专利名称：元胡提取物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域。具体而言，本发明涉及一种元胡总生物碱提取物及其制备方法和抗抑郁用途。
背景技术：
抑郁性障碍是一类以抑郁心境为主要特点的心境障碍，其表现为长时间持续的抑郁情绪，并且这种情绪明显超过必要的限度，缺乏自信，感到身体能量的明显降低，无法在任何有趣的活动中体会到快乐。这类障碍还会造成患者的躯体功能失调，如睡眠紊乱或食欲减退。抑郁性障碍在世界范围内的发病率很高，几乎每10个成年人中就有2个存在相应症状，并且呈现出发病年龄日趋提早，发病率逐年增加的趋势，因此抑郁性障碍也被称为“心灵感冒”。该疾病的终身患病率在不同国家中也不尽相同，有调查显示中国的终身患病率约为7%。其中，重性抑郁障碍最为常见，因此也将重性抑郁障碍称为“抑郁症”。抑郁症目前已成为全球疾病中给人类造成严重负担的第二位重要疾病，对患者及其家属造成的痛苦，对社会造成的损失是其他疾病所无法比拟的。究其原因，造成上述局面的首要因素是社会对抑郁症缺乏正确的认识，对出现抑郁症状者误认为是闹情绪，不能给予应有的理解和情感支持；其次，社会偏见对患者造成更大的心理压力，使得患者不愿接受相应的诊疗，使病情进一步恶化。因此，针对抑郁症的防治工作已经迫在眉睫，刻不容缓。目前，除了氟西汀、舍曲林等为数不多的化学合成药以外，现有的其他抗抑郁症化药的临床应用均受其易耐药和副作用多等缺点的限制。相反，传统中医药在治疗抑郁症方面有着丰富的经验和大量的文献记载。中医学虽无“抑郁症”之名，但从其发病特点和临床变现看，与中医学的“郁病”、“百合病”、“脏躁”、“癫症”、“惊悸”等神志病有一定联系。鉴于中医理论在实际治疗过程中的指导意义，大多数情况下均采用基本方剂加减治疗的方式来进行。然而，以单味药治疗抑郁症却仅仅停留在科研水平，例如姜建章等采用银杏叶片治疗血管性抑郁症与阳性对照药阿米替林无显著性差异，但是需要较长的治疗时间(姜建章等，银杏叶片治疗血管性抑郁症的临床观察[J]，中国中西医结合杂志，2003，23(5):388-399);又如，梁建辉等采用巴戟天制成的巴戟乐胶囊来治疗抑郁症，虽然其总有效率高于国产氯丙咪嗪片，但却低于作用迅速、副作用少的四环类抗抑郁药麦普替林和米安舍林(梁建辉等，巴戟天水提物治疗抑郁症临床疗效初探[J]，中国中药杂志，2002, 27(1):75-79)。元胡(Corydalis yahusuo W.T.Wang)又名延胡索、玄胡，为S粟科紫堇属多年生草本植物，为大宗常用中药。陈卫垠等观察了中药复方郁乐疏(由柴胡、郁金、丹参、元胡等中药组成)与氟西汀对卒中后抑郁症状和神经功能康复的影响，由实验得出结论，中药制剂郁乐疏与氟西汀均能有效治疗卒中后抑郁症，促进神经功能恢复(陈卫垠等，中药复方与氟西汀对卒中后抑郁神经功能康复影响的研究[J]，成都中医药大学学
报，2001，24(4):20-23, 41)。发明专利《一种治疗抑郁症的内服药剂》(CN101085306A)公开了一种治疗抑郁症的内服药剂，该药剂由柴胡、钩藤、天麻、酸枣仁、郁金、元胡等配制而成。由此可见，中药元胡已被用于与其他中药组方来治疗抑郁症，然而有关元胡单味药材用于治疗抑郁症的研究却未见报道。
发明内容
