和厚朴酚在制备治疗急性肺损伤药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及和厚朴酚的应用，特别涉及和厚朴酚在制备治疗急性肺损伤药物中的应用。小鼠预先服用和厚朴酚，然后采用脂多糖诱导建立小鼠炎症急性肺损伤模型，造模8小时后处死动物制备支气管肺泡灌洗液，用于检测肿瘤坏死因子和白细胞介素6水平和超氧化物歧化酶活力，并计数白细胞和中性粒细胞的数量；收集肺组织测定湿干重比率，观察组织病理学的变化。实验结果显示，和厚朴酚显著降低肺组织的湿干重比率，显著改善肺组织的病理学损伤；和厚朴酚显著升高支气管肺泡灌洗液中超氧化物歧化酶的活力，显著抑制肿瘤坏死因子和白细胞介素6的产生，显著减少白细胞和中性粒细胞的数量。实验结果说明，和厚朴酚对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤具有保护作用。
【专利说明】和厚朴酚在制备治疗急性肺损伤药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及和厚朴酚的应用，特别涉及和厚朴酚在制备治疗急性肺损伤药物中的应用。
【背景技术】
[0002]急性肺损伤(acute lung injury,ALI)是各种直接和间接致伤因素导致的肺泡上皮细胞及毛细血管内皮细胞损伤，造成弥漫性肺间质及肺泡水肿，导致的急性低氧性呼吸功能不全。以肺容积减少、肺顺应性降低、通气/血流比例失调为病理生理特征，临床上表现为进行性低氧血症和呼吸窘迫，肺部影像学上表现为非均一性的渗出性病变，其发展至严重阶段(氧合指数< 200)被称为急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distresssyndrome, ARDS)。
[0003]急性肺损伤目前尚无特效的治疗方法，主要根据其病理生理改变和临床表现，采取针对性或支持性治疗措施。初步使用的ALI治疗药物有血管舒张剂的吸入治疗(一氧化氮吸入、前列环素吸入及外源性肺表面活性物质等)、肾上腺糖皮质激素、非留体类抗炎药物、酮康唑等，但存在疗效不满意或严重的不良反应等问题，因此，迄今尚无强力的、安全有效的药物治疗手段。
[0004]厚朴为木兰科植物厚朴或凹叶厚朴的干燥干皮、根皮及枝皮。其具燥湿消痰，下气除螨之功效，用于湿滞伤中，脱痞吐泻，食积气滞，腹胀便秘，痰饮喘咳，为常用中药。现代药理研究表明，厚朴具有影响胃肠活动、抗菌、镇咳、肌肉松弛和中枢抑制等作用。厚朴中药效活性成分主要为厚朴酚与和厚朴酚，二者为同分异构体。其中和厚朴酚其具有多重药效药理作用，包括抗氧化作用；抗菌、抗病毒作用；保肝、护肝作用；保护、营养神经作用；抗肿瘤作用。但和厚朴酚是否具有抗急性肺损伤作用，未见报道，本发明发现该药具有抗急性肺损伤作用。
【发明内容】
[0005]发明目的
[0006]本发明提供和厚朴酚的新的应用，即和厚朴酚在制备治疗急性肺损伤药物中的应用
[0007]技术方案
[0008]和厚朴酚在制备治疗急性肺损伤药物中的应用
[0009]有益效果
[0010]1、急性肺损伤(acute lung injury,ALI)是各种直接和间接致伤因素导致的肺泡上皮细胞及毛细血管内皮细胞损伤，造成弥漫性肺间质及肺泡水肿，导致的急性低氧性呼吸功能不全。以肺容积减少、肺顺应性降低、通气/血流比例失调为病理生理特征，临床上表现为进行性低氧血症和呼吸窘迫，肺部影像学上表现为非均一性的渗出性病变，其发展至严重阶段(氧合指数< 200)被称为急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distresssyndrome, ARDS)。本发明的研究发现，小鼠预先服用和厚朴酚，然后采用脂多糖(LPS)诱导建立小鼠炎症急性肺损伤(ALI)模型，造模8小时后处死动物制备支气管肺泡灌洗液(BALF)，用于检测肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素6 (IL-6)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活力，以及计数白细胞和中性粒细胞的数量；收集肺组织测定湿干重(W/D)比率，观察组织病理学的变化。