一种利肝隆片的制备方法及应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种利肝隆片的制备方法，由板蓝根800g、茵陈166g、郁金266g、五味子266g、甘草266g、当归133g、黄芪400g、刺五加20g作为原料药，采用超临界萃取制备而成，使得含量有很大提高，服用量减少，本发明还提供了利肝隆片在制备抑制小鼠黑色素瘤肺转移株B16-F10细胞增殖药物中的应用。
【专利说明】一种利肝隆片的制备方法及应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及中药制剂【技术领域】，具体涉及一种利肝隆片的制备方法及应用。
【背景技术】
[0002]利肝隆片记载于卫生部标准WS3-B-0281-90，处方为板蓝根800g、茵陈166g、郁金266g、五味子266g、甘草266g、当归133g、黄芪400g、刺五加20g，以上八味，取板蓝根130g粉碎成细粉；另取五味子，干燥，粉碎成粗粉，加75%乙醇加热回流提取三次，每一次3小时，第二次2小时，每三次I小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30~1.32 (80°C )的清膏；另取茵陈、当归、郁金酌予粉碎，提取挥发油，药渣与蒸镏后的水溶液加入酌予碎断的黄芪、甘草及剩余的板蓝根，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并煎液滤过，滤液浓缩至相对密度为1.30~1.32 (800C )的清膏，将上述各清膏与刺五加浸膏混合均匀，加板蓝根细粉及淀粉适量，混匀，70~80°C干燥，粉碎成细粉，制成颗粒，低温干燥，喷入挥发油，混匀，密闭约2小时，压制成1000片，包糖衣，即得。能疏肝解郁，清热解毒。用于急、慢性肝炎，迁延性肝炎，慢性活动性肝炎、对血清谷丙转氨酶，麝香草酚浊度，黄疸指数均有显著的降低作用，对乙型肝炎表面抗原转阴有较好的效果。
[0003]现有技术中，尚未有利肝隆片在提取制备方面采用超临界技术的报道，而采用水煎煮的方法，工艺粗糙、落后，杂质多，导致患者用量过大，不方便服用，严重影响了本品在临床上应用。
【发明内容】
[0004]发明目的:为了解决上述问题`，本发明的目的在于提供一种利肝隆片的制备方法。
[0005]本发明的另一目的在于提供利肝隆片在制备抑制小鼠黑色素瘤肺转移株B16-F10细胞增殖药物中的应用。
[0006]技术方案:本发明的目的是通过如下的方案实现的:
[0007]—种利肝隆片的制备方法，由板蓝根800g、茵陈166g、郁金266g、五味子266g、甘草266g、当归133g、黄苗400g、刺五加20g作为原料药制成,所述的方法由下列步骤组成:取板蓝根800g、茵陈166g、郁金266g、五味子266g、甘草266g、当归133g、黄苗400g、刺五加20g，加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50。。，CO2流量l_3ml/g生药.min，萃取时间150-180min,得超临界萃取物，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.37g0
[0008]上述一种利肝隆片的制备方法，所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。
[0009]上述一种利肝隆片的制备方法，所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40°C, CO2 流量 2ml/g 生药.min,萃取时间 160min。
[0010]上述一种利肝隆片在制备抑制小鼠黑色素瘤肺转移株B16-F10细胞增殖药物中的应用，利肝隆片由板蓝根800g、茵陈166g、郁金266g、五味子266g、甘草266g、当归133g、黄芪400g、刺五加20g作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成:取板蓝根800g、茵陈166g、郁金266g、五味子266g、甘草266g、当归133g、黄芪400g、刺五加20g，加入到CO2超临界萃取器中，こ醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50°C，C02流量l_3ml/g生药.min,萃取时间150_180min，得超临界萃取物，加入淀粉，70%こ醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.37g。
[0011]上述ー种利肝隆片在制备抑制小鼠黑色素瘤肺转移株B16-F10细胞增殖药物中的应用，利肝隆片的制备方法中所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5% o
[0012]上述ー种利肝隆片在制备抑制小鼠黑色素瘤肺转移株B16-F10细胞增殖药物中的应用，利肝隆片的制备方法中所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40°C，C02流量2ml/g生药? min,萃取时间160min。
[0013]现有技术中，利肝隆片每片0.37g，一次5片，一日3次，采用本发明制备成的利肝隆片每片0.37g，但含有的药材量是原来的2倍，因此每次仅需2-3片，一日服用3次，在具有更多活性成分的条件下大大減少了服用量。
【具体实施方式】
[0014]以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进ー步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
[0015]实施例1
[0016]取板蓝根800g、茵陈166g、郁金266g、五味子266g、甘草266g、当归133g、黄苗400g、刺五加20g加入到CO2超临界萃取器中，こ醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4%，萃取压力15MPa，温度30°C，C02流量lml/g生药^min,萃取时间150min，得超临界萃取物，加入淀粉，70%こ醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.5g。
[0017]实施例2
[0018]取板蓝根800g、茵陈166g、郁金266g、五味子266g、甘草266g、当归133g、黄苗400g、刺五加20g加入到CO2超临界萃取器中，こ醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为6%，萃取压力30MPa，温度50°C，C02流量3ml/g生药.min,萃取时间180min，得超临界萃取物，加入淀粉，70%こ醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.5g。
[0019]实施例3
[0020]取板蓝根800g、茵陈166g、郁金266g、五味子266g、甘草266g、当归133g、黄苗400g、刺五加20g加入到CO2超临界萃取器中，こ醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力20MPa，温度40°C，C02流量2ml/g生药.min,萃取时间160min，得超临界萃取物，加入淀粉，70%こ醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重0.5g。
[0021]实施例4:利肝隆片抑制B16-F10细胞增殖的实验研究资料
[0022]I实验材料
[0023]1.1实验用细胞株
[0024]小鼠黑色素瘤肺转移株(B16-F10)，南京正亮医药科技有限公司实验室细胞库，DMEM+10%FBS常规培养。
[0025]1.2实验药物
[0026]研究药物:本发明利肝隆片:按实施例3方法制备。
