中和抗艰难梭菌毒素IgY的口服结肠定位制剂的制作方法

中和抗艰难梭菌毒素IgY的口服结肠定位制剂的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种中和抗艰难梭菌毒素IgY的口服结肠定位制剂，所述的口服结肠定位制剂是包衣微丸，其中包衣微丸由空白MCC丸、IgY含药层和适当厚度的尤特奇包衣层组成。本发明的口服结肠定位制剂具有表面圆整、粒度均匀、脆碎度小且含药量高达20%的优点，口服该药八小时后大鼠结肠的释放量高达87%，同时抗艰难梭菌感染IgY活性未下降。
【专利说明】中和抗艰难梭菌毒素IgY的口服结肠定位制剂
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种治疗艰难梭菌相关性腹泻的药物制剂，具体地，是以针对艰难梭菌感染的IgY为活性成分制备而成的微丸制剂，属于药物制剂领域。
【背景技术】
[0002]艰难梭菌感染已经成为一个重大的医疗问题。它代表了医院抗生素相关性腹泻和伪膜性结肠炎的主导病因。据估计，在美国每年艰难梭菌感染总数超过750，000个病例，并且它所导致的死亡超过所有其他肠道感染之和。在许多医院艰难梭菌对患者构成的风险比耐甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌或其他任何细菌更大。艰难梭菌感染的治疗策略最常用的方法是口服甲硝唑(每天三次或四次，每次250至500mg)或万古霉素(每天四次，每次125mg)，由于抗生素导致结肠菌群的紊乱，最近暴发的毒力或抗生素耐药性增加的艰难梭菌菌株已经导致治疗失败、复发更频繁以及死亡率增加，而艰难梭菌抗体通过中和胃肠道中的艰难梭菌毒素的作用来防止，这种疗法没有危险的副作用，而且可安全用药。采用艰难梭菌菌体、纯化的毒素蛋白或重组毒素经甲醛处理后免疫母鸡，得到蛋黄免疫球蛋白IgY，经纯化后，口服治疗艰难梭菌感染。这类疫苗的优点是不仅可以预防，还可以作为治疗药物。
[0003]IgY (IgY)是从经抗原免疫的禽类所产卵中分离的具有特异性的蛋白，它具有产率高、稳定性好、特异性强等优点，是一种易于生产、廉价的抗体，免疫I只鸡所收集到的仅1个鸡蛋中含有的IgY的量(约200mg)远远高于免疫I只兔子所收集到的全部血清中的抗体量。目前，IgY在畜牧 业上已经得到较广泛的关注和应用，高效IgY可以通过注射、拌饵投喂、浸泡等方式对水产动物起到疾病治疗作用，还可用于免疫学检测等领域。
[0004]艰难梭菌感染目前以抗生素疗法为主要手段，随着菌株毒力的增强和对抗生素产生耐药性的新菌株的产生，需探索新的治疗方法，而针对艰难梭菌毒素A和毒素B的抗体作为预防艰难梭菌感染成为主要的研究方向。IgY由于化学性质稳定、产量高、成本低以及动物种系发生学距离的优势日益成为医药领域的新热点，用特异性IgY治疗腹泻等胃肠道疾病这一成果已经在兽医学中获得应用，不少人用IgY药物临床前和临床研究也正在开展，具有广阔的应用前景。用针对艰难梭菌感染的IgY作为治疗艰难梭菌感染的手段成为我们探索的目标，该感染主要发病于结肠，通过考察IgY的性质以及利用口服结肠定位给药系统的理论，我们的目标是将抗艰难梭菌感染的IgY制备成口服结肠定位制剂。
