一种高载药量的缓释莫西沙星纳米粒的制备方法
【专利摘要】本发明涉及药物制剂领域，具体涉及一种高载药量的缓释莫西沙星纳米粒的制备方法。该方法用高压均质法制备空白脂质体，然后用硫酸铵梯度装载水溶性的盐酸莫西沙星药物。本发明获得的脂质体纳米粒对莫西沙星具有较高的载药量，并能对药物起到缓释作用。
【专利说明】一种高载药量的缓释莫西沙星纳米粒的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于主动智能载药【技术领域】，具体涉及一种将硫酸铵梯度法与高压均质法相结合，进行改良和工艺优化，以制备高载药量缓释莫西沙星脂质体纳米粒的方法。
【背景技术】
[0002]莫西沙星是20世纪90年代末由德国拜耳公司合成上市的第4代氟喹诺酮类抗菌素药物。莫西沙星以其抗菌谱广、抗菌力强、体内分布广、与其他抗菌药物无交叉耐药性、几乎无光敏反应等优点自上市以来得到临床广泛应用，是第4代氟喹诺酮类抗菌素药物中对结核菌最有效的一种，对95种株肺炎链球菌的敏感度为95.78%。莫西沙星早期灭菌活性高，防突变浓度低，耐药选择指数低，组织穿透性好，在呼吸道黏膜及肺组织中易蓄积，这些特点使其成为新一 代抗结核药物。至今已上市的莫西沙星制剂为拜耳公司的盐酸莫西沙星注射液和口服片剂。然而莫西沙星在人体半衰期短，药物体内分布不具选择性，且用药量大，易产生毒副反应；莫西沙星作为抗结核药，在临床治疗上存在治疗周期长、病人顺应性低等问题。故能在肺部滞留并在较长时间内缓慢释放药物的剂型将成为肺结核治疗的新方向。为此首先需要制备出具有一定载药量能较长时间内缓慢释放药物的微米或纳米大小的载药微粒。
脂质体是由脂质双分子层构成的内部为水相的封闭囊泡。脂质体作为一种广泛使用的智能纳米给药系统具有优良的生物相容性、良好的缓释作用和一定的肺部靶向性，并已能够工业化生产。
莫西沙星是小分子水溶性药物，由于极强的水溶性，目前尚无能同时实现莫西沙星缓释和高载药量的在纳米或微米尺度内的载药微粒。尤其是高载药量是莫西沙星等小分子水溶性药物缓释微粒难以实现的目标。以复乳法制备的聚合物纳米粒或微球、微囊，在低载药量(如小于5% )可以实现对莫西沙星对水溶性小分子药物的缓释，但当载药量提高(如大于10% )，缓释能力急剧降低，甚至完全失去缓释能力。莫西沙星具有一定的弱碱性，采用磷酸铵梯度法主动转载法制备莫西沙星脂质体，有望能提高脂质体的载药量。
[0003]目前，制备脂质体的方法很多，较为成熟的被动载药法有薄膜蒸发法、逆向蒸发法、乙醇注入发等。但是被动载药制得的脂质体对水溶性药物包封率低、载药量低，并存在包封条件不易掌握、包封率差异较大等缺点限制了其应用。主动载药法因能够克服被动载药对水溶性药物的不足而近年来得到了快速发展。主动载药法特别是硫酸铵梯度法适于制备两亲性药物脂质体。硫酸铵梯度法是利用硫酸铵水溶液为脂质体的内水相，缓冲溶液为外水相，而在磷脂双分子层两侧产生硫酸铵的浓度梯度，而硫酸铵梯度又是产生pH值梯度的原动力[7]。外水相中的弱碱性药物分子通过磷脂双分子层进入内水相后，与S042—形成硫酸盐，因磷酸盐难以跨越双分子层不能再返回外水相而滞留在脂质体内水相。这样，外水相中的弱碱性分子持续不断地进入内水相，而使药物具有很高的包封率。
本发明在硫酸铵梯度法主动载药制备脂质体的基础上，为尽可能提高莫西沙星的载药量、包封率和成品中莫西沙星的浓度，最优方案使用高浓度的硫酸铵溶液，借助高压均质法使得高含高浓度硫酸铵和高磷脂浓度的空白脂质体得以制备成功，并能控制粒径到较好的范围；使用最高的药物-磷脂比例；载药时，将莫西沙星以药物固体粉末的形式直接加入到空白脂质体中溶解、混匀和孵育。
