呋喃并吡啶衍生物的制作方法

呋喃并吡啶衍生物的制作方法
【专利摘要】其中R1、R2和R4具有权利要求1中表明的含义的式I化合物为Syk的抑制剂，并且可尤其用于治疗癌症、类风湿性关节炎和/或系统性狼疮。
【专利说明】映喃并吡啶衍生物
[0001] 发明背景 本发明的目的在于发现具有有价值性质的新化合物，尤其是可用于制备药物的那些新 化合物。
[0002] 本发明涉及化合物和化合物在激酶（尤其是酪氨酸激酶）抑制、调控和/或调节 信号转导中的用途，进一步涉及包含这些化合物的药物组合物，并涉及所述化合物用于治 疗激酶引起的疾病的用途。
[0003] 因为蛋白质激酶调节包括新陈代谢、细胞增殖、细胞分化和细胞存活在内的几乎 所有细胞过程，因此它们是用于治疗性干涉各种疾病状态的有吸引力的靶标。例如，其中蛋 白质激酶起关键作用的细胞循环控制和血管发生为与许多病况相关的细胞过程，所述病况 例如但不限于癌症、炎性疾病、血管发生异常和与其相关的疾病、动脉粥样硬化、黄斑变性、 糖尿病、肥胖和疼痛。
[0004] 肥大细胞活化后信号转导途径中的关键事件之一是酪氨酸激酶Syk的活化。肥大 细胞通过释放促炎性介质和细胞因子而在哮喘和变应性病症中起重要作用。抗原介导的 Fc ε RJ (IgE的高亲和力受体）聚集导致肥大细胞的活化。这触发一系列信号转导事件， 其导致包括组胺、蛋白酶、白细胞三烯和细胞因子的介质的释放。这些介质引起血管通透性 增加、粘液产生、支气管收缩、组织降解和炎症，从而在哮喘和变应性病症的病因学和症状 中起重要作用。Syk激酶起引起介质释放的所有后续信号转导的重要引发剂的作用。Syk 激酶在信号转导途径中的重要作用经通过含Syk激酶的SH2结构域的蛋白质完全抑制介质 释放而得到证实，该蛋白质起Syk激酶抑制剂的作用（J. A. Taylor等，Molec. and Cell Biol, 15: 4149-4157 (1995)。
[0005] Syk (脾酪氨酸激酶）是72 KDa的非受体酪氨酸激酶，其属于尤其包括ZAP70、 ?7让2、4131、1162、1(01?和冊1?在内的细胞内酪氨酸激酶亚家族。371^是？^?$(^1?1、11、111、 Fc ε RI、Fc a R)和BCR信号转导的主要调节物，并且在整个造血谱系中表达，以及在成纤维 细胞、破骨细胞、肝细胞、上皮细胞和神经细胞中表达。除了 C端激酶结构域之外，Syk还显 示两个SH2结构域和超过10个自磷酸化位点1。
[0006] 通过其两个SH2结构域，SYK被特异性募集到磷酸化的ITAM (免疫受体基于酪氨 酸的活化基序，其存在于免疫受体例如Fc γ RI、IIA、IIIA、Fc a R、Fc ε RI和BCR上，由单核 细胞、巨噬细胞、肥大细胞、嗜中性粒细胞和Β细胞表达）上，并特异性介导由在肥大细胞、 Β细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性细胞、ΝΚ细胞、DC细胞、血小板和破骨细 胞中这些受体的活化触发的免疫受体信号转导u。
[0007] BCR交联后，Iga /Igi3的细胞溶质尾的ITAM基序上的酪氨酸残基被Src家族激 酶Lyn磷酸化，形成SYK的对接位点，SYK从而募集到BCR免疫复合物上。然后，SYK被Src 家族激酶Lyn磷酸化和活化。活化后，SYK将衔接蛋白BLNK磷酸化，这允许其通过BTK和 PLC γ 2各自的SH2结构域与BTK和PLC γ 2两者相互作用。SYK磷酸化并由此活化的BTK进 而将PLC γ 2磷酸化和活化，导致IP3形成、Ca2+活动、PKC和MAPK活化以及随后的NFAT、AP-1 和NF κ B转录因子活化，导致活化和表面标记表达、细胞因子释放、B细胞的存活和增殖3。 在肥大细胞中，变应原活化的Fc ε RI被LYN和FYN磷酸化，并募集SYK，其进而被LYN磷酸 化并进一步自磷酸化，变成完全活化。活化的SYK将两个衔接分子NTAL和LAT磷酸化，产 生针对含SH2蛋白质（例如PLC γ pvav和PI3K的p85调节亚基）的更多对接位点，导致肥 大细胞脱粒和细胞因子产生'Syk在肥大细胞的信号转导中的重要作用通过以下可重现的 观察结果证实：不能脱粒的来自人供体的嗜碱粒细胞（循环肥大细胞）的10-15%具有降低 量的Syk蛋白 5'6。此外，SYK对破骨细胞的骨再吸收活性是必需的。破骨细胞被a v β 3整 联蛋白刺激后，SYK最可能被c-Src以DAP-12 / Fc γ RII依赖性机制磷酸化，导致SPL-76 和Vav3磷酸化和随后的细胞骨架重组。SYK缺陷的破骨细胞是无活性的，显示有缺陷的细 胞骨架重组。与此关联，SYK缺陷胚胎显示有缺陷的骨骼块 7'8。
[0008] 在淋巴结中BCR介导的B细胞活化以及在关节中FcR介导的树突细胞、单核细胞、 巨噬细胞、嗜中性粒细胞和肥大细胞活化是类风湿性关节炎（RA)期间发生的细胞病理生 理机制的必要组成。此外，破骨细胞的活化导致骨和软骨的破坏，这是该病理学的标志 9。因 此，SYK信号转导应在关节炎发生期间在外周和炎症位点均起关键作用1(1。实际上，口服可 用的Syk抑制剂R460 (由Rigel开发）引起临床评分的显著改善，并在RA的鼠模型中显 著降低血清细胞因子浓度以及骨侵蚀n' 12。此外，该抑制剂显示在人类的RA II期研究中具 有功效（ACR评分改善）和良好的耐受13'14'15。
[0009] 在SLE中，B细胞本质上通过产生自身抗体促进发病，所述自身抗体导致免疫复合 物形成，刺激Fc受体，并最终导致过度和慢性的炎症活化。在SLE的鼠模型中，用Syk抑制 剂治疗导致类型转变的（class-switched)生发中心、边缘区、新形成的滤泡B细胞的数量 降低，并由此导致疾病缓和效果 18。
[0010] 尽管在胸腺细胞和天然τ细胞中TCR信号通过细胞内酪氨酸激酶ZAP-70传递，数 个研究表明，分化型效应T细胞例如涉及多发性硬化（MS)或系统性红斑狼疮（SLE)的病理 生理学的那些，显示TCR ζ链减量调节和伴随的TCR/⑶3链及其与FcR γ相互作用的增量 调节。这些研究表明，在效应细胞中TCR/⑶3/FcRy复合物募集并活化Syk酪氨酸激酶，而 不是ZAP-70酪氨酸激酶。在TCR信号转导中该病理学转变全部发生在效应细胞中，而不是 在天然或记忆T细胞中 16'17'18。然后并不令人惊讶的是，SYK抑制剂已表明延缓疾病进展和 提高SLE鼠模型的存活 17，18，19,2°，21。
[0011] SYK抑制剂亦可用于哮喘、变态反应症、多发性硬化和其它疾病例如血小板减少性 紫癜和T或B细胞淋巴瘤a22_ 35。
[0012] 用Syk抑制剂治疗患病前的NZB/W小鼠防止肾病的发生，其通过降低肾小球硬化、 肾小管损伤、蛋白尿和BUN水平得到证实 18。
[0013] 参考f献 K Turner, Μ,. Scliweigliotler? Κ., Colucci, f" Di S.wto. J,P. & Tybulwicz. 1'yrosine kinase SYK; essential ftmctioiis for jmrmiiTOi-eceptor signalUiig 激聲SYiC:对兔獲/?体信号詩导的基本 功能/#?細|卿/ Γ，λ#γ 21, 14S-154 (-2000). 2. Ghosii, D, & Tsokos, O.C. Spleen lyrosiiie kinase; an Src family of* rion-rcccptor kinase lias multiple functions and represents a valuable therapeirtic targei i圓Uhe IreMmem of 獄itoimniijne ami mflammatory diseases (牌驗氨錢激酶：非受体激聲的Src家换其.