[0005]口服结肠定位释药系统是指用适当的方法，使药物口服后避免在胃、十二指肠、空肠和回肠前端释放药物，运送到回盲肠部后释放药物而发挥局部和全身治疗作用的一种给药系统，是一种定位在结肠释药的制剂。近年来，这种给药系统普遍受到关注，人们逐渐认识到结肠在药物吸收及局部治疗方面所体现的优势，与胃和小肠的生理环境比较，结肠的转运时间较长，而且酶的活性较低，因此药物的吸收增加，特别是对于多肽类药物，降解的可能性大大降低，这种生理环境对结肠定位释药和发挥治疗作用非常有利。
[0006]然而，虽然IgY具有较强的耐酸、耐碱、耐热能力，但如何制备一种能够维持中和抗艰难梭菌毒素IgY的长期稳定性和活性的口服结肠定位制剂仍然是本领域尚待解决的技术问题。

【发明内容】

[0007]专利(CN201210568057.2) “艰难梭菌外毒素A羧基端序列密码子优化基因片段、表达载体构建方法及其表达蛋白的应用”中提供了毒素A蛋白，同时专利(CN201310247870.4) “在大肠杆菌中高效表达的艰难梭菌外毒素B羧基端蛋白基因”中提供了毒素B蛋白，本发明用上述毒素A和毒素B蛋白免疫产蛋鸡获得抗艰难梭菌感染IgY，ELISA检测其效价，家兔肠袢实验进一步证明抗体的保护活性，提供了有抗艰难梭菌感染活性的IgY0
[0008]本发明提供一种中和抗艰难梭菌毒素IgY的口服结肠定位制剂，其特征在于所述的定位制剂是包衣微丸，其中该微丸胶囊通过如下制备方法制备得到，
[0009](I)活性药物丸芯的制备
[0010]取50重量份中和抗艰难梭菌毒素IgY，占中和抗艰难梭菌毒素IgY成分15-25%重量的滑石粉，用水配成粘度适中的含药溶液，取80-120重量份空白微晶纤维素(MCC)丸芯(粒径0.7-0.8mm)，用流化床包衣法制备活性药物载药丸芯；
[0011](2)肠溶包衣
[0012]取有结肠溶解功能的包衣材料EudragitS1008_10重量份，占包衣材料聚合物含量15-25%重量的柠檬酸三乙酯和占包衣材料聚合物含量8-15%重量的滑石粉，加水或者95%乙醇水至配置成尤特奇水分散体包衣液，用流化床包衣法制备包衣微丸。
[0013]在本发明的一个优选实施方式中，步骤(1)中的流化床包衣方法是采用流化床底喷液相层积法上药，流化压力为0.3-0.4bar，雾化压力为0.5-0.6bar，供浆速度为
1.5-2.5mg/ml，床内温度控制在41-43°C范围内。
[0014]在本发明的一个优选实施方式中，其中步骤(2)流化床包衣参数为:包衣罐预热至28-32°C，喷雾，包衣温度28-32°C，雾化压力0.4-0.6bar，喷雾液流量为2_3ml/min，喷雾结束后，继续干燥15-25min，整粒，取粒径1.0-1.5mm的微丸即得。
[0015]在本发明的另一方面，还涉及所述的中和抗艰难梭菌毒素IgY的口服结肠定位制剂在治疗腹泻或者在制备治疗腹泻药物制剂中的应用，优选的，所述的腹泻是指治疗艰难梭菌相关性腹泻。
[0016]本发明创新的运用口服结肠定位给药系统的pH依赖时滞原理，优选尤特奇SlOO水分散体包衣液，运用流化床包衣技术，获得了口服给药八小时后结肠的累积释放量高达87%的微丸胶囊制剂，从而保证了抗艰难梭菌感染IgY的高效价，为艰难梭菌感染的治疗提供保障。本发明的口服结肠定位制剂具有表面圆整、粒度均匀、脆碎度小且含药量高达20%的优点，同时抗艰难梭菌感染IgY活性未下降。
【专利附图】

【附图说明】
[0017]图1抗毒素A和抗毒素BIgY的SDS-PAGE检测结果
[0018]图2抗毒素AIgY的活性检测结果
[0019]图3抗毒素BIgY的活性检测结果[0020]图4抗毒素AIgY的家兔肠袢保护实验结果