针对上述情况，本申请旨在提供一种元胡提取物、其制备方法及其在治疗抑郁症方面的医药用途。一方面，本发明旨在提供一种元胡提取物，其特征在于该元胡提取物包含至少40重量％的总生物碱，由包括如下步骤的方法制备:I)提取步骤:将元胡药材粉碎，过10目筛，得到粗粉，分别用8倍、6倍、6倍量的乙醇-水溶液回流提取3次，提取时间依次为3h、2h和lh，合并三次提取液，减压回收溶剂至无醇味，且最终加水定容至0.2g药材/ml提取液,得到元胡提取液；2)吸附步骤:将步骤I)中得到的元胡提取液经大孔树脂吸附，其中大孔树脂柱的柱床径高比为1:10，上样流速为lBV/h，且大孔树脂与元胡提取液的重量比为1:1 ;3)洗脱步骤:将步骤2)中吸附了元胡活性部位的大孔树脂进行梯度洗脱，合并所需的洗脱部分，减压回收溶剂，干燥，得元胡提取物；在本发明中，提取步骤I)中的乙醇-水溶液为15体积％_95体积％的乙醇-水溶液。在本发明中，吸附步骤2)中的大孔树脂选自AB-8、X_5、D101中的任意一种，优选AB-8。在该吸附步骤中，待提取液全部进入树脂床之后，静置1-2小时(视元胡提取液的上样体积酌情而定) ，以便使大孔树脂充分吸附元胡活性部位。本发明中的术语“活性部位”指的是药材中含量较高的，起主导作用的活性成分的混合物，例如总生物碱、总黄酮或总皂苷等。在本发明中，洗脱步骤3)中的梯度洗脱程序为:先用水洗脱5BV，再用70体积％乙醇-水溶液洗脱5BV，洗脱速度为2BV/h，所需的洗脱部分为70体积％乙醇-水溶液洗脱部分。本发明中的术语“梯度洗脱”(又称为梯度淋洗或程序洗脱)指的是在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的种类或浓度配比，以便使复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子而达到良好的分离目的的洗脱方法。上述方法的收率范围以及总生物碱的含量范围均比较恒定，可适用于工业化大生产，具有可操作性强、方法稳定、结果可控等特点。另一方面，本发明旨在提供一种制备如上所述的元胡提取物的方法，按照所述方法制备的元胡提取物的收率为12-15%，且元胡提取物中的总生物碱含量至少为40重量％。另一方面，本发明旨在提供一种药物组合物，其包含上述元胡提取物和任选的药学上可接受的赋形剂。所述药学上可接受的赋形剂选自稀释剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂、矫味剂、包衣剂、防腐剂或稳定剂。另一方面，本发明旨在提供如上所述的元胡提取物或者包含所述元胡提取物的药物组合物在制备用于治疗和/或预防抑郁症的药物中的用途。这些药物可以为制剂领域中的常规口服制剂，优选为片剂、胶囊剂、颗粒剂或散剂，其使用方法和使用剂量取决于多种因素，如患者的年龄、体重、性别、健康状况、饮食以及病征的持续时间和严重程度等。本领域技术人员根据上述因素可以容易地决定其使用方法和使用剂量。此外，发明人对本发明的元胡提取物进行了长期毒性试验，其结果证明口服给药安全。同时，由于本发明的提取物或包含该提取物的药物组合物是由单味药材经特殊的提取分离过程制备而成，相较于传统成方制剂具有更高的可控性，为今后的生产标准化以及疗效可控性奠定了物质基础。
具体实施例方式下面将结合具体的实施例进一步阐述本发明。下列实施例仅为说明本发明，而不应将其理解为对本发明的限制。实施例一、元胡提取物的制备1.材料:元胡药材购自河北省安国中药材有限公司，产自河北省，符合中华人民共和国药典2005年版一部正文各药材项下的有关规定，样品保存于中国中医科学院中药研究所，批号为yp0033。经鉴定，各药材名称与实物相符，质量均符合药典标准。乙醇(济南汇丰达化工开发有限公司)；纯净水(杭州娃哈哈集团有限公司)；AB-8型大孔树脂(天津南开大学化工厂);X-5型大孔树脂(天津南开大学化工厂);D101-1型大孔树脂(安徽三星树脂科技有限公司)。2.方法:
