539、1549、1559、1569、 1579、1589、1599、1609、1619、1629、1639、1649、1659、1669、1679 和 1689,并且所述结合蛋 白能够结合硬化蛋白和另一靶标； (b) VDl和VD2重链可变结构域独立地包含选自下述的三个CDR:SEQ ID NO:24、34、44、 54、64、74、84、94、104、114、124、134、144、154、164、174、184、194、204、214、224、234、244、 254、264、274、284、294、304、314、324、334、344、354、364、374、384、394、404、414、424、434、 444、454、464、474、484、494、504、514、524、534、544、554、564、574、584、594、604、614、624、 634、644、654、664、674、684、694、704、714、724、734、744、754、764、774、784、794、804、814、 824、834、844、854、864、874、884、894、904、914、924、934、944、954、964、974、984、994、1004、 1014、1024、1034、1044、1054、1064、1074、1084、1094、1114、1124、1134、1144、1154、1164、 1174、1184、1194、1204、1214、1224、1234、1244、1254、1264、1274、1284、1294、1304、1314、 1324、1334、1344、1354、1364、1374、1384、1394、1404、1414、1424、1434、1444、1454、1464、 1474、1484、1494、1504、1514、1524、1534、1544、1554、1564、1574、1584、1594、1604、1614、 1624、1634、1644、1654、1664、1674和1684，￥01或￥02轻链可变结构域包含选自下述的三 个 CDR :SEQ ID N0:29、39、49、59、69、79、89、99、109、119、129、139、149、159、169、179、189、 199、209、219、229、239、249、259、269、279、289、299、309、319、329、339、349、359、369、379、 389、399、409、419、429、439、449、459、469、479、489、499、509、519、529、539、549、559、569、 579、589、599、609、619、629、639、649、659、669、679、689、699、709、719、729、739、749、759、 769、779、789、799、809、819、829、839、849、859、869、879、889、899、909、919、929、939、949、 959、969、979、989、999、1009、1019、1029、1039、1049、1059、1069、1079、1089、1099、1109、 1119、1129、1139、1149、1159、1169、1179、1189、1199、1209、1219、1229、1239、1249、1259、 1269、1279、1289、1299、1309、1319、1329、1339、1349、1359、1369、1379、1389、1399、1409、 1419、1429、1439、1449、1459、1469、1479、1489、1499、1509、1519、1529、1539、1549、1559、 1569、1579、1589、1599、1609、1619、1629、1639、1649、1659、1669、1679 和 1689,并且所述结 合蛋白能够结合硬化蛋白和硬化蛋白； (c) VDl重链可变结构域包含选自下述的三个CDR:SEQ ID NO:24、34、44、54、64、74、 84、94、104、114、124、134、144、154、164、174、184、194、204、214、224、234、244、254、264、 274、284、294、304、314、324、334、344、354、364、374、384、394、404、414、424、434、444、454、 464、474、484、494、504、514、524、534、544、554、564、574、584、594、604、614、624、634、644、 654、664、674、684、694、704、714、724、734、744、754、764、774、784、794、804、814、824、834、 844、854、864、874、884、894、904、914、924、934、944、954、964、974、984、994、1004、1014、 1024、1034、1044、1054、1064、1074、1084、1094、1114、1124、1134、1144、1154、1164、1174、 1184、1194、1204、1214、1224、1234、1244、1254、1264、1274、1284、1294、1304、1314、1324、 1334、1344、1354、1364、1374、1384、1394、1404、1414、1424、1434、1444、1454、1464、1474、 1484、1494、1504、1514、1524、1534、1544、1554、1564、1574、1584、1594、1604、1614、1624、 1634、1644、1654、1664、1674和1684, VD2重链可变结构域包含选自下述的三个CDR :SEQ ID N0:22、32、42、52、62、72、82、92、102、112、122、132、142、152、162、172、182、192、202、 212、222、232、242、252、262、272、282、292、302、312、322、332、342、352、362、372、382、392、 402、412、422、432、442、452、462、472、482、492、502、512、522、532、542、552、562、572、582、 592、602、612、622、632、642、652、662、672、682、692、702、712、722、732、742、752、762、772、 