[0021]图5抗毒素BIgY的家兔肠袢保护实验结果
[0022]图6抗艰毒素A的IgY溶液在不同温度条件下的稳定性结果
[0023]图7抗毒素B的IgY溶液在不同温度条件下的稳定性结果
[0024]图8抗毒素A的IgY溶液在不同pH条件下的稳定性结果
[0025]图9抗毒素B的IgY溶液在不同pH条件下的稳定性结果
[0026]图10抗毒素A的IgY溶液在人工胃液和人工肠液中的稳定性结果
[0027]图11抗毒素B的IgY溶液在人工胃液和人工肠液中的稳定性结果
[0028]图12空白丸芯和载药丸芯的表面状态(左为空白丸芯,右为载药丸芯)
[0029]图13抗毒素AIgY载药丸芯的温度稳定性
[0030]图14抗毒素BIgY载药丸芯的温度稳定性
[0031]图15载药丸芯和包衣微丸的表面状态(左为载药丸芯，右为包衣微丸)
[0032]图16尤特奇SlOO水分散体和有机溶剂包衣液对IgY包衣微丸的活性的影响
[0033]图17抗毒素AIgY包衣微丸的温度稳定性
[0034]图18抗毒素BIgY包衣微丸的温`度稳定性
[0035]图19抗毒素AIgY包衣微丸室温下长期稳定性
[0036]图20抗毒素BIgY包衣微丸室温下长期稳定性
[0037]图21不同包衣厚度微丸的累积释放率
[0038]图22不同包衣厚度微丸胶囊制剂的累积释放率
[0039]图23包衣微丸在大鼠的体内释放
【具体实施方式】
[0040]本发明首先通过艰难梭菌外毒素A和B羧基端蛋白免疫产蛋鸡获得IgY，ELISA检测其效价，家兔肠袢实验进一步验证抗体的抗艰难梭菌感染的保护活性；ELISA检测该抗体的体外稳定性以选择合适的制剂工艺，进一步优化流化床包衣工艺中的各项参数、IgY包衣溶液和尤特奇包衣液的处方。通过流化床技术进行空白丸芯载药获得载药丸芯；用在PH> 7条件下溶解的尤特奇SlOO作为包衣材料，同时控制包衣厚度，利用pH依赖和时滞的原理制备抗艰难梭菌感染的IgY微丸制剂；并研究尤特奇SlOO水分散体和有机溶剂溶液作为包衣材料时制备的微丸剂的活性。考察微丸制剂的体内和体外释放是否达到结肠定位的标准。
[0041]下面用实施例来进一步说明本发明，但本发明并不受其限制。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所述的“室温”是指进行试验的操作间的温度，一般为25°C。
[0042]实施例1针对艰难梭菌感染毒素A和毒素BIgY的制备
[0043]艰难梭菌外毒素A和B羧基端蛋白(2mg/ml) Iml和等体积的弗氏佐剂(一免时使用弗氏完全佐剂，再免时使用弗氏不完全佐剂)制备成油包水乳状液，作为免疫原。油包水乳状液Iml (lmg/ml)，采用胸肌和颈部皮下多点免疫。二免后开始用ELISA板检测IgY的活性，当效价达到1:50000时开始收集鸡蛋，直至IgY活性显著下降，收集所有活性鸡蛋，用冰乙醇沉淀法提取IgY，纯化得到的IgY的SDS-PAGE检测结果如图1，鸡蛋的抗毒素A和抗毒素B的活性检测结果分别如图2和图3，家兔肠袢抗体保护实验的结果分别如图4和图5。