元胡提取物I的制备:将元胡药材Ikg粉碎，得到粗粉，分别用8倍、6倍、6倍量的15体积％乙醇-水溶液回流提取3次，提取时间依次为3h、2h和lh，合并三次提取液，回收溶剂至无醇味，且最终加水定容至0.2g药材/ml提取液，得到元胡提取液I ;将上述元胡提取液I经AB-8型大孔树脂吸附，其中大孔树脂柱的柱床径高比为1:10，上样流速为lBV/h，且大孔树脂与元胡提取液I的重量比为1:1 ;将上述吸附了元胡活性部位的大孔树脂进行梯度洗脱，其中所述梯度洗脱的程序为:先用水洗脱5BV，再用70体积％乙醇-水溶液洗脱5BV，洗脱速度为2BV/h ;合并70体积％乙醇-水溶液洗脱部分，回收水分，干燥，得元胡提取物，收率为12.52%。元胡提取物2的制备:将元胡药材Ikg粉碎，得到粗粉，分别用8倍、6倍、6倍量的35体积％乙醇-水溶液回流提取3次，提取时间依次为3h、2h和lh，合并三次提取液，回收溶剂至无醇味，且最终加水定容至0.2g药材/ml提取液，得到元胡提取液2 ；将上述元胡提取液2经AB-8型大孔树脂吸附，其中大孔树脂柱的柱床径高比为1:10，上样流速为lBV/h，且大孔树脂与元胡提取液2的重量比为1:1 ;将上述吸附了元胡活性部位的大孔树脂进行梯度洗脱，其中所述梯度洗脱的程序如上所述；合并70体积％乙醇-水溶液洗脱部分，回收水分，干燥，得元胡提取物，收率为14.28%ο元胡提取物3的制备:将元胡药材Ikg粉碎，得到粗粉，分别用8倍、6倍、6倍量的95体积％乙醇-水溶液回流提取3次，提取时间依次为3h、2h和lh，合并三次提取液，回收溶剂至无醇味，且最终加水定容至0.2g药材/ml提取液，得到元胡提取液3 ；将上述元胡提取液3经AB-8型大孔树脂吸附，其中大孔树脂柱的柱床径高比为1:10，上样流速为lBV/h，且大孔树脂与元胡提取液3的重量比为1:1 ;将上述吸附了元胡活性部位的大孔树脂进行梯度洗脱，其中所述梯度洗脱的程序如上所述；合并70体积％乙醇-水溶液洗脱部分，回收水分，干燥，得元胡提取物，收率为13.23%。元胡提取物4的制备:将元 胡药材Ikg粉碎，得到粗粉，分别用8倍、6倍、6倍量的15体积％乙醇-水溶液回流提取3次，提取时间依次为3h、2h和lh，合并三次提取液，回收溶剂至无醇味，且最终加水定容至0.2g药材/ml提取液，得到元胡提取液4 ；将上述元胡提取液4经X-5型大孔树脂吸附，其中大孔树脂柱的柱床径高比为1:10，上样流速为lBV/h，且大孔树脂与元胡提取液4的重量比为1:1 ;将上述吸附了元胡活性部位的大孔树脂进行梯度洗脱，其中所述梯度洗脱的程序如上所述；合并70体积％乙醇-水溶液洗脱部分，回收水分，干燥，得元胡提取物，收率为
13.17%。元胡提取物5的制备:将元胡药材Ikg粉碎，得到粗粉，分别用8倍、6倍、6倍量的55体积％乙醇-水溶液回流提取3次，提取时间依次为3h、2h和lh，合并三次提取液，回收溶剂至无醇味，且最终加水定容至0.2g药材/ml提取液，得到元胡提取液5 ；将上述元胡提取液5经X-5型大孔树脂吸附，其中大孔树脂柱的柱床径高比为1:10，上样流速为lBV/h，且大孔树脂与元胡提取液5的重量比为1:1 ;将上述吸附了元胡活性部位的大孔树脂进行梯度洗脱，其中所述梯度洗脱的程序如上所述；合并70体积％乙醇-水溶液洗脱部分，回收水分，干燥，得元胡提取物，收率为