782、792、802、812、822、832、842、852、862、872、882、892、902、912、922、932、942、952、962、 972、982、992、1002、1012、1022、1032、1042、1052、1062、1072、1082、1092、1102、1112、1122、 1132、1142、1152、1162、1172、1182、1192、1202、1212、1222、1232、1242、1252、1262、1272、 1282、1292、1302、1312、1322、1332、1242、1252、1262、1272、1282、1292、1302、1312、1322、 1332、1342、1352、1362、1372、1382、1392、1402、1412、1422、1432、1442、1452、1462、1472、 1482、1492、1502、1512、1522、1532、1542、1552、1562、1572、1582、1592、1602、1612、1622、 1632、1642、1652、1662、1672和1682 ;VD1轻链可变结构域包含选自下述的三个CDR :SEQ ID N0:29、39、49、59、69、79、89、99、109、119、129、139、149、159、169、179、189、199、209、 219、229、239、249、259、269、279、289、299、309、319、329、339、349、359、369、379、389、399、 409、419、429、439、449、459、469、479、489、499、509、519、529、539、549、559、569、579、589、 599、609、619、629、639、649、659、669、679、689、699、709、719、729、739、749、759、769、779、 789、799、809、819、829、839、849、859、869、879、889、899、909、919、929、939、949、959、969、 979、989、999、1009、1019、1029、1039、1049、1059、1069、1079、1089、1099、1109、1119、1129、 1139、1149、1159、1169、1179、1189、1199、1209、1219、1229、1239、1249、1259、1269、1279、 1289、1299、1309、1319、1329、1339、1349、1359、1369、1379、1389、1399、1409、1419、1429、 1439、1449、1459、1469、1479、1489、1499、1509、1519、1529、1539、1549、1559、1569、1579、 1589、1599、1609、1619、1629、1639、1649、1659、1669、1679 和 1689, VD2 轻链可变结构域包 含选自下述的三个 CDR :SEQ ID N0:27、37、47、57、67、77、87、97、107、117、127、137、147、 157、167、177、187、197、207、217、227、237、247、257、267、277、287、297、307、317、327、337、 347、357、367、377、387、397、407、417、427、437、447、457、467、477、487、497、507、517、527、 537、547、557、567、577、587、597、607、617、627、637、647、657、667、677、687、697、707、717、 727、737、747、757、767、777、787、797、807、817、827、837、847、857、867、877、887、897、907、 917、927、937、947、957、967、977、987、997、1007、1017、1027、1037、1047、1057、1067、1077、 1087、1097、1107、1117、1127、1137、1147、1157、1167、1177、1187、1197、1207、1217、1227、 1237、1247、1257、1267、1277、1287、1297、1307、1317、1327、1337、1347、1357、1367、1377、 1387、1397、1407、1417、1427、1437、1447、1457、1467、1477、1487、1497、1507、1517、1527、 1537、1547、1557、1567、1577、1587、1597、1607、1617、1627、1637、1647、1657、1667、1677 和 1687,并且所述结合蛋白能够结合硬化蛋白和TNF-α ;或 (d)VD2重链可变结构域包含选自下述的三个CDR:SEQ ID NO:24、34、44、54、64、74、 84、94、104、114、124、134、144、154、164、174、184、194、204、214、224、234、244、254、264、 274、284、294、304、314、324、334、344、354、364、374、384、394、404、414、424、434、444、454、 464、474、484、494、504、514、524、534、544、554、564、574、584、594、604、614、624、634、644、 654、664、674、684、694、704、714、724、734、744、754、764、774、784、794、804、814、824、834、 844、854、864、874、884、894、904、914、924、934、944、954、964、974、984、994、1004、1014、 1024、1034、1044、1054、1064、1074、1084、1094、1114、1124、1134、1144、1154、1164、1174、 1184、1194、1204、1214、1224、1234、1244、1254、1264、1274、1284、1294、1304、1314、1324、 1334、1344、1354、1364、1374、1384、1394、1404、1414、1424、1434、1444、1454、1464、1474、 1484、1494、1504、1514、1524、1534、1544、1554、1564、1574、1584、1594、1604、1614、1624、 1634、1644、1654、1664、1674和1684, VD1重链可变结构域包含选自下述的三个CDR :SEQ ID N0:22、32、42、52、62、72、82、92、102、112、122、132、142、152、162、172、182、192、202、 212、222、232、242、252、262、272、282、292、302、312、322、332、342、352、362、372、382、392、 402、412、422、432、442、452、462、472、482、492、502、512、522、532、542、552、562、572、582、 592、602、612、622、632、642、652、662、672、682、692、702、712、722、732、742、752、762、772、 782、792、802、812、822、832、842、852、862、872、882、892、902、912、922、932、942、952、962、 972、982、992、1002、1012、1022、1032、1042、1052、1062、1072、1082、1092、1102、1112、1122、 1132、1142、1152、1162、1172、1182、1192、1202、1212、1222、1232、1242、1252、1262、1272、 1282、1292、1302、1312、1322、1332、1242、1252、1262、1272、1282、1292、1302、1312、1322、 1332、1342、1352、1362、1372、1382、1392、1402、1412、1422、1432、1442、1452、1462、1472、 1482、1492、1502、1512、1522、1532、1542、1552、1562、1572、1582、1592、1602、1612、1622、 1632、1642、1652、1662、1672和1682 ;VD2轻链可变结构域包含选自下述的三个CDR :SEQ ID N0:29、39、49、59、69、79、89、99、109、119、129、139、149、159、169、179、189、199、209、 219、229、239、249、259、269、279、289、299、309、319、329、339、349、359、369、379、389、399、 409、419、429、439、449、459、469、479、489、499、509、519、529、539、549、559、569、579、589、 599、609、619、629、639、649、659、669、679、689、699、709、719、729、739、749、759、769、779、 789、799、809、819、829、839、849、859、869、879、889、899、909、919、929、939、949、959、969、 979、989、999、1009、1019、1029、1039、1049、1059、1069、1079、1089、1099、1109、1119、1129、 1139、1149、1159、1169、1179、1189、1199、1209、1219、1229、1239、1249、1259、1269、1279、 1289、1299、1309、1319、1329、1339、1349、1359、1369、1379、1389、1399、1409、1419、1429、 1439、1449、1459、1469、1479、1489、1499、1509、1519、1529、1539、1549、1559、1569、1579、 1589、1599、1609、1619、1629、1639、1649、1659、1669、1679 和 1689, VD1 轻链可变结构域包 含选自下述的三个 CDR :SEQ ID N0:27、37、47、57、67、77、87、97、107、117、127、137、147、 157、167、177、187、197、207、217、227、237、247、257、267、277、287、297、307、317、327、337、 347、357、367、377、387、397、407、417、427、437、447、457、467、477、487、497、507、517、527、 537、547、557、567、577、587、597、607、617、627、637、647、657、667、677、687、697、707、717、 727、737、747、757、767、777、787、797、807、817、827、837、847、857、867、877、887、897、907、 917、927、937、947、957、967、977、987、997、1007、1017、1027、1037、1047、1057、1067、1077、 1087、1097、1107、1117、1127、1137、1147、1157、1167、1177、1187、1197、1207、1217、1227、 1237、1247、1257、1267、1277、1287、1297、1307、1317、1327、1337、1347、1357、1367、1377、 1387、1397、1407、1417、1427、1437、1447、1457、1467、1477、1487、1497、1507、1517、1527、 1537、1547、1557、1567、1577、1587、1597、1607、1617、1627、1637、1647、1657、1667、1677 和 1687,并且所述结合蛋白能够结合TNF- α和硬化蛋白。
33.根据权利要求28、29或32所述的结合蛋白，其中XI或Χ2为选自下述的氨基酸 序列：SEQ ID Ν0:1695、1696、1697、1698、1699、1700、1701、1702、1703、1704、1705、1706、 1707、1708、1709、1710、1711、1712、1713、1714、1715、1716、2050、2051、2052、2053、2054、 2055、2056、2057、2058 和 2059。
34. 根据权利要求33所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白包含两条第一多肽链和两条 第二多肽链。
35. 根据权利要求28、29或32所述的结合蛋白，其中所述Fc区是变体序列Fc区。
36. 根据权利要求28、29或32所述的结合蛋白，其中所述Fc区选自IgGl、IgG2、IgG3、 IgG4、IgA、IgM、IgE 和 IgD。