有多种功能并R表在1}身免疫 和炎性疾病的治疗有价值的治疗性fc标),,4i#iww則/w/j 43, 411-55, 3. Lindvall. J.M Bruton's tyrosine kinase: cell biology, sequence conservation, imitation spedrtim* si'RNA inodificatioiis. and expression pr<_ing (Brut·潘-氣酸激鱗：細絶生物学，序H保守性.突变ill.? siRNA 修饰和表达^1况>,細細|_/ /?作20i 200-215《2005), 4. Gi1fillaii. A,Μ & 1'kaczyk, C. lulegraled signal I tng palhways for mast-edl aetivatwn 太细月&法化的完整信号4f导途径).Λ'λ/ Jit*r/tohww/ 6.218-230(2006). 5. Gomez, (λ, Schwartz, L. & Keplcy, C. Syk ddlcieney in liiimmi iK)_i-retoser lu?g I職st cells (人类非释敌器雖肥大細I包中的Syk缺Ff5丨+ Γ/姻 Immnfmi 125, f 12-Π 5 |2〇〇7)- 6. Kepley. C.L., Youssct L" Andrews, RJ5^, Wilson, B.S. & Oliver, Syk tlefkie丨icy hi noiirdeaser basophils (非#放器嗜職粒细跑 + 的 Syk 缺 ?).?/,.!//#尺.ri%i //iiw冊ι?/ 〗M, 279-2W (1999). 7. Ζοιι, W.^f, Syk, c-Src, the alphavbcta3 iniegrin. and Π?Μ iinnimioreceptors, in concert, regulate osteoclastic lione resoiplion ($yk, c-Src,?vp3整联资--和OV\M免疫受体一致调节破骨细胞的骨再吸收).,/ CdfHm/ 176. 877-888(200? K 8 Jkeve, J,L,等，SLP-7() couples Syk to ll】e iisleodasl cyloskdeton (SLP-76 Syk lelfeiffrl' U). J Immmwf 18J, 1804-1812 (2009). 9, KIareskog, L,, Calrira. A,I. & Faget, S. Rheumatoid arlhrilis <#Λ8Ι 性美节炎).九浦比/ 373, 659-6.72 (2〇W)- 10, Wong, B,R" Gi-ossbarcl E.B., Fiiyan, DXi, & Masuda, H.S, Targeliiig Syk as a treatmeiil for allergic and aiiioiinmime disorders (fe#) Syk作为变应性和自身免症的治疗).O/wi IJfi供v IJL ?43?762|2〇〇41 11, Braselmaim, S/if. R406, an cwaliy available sptei lyrosine kinase inhibilor blocks fc receptor signaling and reduces iinimme complex-mediated inffei翻ia〖ioii{:R406, -种〇服▼用的牌酪氨酸激酶抑制形，Htt飫fc受体 信号转导-終聲低免疫复4、物介导的炎被).,/ /*/wrm<++i￡Yi/ Ι::γ/5 Λ?/ι· 319, 998-1008 (20061. 12, Pine, P.R.^1. luHaniinatbn and bone erosion are suppressed in models of rheumatoid anliritis follo%ving ireatmeiil wilh a novel Syk inhibitor (用新的Syk抑制·治疗尥，类风.?性关节炎模 t炎焱和骨质優饪受到 抑制）.Γ/wi /顚冊w/ 124, 244-257 <2007：). 13, TomilleiO, A. & Moral, M.A. Gateways to clinical trials 验人门）^V/t油伙A 膽//kp (7w /^:ir酿λ·"/ 31, 47-57 (20W). 14, Bajpai, M. Fostamatiiiib, a Syk inhibilor jirodrug for the treatment of iiiflainiiialory diseases (Fostainatinib,-种用于治疗炎今i疾 1:1 的 Syk 参， 制⑶前药12, 174-185 (2009). 15, %rei?blall. MJi,-等.'Treatmeiil of rlieiwiatoid arthritis with a Syk kinase inliibitor; a iweh'e-week, randomized? placebo-controlled irial (Ifl Syk 激酶抑制_治疗类.氣湿性关节炎：12雨、3i机化,.安懲+ 対对照的试验:>, Arfhnm Rheum 58, 3309-3318 (2008). 16, Krislman, S., Warke, V.G,, Nambiar, M.P.. Tsokos, G.C. & Farber. D.I.. The FcR ganwia subuiiil and Syk kinase replace fli€ Ci>3 ?,eta-chaiti and ZAI^TO kinase in the TCR signaling complex ofltuinan effeclor CD4 T cells 《FcRy 3E基和Syk激游置換人紋虚CD4 T细鮑的TCR信号转导复合物+ 的〔'034链和2為卜7〇激!等),,_//請贿卿/17队41894,5(2魏3). 17, ICrisliiian. S.^, Differential espresskm and motecular associations of Syk in systemic lupus erylliematosus T cells (Syk ?Ε.τ-.---'--?&--Ι^Ψ -- 1异表达和分子相关性>,./ /mwww/ _8L 8145-8152 〖2008}. 18, Balijal, F.R,<f. Α? orally btoavailable spleen iyrosine kinase iiiliibitor delays disease propressio? aticl prolongs survival in murine lupus I 口股生物可利用的脾駱教酸激SI抑制迷缓疾病进敬并逯最鼠 I良疫的 存沽}. 58,1433-1444 (2冊8). 19, Smith, J.-if". Λ Spleen Tyrosine Kinase Inhibitor Reduces the Severity of EsMifched Olomemkmephrrtis (脾S·氨酸激涛抑制射减轻建立 的1:.H'球贤炎的严重性+),,/,4樹iVV/iAw/12〖)09》. 20, liiiyecly, Ιι,.Ι，4·- Fc epsilon receptor type I gaiiuna chain replaces tlie tldkieirt T cell receptof zeta cliain in T cells of palienls with systemic liipHsef>l細《!alos?s (在系缓性红iAlWl：患者的 T fetll·!·中 Fes 受体 I 5! γ fcl 置換缺陷型 T 紅€受体 ζ 链).