14.25%。元胡提取物6的制备:将元胡药材Ikg粉碎，得到粗粉，分别用8倍、6倍、6倍量的95体积％乙醇-水溶液回流提取3次，提取时间依次为3h、2h和lh，合并三次提取液，回收溶剂至无醇味，且最终加水定容至0.2g药材/ml提取液，得到元胡提取液6 ；将上述元胡提取液6经X-5型大孔树脂吸附，其中大孔树脂柱的柱床径高比为1:10，上样流速为lBV/h，且大孔树脂与元胡提取液6的重量比为1:1 ;将上述吸附了元胡活性部位的大孔树脂进行梯度洗脱，其中所述梯度洗脱的程序如上所述；合并70体积％乙醇-水溶液洗脱部分，回收水分，干燥，得元胡提取物，收率为14.65%。元胡提取物7的制备:将元胡药材Ikg粉碎，得到粗粉，分别用8倍、6倍、6倍量的15体积％乙醇-水溶液回流提取3次，提取时间依次为3h、2h和lh，合并三次提取液，回收溶剂至无醇味，且最终加水定容至0.2g药材/ml提取液，得到元胡提取液7 ；将上述元胡提取液4经DlOl型大孔树脂吸附，其中大孔树脂柱的柱床径高比为1:10，上样流速为lBV/h，且大孔树脂与元胡提取液7的重量比为1:1 ;
将上述吸附了元胡活性部位的大孔树脂进行梯度洗脱，其中所述梯度洗脱的程序如上所述；合并70体积％乙醇-水溶液洗脱部分，回收水分，干燥，得元胡提取物，收率为
13.35%。元胡提取物8的制备:将元胡药材Ikg粉碎，得到粗粉，分别用8倍、6倍、6倍量的75体积％乙醇-水溶液回流提取3次，提取时间依次为3h、2h和lh，合并三次提取液，回收溶剂至无醇味，且最终加水定容至0.2g药材/ml提取液，得到元胡提取液8 ；将上述元胡提取液8经DlOl型大孔树脂吸附，其中大孔树脂柱的柱床径高比为1:10，上样流速为lBV/h，且大孔树脂与元胡提取液8的重量比为1:1 ;将上述吸附了元胡活性部位的大孔树脂进行梯度洗脱，其中所述梯度洗脱的程序如上所述；合并70体积％乙醇-水溶液洗脱部分，回收水分，干燥，得元胡提取物，收率为
14.41%。元胡提取物9的制备:将元胡药材Ikg粉碎，得到粗粉，分别用8倍、6倍、6倍量的95体积％乙醇-水溶液回流提取3次，提取时间依次为3h、2h和lh，合并三次提取液，回收溶剂至无醇味，且最终定容至0.2g药材/ml提取液，得到元胡提取液9 ；将上述元胡提取液9经DlOl型大孔树脂吸附，其中大孔树脂柱的柱床径高比为1:10，上样流速为lBV/h，且大孔树脂与元胡提取液9的重量比为1:1 ;将上述吸附了元胡活性部位的大孔`树脂进行梯度洗脱，其中所述梯度洗脱的程序如上所述；合并70体积％乙醇-水溶液洗脱部分，回收水分，干燥，得元胡提取物，收率为12.18%。实施例二、元胡提取物中总生物碱的含量测定及其方法学考察现代药理学研究表明，元胡中的主要有效组分为元胡总生物碱。而在多种四氢异喹啉类生物碱中，尤以延胡索乙素所表现出的生理活性最强。因此，参照相关文献资料(王绪颖等，延胡索总生物碱的提取纯化工艺研究[J]，中成药，2010，32 (11):1899-1903)，本发明选用溴甲酚绿酸性染料比色法测定元胡提取物中总生物碱的含量。该方法的原理是，在一定的PH介质中，有机生物碱类可与某些酸性染料定量结合成有色络合物。该有色络合物可定量被提取到有机溶剂中，进而可以用比色法测量有机碱的量。