37. 根据权利要求28、29或32所述的结合蛋白，其中所述第一多肽链的VD1和所述第 二多肽链的VD1分别得自相同的第一亲本抗体和第二亲本抗体、或其抗原结合部分。
38. 根据权利要求28、29或32中任意一个所述的结合蛋白，其中所述抗TNF-α抗体结 合TNF- a的效力不同于所述抗硬化蛋白抗体结合人硬化蛋白的效力。
39. 根据权利要求28、29或32中任意一个所述的结合蛋白，其中所述抗TNF-a抗体结 合TNF-a的亲和力不同于所述抗硬化蛋白抗体结合人硬化蛋白的亲和力。
40. 根据权利要求28、29或32所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白具有由所述抗 TNF-a抗体或所述抗硬化蛋白抗体显示出下述至少一种所需特性：抗原特异性、对抗原的 亲和力、效力、生物学功能、表位识别、稳定性、可溶性、生产效率、免疫原性、药物代谢动力 学、生物利用度、组织交叉反应性或直向同源抗原结合。
41. 一种包含四条多肽链的能够结合两个抗原的结合蛋白，其中两条多肽链包含 VD1- (XI) n-VD2-C- (X2) n，其中 VD1是第一重链可变结构域； VD2是第二重链可变结构域； C是重链恒定结构域； XI是第一接头； X2是Fc区； (XI) η 是（XI) 0 或（XI) 1 ; (Χ2)η 是（Χ2)0 或（X2)l ;和 其中两条多肽链包含VD1- (XI) n-VD2-C- (Χ2) η，其中 VD1是第一轻链可变结构域； VD2是第二轻链可变结构域； C是轻链恒定结构域； XI是第二接头； Χ2不包含Fc区； (XI) η 是（XI) 0 或（XI) 1 ; (Χ2)η 是（Χ2)0 或（X2)l ;和 其中所述第一 XI接头和第二XI接头是相同或不同的； 其中所述第一 XI接头不是CH1和/或所述第二XI接头不是CL，和 其中 (a)VDl或VD2重链可变结构域包含选自下述的三个CDR:SEQIDNO:24、34、44、54、64、 74、84、94、104、114、124、134、144、154、164、174、184、194、204、214、224、234、244、254、264、 274、284、294、304、314、324、334、344、354、364、374、384、394、404、414、424、434、444、454、 464、474、484、494、504、514、524、534、544、554、564、574、584、594、604、614、624、634、644、 654、664、674、684、694、704、714、724、734、744、754、764、774、784、794、804、814、824、834、 844、854、864、874、884、894、904、914、924、934、944、954、964、974、984、994、1004、1014、 1024、1034、1044、1054、1064、1074、1084、1094、1114、1124、1134、1144、1154、1164、1174、 1184、1194、1204、1214、1224、1234、1244、1254、1264、1274、1284、1294、1304、1314、1324、 1334、1344、1354、1364、1374、1384、1394、1404、1414、1424、1434、1444、1454、1464、1474、 1484、1494、1504、1514、1524、1534、1544、1554、1564、1574、1584、1594、1604、1614、1624、 1634、1644、1654、1664、1674和1684, VD1或VD2轻链可变结构域包含选自下述的三个CDR : SEQ ID N0:29、39、49、59、69、79、89、99、109、119、129、139、149、159、169、179、189、199、 209、219、229、239、249、259、269、279、289、299、309、319、329、339、349、359、369、379、389、 399、409、419、429、439、449、459、469、479、489、499、509、519、529、539、549、559、569、579、 589、599、609、619、629、639、649、659、669、679、689、699、709、719、729、739、749、759、769、 779、789、799、809、819、829、839、849、859、869、879、889、899、909、919、929、939、949、959、 969、979、989、999、1009、1019、1029、1039、1049、1059、1069、1079、1089、1099、1109、1119、 1129、1139、1149、1159、1169、1179、1189、1199、1209、1219、1229、1239、1249、1259、1269、 1279、1289、1299、1309、1319、1329、1339、1349、1359、1369、1379、1389、1399、1409、1419、 1429、1439、1449、1459、1469、1479、1489、1499、1509、1519、1529、1539、1549、1559、1569、 1579、1589、1599、1609、1619、1629、1639、1649、1659、1669、1679 和 1689,并且所述结合蛋 白能够结合硬化蛋白和另一靶标； (b)VDl和VD2重链可变结构域独立地包含选自下述的三个CDR:SEQ ID NO:24、34、44、 54、64、74、84、94、104、114、124、134、144、154、164、174、184、194、204、214、224、234、244、 254、264、274、284、294、304、314、324、334、344、354、364、374、384、394、404、414、424、434、 444、454、464、474、484、494、504、514、524、534、544、554、564、574、584、594、604、614、624、 634、644、654、664、674、684、694、704、714、724、734、744、754、764、774、784、794、804、814、 824、834、844、854、864、874、884、894、904、914、924、934、944、954、964、974、984、994、1004、 