撕 44, Π 14-1 21, Peirl，A. Systems biology t>flupus: mapping llie impael of ge?oi!iic and eiiviroiuneiilal factors on gene expression signaitires, cellular signaling, metabolic pathways^ hormonal and cytokine imbalance, and selecting targets for treatment《恨疫的系统生物学：将基HI组和坏境13素缚基因表达标i已， 细ffil信号转导，代谢途g.激素和細跑因予不乎衝的影·?作圈，并选# 治行&#>"-1油層腳11撕(1.'43.32-47, 22, Smith, J.-f·- A spleen tyrosine kinase inliilulor reduces the severity (>f estaWished gk翻erykineplwkis (膊SI·氣酸激_'抑制則减轻建立的1-f小球 肾炎的严重性}/Sw Λ￥/_/ 2L 231-B6, 23. Saoclcrson^ MJ3., Gclliiig, S..L, Rippmami, JJ·^ & Schnapp, A. CoiTiparisoii of (lie anti-allergic acliviiy of Svk itiliibilors v%ilh oplimized Syk siRNAs in Fccpsi 1 onRI-activated RBL-2II3 basophilic cells (FccRl RBL-2H3 Syk #t'l Syk SiRMA 4--? 6? ttl￡ j, ? V// Immmmi 262. 28-34. 24. Podolaiicziik, A,, Lazarus, AJ^l, Crow, A.R., Urossbard, E, & Bussel, J.B. Of mice and men: an open-label pilot stiidy for treatment of imimme llirombocytopenic purpura by ail inhibitor of S)4 (Λ] 于通过抑.H:]治疗免疫性的命小板减少性紫疾的开放#签+试Jf究+}. /Ι/?ιλ/ 113, 3154-3160 (2009), 25. Bajpai, M.. Chopra. P.r Daslidar. S.G. & Ray, A. Spleen tyrosiiw kimise; a no%'eI large! for Iherapeiilic iiitervenlioi] of rheiinialoki arthritis 1 潘氨酸激游：用于治疗性干预类.Λ3Ι性关节炎的新+fc标>,/::t/7(t/ i树w Im'estigDrms 17, 641-659 (2()08}. 26. Friedb^rg, Inhibition of Syk with fostamaliiiib disodiuin has significant clinical activity in non-Hodgkin lymplioma and chronic iymphocylic leukemia《用 fbstamatiiiib 二纳和制 Syk 在# 奇金淋巴瘤和 役性淋巴細性会血病+異有見著的临朱湯性).孤斯/ 11艮2578-25既 27. Gao, C.if, Eptifibatide-induced lliromlxicytopenk and Ihrombosis in tiuraaiis rcciitirc FcgainniaRlla and the iiitcgrin bcta3 cytoplasmic ciomaiii (依替巴酞诱导的人类中众小板减少和iM全形成需要FcfRIki和S联蛋白 P 炮质结构域I,/ (7w /wv-w 119· 504-51 丨 28. Marion, K.D.. ManiclI. L.L., Mold, C. & Du Clos. T.W. Macrophages aclivalcd by C-rcacIn'e protein ihrough Fc gamma Rl transfer --ippresskm of immuiie lhrt>mbocytopeiiia < d】C 反应 ?·?ι 活化 6? liKifel包 適过Fc+tFU侍送免疫性血小板减少症的51遏),,//樹__/ 1S2. 13W-H0? (2009). 29. Chen-, L. SYK-dcpendcm tonic B-cell receptor sigiKilmg is a rational treatnienl target in difliise large B-cell lymplioraa (SYK 的B細絶受体信号转导是你散姓欠 B细抱秣匕瘤的合理治疗la标). 111,2250-2237(2008). 30- Ponzoiii, M.^? at α? Syk expression patterns differ among B-cell lyi-h_ias <Syk表达概况在B *ffl跑·幕巴瘤之同不同),/,?_ /?ο- (2010}. 31. Pcchloff, K.if, The fusion kinase ITK-SYK mimics a Tcdl recepior signal and drives oncogenesis in coiidilioiial mouse models of periphera丨T edl lymplw)iiia《狀合激緣ITK-SYK模推T 1?絶受体信号并駔 使外ΙΙΓΓ _絶淋巴瘤的条件性小鼠糢f!中的肿瘤形成),.//·:.ψ Α--/21)7. 1011.1044(2009^ 32. Uckuo, F.M, Ek, R.C1, Jan, S.T., Chen, C.L. & Qazi, S. Tari;eiiiig SYK kiiiasc-depciidciit anti-apoptofic resistance patliway in B-lincage acute lyinplioblastjc leukaemia (AIJ.) cells with a {K>tent SYK itihiWtory {)(21伽〖30|)11_<：1€1111-11?<：(在！^細跑系的急.性成游巴細胞性白~&^彳 /1\1丄)细胞4+;|° 闲有效的SYK抑制性_腺喷丁模担物#+t甸SYK激t錄依箱性抗細鮑凋亡 抵抗途径 Uii，·/ 14免 508-5 Π α〇 1 〇 >. 33. Wilcox, R.A.^f. InliiWtion of S\k proteiii tyrosine kinase induces apoptosis and blocks proliferalkm in T-cell non-Hodgkin's lyraplioma cell lines《Syk蛋白潘氨驗激聲的#制诱-11--?亡并阻断T細胞非霍奇金漱 巴瘤细孢系的增殖)jxwAwi+聽21 229-B2 (2009)- 34. Feldman, A, 1,.+等.Overexp'essioii of Syk tyrosine kimw^ peripherankeH丨ym_oirias (Syk il教酸激錄在外_ T細1也麻巴瘤+的过 表达丨.22, I 139-1 1*0 ?-2008:}. 35. Wang, 1.,-^r. Alieroalive splicing disrupts a JMiclear localization signal in splee寒i lyrosiiie kiniase lluit is retpiiinect for invasion si暴ppressioii in breast ca.ticer ΡΓ变:ii接破炼IU4i癌侵入扭抑所必需的脾潘氨酸激〖游的核 定位信号(' oncer Res 63, 4724-4730 (2003).