[0044]图1显示，右非还原电泳显示冰乙醇沉淀法提取得到的IgY纯度约80%，左还原电泳重链约66KDa和轻链约30KDa与理论值相符，也进一步证明了 IgY的纯度约80% ;抗毒素A的活性检测结果图2显示在二免后第一天开始，IgY具有抗毒素A的活性，直至180天，效价依然为1:50000，到196天时活性开始快速下降；抗毒素B的活性检测结果图3显示在二免后第一天开始，IgY具有抗毒素B的活性，相较抗毒素A抗体，抗毒素B抗体开始活性较低，但直至到196天时活性也开始快速下降。图5显示A图中毒素A段较生理盐水段，有明显的肠液累积、肠内容物变稀、肿胀等症状，中和组较毒素组有肠液累积减少、肿胀减轻的现象图经数据分析，IOOug组的重量长度为1.314g/cm，50ug组的重量长度为1.032g/cm,生理盐水组的重量长度为0.243g/cm, IOOug组的重量长度为0.65g/cm, 50ug组的重量长度为0.697g/cm，结果表明抗体中和实验的重量长度比显然大于生理盐水对照组而小于毒素实验组，证明了毒素AIgY具有中和活性。图6实验结果类似于图5，但是毒素B的毒性和中和活性明显弱于毒素A。
[0045]实施例2抗艰难梭菌感染毒素A和毒素B的IgY溶液对温度、酸碱度、人工胃液和肠液中的稳定性
[0046]药物制剂设计应使药物具有足够的稳定性，以保证药物的有效性和安全性，包括物理(高温、高湿、强光)，化学(强酸、强碱)、生物稳定性。以筛选更为稳定的处方，不稳定性可能导致药物含量下降、产生毒副作用以及固体制剂发生形变、破裂等现象。实验研究抗艰难梭菌感染IgY溶液体外稳定性:热稳定性、酸碱稳定性、消化系统中的稳定性。
[0047]温度稳定性，选取25、37、50、60、70、80°C，考察lh、12h、24h的稳定性；酸碱稳定性，选取pH2.0-13的磷酸盐 缓冲液，考察3h、12h、24h的稳定性；消化系统中的稳定性，按照中国药典2010版二部配置人工胃液和人工肠液。抗艰难梭菌感染毒素A和毒素B的IgY溶液在不同温度条件下的稳定性结果见表1、表2和图6、图7;不同pH条件下的稳定性结果见表3、表4和图8、图9 ;人工胃液和人工肠液中的稳定性结果见表5、表6和图10、图11。
[0048]表1和图6的结果表明，抗艰难梭菌感染毒素AIgY具有较好的温度稳定性，低于60°C时在24小时内具有较高的活性，70°C时，12小时内比较稳定，但24小时后，抗体失活，在80°C时放置I小时后，抗体失活；表2和图7的结果表明，抗艰难梭菌感染毒素BIgY具有较好的温度稳定性，低于60°C时在24小时内具有较高的活性，70°C时，I小时活性下降，但12小时后，抗体失活，在80°C时放置I小时后，抗体失活，抗体具有较好的温度稳定性有利于后续的处方设计。表3和图8结果表明，抗艰难梭菌感染的IgY具有较好的pH稳定性，PH2和pH13时放置3小时后失活，pH12时放置12小时后失活，pHll放置过程中，活性有所下降，所以在PH3-10的范围内，抗艰难梭菌感染的IgY保持较好的pH稳定性；表4和图9结果表明，抗艰难梭菌感染的毒素BIgY具有较好的pH稳定性，pH2和pH12时放置3小时后失活，在PH3-11的范围内，抗艰难梭菌感染的IgY保持较好的pH稳定性。表5和图10的结果表明，人工胃液I小时时几乎失活，表明毒素AIgY在人工胃液中很不稳定；人工肠液中4小时活性下降，表明毒素AIgY对胰蛋白酶敏感，表6和图11的结果与表5和图10结果类似，但毒素BIgY较毒素AIgY活性弱，总体上,抗艰难梭菌毒素IgY具有较好的人工肠液中的稳定性；而在人工胃液中，Ih即迅速失活，因此填充到肠溶胶囊胶囊中有利于保护微丸。
[0049]实施例3含药丸芯的制备及其稳定性考察[0050]含药丸芯制备的处方:IgY20g (抗艰难梭菌感染毒素A和毒素B的IgY各IOg)/20%的滑石粉/空白MCC丸50g/适量水保证IgY溶液合适的粘度