1.材料:1.1 仪器:十万分之一电子分析天平(瑞士梅特勒公司)；T6新世纪紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)；KQ_100B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；RE-52A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。1.2 试剂醋酸(北京化工厂，分析纯)；醋酸钠(北京化工厂，分析纯)；去离子水(中国中医科学院中药研究所自制);溴甲酚绿(北京化工厂，分析纯);邻苯二甲酸氢钾(北京化工厂，分析纯)；盐酸(北京化工厂，分析纯)；氢氧化钠(北京化工厂，分析纯)；氨水(北京化工厂，分析纯)；甲醇(北京化工厂，分析纯)；三氯甲烷(北京化工厂，分析纯)。1.3待测样品及对照品
待测样品:按照实施例一所述的方法制备的元胡提取物。对照品:延胡索乙素(批号:110726，中国药品生物制品检定所，供含量测定用)。2.方法和结果:2.1试液配制醋酸-醋酸钠缓冲溶液(pH4.5)的配制:称取无水醋酸钠18.092g,量取醋酸
9.8ml，加去离子水定容至IOOOmL,即得pH4.5的缓冲溶液。溴甲酚绿溶液的配制:精密称取溴甲酚绿0.0504g，邻苯二甲酸氢钾1.2005g，加
0.lmol/L盐酸3ml溶解,加去离子水定容至IOOmL,采用氢氧化钠调节pH至4.5。对照品溶液的制备:精密称取延胡索乙素2.50mg，用醋酸-醋酸钠缓冲液定容至IOmL,配成每ImL含有0.25mg延胡索乙素对照品的溶液。供试品溶液的制备:以元胡提取物I为例，精密称取提取物0.05g，加入70体积％甲醇超声溶解并定容至IOOmL,配成0.5mg/mL的样品溶液。精密量取样品溶液5.0mL,蒸干，加醋酸-醋酸钠缓冲液(PH4.5)将残渣溶解，定容至10mL，即得供试品溶液。2.2标准曲线及线性范围分别精密吸取对照品溶液0、0.2,0.4,0.6,0.8和1.0mL，置于预先精密加入三氯甲烷IOmL的分液漏斗中，再分别补加1.0,0.8,0.6,0.4,0.2和OmL醋酸-醋酸钠缓冲液(PH4.5)。精密加入4mL溴甲酚绿溶液，振摇3分钟，静置40分钟，分取三氯甲烷层。按照《中国药典》(2010年版)第一部附录VA中记载的紫外-可见分光光度法在411nm波长处测定吸光度，标准曲线为Y=54.72χ-0.004，r=0.998，结果表明在5.0 μ g/ml-25.0 μ g/ml之间的质量浓度与吸光度呈良好线性关系。2.3稳定性试验精密吸取供试品溶液1.0mL，置于预先精密加入三氯甲烷IOmL的分液漏斗中。按照上述2.2项下的方法，分别于0、10、20、30、40、50和60分钟时，在411nm波长处测定吸光度。测量结果的RSD为0.8723%，说明样品溶液在60分钟内稳定。2.4精密度试验精密吸取供试品溶液1.0mL，置于预先精密加入三氯甲烷IOmL的分液漏斗中。按上述2.2项下的方法，在41 Inm波长处连续测定6次。测量结果的RSD为0.2%，说明本方法的精密度良好，所测数据准确可靠。2.5重现性试验以元胡提取物I为例，精密称取6份，每份各0.5g，按2.1项下的方法制备供试品溶液。取供试品溶液lmL，置于预先精密加入三氯甲烷IOmL的分液漏斗中。按2.2项下的方法，在411nm波长处测定吸光度。测量结果的RSD为1.60%，说明本方法的重现性良好，符合含量测定的检测要求。2.6加样回收率试验