所制备的高载药莫西沙星缓释纳米粒尤其适合与透明质酸等肺部相容性凝胶材料制备成脂质体凝胶，在支气管镜导引下介入给药到肺部病患部位(如肺结核病灶部位)，实现长效缓释作用，以减少给药次数，提高病人顺应性，改善治疗效果。这是因为脂质体材料对肺部生物相容性好，也不会引起明显的刺激和不良反应。
【发明内容】
[0004]本发明根据脂质体载体材料的特性及莫西沙星产品本身的特性，而提供了一种硫酸铵梯度法与高压均质法相结合，进行方法改良和工艺优化，从而获得高载药缓释莫西沙星脂质体纳米粒。此方法创建了一种新的易于工业化的主动载药的方法，以制备莫西沙星脂质体。本发明有效解决了莫西沙星缓释微粒存在的载药量低、包封率低、终产品终莫西沙星药物浓度不够高等问题，同时得到的脂质体粒径小、尺寸均一，制备工艺也较简单。
[0005]完成上述任务本发明的技术方案是，高浓度的硫酸铵结合高压均质法制备粒径合适的空白脂质体，在很高的药物-磷脂比例下用硫酸铵梯度法装载莫西沙星制备缓释脂质体纳米粒，步骤如下:
[0006]用烧杯称取一定量50_800mg氢化大豆磷脂、1/5量的胆固醇、1/20量的DSPE-PEG2000在50°C加热条件下高速搅拌均匀分散到硫酸铵水溶液中，温和搅拌下持续加热lh，得到白色乳状悬液；
[0007]将悬液在60°C加热并一定压力下经高压均质机循环均质若干次得脂质体溶液；
[0008]以160mmolNaCl为透析介质一定温度下透析4_6h,制造硫酸铵梯度,得空白脂质体；
[0009]取5mL空白脂质体中加入150mg莫西沙星粉末，搅拌均匀后在40°C孵化20_30min ；
[0010]取孵化后的溶液，以PBS为透析外液于37°C温度下透析2_3h，直到外液中莫西沙星含量不再增加；透析外液转移至IOOmL容量瓶中定容，即可获得高包封率，稳定，粒径均匀的脂质体。
[0011]所述的硫酸铵溶液浓度分别为70mg/mL ;硫酸铵溶液的加入量为ImL硫酸铵溶液/50mgHSPC。
[0012]所述的高压均质压力800bar，高压均质温度60°C，高压均质循环次数为3次，空白脂质体粒径为IlOnm左右。
[0013]所述的透析温度为25°C，透析时间5h。
[0014]所述药物为粉末形式直接加入到空白脂质体溶液中，每mL空白脂质体溶液加入莫西沙星的量为30mg。
[0015]所述的孵化温度和时间:40°C下孵育30min。
[0016]所述孵化后的溶液，以PBS为透析外液于37°C温度下透析2.5h。
[0017]本发明提供的用硫酸铵梯度法结合高压均质法制备莫西沙星脂质体的综合制备方法，通过本发明所获得的脂质体包封率高，稳定，粒径均匀，同时制备工艺简单易于工业化生产。
【专利附图】
【附图说明】
图1为硫酸铵浓度对包封率影响曲线图
图2为孵化温度对包封率影响曲线图
图3为孵化时间对包封率影响曲线图
图4为空白脂质体透析时间对包封率影响曲线图
图5莫西沙星脂质体粒径分布图
图6莫西沙星脂质体室温放置粒径变化图
图7莫西沙星脂质体体外药物释放图
【具体实施方式】