[0051]含药丸芯制备的工艺:采用流化床底喷液相层积法上药，流化压力为0.3-0.4bar，雾化压力为0.5-0.6bar，供浆速度为2mg/ml，床内温度控制在41-43 °C范围内，根据实验条件适度微调即可。
[0052]空白丸芯载药增重约40%，含药微丸的表面状态如图12，含药量经BCA试剂盒测定为21%。考察载药丸芯的温度稳定性，抗毒素A的IgY检测结果如图13和表7，抗毒素B的IgY检测结果如图14和表8。
[0053]通过ELISA测定抗体的稳定性，取免疫前的IgY、IgY粉末、载药丸芯三种样品，各样品全部先用BCA试剂盒进行蛋白定量测定，确定溶液的准确浓度。ELISA检测抗艰难梭菌毒素的IgY活性,96孔板在4°C下用15ug/ml的毒素蛋白以IOOul/孔包被过夜。次日，每孔以包含5%牛血清白蛋白的PBST在37°C下封闭I小时各样品用抗体稀释液(包含1%BSA和0.1%的Tween-20的PBS溶液)稀释，加入封闭孔中，37°C条件下温育I小时。平板先用PBST洗涤三次，加入4000倍稀释的兔抗鸡IgG，37°C条件下温育I小时。平板如前洗涤，然后IOOul/孔加入显色液，在加入底物10分钟后，IOOul/孔加入终止液，在10分钟之内用酶标仪在450nm处测定吸收值。结果表明该方法制备的含药丸芯和IgY粉末的温度稳定性无显著性差异。
[0054]实施例4IgY 口服结肠定位微丸的制备及其稳定性考察
[0055]EudragitSlOO 水分散体包衣处方:EudragitS1009.94g/ 氨水(lmol/16.75g),聚合物含量50%的柠檬酸三乙酯和滑石粉，加水至100g。
[0056]包衣工艺:采用流化床底喷包衣，流化压力为0.3-0.4bar,雾化压力为
0.5-0.6bar，供浆速度为lmg/ml，床`内温度控制在28_32°C范围内，根据实验条件微调即可。
[0057]EudragitSlOO有机溶液包衣处方:EudragitS1006.25g，聚合物含量20%的柠檬酸三乙酯，聚合物含量10%的滑石粉，加95%乙醇至100g。
[0058]包衣工艺:按水分散体包衣工艺，床内温度控制在25_26°C范围以内。
[0059]EudragitSlOO水分散体和EudragitSlOO有机溶液包衣微丸增重约15、20、25、30%，包衣微丸的表面状态如图15，包衣增重25%的微丸经紫外分光光度法测定含药量为18%。
[0060]获得水分散体包衣微丸五批，依次为聚合物增重15、20、25、30、35% ;有机溶剂包衣微丸一批，聚合物增重25%，(以抗毒素A的IgY为例)考察流化床包衣工艺对尤特奇SlOO水分散体和有机溶剂包衣液对抗艰难梭菌感染IgY包衣微丸的活性的影响，结果如图16和表9。同时用水分散体包衣增重25%的微丸考察包衣工艺对其温度稳定性的影响。抗毒素A的IgY检测结果如图17和表10，抗毒素B的IgY检测结果如图18和表11。用水分散体包衣增重25%的微丸考察微丸的长期稳定性，依次对I个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月进行考察，抗毒素A的IgY检测结果如图19和表12，抗毒素B的IgY检测结果如图20和表13。