以元胡提取物I为例，精密称取0.025g,置于IOOmL量瓶中。加入对照品10.5mg,加70体积％甲醇超声溶解，配制成0.5mg/mL样品溶液。精密量取样品溶液5.0mL,蒸干，加醋酸-醋酸钠缓冲液(PH4.5)将残渣溶解，定容至10mL，即得供试品溶液。精密吸取加样供试品溶液1.0mL，置于预先精密加入三氯甲烷IOmL的分液漏斗中。按照2.2项下的方法操作，在411nm波长处测定吸光度。结果平均回收率为100.2%，RSD为1.56%，说明本方法的回收率良好。2.7元胡提取物的含量测定分别精密称取元胡提取物1-9，各0.05g，按2.1项下的方法平行制备供试品溶液1-9。在411nm波长处测定元胡中总生物碱的含量，结果见表I。表1.元胡提取物中总生物碱的含量测定结果
权利要求
1.元胡提取物，其特征在于所述元胡提取物包含至少40重量％的总生物碱，由包括如下步骤的方法制备: 1)将元胡药材粉碎，得到粗粉，分别用8倍、6倍、6倍量的乙醇-水溶液回流提取3次，提取时间依次为3h、2h和lh，合并三次提取液，减压回收溶剂至无醇味，且最终加水定容至0.2g药材/ml提取液,得到元胡提取液； 2)将步骤I)中得到的元胡提取液经大孔树脂吸附，其中大孔树脂柱的柱床径高比为1:10，上样流速为lBV/h，且大孔树脂与元胡提取液的重量比为1:1 ; 3)将步骤2)中吸附了元胡活性部位的大孔树脂进行梯度洗脱，其中所述梯度洗脱的程序为:先用水洗脱5BV，再用70体积％乙醇-水溶液洗脱5BV，洗脱速度为2BV/h ;合并70体积％乙醇-水溶液洗脱部分，减压回收溶剂，干燥，得元胡提取物。
2.根据权利要求1所述的元胡提取物，其特征在于步骤I)的所述乙醇-水溶液为15体积％-95体积％的乙醇-水溶液。
3.根据权利要求1或2所述的元胡提取物，其特征在于步骤2)中的所述大孔树脂选自AB-8、X-5、D101中的任意一种，优选AB-8。
4.制备根据权利要求1-3中任一项所述的元胡提取物的方法，其特征在于按照所述方法制备的元胡提取物的收率为12-15%，且所述元胡提取物中的总生物碱含量至少为40重量％。
5.药物组合物，其包含根据权利要求1-3中任一项所述的元胡提取物和任选的药学上可接受的赋形剂。
6.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于所述药学上可接受的赋形剂选自稀释剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂、矫味剂、包衣剂、防腐剂或稳定剂。
7.根据权利要求1-3中任一项所述的元胡提取物，或者根据权利要求5或6所述的药物组合物在制备用于治疗和/或预防抑郁症的药物中的用途，其特征在于所述药物为制剂领域中的常规口服制剂，优选为片剂、胶囊剂、颗粒剂或散剂。
全文摘要
本发明涉及元胡提取物及其制备方法和用途。具体而言，本发明涉及含有至少40%总生物碱的元胡提取物，制备该提取物的提取分离方法，包含该提取物的药物组合物以及该提取物或药物组合物在制备用于预防和/或治疗抑郁症的药物中的用途。
文档编号A61P25/24GK103191198SQ20131011539
公开日2013年7月10日 申请日期2013年4月3日 优先权日2013年4月3日
发明者杨洪军, 许海玉, 李春, 黄璐琦 申请人:中国中医科学院中药研究所