实施例1:用烧杯称取50mg氢化大豆磷脂、1/5量的胆固醇、1/20量的DSPE-PEG2000在500C加热条件下高速搅拌均匀分散到不同浓度(30、50、70、80mg/mL)硫酸铵水溶液中，持续加热lh，若有泡沫超声除去，得到白色乳状溶液；将溶液在60°C加热并一定压力下经高压均质机循环均质三次得脂质体溶液；以160mmolNaCl为透析介质透析5h,制造硫酸铵梯度，得空白脂质体；取5!^空白脂质体中加入150mg莫西沙星粉末，搅拌均匀后在40°C孵化30min ;取孵化后的溶液，以PBS为透析外液于37`°C温度下透析2.5h，直到外液中莫西沙星含量不再增加；透析外液转移至IOOmL容量瓶中定容，经高效液相测定其中莫西沙星含量，根据标准曲线算出不同硫酸铵浓度制备脂质体的包封率，考察最优条件。(见图1)。
实施例2:用烧杯称取一定量50mg氢化大豆磷脂、1/5氢化大豆磷脂质量的胆固醇、1/20氢化大豆磷脂质量的卞泽-78在50°C加热条件下高速搅拌均匀分散到70mg/mL硫酸铵水溶液中，持续加热lh，若有泡沫超声除去，得到白色乳状溶液；将溶液在60°C加热并一定压力下经高压均质机循环均质三次得脂质体溶液；以160mmolNaCl为透析介质透析5h,制造硫酸铵梯度，得空白脂质体；取5mL空白脂质体中加入150mg莫西沙星粉末，搅拌均匀后分别在30、40、50、60°C孵化30min ;取孵化后的溶液，以PBS为透析外液于37°C温度下透析2.5h，直到外液中莫西沙星含量不再增加；透析外液转移至IOOmL容量瓶中定容，经高效液相测定其中莫西沙星含量，根据标准曲线算出不同孵化温度下制备脂质体的包封率，考察最优条件。(见图2)
实施例3:用烧杯称取一定量50mg氢化大豆磷脂、1/5氢化大豆磷脂质量的胆固醇、1/20氢化大豆磷脂质量的卞泽-78在50°C加热条件下高速搅拌均匀分散到70mg/mL硫酸铵水溶液中，持续加热lh，若有泡沫超声除去，得到白色乳状溶液；将溶液在60°C加热并一定压力下经高压均质机循环均质三次得脂质体溶液；以160mmolNaCl为透析介质透析5h,制造硫酸铵梯度，得空白脂质体；取5mL空白脂质体中加入150mg莫西沙星粉末，搅拌均匀后在40°C条件下分别孵化20、30、40、60min ;取孵化后的溶液，以PBS为透析外液于37°C温度下透析2.5h，直到外液中莫西沙星含量不再增加；透析外液转移至IOOmL容量瓶中定容，经高效液相测定其中莫西沙星含量，根据标准曲线算出不同孵化时间制备脂质体的包封率，考察最优条件。(见图3)
实施例4:用烧杯称取一定量50mg氢化大豆磷脂、1/5氢化大豆磷脂质量的胆固醇、1/20氢化大豆磷脂质量的卞泽-78在50°C加热条件下高速搅拌均匀分散到70mg/mL硫酸铵水溶液中，持续加热lh，若有泡沫超声除去，得到白色乳状溶液；将溶液在60°C加热并一定压力下经高压均质机循环均质三次得脂质体溶液；以ieOmmolNaCl为透析介质分别透析
l、3、5、8、16、48h，制造硫酸铵梯度，得空白脂质体；取5mL空白脂质体中加入150mg莫西沙星粉末，搅拌均匀后在40°C条件下分别孵化30min ;取孵化后的溶液，以PBS为透析外液于37°C温度下透析2.5h，直到外液中莫西沙星含量不再增加；透析外液转移至IOOmL容量瓶中定容，经高效液相测定其中莫西沙星含量，根据标准曲线算出不同透析时间制备脂质体的包封率， 考察最优条件。(见图4)
【权利要求】