[0014] 除了肥大细胞，Syk还在包括B细胞在内的其它造血细胞中表达，其中认为Syk 在转导不成熟B细胞转变成成熟循环B细胞所必需的信号中起重要作用（M. Turner等， Immunology Today, 21: 148 (2000)。已报道B细胞在一些炎性病况例如狼疮（0. T. Chan 等，Immunological Rev, 169: 107-121 (1999)和类风湿性关节炎（A. Gause 等， Biodrugs, 15(2): 73-79 (2001)中起重要作用。
[0015] 还报道Syk是引起产生神经毒性产物的β淀粉样蛋白和朊病毒原纤维的信号转 导级联放大的元件（C. Κ. Combs 等，J. Neuroscl, 19: 928-939 (1999)。此外，Syk 抑 制剂阻断产生这些神经毒性产物。因此，呋喃并吡啶衍生物将可能用于治疗阿尔茨海默氏 病和相关的神经炎性疾病。另一报道（Y. Kuno等，Blood, 97，1050-1055 (2001)证实 Syk在恶性进展中起重要作用。发现TEL-Syk融合蛋白转变造血细胞，这表明其在造血恶性 肿瘤的发病中起作用。因此，呋喃并吡啶衍生物可用于治疗某些类型的癌症。
[0016] 涉及在造血恶性肿瘤中的其它蛋白酪氨酸激酶包括ABL (ABL1)、ARG (ABL2)、 PDGF β R、PDGFaR、JAK2、TRKC、FGFR1、FGFR3、FLT3 和 FRK。
[0017] Janus激酶（JAK)是由JAK1、JAK2、JAK3和TYK2组成的酪氨酸激酶家族。JAK在 细胞因子信号转导中起关键作用。JAK激酶家族的下游底物包括信号转导及转录激活因子 (STAT)蛋白。JAK/STAT信号转导涉及许多异常免疫反应的介导，例如变态反应、哮喘、自身 免疫疾病例如移植物（异体移植物）排斥、风湿性关节炎、肌萎缩性侧索硬化和多发性硬 化、以及实体和血液恶性肿瘤例如白血病和淋巴瘤（JAK/STAT途径的药物干预的综述参见 Frank, Mol. Med. 5，432:456 (1999)和 Seidel 等，Oncogene 19，2645-2656 (2000)。 JAK2是已证实的治疗骨髓增生病症（MPD)的强有力靶标，所述病症包括真性红细胞增多 症（PV)、特发性血小板增多症、慢性特发性骨髓纤维化、伴随有骨髓纤维化的骨髓样组织变 性、慢性髓细胞样白血病、慢性髓性单核细胞白血病、慢性嗜酸细胞性白血病、嗜酸细胞增 多综合征和系统性肥大细胞疾病。
[0018] Fms样酪氨酸激酶3 (FLT3)，其亦称为FLK-2 (胎肝激酶2)和STK-I (干细胞激 酶1)，在造血干细胞的增殖和分化中起重要作用。FLT3受体激酶在正常造血细胞、胎盘、 性腺和脑中表达。然而，该酶在超过80%的骨髓性患者的细胞和部分急性成淋巴细胞性白 血病细胞中以极高水平表达。此外，该酶亦可见于淋巴样胚细胞危象的慢性髓细胞样白血 病患者的细胞上。已报道FLT3激酶在30%的急性髓细胞样白血病（AML)以及在急性成淋 巴细胞性白血病（ALL)的子集中突变（Gilliland等，Blood 100，1532-1542 (2002); Stirewalt 等，Nat. Rev. Cancer, 3，650-665 (2003)。FLT3 的最常见的活化突变是 在近膜区内固有的串联复制，激酶结构域的点突变、插入或缺失较少见。这些突变的FLT3 激酶的一些是组成型活性的。FLT3突变与预后差有关（Malempati等，Blood，104，11 (2004)。开发了超过12个已知的FLT3抑制剂，并且一些已显示出针对AML具有前景的临 床效果（Levis 等 Int. J. Hematol, 52，100- 107 (2005)。
[0019] 已报道小分子FLT3抑制剂中的一些在具有FLT3活化突变的细胞系中有效诱导 细胞凋亡并延长在小鼠骨髓细胞中表达突变体FLT3的小鼠存活（Levis等，Blood，99， 3885-3891 (2002); Kelly等，Cancer Cell, 1，421-432 (2002); Weisberg等，Cancer Cell, 1，433-443 (2002); Yee 等，Blood, 100，2941-2949 (2002)。
[0020] 具体而言，本发明涉及化合物，并涉及其中Syk抑制、调控和/或调节信号转导起 作用的化合物的用途。
[0021] 因此，通过酪氨酸激酶特别是Syk特异性抑制、调控和/或调节信号转导的小分子 化合物的合成是合乎需要的，并且是本发明的目标。
[0022] 此外，本发明的目标在于合成用于预防和治疗类风湿性关节炎、系统性狼疮、哮 喘、变应性鼻炎、ITP、多发性硬化、白血病、乳腺癌和恶性黑素瘤的新化合物。令人惊讶的 是，我们已鉴定选择性抑制SYK、BTK、KDR、Src、Zap70、Fak、Pyk2、Flt3或Jak或者抑制从 这些激酶中选择的一些的呋喃并吡啶。
[0023] 此外，式I化合物抑制丝氨酸激酶GCN2。
[0024] 实体瘤的癌症治疗的许多策略集中在尽可能地手术移除肿瘤块和随后通过放射 疗法和用更特异性靶向癌细胞途径的抑制剂或者细胞毒性剂的化学疗法根除任何残留肿 瘤细胞。然而，这样的方法的成功性有限并且经常不可持续。这主要是由于所述细胞毒性剂 狭窄的治疗窗（特异性和副作用）和癌症细胞适应由细胞毒性剂或其它抑制剂施加的选择 压力的能力造成。获得对起始治疗的抵抗力的小量肿瘤（干）细胞的存活可足以播种肿瘤 的再生长。这些复发存在于与初始肿瘤相比更难治疗的大多数病例中。结果，对肿瘤细胞的 更成功祀向可能需要祀向肿瘤细胞的平行的多重存活和逃脱机制（Muller & Prendegast 2007)。
[0025] 恶性肿瘤的发生伴有较多细胞生理学的参与。在该过程期间，癌症细胞获得是 无限增殖化或对生长抑制信号不敏感基础的数个性质。此外，肿瘤细胞还改变与微环境 的相互作用等。后者领域包括肿瘤细胞自免疫监督逃脱的策略（Muller & Prendegast 2007)。免疫监督限制恶性生长，但同时提供触发避免免疫反应的机制进化的选择压力，如 [Dunn等2004]所综述。基本上已经常观察到T细胞免疫性的去除足以增加肿瘤发生率 [Shankaran等2001]，并且认为免疫逃脱在影响肿瘤潜伏（相对于进展），促进侵入和转移， 并且负面影响治疗反应。
[0026] 数个机理学研究发现，免疫逃脱与肿瘤微环境内的代谢改变具有重要的界面。此 处，介导对抗原的免疫耐受的重要作用与必需氨基酸色氨酸和精氨酸的分解代谢（分别由 酶吲哚胺2, 3-二加氧酶（ID0)和精氨酸酶I (ARG)进行）相关（Bronte和Zanovello， 2005; Muller 等，2005b; Muller 和 Prendergast, 2007; Munn 和 Mellor, 2007; Popovic 等，2〇〇7)。
[0027] IDO是催化色氨酸降解成犬尿氨酸的单链氧化还原酶。IDO不负责分解代谢过量 膳食色氨酸，而是负责调节在局部环境中的色氨酸水平。癌症患者中色氨酸分解代谢的提 高以显著改变的色氨酸或分解代谢物血清浓度显示，并且这与通常在肿瘤和引流淋巴结 中升高的ID0相关。根据数个出版物，ID0过表达与癌症预后差有关[Okamoto等2005; Brandacher 等，2006]。
[0028] T细胞似乎优先对ID0活化敏感，使得当对色氨酸饥饿时，它们不能分开，结果不 能通过呈递给它们的抗原活化。Munn和Mellor以及他们的同事揭露，ID0通过阻抑T细胞 活化和通过对肿瘤抗原产生外周耐受来调节免疫性（Mellor和Munn, 2004)。这些机制包 括由肿瘤细胞募集到其直接微环境或肿瘤-引流淋巴结的免疫细胞的破坏。此处，通过抗 原呈递细胞清除的肿瘤抗原被交叉呈递到适应性免疫系统。除了是直接耐受产生之外，成 熟的DC还具有扩繁调节T细胞（Treg)的能力[Moser 2003]。
[0029] 除了色氨酸分解代谢之外，在肿瘤条件的微环境中精氨酸转变增加，并且很多报 道表明，在肿瘤生长和发展期间精氨酸酶活化的作用。在肿瘤侵润的骨髓细胞中，精氨酸通 过精氨酸酶I (ARG1)、精氨酸酶II (ARG2)转变成脲和鸟氨酸，并且通过诱导形式的氧化氮 合酶（N0S2)氧化成瓜氨酸和一氧化氮（NO)。
[0030] 在结肠癌、乳腺癌、肺癌和前列腺癌患者中经常观察到ARG活性增加 [Cederbaum 2004]，其与前列腺癌中存在的ARG和NOS过表达相关[Keskinege等2001，Aaltoma等 2001，Wang等2003]。已显示侵润巨噬细胞中的ARG活性损害抗原特异性T细胞反应和 CD3受体的表达。此外，骨髓细胞相关肿瘤中ARG和N0S的累积活性可对最终导致细胞凋亡 的抗原特异性T淋巴细胞产生抑制信号[Bronte 2003 a; 2003b]。
