专利名称：一种鳄鱼血红蛋白肽的组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种鳄鱼血红蛋白肽的组合物，本发明还涉及该组合物的制备方法，属于生物医药技术领域。
背景技术：
鳄鱼与恐龙同时代，是地球上最古老的动物之一，有“活化石”之称。鳄鱼同时还是地球上寿命最长的动物之一，寿命高达两百多岁，比龟和鳖还长。此外，鳄鱼长期生活在沼泽地带，并且经常撕咬，可是他们的伤口从来都不会感染细菌，拥有超强的免疫力。事实上，早在两千年前，我们的老祖宗就对鳄鱼有了很深的了解。秦汉时代的《神农本草经》称鳄鱼为鉈鱼，主治心腹症瘕，伏坚积聚，寒热，女子崩中下血五色，小腹阴中相引痛，疥疮死肌。唐朝“药王”孙思邈的《千金要方》里记载鳄甲汤主治“风癫”。明朝李时珍的《本草纲目》里记载:鳄鱼“主治少呼吸，足不立地，湿气邪气，诸它腹内，症痞恶疮。”可见鳄鱼在治疗哮喘、风湿类风湿、皮肤病、五脏疾病、肿瘤乃至癫痫、老年痴呆症等多种疾病方面具有极高的药用价值，是“中医瑰宝级”的珍稀动物。鳄鱼长寿的秘密的是什么？鳄鱼超强的免疫力源自哪里？鳄鱼为什么可以治疗这么多种疑难病症？研究鳄鱼的生命密码，让鳄鱼长期服务于人类健康，成为生物医学领域的一个重大课题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种增强人体免疫力和抗氧化能力，减少人体自由基的形成，改善心血管疾病的鳄鱼血红蛋白肽的组合物及其制备该组合物的方法。为解决上述技术问题，本发明提供的前一技术方案是这样的:该鳄鱼血红蛋白肽的组合物，包括下述质量百分比的原料:鳄鱼血红蛋白肽I 90%，鳄鱼肉蛋白I 50%，辅酶QlOl 50%,各组分之和为100%。优选的，所述的鳄鱼血红蛋白肽的组合物，该组合物包括下述质量百分比的原料:鳄鱼血红蛋白肽10 80%，鳄鱼肉蛋白5 40%，辅酶QlO 5 40%，各组分之和为100%。更优的，所述的鳄鱼血红蛋白肽的组合物，该组合物包括下述质量百分比的原料:鳄鱼血红蛋白肽25 65%，鳄鱼肉蛋白10 30%，辅酶QlO 10 30，各组分之和为100%。进一步的，所述的鳄鱼血红蛋白肽的组合物，该组合物还包括下述质量百分比的原料:5-10%麦芽糊精；5-10%粘合剂。本发明提供的后一技术方案是这样的:该鳄鱼血红蛋白肽的组合物的制备方法，依次包括下述步骤:称取鳄鱼血红蛋白肽，鳄鱼肉蛋白，辅酶Qio，麦芽糊精和食品粘合剂；2)将步骤I)称取的鳄鱼血红蛋白肽 和鳄鱼肉蛋白多肽通过传统的喷雾方法制成细小颗粒，然后和辅酶Qio颗粒混合在一起，充分的搅拌，再添加的麦芽糊精和粘合剂搅拌均匀。
上述的一种鳄鱼血红蛋白肽的组合物的制备方法所述的鳄鱼血红蛋白肽的制备方法依次包括下述步骤:I)血红蛋白的制备向新鲜鳄鱼血加入食用级抗凝剂，充分搅拌并离心分离，将下层血细胞用生理盐水洗涤，收集沉淀的血细胞加入蒸馏水，用超声波粉碎仪处理，离心去除细胞膜及杂质，得血红蛋白溶液；2)血红蛋白的酶解方法取血红蛋白溶液，用NaOH溶液调至反pH值6.5-7.5，加入蛋白酶反应过程中用NaOH溶液调至pH值7.5 ;反应结束后灭酶，终止反应，得到水解液；3)水解液的预处理将灭酶的水解液离心分离，上清液进行脱色、脱苦处理，多次离心得到血红蛋白水解液；4)血红蛋白肽的提纯将血红蛋白水解液透析处理，得到分子量小于8000的外透液，将外透液真空冷冻干燥，将血红蛋白肽样品配制成5ug/ml浓度的溶液，取适量样品依次通过离子交换色谱、凝胶过滤色谱、高效液相色谱进行纯化，最后得到较纯的血红蛋白肽样品。进一步的，上述的一种鳄鱼血红蛋白肽的组合物的制备方法，所述的蛋白酶为中性蛋白酶和木瓜蛋白酶。与现有技术相比，本发明具有以下优点:本发明提供的组合可以增强人体免疫力和抗氧化能力，有效减少·人体自由基的形成，抗击衰老，同时有效改善心血管疾病、和癌症。
