原儿茶醛在制备治疗或预防肺纤维化的药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了原儿茶醛的药物新用途，具体涉及原儿茶醛通过抑制上皮细胞间质转化和成纤维细胞增殖从而抑制肺纤维化的发生发展，达到预防或治疗肺纤维化。在上述应用中，原儿茶醛使用剂量范围是20mg～2000mg；优选20～1000mg。
【专利说明】原儿茶醛在制备治疗或预防肺纤维化的药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及原儿茶醛抑制肺纤维化的发生发展从而预防或治疗肺纤维化；具体涉 及原儿茶醛通过抑制上皮细胞-间质转化（EMT)和抑制肺成纤维细胞异常活化从而抑制肺 纤维化的发生发展，达到预防或治疗肺纤维化。
【背景技术】：
[0002] 特发性肺纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis, IPF)又称为隐源性致纤维化 性肺泡炎（cryptogenicfibrosing alveolitis, CFA)，是一种慢性炎症性间质性疾病，以普 通型间质性肺炎（usual interstitialpneumonia，UIP)为特征性病理改变且病因不明。主 要表现为成纤维细胞灶（fibroblastic foci)的出现致大量细胞外基质（extracellular matrix, ECM)沉，胶原积聚，肺泡结构破坏，最终导致正常肺组织结构的破坏，是一种 慢性、进行性、不可逆转也是最常见的一种致命性肺疾病[King TJ，Pardo A, Selman Μ· Idiopathic pulmonary fibrosis[J]· Lancet. 2011,378(9807) :1949-1961.]。临床表 现为进行性呼吸困难并伴有刺激性干咳，肺功能限制性通气障碍，病情持续恶化，最终因呼 吸衰竭而死亡。流行病学研究显示IPF发病率呈不断上升趋势，目前约为16. 3/100, 000， 且 3 年内急性恶化发生率为 20. 7% [Navaratnam V，Fleming KM，West J et al.The rising incidence of idiopathic pulmonary fibrosis in the UK J. Thorax,2011, 66(6) :462-467. ;Song JW, Hong SB, Lim CM et al. Acute exacerbation of idiopathic pulmonary fibrosis !incidence, risk factors and outcome[J]. Eur Respir J,2011, 37(2) :356-363.]。肺纤维化主要是肺组织受损后修复调节失控、重建异常所引起的病变， 期间一系列细胞因子和生长因子等表达异常、炎症反应参与肺纤维化的发病过程。由此 造成上皮细胞缺损、成纤维细胞增生和ECM积聚等主要病变，最终结果是成纤维细胞替代 了行使正常功能的肺泡上皮细胞，导致了纤维化的发生。肺泡上皮细胞（AECs)的上皮细 胞 -间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT)是一种完全分化的肺泡上皮细 胞经历细胞表型改变转化成完全分化的间质细胞的过程，通常转化成肺成纤维细胞和肌纤 维母细胞，与肺纤维化密切相关[Guarino M，Tosoni A，Nebuloni M. Direct contribution of epithelium to organ fibrosis ：epithelial-mesenchymal transition. Hum Pathol, 2009,40(10) :1365-1376.].成纤维细胞异常活化分化成肌成纤维细胞，是肺纤维化合成 大量的细胞外基质（ECM)的来源（Coward WR，Saini G，Jenkins G. The pathogenesis of idiopathic pulmonary fibrosis. Ther Adv RespirDis. 2010 ;4 (6) :367-388.)〇 IPF 瘢痕肌成纤维细胞参与失调伤口愈合反应，导致肺的结构扭曲和功能失调，破坏肺的气体 交换（Selman M, King TE, Pardo A. Idiopathic pulmonary fibrosis !prevailing and evolving hypotheses aboutits pathogenesis and implications for therapy. Ann Intern Med2001 ;134(2) :136-151;Sime PJ, 0' Reilly KM. Fibrosis of the lung and other tissues ：new concepts in pathogenesis and treatment. Clin Tmmunol2001 ； 99(3) :308-319.)，所以抑制成纤维细胞异常增殖很有意义。
