乳清蛋白组合物及其在美容中的用途
【专利摘要】本发明提供一种以乳清蛋白为核心的组合物，具体是以乳清蛋白纳米粒为主要材质，其包含0.1～50重量％的乳清蛋白，0～1重量％的表皮细胞生长因子(EGF)，所述组合物可单独使用，和/或作为载体及传递介质，负载表皮细胞生长因子生物活性蛋白进一步制备成化妆品原料或活性添加成分，并可进一步制备成泡沫剂、水剂、乳剂、凝胶剂或膏霜剂。优选地，所述乳清蛋白以纳米粒形式存在，其粒径为100nm～2μm，优选100nm～500nm，并且所述纳米粒负载有EGF，形成负载有EGF的乳清蛋白纳米粒。本发明还提供制备负载有EGF的乳清蛋白纳米粒的方法。
【专利说明】乳清蛋白组合物及其在美容中的用途
【技术领域】
[0001]本发明提供一种以乳清蛋白为核心的组合物，具体是以乳清蛋白纳米粒为主要材质，其可单独使用，和/或作为载体及传递介质，负载有表皮细胞生长因子(EGF)生物活性蛋白进一步制备成化妆品原料或活性添加成分，并可进一步制备成泡沫剂、水剂、乳剂、凝胶剂、膏霜剂。属于美容护肤品的【技术领域】。
技术背景
[0002]乳清蛋白(whey protein)被称为蛋白之王，是从牛奶中提取的一种蛋白质，牛乳中87%是水分，13%是乳固体；乳固体中37%是乳糖，30%是脂肪，27%是乳蛋白。而乳蛋白中80%是酪蛋白，20%是乳清蛋白，后者是牛乳中的精华。以其纯度高、吸收率高、氨基酸组成最合理等诸多优势被推为“蛋白之王”。它是由干酪生产过程中所产生的副产品乳清经过特殊工艺浓缩精制而成的一类蛋白质，乳清浓缩蛋白(whey protein concentration,WPC)是指从巴氏杀菌的乳清中尽量去除非蛋白质成分，蛋白质含量在34%~82%的产品[张丹凤.乳清蛋白的特性及其在乳制品生产中的应用[J].中国乳业，2007 (3):27-28.]。乳清蛋白中含有β_乳球蛋白、α-乳白蛋白、乳铁蛋白、免疫球蛋白和乳过氧化物酶等人体必需的多种活性蛋白，且配比合理，接近人体的需求比例，是人体生长、发育、抗衰老等生命活动不可缺少的精华物质。其中，β_乳球蛋白具有增强细胞清除自由基，提高细胞膜抗氧化性的能力；α -乳白蛋白与乳铁蛋白等成分富含胱氨酸残基，能促进GSH的合成，维持细胞和组织的GSH水平，并具有在细胞分裂过程中稳定DNA的功能，具有营养细胞，调节细胞正常代谢，避免表皮细胞的过早凋亡和角质细胞的堆积，起到美白嫩肤的作用。
[0003]作为天然乳液的典型例子，牛奶从古代就被用于化妆品，也被认为是中国历史上第一个“美容秘密”。古埃及艳后克利欧佩特拉和许多公主都用牛奶沐浴为了保持她们皮肤的柔软。后来，印第安女性用牛奶来做成可撕掉的美容面膜，用于她们的面部和身体，也把牛奶混合于植物制品里来清洁、纯化和滋养她们的皮肤和头发。法国Lactofil.GatteffoSSe公司开发了 Lactofil等一系列以牛奶乳清蛋`白质衍生物为基础的化妆品。这一系列包括三种产品=Lactofil Moist，不仅含有乳糖，脂肪含量低，具有滋养和保湿的活性，保湿性能优越；Lactofil Foam，天然的发泡增强剂，富含酪蛋白酸钠，提供保湿和发泡特性，用于身体护理，头发护理和化妆品；Lactofil Sensitive,具有使敏感肌肤正常化和固化的活性，能在皮肤上能起到缓冲的作用，保持皮肤的湿度平衡进而带来皮肤紧实的效果。上述产品已经上市且得到了广泛的应用。
[0004]雀巢技术公司的已授权的发明专利CN 101031208，发明名称为“纳米微粒化的乳清蛋白”(对应的国际公布为W02006/034857)，该专利技术通过将乳清蛋白水溶液pH值从
5.6调整至6.4或者在保持pH值恒定的同时调节离子强度并且将水溶液加热80°C至95°C之间的温度持续10秒至30分钟，以得到微粒大小小于I μ m的纳米微粒化乳清蛋白。
[0005]然而，这一技术需要调整pH值和进行高温变性操作，这些对蛋白的生物活性具有不良影响。
【发明内容】
[0006]为克服现有技术的缺陷，本发明分别采用溶剂蒸发法和乳化交联法制备负载有表皮细胞生长因子(EGF)(例如，重组人表皮细胞生长因子(rhEGF))的乳清蛋白纳米粒，无须调整PH值和进行高温变性操作，避免了剧烈条件对蛋白生物活性的影响。这是本发明的独特之处。