[0031] 与IDO和ARG有关的机制两者在检测到各自氨基酸浓度的衰竭浓度的点 时合并。在氨基酸剥夺期间，被称为一般性控制非不可抑制2 (general control nonderepressible 2 (GCN2))的eIF2激酶EIF2AK4与细胞内聚集的脱酰tRNA相互作 用。因此，认为GCN2从自抑制改变成活性构象，并进一步通过自磷酸化被活化。然后，唯 一已知的底物蛋白质eIF2a被磷酸化并且结果用于翻译起始的复合物被抑制[Harding等 2000]。这减少一般Cap依赖性翻译起始和由此减少相应蛋白质产生。另一方面，这诱导应 激相关靶基因主要通过经由活化转录因子4 (ATF4)的cap非依赖性起始的特异表达。通 过表达相应的应激反应蛋白例如在氨基酸代谢中的酶，细胞试图补偿特定的细胞应激[Wek 等2006]。如果应激持续，通过转录促细胞凋亡转录因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白 (CHOP)，同一途径转变以促进细胞凋亡[Oyadomari 2004]。已显示色氨酸饥饿触发GCN2 依赖性应激信号转导途径。在T细胞中，改变eIF2a磷酸化和翻译起始导致细胞生长停止 (Munn等2005)。Sharma等[2007]公布成熟Treg的直接ID0诱导活化和GCN2依赖性活 化。类似地，Fallarino 等[2006]发现 CD4+CD25-细胞至 CD25+FoxP3+ Treg 的 GCN2 依赖 性转变，后者产生IL-10和TGFi3。Rodriguez等[2007]鉴定，通过色氨酸或精氨酸耗尽的 GCN2途径的活化连同TCR信号转导导致CD3 ζ链减量调节、细胞周期停止和无反应性。
[0032] 重要的是，GCN2途径不仅对肿瘤免疫逃脱是重要的，而且在直接调节肿瘤存活中 起积极作用。Ye等[2010]发现在人实体瘤中前述转录因子ATF4过量表达，这表明在肿瘤 进展中的重要作用。氨基酸和葡萄糖剥夺是实体瘤中存在的典型应激，并活化GCN2途径以 增量调节涉及氨基酸合成和运输的ATF4靶基因。与正常组织相比，在人类和小鼠肿瘤中观 察到GCN2活化/过表达和磷酸-eIF2a增加，并且ATF4或GCN2表达的废除显著抑制体内 肿瘤生长。得出结论，GCN2-eIF2a-ATF4途径对维持肿瘤细胞中的代谢动态平衡是关键的。
[0033] 现有生物学通过适应性机制全面干扰对制动肿瘤免疫逃脱有吸引力的ARG/ID0 途径。此处GCN2功能的干扰特别引人关注，因为其是两种途径即ID0和ARG途径的合并点， 以及其为直接阻碍肿瘤代谢提供另外的机会。
[0034] 数种途径抑制剂已被考虑为免疫调节剂。这些抑制剂主要针对ID0或ARG蛋白的 酶功能（Muller和Scherle, 2006)。精氨酸酶抑制剂N-轻基-nor-L-Arg的施用阻断小鼠 中s. c. 3LL肺癌的生长[Rodriguez 2004]。贡献N0的阿司匹林例如NCX 4016 (2-(乙酰 基氧基）苯甲酸3-(硝基氧基甲基）苯基酯）已被报道干扰骨髓细胞的抑制酶活性。口服 给予的N0阿司匹林使荷瘤宿主的免疫状态正常化，增加肿瘤抗原特异性T淋巴细胞的数量 和功能，并且提高由癌接种引发的抗肿瘤免疫的预防和治疗有效性（DeSanto 2005)。
[0035] 底物类似物1甲基-色氨酸（1MT)和相关分子在癌症背景和其它环境下已广泛用 于革巴向IDCLFriberg等（2002)和Uyttenhove等（2003)的研究证实，1MT可限制过表达ID0 的肿瘤的生长。然而，在数个肿瘤模型中1MT不能引起肿瘤消退，暗示着当ID0抑制用作单 一疗法只有不高的抗肿瘤功效。相比之下，用1MT和多种细胞毒性化学治疗剂的组合治疗 引起建立的MMTV-neu/HER2肿瘤消退，所述肿瘤对任何单一作用剂疗法反应差[Muller等 2005a]。治疗之前，小鼠的CD4+或CD8+ T细胞的免疫耗竭废除该模型中观察到的组合功 效，证实1MT间接通过活化T细胞介导的抗肿瘤免疫性而起作用的预期。IDO靶向是1MT作 用所必需的重要证据由以下论证提供：在遗传缺乏IDO的小鼠中1MT缺乏抗肿瘤活性[Hou 等，2007]。
[0036] GCN2的抑制使得能够将氨基酸饥饿诱导的免疫编辑的两种途径分支合并，并减少 肿瘤避开抑制任一分支的选择。此外，如上文详述，GCN2抑制提供干扰肿瘤代谢的机会，同 时可提高单一疗法或与其它抗癌方法的组合疗法的功效。
[0037] 文献： 1. Aaltoma，S. Η. , Ρ. Κ. Lipponen和 V. Μ· Kosma. 2001. Inducible nitric oxide synthase (iNOS) expression and its prognostic value in prostate cancer (可诱导 的氧化氮合酶（iNOS)表达和其在前列腺癌中的预后价值）.Anticancer Res. 21:3101-3106. 2. Brandacher，G. ; Perathoner，A. ; Ladurner，R. ; Schneeberger，S. ; Obrist， P. ; Winkler, C. ; Werner, E. R. ; Werner-Felmayer, G. ; Weiss, H. G. ; Gobel，G.; Margreiter，R. ; Konigsrainer，A. ; Fuchs, D. ; Amberger，A. Prognostic value of indoleamine 2,3_ dioxygenase expression in colorectal cancer: effect on 七11111〇1'；!_1111；^^七;!_1^1'〇6118(剛哚胺2,3-二加氧酶表达在结肠直肠癌中的预后价值：对 肿瘤侵润 T 细胞的作用）.Clin. Cancer Res. 2006，12，1144-1151. 3. Bronte V，Zanovello P. (2005). Regulation of immune responses by L-arginine metabolism (L_ 精氨酸代谢的免疫反应调节）· Nat Rev Immunol 5: 641-654. 4. Bronte, V. , P. Serafini，C. De Santo, I. Mari go, V. Tosello，A. Mazzoni, D. M. Segal, C. Staib，M. Lowel, G. Sutter 等· 2003a. IL_4_ induced arginase 1 suppresses alloreactive T cells in tumor-bearing mice (IL-4 诱导的精氨酸酶 1 阻 抑荷瘤小鼠中的同种异体反应性T细胞）.J. Immunol. 170:270 - 278. 5. Bronte，V·，Ρ· Serafini，A. Mazzoni，D.M. Segal 和 Ρ· Zanovello. 2003b. L-arginine metabolism in myeloid cells controls T-lymphocyte functions (骨髓细 胞中L-精氨酸代谢控制T淋巴细胞的功能）.Trends Immunol. 24:302 - 306 6. Carmel a De Santo, Paolo Serafini，Ilaria Marigo，Luigi Dolcetti，Manlio Bolla， § Piero Del Soldato， Cecilia Melani， Cristiana Guiducci， Mario P. Colombo, Manuela Iezzi, Piero Musiani， Paola Zanovello 和 Vincenzo Bronte. Nitroaspirin corrects immune dysfunction in tumor-bearing hosts and promotes tumor eradication by cancer vaccination (硝基阿司匹林纠正荷瘤宿主中的免疫功 能异常并通过癌接种促进肿瘤根除）.Proc Natl Acad Sci USA. 2005 March 15; 102(11) : 4185 - 4190 7. Cederbaum，S.D·，H. Yu，W.W. Grody，R.M. Kern，P. Yoo 和尺.1(.1乂61'.2004· Arginases I and II: do their functions overlap?