[0061]通过ELISA测定抗体的稳定性，取免疫前的IgY、IgY粉末、EudragitSlOO水分散体包衣微丸和EudragitSlOO有机溶液包衣微丸四种样品，包衣微丸在pH7.2的PBS溶液中溶解，各样品全部先进行蛋白定量测定，将浓度标准化。进行ELISA以检测抗艰难梭菌毒素IgY的活性，检测方法如实施例3，图16和表9结果表明该方法制备的EudragitSlOO水分散体包衣微丸和EudragitSlOO有机溶液包衣微丸和IgY粉末的温度稳定性无显著性差异；图17和表10以及图18和表11结果表明包衣过程中IgY的效价未见下降，包衣工艺对温度稳定性没有影响；图19和表12以及图20和表13显示六个月内IgY效价未见变化，表明室温条件下，六个月内包衣微丸中IgY活性较好。
[0062]实施例5 口服结肠定位抗艰难梭菌感染的IgY微丸制剂的体外释放度 [0063]用BCA试剂盒测定抗艰难梭菌感染毒素A和毒素B的IgY总蛋白量的方法进行体外释放试验。释放度的测定方法:照中国药典溶出度测定法第一法装置，精密称取相当于含IgIgY的包衣微丸,放入900ml的0.lmol/1的盐酸溶液的释放介质中，转速为IOOrpm,温度(37±0.5)°C，每30分钟取样一次，两小时后更换释放介质为pH6.8PBS缓冲液900ml，六小时后加入0.lmol/1的NaOH溶液100ml调节释放介质为pH7.2，取样四小时按照设定取样时间取样5ml/次(同时补加同体积的释放介质5ml)，过滤，BCA试剂盒测定每个取样点的浓度，计算每个时间点累计释放率。IgY微丸的体外释放结果如图19和表12，结果表明:包衣增重15%、20%、25%和30%的微丸在2h时，累积释放率依次为74、53、38、11%，在8h时累积释放率依次为93、68、62、36、14%，在911时，累积释放率均达到90%，综上所述，包衣增重15、20,25%的微丸在人工胃液和小肠液中，由于包衣层不完整而快速释放，而包衣增重30、35%的微丸有明显的控释效果，尤其是增重35%的包衣微丸在8h内的累积释放率仅仅14%，与口服结肠定位系统的标准10%接近，所以包衣增重35%微丸是合格的口服结肠定位抗艰难梭菌感染的IgY微丸制剂。微丸制剂常采用的的剂型有片剂和胶囊剂，考虑到胶囊剂对微丸的表面状态影响较小，选择微丸填充肠溶胶囊壳，胶囊制剂的体外释放度结果的考察同微丸相同，将微丸填充I号肠溶胶囊壳，以空白胶囊壳为对照，检测方法同上，结果如图20和表13，结果表明:由于肠溶胶囊壳的保护，2h内所有批次的微丸均未释放，而在8h时，所有批次的微丸胶囊制剂同微丸制剂具有相似的释放度，同时考虑到IgY的pH稳定性，我们可知，在人工胃液中IgY易失活，所以肠溶胶囊壳对微丸制剂有保护作用，同时也未影响药物的释放，是合适的剂型。
[0064]实施例6 口服结肠定位抗艰难梭菌感染的IgY微丸制剂的体内释放度
[0065]以毒素A的IgY为例进行体内释放实验。实验以大鼠为研究对象，观察微丸在大鼠消化道内的分布情况，于不同时间点取出大鼠体内的微丸，用ELISA标准曲线法检测胃、小肠和结肠内容物中药物含量，以得到制剂在大鼠体内分布、释药部位、释药量；同时也用ELISA标准曲线法检测大鼠口服IgY包衣微丸后的血药浓度，考察其在体内释药特性和吸收情况，以及制剂的结肠革巴向性。IgY微丸的大鼠体内分布结果如表14,体内不同部位的释放结果如图21和表15。
