厄贝沙坦在预防和治疗乙型肝炎病毒感染疾病中的新用途
【专利摘要】本发明涉及化合物2-丁基-3-[4-[2-(1H-四唑-5-基)苯基]苄基]-1，3-二氮杂螺-[4.4]壬-1-烯-4-酮(厄贝沙坦，Irbesartan，CAS号138402-11-6，结构式见图1)的一种医药新用途，具体地说，本发明涉及厄贝沙坦及其药物组合物在预防和治疗乙型肝炎病毒(hepatitis?B?virus，HBV)感染疾病中的新用途。本发明利用过表达人NTCP分子的HepG2稳定转染单克隆细胞株发现厄贝沙坦可以显著抑制HBV感染肝细胞，从而为抗HBV感染提供了一种新药物。因此，本发明涉及的厄贝沙坦及其药物组合物有望成为治疗HBV感染相关疾病的新型治疗药物和手段。
【专利说明】厄贝沙坦在预防和治疗乙型肝炎病毒感染疾病中的新用途
【技术领域】
[0001]本发明涉及医药【技术领域】，具体地说，本发明涉及厄贝沙坦及其药物组合物在预防和治疗乙型肝炎病毒(h印atitis B virus, HBV)感染疾病中的新用途。
【背景技术】
[0002]HBV感染是当前威胁人类健康严重的传染病之一，与HBV感染相关的肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌每年约导致100多万人死亡。我国是HBV感染大国属于高流行区，HBV感染不仅危害我国人民的健康，给患者及其家庭造成巨大的经济和精神负担，而且给国家造成了巨大的劳动力和经济损失，乃至导致严重的就业等社会问题。目前临床有效的治疗HBV药物主要包括干扰素和核苷类药物。干扰素治愈率有限，副作用较多，，核苷类药物存在容易引起HBV突变耐药和停药后易复发，因此新型抗HBV药物的研发具有重要的社会和经济价值。
[0003]厄贝沙坦是一种临床广泛应用于高血压和II型糖尿病治疗的药物，其安全性已经得到了广泛验证。本研究应用自主构建的NTCP分子HepG2稳转单克隆细胞株发现厄贝沙坦可以有效抑制HBV感染肝细胞，与目前核苷类药物作用机制不同，其作用机制主要体现在抑制HBV进入肝细胞，从而为抗HBV治疗提供了一种潜在的新型治疗药物。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于发现了厄贝沙坦在治疗HBV感染中的新用途，具体地说，本发明涉及厄贝沙坦及其药物组合在制备治疗HBV感染引起的相关疾病的药物中的应用。
[0005]本发明还涉及包含厄贝沙坦的药物组合，已达到防止病毒变异引起的逃逸并提高病毒抑制效果的目的。
[0006]本发明的实施对严重危害人类健康的乙型肝炎及其相关疾病的治疗具有重要的社会效益和经济效益。
【专利附图】
【附图说明】
[0007]为了更好的理解本发明的实质，下面将结合附图来对本发明进行更详细的说明。
[0008]图1为厄贝沙坦化学结构式。
[0009]图2显示了厄贝沙坦抑制HBV感染HepG2.N9细胞后HBcAg的免疫荧光结果。
[0010]图3显示了厄贝沙坦抑制HBV感染HepG2.N9细胞后HBeAg的表达情况。
[0011]图4显示了厄贝沙坦抑制IfepG2.N9细胞生长活性的毒性结果。
【具体实施方式】
[0012]本发明涉及厄贝沙坦在预防和治疗乙型肝炎病毒感染疾病中的新用途，以下通过实例对本发明做进一步的详细说明。应当理解，此处所描述的具体实例仅仅用于解释本发明，除非特别说明， 本发明的术语具有本领域通常使用的含义。[0013]实施例一厄贝沙坦抑制HBV感染实验
[0014]材料与方法
[0015]1.细胞培养
[0016]所用细胞为肝癌细胞H印G2的人NTCP分子稳定转染细胞H印G2.N9，用含10%胎牛血清(FBS，Gibco)的MEM细胞培养液37°C、5% C02条件下培养。
[0017]2.HBV病毒为Ad38细胞上清PEG浓缩液，保存于_80°C。
[0018]3.病毒感染
[0019]感染前2h，HBV感染多肽抑制剂m47F(200nM)、小分子阳性对照Ezetimibe (50uM)、厄贝沙坦(50 μ M用于HBcAg免疫荧光实验，3、10、30和100 μ M用于HBeAg梯度抑制实验)预先与H印G2.Ν9细胞孕育2h，然后在相应药物浓度和5% PEG8000的条件下进行HBV感染，
[0020]MOI为200，感染后培养于含1.5% DMSO的William E培养基。
[0021]4.HBcAg 免疫荧光
[0022]感染后第10天进行免疫突光实验,按免疫突光通用流程进行，HBcAg多抗为Dako公司产品，抗兔二抗为life technology公司产品,共聚焦显微镜拍摄。
[0023]5.HBeAg 检测
[0024]感染后每2天换一次液，收集第8-10天细胞培养液，按照HBeAg ELISA检测试剂盒(上海科华生物工程股份有限公司)说明书操作`步骤检测。
[0025]实施例二厄贝沙坦细胞毒性实验
[0026]1.细胞培养
[0027]所用细胞为肝癌细胞H印G2的NTCP分子稳定转染细胞H印G2.N9，用含10%胎牛血清(FBS，Gibco)的MEM细胞培养液37°C、5% C02条件下培养。
[0028]2.CCK8 实验
[0029]厄贝沙坦在相应浓度作用H印G2.N9细胞24h后换液，72h后按照CCK-8说明书检测厄贝沙坦的细胞毒性，细胞加入CCK-8后于37°C孵育箱中孵育0.5~lh，酶标仪上检测450nm处吸光度。
【权利要求】
1.化合物2-丁基-3-[4-[2-(1H-四唑-5-基)苯基]苄基]_1，3-二氮杂螺-[4.4]壬-1-烯-4-酮(厄贝沙坦，Irbesartan)用于预防和治疗乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus, HBV)感染的新用途。
2.根据权利要求1所述的化合物厄贝沙坦包含其药物制剂上可接受的衍生物。
3.—种药物组合物，其特征在于含有权利要求1和权利要求2所述的厄贝沙坦及其药物制剂上可接受的衍生物。
4.根据权利要求1、权利要求2和权利要求3所述的厄贝沙坦及其药物组合物，其特征在于所述厄贝沙坦有效预防和治疗剂量的范围是每kg体重0.1mg至20mg,优选剂量范围是每kg体重Img至10mg。
【文档编号】A61K31/4184GK103638019SQ201310646579
【公开日】2014年3月19日 申请日期:2013年12月6日 优先权日:2013年12月6日
【发明者】王升启, 王学军, 胡伟, 张婷玉 申请人:中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所