1014、1024、1034、1044、1054、1064、1074、1084、1094、1114、1124、1134、1144、1154、1164、 1174、1184、1194、1204、1214、1224、1234、1244、1254、1264、1274、1284、1294、1304、1314、 1324、1334、1344、1354、1364、1374、1384、1394、1404、1414、1424、1434、1444、1454、1464、 1474、1484、1494、1504、1514、1524、1534、1544、1554、1564、1574、1584、1594、1604、1614、 1624、1634、1644、1654、1664、1674和1684, VD1或VD2轻链可变结构域包含选自下述的三 个 CDR :SEQ ID N0:29、39、49、59、69、79、89、99、109、119、129、139、149、159、169、179、189、 199、209、219、229、239、249、259、269、279、289、299、309、319、329、339、349、359、369、379、 389、399、409、419、429、439、449、459、469、479、489、499、509、519、529、539、549、559、569、 579、589、599、609、619、629、639、649、659、669、679、689、699、709、719、729、739、749、759、 769、779、789、799、809、819、829、839、849、859、869、879、889、899、909、919、929、939、949、 959、969、979、989、999、1009、1019、1029、1039、1049、1059、1069、1079、1089、1099、1109、 1119、1129、1139、1149、1159、1169、1179、1189、1199、1209、1219、1229、1239、1249、1259、 1269、1279、1289、1299、1309、1319、1329、1339、1349、1359、1369、1379、1389、1399、1409、 1419、1429、1439、1449、1459、1469、1479、1489、1499、1509、1519、1529、1539、1549、1559、 1569、1579、1589、1599、1609、1619、1629、1639、1649、1659、1669、1679 和 1689,并且所述结 合蛋白能够结合硬化蛋白和硬化蛋白； (c)VDl重链可变结构域包含选自下述的三个CDR:SEQ ID N0:24、34、44、54、64、74、 84、94、104、114、124、134、144、154、164、174、184、194、204、214、224、234、244、254、264、 274、284、294、304、314、324、334、344、354、364、374、384、394、404、414、424、434、444、454、 464、474、484、494、504、514、524、534、544、554、564、574、584、594、604、614、624、634、644、 654、664、674、684、694、704、714、724、734、744、754、764、774、784、794、804、814、824、834、 844、854、864、874、884、894、904、914、924、934、944、954、964、974、984、994、1004、1014、 1024、1034、1044、1054、1064、1074、1084、1094、1114、1124、1134、1144、1154、1164、1174、 1184、1194、1204、1214、1224、1234、1244、1254、1264、1274、1284、1294、1304、1314、1324、 1334、1344、1354、1364、1374、1384、1394、1404、1414、1424、1434、1444、1454、1464、1474、 1484、1494、1504、1514、1524、1534、1544、1554、1564、1574、1584、1594、1604、1614、1624、 1634、1644、1654、1664、1674和1684, VD2重链可变结构域包含选自下述的三个CDR :SEQ ID N0:22、32、42、52、62、72、82、92、102、112、122、132、142、152、162、172、182、192、202、 212、222、232、242、252、262、272、282、292、302、312、322、332、342、352、362、372、382、392、 402、412、422、432、442、452、462、472、482、492、502、512、522、532、542、552、562、572、582、 592、602、612、622、632、642、652、662、672、682、692、702、712、722、732、742、752、762、772、 782、792、802、812、822、832、842、852、862、872、882、892、902、912、922、932、942、952、962、 972、982、992、1002、1012、1022、1032、1042、1052、1062、1072、1082、1092、1102、1112、1122、 1132、1142、1152、1162、1172、1182、1192、1202、1212、1222、1232、1242、1252、1262、1272、 1282、1292、1302、1312、1322、1332、1242、1252、1262、1272、1282、1292、1302、1312、1322、 1332、1342、1352、1362、1372、1382、1392、1402、1412、1422、1432、1442、1452、1462、1472、 1482、1492、1502、1512、1522、1532、1542、1552、1562、1572、1582、1592、1602、1612、1622、 1632、1642、1652、1662、1672和1682 ;VD1轻链可变结构域包含选自下述的三个CDR :SEQ ID N0:29、39、49、59、69、79、89、99、109、119、129、139、149、159、169、179、189、199、209、 