具体实施方案以下将结合具体实施方式
，对本发明的的权利要求作作进一步详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何人在本发明权利要求范围内做所的有限次的修改，仍在本发明的权利要求保护范围内。实施例1本发明的一种鳄鱼血红蛋白肽的组合物，包括下述原料:鳄鱼血红蛋白肽IgJf鱼肉蛋白49g，辅酶QlO 50g。实施例2本发明的一种鳄鱼血红蛋白肽的组合物，包括下述原料:鳄鱼血红蛋白肽90g，鳄鱼肉蛋白5g，辅酶QlO 5g。实施例3本发明的一种鳄鱼血红蛋白肽的组合物，包括下述原料:鳄鱼血红蛋白肽50g，鳄鱼肉蛋白20g，辅酶Q1020g，麦芽糊精5g ;粘合剂5g。实施例4本发明的一种鳄鱼血红蛋白肽的组合物，包括下述原料:鳄鱼血红蛋白肽5g，鳄鱼肉蛋白45g，辅酶QlO 30g，麦芽糊精IOg ;粘合剂IOgo实施例5本发明的一种鳄鱼血红蛋白肽的组合物，包括下述原料:鳄鱼血红蛋白肽20，鳄鱼肉蛋白20g，辅酶Q1045g，麦芽糊精5g;粘合剂10g。上述的鳄鱼血红蛋白肽的组合物的制备方法，依次包括下述步骤:I)按实施例1至5中任一种称取鳄鱼血红蛋白肽，鳄鱼肉蛋白，辅酶Q10，麦芽糊精和粘合剂；2)将步骤I)称取的鳄鱼血红蛋白肽和鳄鱼肉蛋白多肽通过传统的喷雾方法制成细小颗粒，然后和辅酶QlO颗粒混合在一起，充分的搅拌，再添加的麦芽糊精和粘合剂搅拌均匀鳄鱼血红蛋白肽的制备方法:鳄鱼生活在沼泽地带，它们十分凶残，并且经常撕咬到伤痕累累，可是它们的伤口从不感染细菌。鳄鱼的血液中一定有某种物质可以抗击细菌，甚至病毒。在抗生素滥用，细菌对抗生素迅速产生耐药性的今天，研究鳄鱼血具有广泛的现实意义。近年来，研究发现，蛋白质经消化道酶促水解后主要以小肽的形式吸收，比完全游离氨基酸更易、更快被 机体吸收利用:这是肽研究理论和实践的重大突破。酶水解血液可以制备游离氨基酸和功能肽，功能肽在促进免疫细胞增生、抗肿瘤、抗氧化、增强机体免疫力等方面有一定的功效。本发明采用双酶水解鳄鱼血红蛋白，通过正交实验，确定酶水解最优条件，并对水解液进行预处理，通过粗提、纯化等步骤得到血红蛋白肽样品。I材料与方法1.1原料与试剂鳄鱼血:由广西钦州华宏特种水产养殖开发有限公司吴川分公司提供的新鲜、检疫合格的鳄鱼血；酶制剂:均为食品级，广西南宁庞博生物工程有限公司；Sephadex G-50:上海君创生物科技有限公司；DEAE-32:上海君创生物科技有限公司；其它试剂均为分析纯。1.2仪器设备精密pH计、分析天平、高速离心机、超声波粉碎仪、高效液相色谱仪等。1.3实验方法1.3.1 总氮测定方法:微量凯氏定氛法(TN)。1.3.2 酶活测定=Folin-酚法。1.3.3 水解度(DH)测定:甲醛滴定法测定氨基氮含量(AN)，按此式计算:DH=AN/TNX100%1.3.4血红蛋白的制备:新鲜鳄鱼血加入适量食用级抗凝剂，抗凝剂加入体积约为鳄鱼血体积的1/10，充分搅拌并离心分离，将下层血细胞用生理盐水洗涤，收集沉淀的血细胞加入适量蒸馏水，使血细胞的浓度为4-7mu/ml，在用超声波粉碎仪处理，离心去除细胞膜及杂质，得血红蛋白溶液。1.3.5血红蛋白的酶解方法量取一定体积的血红蛋白溶液，用NaOH溶液调至反应所需的pH值，依照所用酶的活力单位加入蛋白酶，反应过程中用NaOH溶液调至最适pH值。反应结束后灭酶,终止反应。1.3.6水解液的预处理