(精氨酸酶 I 和 II:它们的功能重 叠吗？）Mol. Genet. Metab. 81:S38 - 44. 8. Dey, M. , Cao，C. , Sicheri，F和 T.E. Dever. Conserved Intermolecular Salt Bridge Required for Activation of Protein Kinases PKR，GCN2，and PERK (蛋白激 酶PKR、GCN2和PERK活化所必需的保守分子间盐桥）.JBC 282(9): 6653，2007. 9. Dunn, G. P. ; Old, L J. ; Schreiber，R. D. The immunobiology of cancer immunosurveillance and immunoediting (癌症免疫监视和免疫编辑的免疫生物学）· Immunity 2004， 21， 137-148. 10. Fallarino，F. U. Grohmann，S. You, B. C.等 The combined effects fo tryptophan starvation and tryptophan catabolites down-regulate T cell receptor zeta-chain and induce a regulatory phenotype in naive T cells (色氨酸饥饿和色氨 酸分解代谢产物组合功效下调T细胞受体ζ链并诱导天然T细胞中的调控性表型）.J. Immunol. 176:6752，2006. 11. Friberg M， Jennings R， Alsarraj M， Dessureault S， Cantor A, Extermann M等(2002). Indoleamine 2,3-dioxygenase contributes to tumor cell evasion of T cell-mediated rejection (Π 引哚胺2, 3-二加氧酶有助于肿瘤细胞逃脱T细胞介导的排 斥）· Int. J Cancer 101: 151-155 12. Harding HP, Novoa I，Zhang Y，Zeng H，Wek R，Schapira M，Ron D. Regulated translation initiation controls stress-induced gene expression in ma_alian cells (调节的翻译起始控制哺乳动物细胞中应激诱导的基因表达）.Mol Cell. 2000 Nov;6(5):1099-108. 13. Hou DY，Muller AJ，Sharma MD，DuHadaway J，Banerjee T，Johnson M 等(2007). Inhibition of indoleamine 2, 3-dioxygenase in dendritic cells by stereoisomers of 1-methyl-tryptophan correlates with antitumor responses (通 过1-甲基-色氨酸的立体异构体抑制树突细胞中的吲哚胺2, 3-二加氧酶与抗肿瘤反应有 关）· Cancer Res 67: 792 - 801. 14. Keskinege，A. , S. Elgun 和 E. Yilmaz. 2001. Possible implications of arginase and diamine oxidase in prostatic carcinoma (前列腺癌中可會巨涉及精氛酸 酶和二胺氧化酶）· Cancer Detect. Prev. 25:76 - 79. 15. Mellor AL，Munn DH. (2004). IDO expression by dendritic cells: tolerance and tryptophan catabolism (通过树突细胞的IDO表达：耐受性和色氨酸分 解代谢）· Nat Rev Immunol 4: 762 - 774. 16. Moser, M. Dendritic cells in immunity and tolerance-do they display opposite functions?(免疫性和耐受性中的树突细胞-它们显示相反的功能？） Immunity 2003, 19, 5-8. 17. Muller, A. J.和P.A. Scherle. Targeting the mechanisms of tumoral immune tolerance with small-molecule inhibitors (用小分子抑制剂祀向肿瘤免疫耐受性机 制）· Nat. Rev. Cancer. 6:613，2006. 18. Muller AJ，Prendergast GC. (2007). Indoleamine 2,3-dioxygenase in immune suppression and cancer (免疫阻抑和癌症中的Π 引哚胺2, 3-二加氧酶）.Curr Cancer Drug Targets 7: 31 - 40. 19. Muller AJ, DuHadaway JB, Sutant〇-Ward E, Donover PS, Prendergast GC. (2005a). Inhibition of indoleamine 2, 3-dioxygenase, an immunomodulatory target of the tumor suppressor gene Binl，potentiates cancer chemotherapy (口引噪胺 2, 3-二加氧酶，一种肿瘤阻抑基因 Binl的免疫调节靶标，使癌症化学疗法成为可能）. Nature Med 11: 312-319. 20. Muller AJ, Malachowski WP, Prendergast GC. (2005b). Indoleamine 2, 3-dioxygenase in cancer: targeting pathological immune tolerance with small-molecule inhibitors (癌症中的卩引哚胺2, 3-二加氧酶：用小分子抑制剂祀向病理 免疫耐受性）· Expert Opin Ther Targets 9: 831 - 849. 21. Munn，D. Η. , M. D. Sharma，B. Baban，Η. P. Harding, Y. Zhang, D. Ron, A. L. Mellor. GCN2 kinase in T cells mediates proliferative arrest and anergy induction in response to indoleamine 2, 3-dioxygenase (响应卩引哚胺 2, 3_二加氧酶， T细胞中的GCN2激酶介导增殖停止和无反应性诱导）.Immunity. 22:633，2005 22. Okamoto，A. ; Nikaido，T. ; Ochiai，K. ; Takakura，S. ; Saito，M. ; Aoki，Y.; Ishii，N. ; Yanaihara，N. ; Yamada，K. ; Takikawa, 0. ; Kawaguchi, R. ; Isonishi， S. ; Tanaka, T. ; Urashima，M. Indoleamine 2,3-dioxygenase serves as a marker of poor prognosis in gene expression profiles of serous ovarian cancer cells (口引 哚胺2, 3-二加氧酶作为浆液性卵巢癌细胞的基因表达概况的预后差的标志物）.Clin. Cancer Res. 2005，11，6030-6039. 23. Oyadomari S， Mori M. Roles of CH0P/GADD153 in endoplasmic reticulum stress (CH0P/GADD153 在内质网应激中的作用）.Cell Death Differ. 