1.一种高载药量的缓释莫西沙星纳米粒的制备方法，步骤如下: 1)将1份氢化卵磷脂、0.1-0.5份儿胆固醇、0-0.3份儿添加剂(均为重量比)在50-60°C加热条件下高速搅拌均匀分散到硫酸铵水溶液中，持续加热lh，得到白色乳状溶液； 2)将溶液在60°C加热并一定压力下经高压均质机循环均质若干次得脂质体溶液； 3)以一定浓度NaCl水溶液为透析介质透析4-6h,制造硫酸铵梯度,得空白脂质体； 4)空白脂质体中加入莫西沙星粉末，在40°C孵化20-30min； 5)取孵化后的溶液，以PBS为透析外液于37°C温度下透析2-3h，直到外液中莫西沙星含量不再增加；透析液转移、定容，即获得包封率高、高载药量的脂质体纳米粒。
2.按照权利要求1所述的一种高载药量的缓释莫西沙星纳米粒的制备方法，其特征在于，所制备的纳米粒对莫西沙星具有较高的载药量(高达30%)、包封率(在30%载药量时包封率高达75-80% )。
3.按照权利要求1、2所述的一种高载药量的缓释莫西沙星纳米粒的制备方法，其特征还在于，为提高莫西沙星的包封率和载药量，在制备空白脂质体时，使用高浓度的硫酸铵溶液(浓度最高可达80mg/mL)，并使用高压均质控制空白脂质体的粒径在合适大小。
4.按照权利要求1、2、3所述的一种高载药量的缓释莫西沙星纳米粒的制备方法，其特征还在于，为进一步提高莫西沙星的包封率和载药量和成品中莫西沙星的浓度，在用空白脂质体硫酸铵梯度法主动装载莫西沙星时，将莫西沙星以药物固体粉末的形式直接加入到空白脂质体中孵育载药。`
5.按照权利要求1、2、3、4所述的一种高载药量的缓释莫西沙星纳米粒的制备方法，其特征还在于，所制备的纳米粒对莫西沙星具有显著的缓释作用。用透析袋法进行的体外释放试验中，17天释放不到60%。
6.按照权利要求1、2、3、4、5所述的一种高载药量的缓释莫西沙星纳米粒的制备方法，其特征还在于，所制备的纳米粒对莫西沙星具有显著的缓释作用。用透析袋法进行的体外释放试验中，17天释放大约50%。
7.按照权利要求1、2、3、4、5、6所述的一种高载药量的缓释莫西沙星纳米粒的制备方法，其特征还在于，所制备的纳米粒尤其适合于与透明质酸等肺部相容性凝胶材料制备成脂质体凝胶，在支气管镜导引下介入给药到肺部病患部位(如肺结核病灶部位)，实现长效缓释作用，改善治疗效果。
8.按照权利要求1、2、3、4、5所述的一种高载药量的缓释莫西沙星纳米粒的制备方法，其特征还在于: 所述的氢化磷脂可以用豆磷脂、卵磷脂等不饱和磷脂代替，此时制备空白脂质体和高压均质时，在室温或低于室温下进行； 所述的添加剂可以为卞泽-78、DSPE-PEG2000、胆固醇-PEG1000、胆固醇-PEG2000 ； 所述的硫酸铵溶液浓度分别为30-80mg/mL，硫酸铵溶液的加入量为0.5-2.0mL硫酸铵溶液 /50mgHSPC ； 所述的高压均质压力200-2000bar，高压均质温度40_70°C，高压均质循环次数为1_10次，制得空白脂质体粒径为50-500nm左右； 所述的透析介质NaCl浓度为50-200mmol/L，透析温度为25°C，透析时间2_24小时；所述药物为粉末形式直接加入或以浓溶液加入到空白脂质体溶液中，莫西沙星用量为10-50mg/lmL空白脂质体溶液； 所述的孵化温度和时间:35-45 °C下孵育20-60min ； 所述孵化后的溶液，以PBS为透析`外液于37°C温度下透析后的溶液。
【文档编号】A61K31/4709GK103768021SQ201310676878
【公开日】2014年5月7日 申请日期:2013年12月13日 优先权日:2013年12月13日
【发明者】王向涛, 张珺, 韩美华 申请人:中国医学科学院药用植物研究所