[0066]肠道内容物处理方法:取一只大鼠胃至结肠末端的肠段，分出胃小肠结肠三部分，将每部分分装，捣碎肠道和内容物，置于25mL烧杯中，精确加水10mL，超声30min，离心30min (1000Orpm)，取上清液，直接进行ELISA检测，由标准曲线分析结果。肠道内容物标准曲线的建立:取大鼠胃、小肠和结肠内容物分别数份，加入IgY系列标准溶液，按照肠道内容物的处理方法处理，使IgY的浓度分别为0.1,0.05,0.02,0.01,0.005,0.002,0.0Olmg/ml，经ELISA检测，以样品浓度(C)对样品OD值拟合标准曲线，求得回归方程。[0067]小肠指十二指肠到回肠末端，结肠指盲肠到结肠末端。微丸的大鼠体内分布结果表明，2h时微丸主要分布在胃中，少量分布在小肠中；4h时微丸主要位于小肠中，少量分布在胃中，有部分微丸开始进入结肠；6h主要位于结肠，少数分布在小肠。8h在盲肠和结肠，有一定数量的微丸已排出体外；10h盲肠和结肠仍有一定数量的微丸，大量的微丸已排出体外。
[0068]包衣微丸的大鼠体内释放结合微丸的体内分布结果表明，2h时微丸主要分布在胃中，但由于包衣层的保护，药物未释放；4h时小肠中的释放率仅3.79%，微丸的包衣层阻止了药物释放，而6h时小肠中的释放率为24.44%，结肠中的释放率为61.51%，大部分的药物已经进入结肠，药物在小肠中也开始释放；8h时结肠中的释放率为87.48%，大部分药物开始释放；10h时肠道中几乎无药物释放。
[0069]表1抗毒素AIgY的温度稳定性
[0070]
【权利要求】
1.一种中和抗艰难梭菌毒素IgY的口服结肠定位制剂，其特征在于所述的定位制剂是包衣微丸，其中该微丸胶囊通过如下制备方法制备得到， (1)活性药物丸芯的制备 取50重量份的毒素A和毒素B等比混合的中和抗艰难梭菌毒素IgY，占中和抗艰难梭菌毒素IgY成分15-25%重量的滑石粉，用水配成粘度适中的含药溶液，取80-120重量份空白微晶纤维素(MCC)丸芯(粒径0.7-0.8_)，用流化床包衣法制备活性药物载药丸芯； (2)肠溶包衣 取有结肠溶解功能的包衣材料EudragitS1008-10重量份，占包衣材料聚合物含量15-25%重量的柠檬酸三乙酯和占包衣材料聚合物含量8-15%重量的滑石粉，加水或者95%乙醇水至配置成尤特奇水分散体包衣液，用流化床包衣法制备包衣微丸。
2.根据权利要求1所述的中和抗艰难梭菌毒素IgY的口服结肠定位制剂，其特征在于步骤(1)中的流化床包衣方法是采用流化床底喷液相层积法上药，流化压力为0.3-0.4bar，雾化压力为0.5-0.6bar，供浆速度为1.5-2.5mg/ml，床内温度控制在41_43°C范围内。
3.根据权利要求1或2所述的中和抗艰难梭菌毒素IgY的口服结肠定位制剂，其中步骤(2)流化床包衣参数为:包衣罐预热至28-32°C，喷雾，包衣温度28-32°C，雾化压力0.4-0.6bar，喷雾液流量为2_3ml/min，喷雾结束后，继续干燥15_25min，整粒，取粒径1.0-1.5mm的微丸即得。
4.权利要求1-3任意一项所述的中和抗艰难梭菌毒素IgY的口服结肠定位制剂在治疗腹泻或者在制备治疗腹泻药物制剂中的应用，优选的，所述的腹泻是指治疗艰难梭菌相关性腹泻。
【文档编号】A61P1/12GK103690948SQ201310683057
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2013年12月13日 优先权日:2013年12月13日
【发明者】冯东晓, 邢平平, 张淑敏, 刘红, 刘枫, 王晓玉 申请人:山东国际生物科技园发展有限公司