2004 Apr; 11 (4) :381-9. 24. GC Prendergast， Immune escape as a fundamental trait of cancer: focus on IDO (免疫逃脱作为癌症的基本特征：焦点在于IDO). Oncogene (2008) 27，3889 - 3900 25. Popovic PJ，Zeh III HJ，Ochoa JB. (2007). Arginine and immunity (精氨 酸和免疫性）.J Nutr 137: 1681S- 1686 S. 26. Rodriguez, P. C. , D. G. Quiceno，J. Zabaleta，B. Ortiz, A. H. Zea，Μ. B. Piazuelo, A. Delgado, P. Correa, J. Brayer, E. M. Sotomayor, S. Antonia, J. B. Ochoa 和 A. C. Ochoa. Arginase I Production in the Tumor Microenvironment by Mature Myeloid Cells Inhibits T-Cell Receptor Expression and Antigen-Specific T-Cell Responses (在肿瘤微环境中通过成熟骨髓细胞产生的精氨酸酶I抑制T细胞受体表达和 抗原特异性T细胞反应）.Cane. Res. 64:5839, 2004 27. Rodriguez, P. C. , D. G. Quiceno 和 A. C. Ochoa. L-arginine availability regulates T-lymphocyte cell-cycle progression (L_ 精氨酸利用度调节 T 淋巴细胞细 胞周期进展）.Blood. 109:1568，2007. 28. Shankaran，V. ; Ikeda，Η. ; Bruce, A. T. ; White, J. M. ; Swanson, P. E.; Old, L J. ; Schreiber， R. D. IFNgamma and lymphocytes prevent primary tumour development and shape tumour immunogenicity (IFNy 和淋巴细胞阻止原发肿瘤发展和 塑造肿瘤免疫原性）.Nature 2001，410，1107-1111. 29. Sharma, M. D. , B. Baban, P. Chandler, D-Y. Hou, N. Singh, H. Yagita, M. Azuma, B. R. Blazar, A. L. Mellor和D.H. Munn. Plasmacytoid dendritic cells from mouse tumor-draining lymph nodes directly activate mature Tregs via indoleamine 2, 3-dioxygenase (来自小鼠肿瘤-引流淋巴结的菜细胞样树突细胞通过卩引哚胺2, 3-二加 氧酶直接活化成熟 Treg). J. Clin. Invest. 117:2570, 2007. 30. Uyttenhove C， Pilotte L， Theate I， Stroobant V, Colau D， Parmentier N等 (2003). Evidence for a tumoral immune resistance mechanism based on tryptophan degradation by indoleamine 2, 3- dioxygenase (肿瘤免疫抵抗机制的证据在于通过口引 哚胺2, 3-二加氧酶的色氨酸降解）.Nat Med 9: 1269 - 1274 31. Wang，J·，Μ· Torbenson，Q. Wang，J.Y. Ro和Μ· Becich. 2003. Expression of inducible nitric oxide synthase in paired neoplastic and non-neoplastic primary prostate cell cultures and prostatectomy specimen (可诱导的氧化氮合 酶在配对的肿瘤和非肿瘤原发前列腺细胞培养物和前列腺切除样本中的表达）.Urol. Oncol. 21:117-122. 32. Wek RC， Jiang HY， Anthony TG. Coping with stress: eIF2 kinases and translational control (对抗应激：elF2 激酶和翻译控制）.Biochem Soc Trans. 2006 Feb;34 (Pt 1) :7-11. 33. Ye J，Kumanova M，Hart LS， Sloane K， Zhang H，De Panis DN， Bobrovnikova-Marjon E， Diehl JA， Ron D， Koumenis C. The GCN2-ATF4 pathway is critical for tumour cell survival and proliferation in response to nutrient d印rivation (GCN2-ATF4途径是肿瘤细胞响应营养剥夺而存活和增殖的关键）.EMBO J. 2010 Jun 16:29(12):2082-96. 已发现，本发明的化合物和其盐具有极有价值的药理学性质，同时被良好耐受。
[0038] 本发明具体涉及抑制、调控和/或调节经由Syk的信号转导的式I化合物，涉及包 含这些化合物的组合物，涉及将其用于治疗Syk诱导的疾病和症状的方法。
[0039] 式I化合物可进一步用于分离和研究Syk的活性或表达。此外，它们特别适合用 于与Syk活性不调或阻碍有关的疾病的诊断方法。
[0040] 宿主或患者可属于任何哺乳动物物种，例如灵长类物种，特别是人类；啮齿类动 物，包括小鼠、大鼠和仓鼠；兔；马、牛、狗、猫等。对实验研究而言，动物模型具有吸引力，只 要是用于治疗人类疾病的模型。
[0041] 特定细胞对用本发明化合物治疗的易感性可通过体外试验测定。通常将细胞培养 物与各种浓度的本发明化合物混合一段时间，所述时间足以允许活性作用剂例如抗IgM诱 发细胞反应例如表面标志物表达，通常在约1小时和1周之间。可使用来自血液或活检样 本的培养细胞进行体外试验。所表达的表面标志物的量通过流式细胞术使用识别该标志物 的特异性抗体来评价。
[0042] 剂量根据所用的具体化合物、具体疾病、患者状况等而改变。治疗剂量通常足以显 著降低靶组织中不需要的细胞群，同时患者的成活力得以维持。治疗通常持续直到发生显 著降低（例如细胞负荷降低至少约50%)，并且可以持续直到机体内基本上不再有不需要的 细胞被检测到。
[0043] 对于鉴定信号转导途径和检测各种信号转导途径之间的相互作用，许多科学家已 开发了合适的模型或模型系统，例如细胞培养模型（例如Khwaja等，ΕΜΒ0，1997，16， 2783-93)和转基因动物模型（例如 White 等，Oncogene, 2001，20，7064-7072)。对于 确定信号转导级联中的某些阶段，可利用相互作用化合物以调节信号（例如Stephens等， Biochemical J.，2000，351，95-105)。本发明化合物还可在动物和/或细胞培养模型中 或在本申请提及的临床疾病中用作测试激酶依赖性信号转导途径的试剂。
[0044] 激酶活性的测量是本领域技术人员熟知的技术。使用底物例如组蛋白（例如 Alessi等，FEBS Lett. 1996，399，3，333-338页）或碱性髓磷脂蛋白测定激酶活性的 一般性测试系统，描述于文献（例如 Campos-Gonzdilez，R.和 Glenney, Jr.，J. R. 1992， J. Biol. Chem. 267，14535 页）。