219、229、239、249、259、269、279、289、299、309、319、329、339、349、359、369、379、389、399、 409、419、429、439、449、459、469、479、489、499、509、519、529、539、549、559、569、579、589、 599、609、619、629、639、649、659、669、679、689、699、709、719、729、739、749、759、769、779、 789、799、809、819、829、839、849、859、869、879、889、899、909、919、929、939、949、959、969、 979、989、999、1009、1019、1029、1039、1049、1059、1069、1079、1089、1099、1109、1119、1129、 1139、1149、1159、1169、1179、1189、1199、1209、1219、1229、1239、1249、1259、1269、1279、 1289、1299、1309、1319、1329、1339、1349、1359、1369、1379、1389、1399、1409、1419、1429、 1439、1449、1459、1469、1479、1489、1499、1509、1519、1529、1539、1549、1559、1569、1579、 1589、1599、1609、1619、1629、1639、1649、1659、1669、1679 和 1689, VD2 轻链可变结构域包 含选自下述的三个 CDR :SEQ ID N0:27、37、47、57、67、77、87、97、107、117、127、137、147、 157、167、177、187、197、207、217、227、237、247、257、267、277、287、297、307、317、327、337、 347、357、367、377、387、397、407、417、427、437、447、457、467、477、487、497、507、517、527、 537、547、557、567、577、587、597、607、617、627、637、647、657、667、677、687、697、707、717、 727、737、747、757、767、777、787、797、807、817、827、837、847、857、867、877、887、897、907、 917、927、937、947、957、967、977、987、997、1007、1017、1027、1037、1047、1057、1067、1077、 1087、1097、1107、1117、1127、1137、1147、1157、1167、1177、1187、1197、1207、1217、1227、 1237、1247、1257、1267、1277、1287、1297、1307、1317、1327、1337、1347、1357、1367、1377、 1387、1397、1407、1417、1427、1437、1447、1457、1467、1477、1487、1497、1507、1517、1527、 1537、1547、1557、1567、1577、1587、1597、1607、1617、1627、1637、1647、1657、1667、1677 和 1687,并且所述结合蛋白能够结合硬化蛋白和TNF-α ;或 (d)VD2重链可变结构域包含选自下述的三个CDR:SEQ ID NO:24、34、44、54、64、74、 84、94、104、114、124、134、144、154、164、174、184、194、204、214、224、234、244、254、264、 274、284、294、304、314、324、334、344、354、364、374、384、394、404、414、424、434、444、454、 464、474、484、494、504、514、524、534、544、554、564、574、584、594、604、614、624、634、644、 654、664、674、684、694、704、714、724、734、744、754、764、774、784、794、804、814、824、834、 844、854、864、874、884、894、904、914、924、934、944、954、964、974、984、994、1004、1014、 1024、1034、1044、1054、1064、1074、1084、1094、1114、1124、1134、1144、1154、1164、1174、 1184、1194、1204、1214、1224、1234、1244、1254、1264、1274、1284、1294、1304、1314、1324、 1334、1344、1354、1364、1374、1384、1394、1404、1414、1424、1434、1444、1454、1464、1474、 1484、1494、1504、1514、1524、1534、1544、1554、1564、1574、1584、1594、1604、1614、1624、 1634、1644、1654、1664、1674和1684, VD1重链可变结构域包含选自下述的三个CDR:SEQ ID N0:22、32、42、52、62、72、82、92、102、112、122、132、142、152、162、172、182、192、202、 212、222、232、242、252、262、272、282、292、302、312、322、332、342、352、362、372、382、392、 402、412、422、432、442、452、462、472、482、492、502、512、522、532、542、552、562、572、582、 592、602、612、622、632、642、652、662、672、682、692、702、712、722、732、742、752、762、772、 782、792、802、812、822、832、842、852、862、872、882、892、902、912、922、932、942、952、962、 972、982、992、1002、1012、1022、1032、1042、1052、1062、1072、1082、1092、1102、1112、1122、 1132、1142、1152、1162、1172、1182、1192、1202、1212、1222、1232、1242、1252、1262、1272、 