[0003] 原儿茶醛是中药丹参的一种水溶性有效成分，但原儿茶醛在制备预防或治疗肺纤 维化的药理作用未见报道。本发明人通过大量的研究发现原儿茶醛可以通过抑制EMT和成 纤维细胞异常活化从而在预防或治疗肺纤维化方面有明显的作用。基于此，本发明人发明 了原儿茶醛通过抑制EMT和肺成纤维细胞异常活化从而抑制肺纤维化的发生发展，以达到 预防或治疗IPF。
【发明内容】
[0004] 本发明提供了原儿茶醛在制备预防或治疗肺纤维化的药物中的应用。
[0005] 本发明提供了原儿茶醛通过抑制EMT达到预防或治疗肺纤维化的药物中的应用。
[0006] 本发明提供了原儿茶醛通过抑制成纤维细胞异常活化达到预防或治疗肺纤维化 的药物中的应用。
[0007] 发明提供的药物在用于肺纤维化时，其使用剂量范围是50mg?2000mg;优选 100 ?lOOOmg。
[0008] 本发明还提供了由原儿茶醛和药学上可接受的载体或辅料组成的药物，该药物可 以以药学常规方法制备成片剂、胶囊剂、注射液、冻干粉针，优选以片剂或冻干粉针形式存 在。
【具体实施方式】
[0009] 实施例1原儿茶醛片剂制备
[0010] 称取100. Og原儿茶醛、35. Og糖粉、40. Og乳糖和23. Og羧甲基淀粉钠充分混合均 匀后过100目筛，加入适量的3% PVPk3ci水溶液适量制软材，20目筛制粒，60°C干燥3小时， 18目筛整粒，加入2. Og硬脂酸镁，混合均匀后浅凹冲压，调节片重约200mg，即得。
【具体实施方式】 [0011]
[0012] 试验例1原儿茶醛对TGF- β 1刺激肺成纤维细胞株上皮细胞钙粘蛋白表达的影响
[0013] 1.1实验材料
[0014] DMEM培养基为Gibco公司产品，新生牛血清为杭州四季青公司产品，TGF-β 1 购自PeproTech公司，肺成纤维细胞购自中国典型培养物保藏中心，用含10 %胎牛血清 (Hyclone公司）的低糖DMEM培养基（GIBC0公司），常规培养于5%的C02 , 37°C人工培养 箱中，细胞呈贴壁生长。E-cadherin -抗购买于sigma公司。
[0015] 原儿茶醛（纯度98. 5%，滨州医学院药物化学研究室制备）
[0016] 1.2试验方法
[0017] 当细胞生长融合至70% -80 %，用无血清培养基饥饿24h，换新鲜培养液，将传 代的A549细胞分为：（1)阴性对照组；（2) TGF- β 1处理组（10 μ g/L作用时间48h) ; (3) TGF-β 1处理组（10yg/L作用时间48h)+原儿茶醛lyM;(4)TGF-P 1处理组（10yg/L 作用时间481〇+原儿茶醛3以1;(4)了6?-3 1处理组（1(^8/1作用时间4811)+原儿茶醛 10 μ M。48h后收获并裂解细胞提取细胞总蛋白。BCA蛋白测定试剂盒（Pierce公司）测定 蛋白浓度后，取50 μ g样品蛋白进行10 %的十二烷基磺酸钠2聚丙烯酰胺（SDS-PAGE)凝胶 变性电泳、然后转至聚偏二氟乙烯（PVDF)膜,加入上皮细胞I丐粘蛋白（E-cadherin) -抗， β-actin作内参,Western blot检测细胞E-cadherin (上皮细胞标记物）蛋白的表达。以 TGF-β 1未刺激组作为对照，分析E-cadherin蛋白的表达差异。
[0018] L 3试验结果
[0019] 表1原儿茶醒对TGF-β 1刺激肺成纤维细胞的E-cadherin表达影响（η = 6)
[0020]
【权利要求】
1. 本发明提供了原儿茶醛在制备预防或治疗肺纤维化的药物中的应用。
2. 根据权利要求1所述的应用，其特征是通过抑制EMT达到预防或治疗肺纤维化的药 物中的应用。
3. 根据权利要求1所述的应用，其特征是通过抑制成纤维细胞异常活化达到预防或治 疗肺纤维化的药物中的应用。
4. 根据权利要求1所述的应用，原儿茶醛在用于肺纤维化时，其使用剂量范围是 50mg ?2000mg。
5. 根据权利要求4所述的应用，原儿茶醛在用于肺纤维化时，优选使用剂量100? lOOOmg。
6. 根据权利要求5所述的应用，由原儿茶醛和药学上可接受的载体或辅料组成的药 物，该药物可以以药学常规方法制备成片剂、胶囊剂。
7. 根据权利要求6所述的应用，由原儿茶醛组成的药物，优选以片剂形式存在。
【文档编号】A61P11/00GK104274430SQ201310295665
【公开日】2015年1月14日 申请日期:2013年7月8日 优先权日:2013年7月8日
【发明者】蒋王林, 吕长俊, 栾海云, 亢泽春, 刁慧玲 申请人:滨州医学院