[0045] 对于鉴定激酶抑制剂，可利用各种测定系统。在闪烁迫近测定法（scintillation proximity assay) (Sorg 等，J. of. Biomolecular Screening, 2002, 7, 11-19)和闪 光板（flashplate)测定法中，测量用γΑΤΡ对作为底物的蛋白质或肽的放射性磷酸化。在 抑制化合物的存在下，可检测到放射性信号减少或根本没有。此外，均相时间分辨荧光共 振會泛量传递（homogeneous time-resolved fluorescence resonance energy transfer, HTR-FRET)和荧光偏振（FP)技术适宜作为测定方法（Sills等，J. of Biomolecular Screening, 2002， 191-214)。
[0046] 其它非放射性ELISA测定法使用特异性磷酸-抗体（磷酸-AB)。磷酸-AB仅结 合磷酸化底物。可通过化学发光使用第二过氧化物酶缀合的抗山羊抗体检测该结合（Ross 等，2002，Biochem. J.)。 现有技术
[0047] 其它杂环 Syk 抑制剂描述于 W02008/118823、W02009/136995、W0 2010/027500。
[0048] 发明简述 本发明涉及式I化合物和其药学上可用的溶剂合物、盐、互变异构体和立体异构体（包 括其以所有比例的混合物）： 其中
【权利要求】
1. 式I的化合物和其药学上可接受的溶剂合物、盐、互变异构体和立体异构体，包括 其以所有比例的混合物，
其中 R1 表示 Ar1 或 Het1, R2 表示 Ar2、Het2、NH (CH2) nAr2、0 (CH2) nAr2、NH (CH2) nHet2、NHCONHA、CONH2 或 N3， R4表示H或F， Ar1 表示苯基，其是未取代的或被 Hal、A、[C(R3)2]nCN、（CH2) nOH、（CH2)nOA、（CH2)nCOOH、 (CH2) nCOOA、S (0) _/、（CH2) nHet3、CON (R3) 2、CONH (CH2) nC (R3) 2N (R3) 2 和 / 或 CONH (CH2) PCH [ (CH2) n0R3] (CH2)p0R3 -、二或三取代， Ar2 表示苯基，其是未取代的或被 A、Hal、（CH2)n0H、（CH2)n0A、（CH 2)nNH2、（CH2)nNHA、 (CH2)nNA2、S02NH2、S0 2NHA、S02NA2、（CH2)nC0NH 2、（CH2)nC0NHA、（CH2)nC0NA 2、[C(R3)2]nN(R3) 2、 CONH (CH2) PCH [ (CH2) nN (R3) 2] (CH2) P0R3、CONH (CH2) PCH [ (CH2) n0R3] NHS02A、CONH (CH2) PCH [ (CH2) n0R3]0R3、C0NH(CH2)p[(CH(0R 3)]pCH20R3、CONHR4、CONH(CH 2)pCH[(CH2)nN(R3) 2]Cyc、C0NH(CH2) nC (R3) 2N (R3) 2 和 / 或 CONHC (R3) 2 (CH2) P0R3 -、二或三取代， Het1表示苯并-1，3-间二氧杂环戊烯基或吲唑基，其各自是未取代的或被A -取代， Het2表示哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、吗啉基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、 噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、三唑基、四唑基、噁二唑基、噻二唑 基、哒嗪基、吡嗪基、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、呋喃并吡啶基或吲唑基，其各自是未取 代的或被他1、順(〇1 2)丨6七4、六、（〇12)110!1、（〇12) 11(^、（〇12)11順2、（〇12) 1^祖、（〇12)11隱2和/或 =0-、二或三取代， Het3表示四唑基或噁二唑基，其各自是未取代的或被A、（CH2)nNH 2、（CH2)nNHA、（CH2)nNA 2 和/或=0-或二取代， Het4表示哌啶基或四氢呋喃基，其各自是未取代的或被A或NH2 -取代， R3表示Η或具有1、2、3或4个C原子的烷基， Α表示非支链的或支链的具有1-10个C原子的烷基，其中1-7个Η原子被F和/或C1 置换，和/或其中一个或两个非邻近的CH2基团可被0和/或ΝΗ置换， 或者 具有3-7个C原子的环状烷基，其可以是未取代的或被OH、NHC0A或NH2 -取代， Cyc表示具有3-7个C原子的环状烷基， m表示0、1或2， η 表示 0、1、2、3 或 4， Ρ表示1、2、3或4。
2. 权利要求1的化合物和其药学上可接受的溶剂合物、盐、互变异构体和立体异构 体，包括其以所有比例的混合物，所述化合物选自

3.权利要求1-2的化合物和其药学上可接受的盐、溶剂合物、互变异构体和立体异构 体的制备方法，其特征在于 a)将式Ila的化合物与式Ilia的化合物以Suzuki型偶联进行反应，得到式IVa的化 合物
其中R4具有权利要求1中表明的含义； f-L Ilia 其中R1具有权利要求1中表明的含义， 和L表示硼酸或硼酸酯基团；
其中R1和R4具有权利要求1中表明的含义； 随后将式IVa的化合物与式Va的化合物以Suzuki型偶联进行反应， R2-L Va 其中R2具有权利要求1中表明的含义， 和L表示硼酸或硼酸酯基团； 或者 b) 将式lib的化合物与式Va的化合物以Suzuki型偶联进行反应，得到式IVb的化合 物，
其中R4具有权利要求1中表明的含义； R2-L Va 其中R2具有权利要求1中表明的含义， 和L表示硼酸或硼酸酯基团；
其中R2和R4具有权利要求1中表明的含义； 随后将IVb的化合物与式Ilia的化合物以Suzuki型偶联进行反应， RiL Ilia 其中R1具有权利要求1中表明的含义， 和L表示硼酸或硼酸酯基团； 或者 c) 通过用溶剂分解剂或氢解剂处理将其自其官能衍生物之一释放， 和/或 将式I的碱或酸转化成其盐之一。
4. 药物，其包含：至少一种式I的化合物和/或其药学上可接受的盐、溶剂合物、互变 异构体和立体异构体，包括其以所有比例的混合物；和任选的药学上可接受的载体、赋形剂 或溶媒。
5. 式I的化合物和其药学上可接受的盐、溶剂合物、互变异构体和立体异构体的药 物，包括其以所有比例的混合物，其用于治疗和/或预防炎性病况、免疫学病况、自身免疫 病况、变应性病况、风湿性病况、血栓形成病况、癌症、传染病、神经变性疾病、神经炎性疾 病、心血管疾病和代谢病况，该方法包括给予有需要的受试者有效量的式I化合物。
6. 权利要求5的化合物，其用于治疗和/或预防癌症，其中所述待治疗的癌症是实体 瘤或血液和免疫系统肿瘤。
7. 权利要求6的化合物，其中所述实体瘤源自于上皮、膀胱、胃、肾、头和颈、食道、宫 颈、甲状腺、肠、肝、脑、前列腺、泌尿生殖道、淋巴系统、胃、喉、骨包括软骨肉瘤和尤因肉瘤、 生殖细胞包括胚胎组织肿瘤和/或肺的肿瘤，源自于单核细胞性白血病、肺腺癌、小细胞性 肺癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤、神经纤维瘤、血管肉瘤、乳腺癌和/或恶性黑素瘤。
8. 权利要求5的化合物，其用于治疗和/或预防选自类风湿性关节炎、系统性狼疮、哮 喘、多发性硬化、骨关节炎、缺血性损伤、巨大细胞动脉炎、炎性肠病、糖尿病、囊性纤维化、 银屑病、舍格伦综合征和移植器官排斥的疾病。
9. 权利要求5的化合物，其用于治疗和/或预防选自阿尔茨海默病、唐氏综合征、伴有 Dutch型淀粉样变性的遗传性脑出血、大脑淀粉样血管病、克雅病、额颞痴呆、亨廷顿病、帕 金森病的疾病。
10. 权利要求5的化合物，其用于治疗和/或预防选自利什曼原虫、分枝杆菌包括麻风 分枝杆菌、结核分枝杆菌和/或鸟分枝杆菌、利什曼原虫、痕原虫、人免疫缺陷病毒、Epstein Barr病毒、单纯疱疫病毒、丙型肝炎病毒的疾病。
11. 药物，其包含：至少一种式I的化合物和/或其药学上可接受的盐、溶剂合物和立 体异构体的药物，包括其以所有比例的混合物；和至少一种另外的药物活性成分。
12. 由以下的分开包装组成的套装（药盒）： (a) 有效量的式I化合物和/或其药学上可接受的盐、溶剂合物、盐和立体异构体，包括 其以所有比例的混合物， 和 (b) 有效量的另外的药物活性成分。
【文档编号】A61P33/00GK104114558SQ201380010420
【公开日】2014年10月22日 申请日期:2013年1月22日 优先权日:2012年2月21日
【发明者】L.布格多夫, T.罗斯, C.多伊奇 申请人:默克专利股份公司