实验结果显示，小鼠预先服用和厚朴酚，显著降低肺组织的W/D比率，显著改善肺组织的病理学损伤；和厚朴酚显著升高BALF中SOD的活力，显著减少BALF中白细胞和中性粒细胞的数量，显著抑制了肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的产生。实验结果说明，和厚朴酚对LPS诱导的小鼠ALI具有保护作用。
【专利附图】
【附图说明】
[0011]图1肺脏组织病理学改变，HE染色(X200):A:空白组；B:模型组；C:地塞米松组；D:和厚朴酌.(10mg/kg) ；E:和厚朴酌.(20mg/kg)
【具体实施方式】
[0012]I材料和方法
[0013]1.1动物和分组
[0014]雌性BALb/c小鼠(体重18-20g)，由南京市江宁区青龙山动物繁殖场提供，随机分为空白组、模型组、和厚朴酚组(低、高剂量)和地塞米松组，每组10只。
[0015]1.2药品与试剂
[0016]LPS和和厚朴酚，美国Sigma公司；地塞米松(DEX)，新乡常乐制药有限公司；小鼠肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的ELISA试剂盒，美国B1legend公司；超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒，南京建成生物工程研究所。
[0017]1.3 方法
[0018]1.3.1ALI模型的建立
[0019]小鼠禁食8h后，和厚朴酚组(10mg/kg，20mg/kg)按体重灌胃给药，空白组和模型组灌胃相同体积的PBS，地塞米松组腹腔注射地塞米松2mg/kg。动物给药I小时后，用乙醚麻醉，模型组、和厚朴酚组(低、高剂量)和地塞米松组向鼻内滴注LPS (用50 μ L PBS溶解)10 μ g诱导ALI，空白组滴鼻PBS50 μ L。
[0020]1.3.2支气管肺泡灌洗液(BALF)的收集和细胞计数
[0021]于滴鼻8h后,处死动物收集BALF,并于4?条件下3000r/min离心1min,取上清液于-70°C保存，用于测定肿瘤坏死因子(TNF-a)和白细胞介素6(IL-6)水平以及超氧化物歧化酶(SOD)活力。沉淀用PBS重悬后，经过瑞氏-吉姆萨染色，计数白细胞和中性粒细胞的数量。
[0022]1.3.3肺脏湿干重(W/D)比率的检测
[0023]取小鼠的左肺脏用PBS洗3次，吸干表面水分后称重，然后于70°C烘干48h，再次称重，计算W/D比率，以此测定肺脏的水肿情况。
[0024]1.3.4BALF中TNF- a和IL-6水平及SOD活性的检测
[0025]按说明书，使用ELISA试剂盒检测BALF中致炎细胞因子TNF- a、IL-6的水平，使用超氧化物歧化酶试剂盒检测BALF中SOD的活性。
[0026]1.3.5肺组织切片观察
[0027]取小鼠右肺脏，用10%福尔马林缓冲液固定，石蜡包埋后切片，做HE染色，光学显微镜下观察。
[0028]1.3.6统计学分析
[0029]所有数据均采用平均值土标准差表示，应用SPSS13.0进行单因素方差分析和t检验。P < 0.05为差异有统计学意义。
[0030]2 结果
[0031]2.1对LPS诱导的ALI小鼠肺脏W/D比率的影响
[0032]实验结果见表1，模型组小鼠肺脏的W/D比率极显著高于空白组(P < 0.01)，而和厚朴酚组和DEX组的W/D比率均显著低于模型组(P < 0.05或P < 0.01)。
[0033]表1肺干湿(W/D)比率
[0034]
【权利要求】
1.和厚朴酚在制备治疗急性 肺损伤药物中的应用。
【文档编号】A61P11/00GK104095831SQ201310111020
【公开日】2014年10月15日 申请日期:2013年4月2日 优先权日:2013年4月2日
【发明者】傅强, 马世平, 马春华, 马占强 申请人:中国药科大学