1282、1292、1302、1312、1322、1332、1242、1252、1262、1272、1282、1292、1302、1312、1322、 1332、1342、1352、1362、1372、1382、1392、1402、1412、1422、1432、1442、1452、1462、1472、 1482、1492、1502、1512、1522、1532、1542、1552、1562、1572、1582、1592、1602、1612、1622、 1632、1642、1652、1662、1672和1682 ;VD2轻链可变结构域包含选自下述的三个CDR :SEQ ID N0:29、39、49、59、69、79、89、99、109、119、129、139、149、159、169、179、189、199、209、 219、229、239、249、259、269、279、289、299、309、319、329、339、349、359、369、379、389、399、 409、419、429、439、449、459、469、479、489、499、509、519、529、539、549、559、569、579、589、 599、609、619、629、639、649、659、669、679、689、699、709、719、729、739、749、759、769、779、 789、799、809、819、829、839、849、859、869、879、889、899、909、919、929、939、949、959、969、 979、989、999、1009、1019、1029、1039、1049、1059、1069、1079、1089、1099、1109、1119、1129、 1139、1149、1159、1169、1179、1189、1199、1209、1219、1229、1239、1249、1259、1269、1279、 1289、1299、1309、1319、1329、1339、1349、1359、1369、1379、1389、1399、1409、1419、1429、 1439、1449、1459、1469、1479、1489、1499、1509、1519、1529、1539、1549、1559、1569、1579、 1589、1599、1609、1619、1629、1639、1649、1659、1669、1679 和 1689, VD1 轻链可变结构域包 含选自下述的三个 CDR :SEQ ID N0:27、37、47、57、67、77、87、97、107、117、127、137、147、 157、167、177、187、197、207、217、227、237、247、257、267、277、287、297、307、317、327、337、 347、357、367、377、387、397、407、417、427、437、447、457、467、477、487、497、507、517、527、 537、547、557、567、577、587、597、607、617、627、637、647、657、667、677、687、697、707、717、 727、737、747、757、767、777、787、797、807、817、827、837、847、857、867、877、887、897、907、 917、927、937、947、957、967、977、987、997、1007、1017、1027、1037、1047、1057、1067、1077、 1087、1097、1107、1117、1127、1137、1147、1157、1167、1177、1187、1197、1207、1217、1227、 1237、1247、1257、1267、1277、1287、1297、1307、1317、1327、1337、1347、1357、1367、1377、 1387、1397、1407、1417、1427、1437、1447、1457、1467、1477、1487、1497、1507、1517、1527、 1537、1547、1557、1567、1577、1587、1597、1607、1617、1627、1637、1647、1657、1667、1677 和 1687,并且所述结合蛋白能够结合TNF- α和硬化蛋白。
42. 根据权利要求27、29、32或41所述的结合蛋白，其中通过表面等离子共振测量，所 述结合蛋白具有至少约ΙΟ^ΤΥ1 ;至少约ΚΛΓ1^ ;至少约;至少约ΙΟ^Γ1^ ;或至 少约的与一种或多种靶标的结合速率常数（Kon)。
43. 根据权利要求27、29、32或41所述的结合蛋白，其中通过表面等离子共振测量，所 述结合蛋白具有至多约l(T3s< ;至多约KT4S4 ;至多约ΙΟ^Γ1 ;或至多约lO^V1的与一种或 多种靶标的分离速率常数（Koff)。
44. 根据权利要求27、29、32或41所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白具有至多约 1(Γ7Μ ;至多约1(Γ8Μ ;至多约1(Γ9Μ ;至多约Κ^Μ ;至多约1(ΓηΜ ;至多约1(Γ12Μ ;或至多1(Γ13Μ 的与一种或多种靶标的解离常数（KD)。
45. -种包含根据权利要求27、29、32或41所述的结合蛋白序列的结合蛋白构建体，所 述结合蛋白构建体还包含接头多肽和/或免疫球蛋白恒定结构域。
46. 根据权利要求45所述的结合蛋白构建体，其中所述结合蛋白是免疫球蛋白分子、 二硫键连接的Fv、单克隆抗体、scFv、嵌合抗体、单结构域抗体、CDR移植抗体、双抗体、人源 化抗体、多特异性抗体、Fab、双重特异性抗体、Fab'、双特异性抗体、F(ab'）2、Fv或DVD结 合蛋白。
47. 根据权利要求46所述的结合蛋白构建体，其中所述结合蛋白包含人IgM恒定结构 域、人IgG4恒定结构域、人IgGl恒定结构域、人IgE恒定结构域、人IgG2恒定结构域、人 IgG3恒定结构域或人IgA恒定结构域。
48. 根据权利要求46所述的结合蛋白构建体，所述结合蛋白构建体包含具有选自SEQ IDN0:1691、SEQIDN0:1692、SEQIDN0:1693 和SEQIDN0:1694 的氨基酸序列的免疫球 蛋白恒定结构域。
49. 一种包含根据权利要求27、29、32或41所述的结合蛋白构建体的结合蛋白缀合物， 所述结合蛋白缀合物还包含免疫粘附分子、显像剂、治疗剂或细胞毒性剂。
50. -种编码根据权利要求27、29、32或41所述的结合蛋白氨基酸序列的分离的核酸。
51. -种编码根据权利要求50所述的硬化蛋白结合蛋白构建体氨基酸序列的分离的 核酸。