[0027]药液储液:称取IOOmg利肝隆片，溶于5ml无水乙醇中，0.2 μ m滤器过滤，500 μ Idoff管分装，-20°c存储，同时0.2 μ m滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。
[0028]1.3实验试剂
[0029]DMEM (GIBC0 公司 Cat.N0.12100_061Lot.N0.758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.N0.100419)；NaHC03 (上海久亿化学试剂有限公司Cat.N0.11810_033Lot.N0.1088387)；Trypsin (AMRESC0 公司批号:2010/04)；EDTA (AMRESC0 公司批号:2009/10);Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0公司批号:2010242);Str印tomycin SulfateCAMRESCO公司批号:2010382);无水乙醇(南京化学试剂有限公司批号:080310182);MTT (Biosharp批号:0793) ; PBS (实验室自配)；1.4实验器材
[0030]莱卡倒置显微镜(德国Leica型号:DM1L);可见-紫外光微孔板检测仪(美国MD公司型号:SPECTRA MAX190) ；C02培养箱(FORMA型号:3111);超净台(苏净集团安泰公司制造型号:SW-CJ-ZFD);纯水仪(美国Spring公司型号:S/N020579);精密移液器(法国吉尔森公司型号:P2);电子天平(德国赛多利斯有限公司型号:BT323S);全自动高压灭菌锅(日本SANYO公司型号:MLS-3020);台式电热鼓风干燥箱(上海精密实验设备公司型号:DHG9123A);冰箱(西门子公 司型号:KG18V21TI);液氮罐(CBS型号:2001);低速离心机(上海安亭科学仪器厂型号:ΚΑ-1000) ;0.2μπι滤器(MILLIP0RE型号:SLGP033RB) ;10cm培养皿(NEST公司)、96孔培养板(NEST公司)；细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。
[0031]2实验方法
[0032]DB16-F10 细胞用 DMEM+10%FBS 于 37°C、5%C02 进行常规培养(IOcm 培养皿)，当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml0.25%胰蛋白酶-0.049ffiDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后将其转入离心管中，1000rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3X 104个/ml。
[0033]2)将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180 μ I,培养板放入细胞培养箱中(37 °C，5%C02 )常规培养。
[0034]3)根据细胞生长情况，一般长至50%_70%，加入利肝隆片溶液，继续培养24h。
[0035]4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 0.5%MTT)，继续培养 4h。
[0036]5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔加入200 μ I 二甲基亚砜，置摇床上低速振荡lOmin，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。
[0037]6)同时设置本底(不加细胞，只加培养液)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜)，每组设定6个复孔。
[0038]7)结果以药物对细胞的抑制率表示:
[0039]细胞增值抑制率(％)=(对照孔OD值-给药孔OD值)/对照孔OD值X 100%。实验重复3次。
[0040]3统计处理
[0041]采用Microsoft Excel2003软件中的相关分析和Student t检验，数据以mean+ S.D.表不。[0042]4实验结果
[0043]MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对B16-F10细胞增殖抑制有差异(P〈0.05)，剂量在10mg/ml时该差异具有显著性(P〈0.01)，当剂量达到15-20mg/ml时有极显著性差异(P〈0.001)。
[0044]表1利肝隆片对B16-F10细胞增殖抑制影响研f (X + SD)
[0045]
【权利要求】
1.ー种利肝隆片的制备方法，由板蓝根800g、茵陈166g、郁金266g、五味子266g、甘草266g、当归133g、黄芪400g、刺五加20g作为原料药制成，其特征在于所述的方法由下列步骤组成:取板蓝根800g、茵陈166g、郁金266g、五味子266g、甘草266g、当归133g、黄芪400g、刺五加20g，加入到C02超临界萃取器中，こ醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30_50°C，CO2流量l_3ml/g生药? min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，加入淀粉，70%こ醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重 0.37g。
2.根据权利要求1所述ー种利肝隆片的制备方法，其特征在于所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。
3.根据权利要求1所述ー种利肝隆片的制备方法，其特征在于所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa,温度40°C, CO2流量2ml/g生药? min,萃取时间160min。
4.根据权利要求1所述ー种利肝隆片在制备抑制小鼠黑色素瘤肺转移株B16-F10细胞增殖药物中的应用，其特征在于利肝隆片由板蓝根800g、茵陈166g、郁金266g、五味子266g、甘草266g、当归133g、黄芪400g、刺五加20g作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成:取板蓝根800g、茵陈166g、郁金266g、五味子266g、甘草266g、当归133g、黄芪400g、刺五加20g，加入到CO2超临界萃取器中，こ醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa,温度30-50°C, CO2流量ト3ml/g生药? min,萃取时间150-180min，得超临界萃取物，加入淀粉，70%こ醇制颗粒，干燥，压片，制成500片，每片重 0.37g0
5.根据权利要求4所述ー种利肝隆片在制备抑制小鼠黑色素瘤肺转移株B16-F10细胞增殖药物中的应用，其特征在于利肝隆片的制备方法中所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。
6.根据权利要求4所述ー种利肝隆片在制备抑制小鼠黑色素瘤肺转移株B16-F10细胞增殖药物中的应用，其特征在于利肝隆片的制备方法中所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa,温度 40。。, CO2 流量 2ml/g 生药? min,萃取时间 160min。
【文档编号】A61P35/04GK103599493SQ201310633962
【公开日】2014年2月26日 申请日期:2013年12月2日 优先权日:2013年12月2日
【发明者】李强 申请人:李强