将灭酶的水解液离心分离，上清液进行脱色、脱苦处理，多次离心得到血红蛋白水解液。1.3.7血红蛋白肽的提纯将水解蛋白液透析处理，得到分子量小于8000的外透液，将外透液真空冷冻干燥。将血红蛋白肽样品配制成一定浓度的溶液，取适量样品依次通过离子交换色谱、凝胶过滤色谱、高效液相色谱进行纯化，最后得到较纯的血红蛋白肽样品。2 结果与讨论2.1两种蛋白酶的最佳作用条件经反复试验，从6种常用的商品蛋白酶进行筛选，初步筛选出了中性蛋白酶和木瓜蛋白酶。中性蛋白酶作用的肽键具有广泛的专一性；木瓜蛋白酶为内肽酶，它专门作用于肽链内部的肽键，能将舒展开的蛋白质肽链切成较长的肽段，使水溶性固形物增多且水解颜色较好。由于同种蛋白酶对不同的底物具有不同的最适作用条件，以水解度(DH)为指标，通过正交实验确定了两种蛋白酶的最佳作用条件，结果见表I。表I中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的最佳作用条件
权利要求
1.一种鳄鱼血红蛋白肽的组合物，其特征在于，该组合包括下述质量百分比的原料:鳄鱼血红蛋白肽I 90%，鳄鱼肉蛋白I 50%，辅酶QlOl 50%，各组分之和为100%。
2.根据权利要求1所述的鳄鱼血红蛋白肽的组合物，其特征在于，该组合物包括下述质量百分比的原料:鳄鱼血红蛋白肽10 80%，鳄鱼肉蛋白5 40%，辅酶QlO 5 40%，各组分之和为100%。
3.根据权利要求1所述的鳄鱼血红蛋白肽的组合物，其特征在于，该组合物包括下述质量百分比的原料:鳄鱼血红蛋白肽25 65%，鳄鱼肉蛋白10 30%，辅酶QlO 10 30，各组分之和为100%。
4.根据权利要求1至3任一所述的鳄鱼血红蛋白肽的组合物，其特征在于，该组合物还包括下述质量百分比5-10%的麦芽糊精，5-10%的食品粘合剂。
5.权利要求4所述的一种鳄鱼血红蛋白肽的组合物的制备方法，其特征在于，依次包括下述步骤: 1)按权利要求4所述的的百分比称取鳄鱼血红蛋白肽，鳄鱼肉蛋白，辅酶Q10，麦芽糊精和食品粘合剂； 2)将步骤I)称取的鳄鱼血红蛋白肽和鳄鱼肉蛋白多肽通过传统的喷雾方法制成细小颗粒，然后和辅酶QlO颗粒混合在一起，充分的搅拌，再添加的麦芽糊精和粘合剂搅拌均匀。
6.根据权利要求5所述的一种鳄鱼血红蛋白肽的组合物的制备方法，其特征在于，所述的鳄鱼血红蛋白肽的制备方法依次包括下述步骤: 1)血红蛋白的制备 向新鲜鳄鱼血加入食用级抗凝剂，充分搅拌并离心分离，将下层血细胞用生理盐水洗涤，收集沉淀的血细胞加入蒸馏水，用超声波粉碎仪处理，离心去除细胞膜及杂质，得血红蛋白溶液； 2)血红蛋白的酶解方法 取血红蛋白溶液，用NaOH溶液调至反pH值6.5-7.5，加入蛋白酶反应过程中用NaOH溶液调至pH值7.5 ;反应结束后灭酶,终止反应,得到水解液； 3)水解液的预处理 将灭酶的水解液离心分离，上清液进行脱色、脱苦处理，多次离心得到血红蛋白水解液； 4)血红蛋白肽的提纯 将血红蛋白水解液透析处理，得到分子量小于8000的外透液，将外透液真空冷冻干燥，将血红蛋白肽样品配制成5ug/ml浓度的溶液，取适量样品依次通过离子交换色谱、凝胶过滤色谱、高效液相色谱进行纯化，最后得到较纯的血红蛋白肽样品。
7.根据权利要求6所述的一种鳄鱼血红蛋白肽的组合物的制备方法，其特征在于，所述的蛋白酶为中性蛋白酶和木瓜蛋白酶。
全文摘要
本发明公开了一种鳄鱼血红蛋白肽的组合物及其制备方法，旨在提供一种增强人体免疫力和抗氧化能力，减少人体自由基的形成，改善心血管疾病的鳄鱼血红蛋白肽的组合物；其技术要点是该组合包括下述质量百分比的原料鳄鱼血红蛋白肽1-90%，鳄鱼肉蛋白1-50%，辅酶Q10 1-50%，各组分之和为100%；制备方法是1)称取鳄鱼血红蛋白肽，鳄鱼肉蛋白，辅酶Q10，麦芽糊精和粘合剂；2)将步骤1)称取的鳄鱼血红蛋白肽和鳄鱼肉蛋白多肽通过传统的喷雾方法制成细小颗粒，然后和辅酶Q10颗粒混合在一起，充分的搅拌，再添加的麦芽糊精和粘合剂；属于生物医药技术领域。
文档编号A61P9/00GK103230587SQ20131017367
公开日2013年8月7日 申请日期2013年5月10日 优先权日2013年5月10日
发明者汪华东 申请人:汪华东