52. -种包含根据权利要求51所述的分离的核酸的载体。
53. -种包含根据权利要求52所述的载体的宿主细胞。
54. -种产生能够结合硬化蛋白的蛋白质的方法，所述方法包括在足以产生能够结合 硬化蛋白的结合蛋白的条件下，在培养基中培养根据权利要求53所述的宿主细胞。
55. -种由根据权利要求54所述的方法产生的蛋白质。
56. -种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求27、29、32或41所述的结合蛋 白和药学可接受的载体。
57. -种用于处理哺乳动物的方法，所述方法包括给所述哺乳动物施用有效量的根据 权利要求56所述的组合物的步骤。
58. 根据权利要求56所述的药物组合物，所述药物组合物还包含用于治疗硬化蛋白活 性有害的疾病的至少一种另外的治疗剂。
59. 根据权利要求58所述的药物组合物，其中所述另外的试剂选自治疗剂、显像剂、细 胞毒性剂、血管生成抑制剂；激酶抑制剂；共刺激分子阻滞剂；粘附分子阻滞剂；抗细胞因 子抗体或其功能片段；氨甲蝶呤；环孢素；雷帕霉素；FK506 ;可检测标记或报道物；TNF拮 抗剂；抗风湿药；肌肉松弛剂、麻醉药、非类固醇抗炎药（NSAID)、止痛剂、麻醉剂、镇静剂、 局部麻醉剂、神经肌肉阻滞剂、抗微生物剂、抗牛皮癣药、皮质类固醇、同化类固醇、促红细 胞生成素、免疫接种、免疫球蛋白、免疫抑制剂、生长激素、激素替代药物、放射性药物、抗抑 郁药、抗精神病药物、刺激物、哮喘药物、β激动剂、吸入类固醇、口服类固醇、肾上腺素或类 似物、细胞因子和细胞因子拮抗剂。
60. -种用于降低人硬化蛋白活性的方法，所述方法包括使人硬化蛋白与根据权利要 求27、29、32或41所述的结合蛋白接触，使得人硬化蛋白活性降低。
61. -种用于降低硬化蛋白活性有害的疾病的人受试者的人硬化蛋白活性的方法，所 述方法包括给所述人受试者施用根据权利要求27、29、32或41所述的结合蛋白，使得所述 人受试者的人硬化蛋白活性降低。
62. -种治疗硬化蛋白活性有害的疾病或障碍的受试者的方法，所述方法通过给所述 受试者施用根据权利要求27、29、32或41所述的结合蛋白，来实现治疗。
63. 根据权利要求62所述的方法，其中所述障碍选自下述：呼吸障碍；哮喘；变态反应 性和非变态反应性哮喘；感染引起的哮喘；呼吸道合胞病毒（RSV)感染引起的哮喘；慢性阻 塞性肺疾病（COPD)、涉及气道炎症的病症；嗜酸性细胞增多症；纤维化和/或粘液产生过 多；囊性纤维化；肺纤维化；特应性障碍；特应性皮炎；荨麻疹；湿疹；变应性鼻炎；变应性 肠胃炎；皮肤的炎性和/或自身免疫性病症；胃肠道器官的炎性和/或自身免疫性病症；炎 性肠病（IBD);溃疡性结肠炎；克罗恩氏病；肝的炎性和/或自身免疫性病症；肝硬化；肝纤 维化；由乙型肝炎和/或丙型肝炎引起的肝纤维化；硬皮病；肿瘤；癌症；肝细胞癌；成胶质 细胞瘤；淋巴瘤；霍奇金氏淋巴瘤；病毒感染；HTLV-1感染（例如来自HTLV-1);保护性1型 免疫应答表达的阻抑、和在疫苗接种过程中保护性1型免疫应答表达的阻抑。
64. -种治疗患有硬化蛋白有害的疾病的患者的方法，所述方法包括在施用第二试剂 之前、同时或之后施用根据权利要求27、29、32或41所述的结合蛋白的步骤，其中所述第 二试剂选自吸入类固醇；β -激动剂；短效或长效β -激动剂；白三烯或白三烯受体的拮抗 齐IJ ;ADVAIR ;IgE抑制剂；抗IgE抗体；XOLAIR ;磷酸二酯酶抑制剂；TOE4抑制剂；黄嘌呤； 抗胆碱能药；肥大细胞稳定剂；色甘酸；IL-4抑制剂；IL-5抑制剂；嗜酸细胞活化趋化因 子/CCR3抑制剂；组胺或其受体包括HI、H2、H3和H4的拮抗剂；前列腺素 D或其受体DPI 和CRTH2的拮抗剂；TNF拮抗剂；TNF受体的可溶片段；ENBREL ;TNF酶拮抗剂；TNF转换酶 (TACE)抑制剂；毒蕈碱受体拮抗剂；TGF-β拮抗剂；干扰素 γ ;吡非尼酮；化学治疗剂、氨 甲蝶呤；来氟米特；西罗莫司（雷帕霉素）或其类似物、CCI-779 ;C0X2或cPLA2抑制剂； NSAID ;免疫调节剂；p38抑制剂；TPL-2、MK-2和NFkB抑制剂；布地奈德；表皮生长因子； 皮质类固醇；环孢菌素；柳氮磺吡啶；氨基水杨酸盐；6-巯嘌呤；硫唑嘌呤；甲硝唑；脂氧合 酶抑制剂；美沙拉嗪；奥沙拉嗪；巴柳氮；抗氧化剂；血栓烷抑制剂；IL-1受体拮抗剂；抗 IL-1 β抗体；抗IL-6抗体；生长因子；弹性蛋白酶抑制剂；吡啶基-咪唑化合物；TNF、LT、 IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-14、IL-15、 IL-16、 IL-17、 IL-18、 IL-19、 IL-20、 IL-21、 IL-22、 IL-23、 IL-24、 IL-25、 IL-26、 IL-27、 IL-28、IL-29、IL-30、IL-31、IL-32、IL-33、EMAP-II、GM-CSF、FGF 或 PDGF 的抗体或激动剂； CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD90 或其配体的抗体；FK506 ;雷帕 霉素；霉酌'fe醋；布洛分；泼尼松龙；憐fe - 醋酶抑制剂；腺昔激动剂；抗血检药；补体抑制 齐1];肾上腺素能剂；1狀1(、见1(、11?、？38或麻？激酶抑制剂 ；几 -10转换酶抑制剂汀即-〇转 换酶抑制剂；T细胞信号传导抑制剂；金属蛋白酶抑制剂；6-巯嘌呤；血管紧张素转换酶抑 制剂；可溶性细胞因子受体；可溶性P55TNF受体；可溶性p75TNF受体；sIL-lRI ;SIL-1RII ; sIL-6R ;抗炎细胞因子；IL-4 ;IL-10 ;SOST ;和 TGF-β。
65. -种用于生成DVD结合蛋白的方法，所述方法包括下述步骤： a) 获得能够结合TNF-α的第一亲本抗体或其抗原结合部分； b) 获得能够结合人硬化蛋白的第二亲本抗体或其抗原结合部分； c) 构建根据权利要求27、29、32或41中任一项所述的包含VD1- (XI) n-VD2-C- (X2) η的 多肽链； e)表达所述多肽链； 使得生成DVD结合蛋白。
【文档编号】A61K39/395GK104203978SQ201280064333
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2012年10月24日 优先权日:2011年10月24日
【发明者】C-M.谢, A.伊万诺夫, W.威格尔 申请人:艾伯维股份有限公司