[0007]本发明还公开了一种以乳清蛋白为核心的组合物，具体是以乳清蛋白纳米粒为主要材质，其可单独使用，和/或作为载体及传递介质，负载表皮细胞生长因子(EGF)生物活性蛋白进一步制备成化妆品原料或活性添加成分，并可进一步制备成泡沫剂、水剂、乳剂、凝胶剂、膏霜剂。所述组合物具有滋润、保湿、祛角质、抗衰、抗氧化的作用，乳清蛋白纳米粒还能使携带的活性成分深入深层皮肤，清除皮肤内部自由基，活化深层皮肤细胞，特别适用于敏感肌肤，起到重建表皮，修复敏感肌肤，抗皱嫩肤的作用。
[0008]在本发明的第一个方面，提供了一种以乳清蛋白为核心的组合物，其包含0.1~50重量％的乳清蛋白，O~I重量^^9EGF。
[0009]其中所述乳清蛋白来源于哺乳动物，优选来源于牛，可以是市售的乳清蛋白分离物和浓缩物，特别优选是蛋白质含量在34%~82%的乳清浓缩蛋白。
[0010]其中所述乳清蛋白是以纳米粒的形态存在，其粒径为IOOnm~2 μ m,优选IOOnm~500nmo
[0011]其中所述EGF优选为基因工程技术获得的重组人EGF(rhEGF)，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1 所示:
[0012]Asn Ser Asp Ser Glu Cys Pro Leu Ser His Asp Gly Tyr Cys Leu His Asp GlyVal Cys Met Tyr He Glu `Ala Leu Asp Lys Tyr Ala Cys Asn Cys Val Val Gly Tyr IleGly Glu Arg Cys Gln Tyr Arg Asp Leu Lys Trp Trp Glu Leu Arg(53aa,SEQ ID NO:1)。
[0013]在本发明的第二个方面，提供了一种以乳清蛋白纳米粒为载体的负载EGF的活性半成品(在本发明中还称为EGF乳清蛋白纳米粒)及其制备方法。
[0014]所述EGF乳清蛋白纳米粒中各组分的质量百分比如下:
[0015]
EGF 0.001%-0.005%:
乳淸蛋 G 0.1%-10%；
溶剂 15-40%;
脱水剂 50%-80%;
交联剂().()丨％-().1%;
[0016]其中所述溶剂为蒸馏水或NaCl溶液，优选为IOmM NaCl溶液；
[0017]其中所述脱水剂为甲醇、乙醇或丙酮中的任一种，优选乙醇，更优选95%的乙醇；
[0018]其中所述交联剂为戊二醛、甲基聚乙烯-右旋糖苷中的任一种，优选戊二醛。
[0019]本发明的EGF乳清蛋白纳米粒可采用下述步骤制备:
[0020]其中所述EGF乳清蛋白纳米粒各组分的质量百分比如下:
[0021]
【权利要求】
1.一种以乳清蛋白为核心的组合物，其包含0.1~50重量％的乳清蛋白，O~I重量％的表皮细胞生长因子EGF。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述乳清蛋白来源于哺乳动物，优选来源于牛，特别优选是蛋白质含量在34%~82%的乳清浓缩蛋白。
3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述乳清蛋白是以纳米粒的形态存在，其粒径为 IOOnm ~2 μ m,优选 IOOnm ~500nm。
4.根据权利要求1所述的组合物，其中EGF为通过基因工程技术获得的重组人EGF，，其氨基酸序列为SEQ ID Ν0:1ο
5.根据权利要求1所述的组合物，其中所述乳清蛋白以纳米粒形式存在，并且所述纳米粒负载有EGF，形成负载有EGF的乳清蛋白纳米粒，其中各组分的质量百分比如下:
6.根据权利要求5所述的组合物，其中所述溶剂为蒸馏水或NaCl溶液，优选为IOmMNaCl溶液。
7.根据权利要求5所述的组合物，其中所述脱水剂为甲醇、乙醇或丙酮中的任一种，优选为乙醇，更优选为95%的乙醇。
8.按照权利要求5所述的组合物，其中所述交联剂为戊二醛、甲基聚乙烯-右旋糖苷中的任一种，优选为戍二醒。
9.一种制备权利要求5的负载有EGF的乳清蛋白纳米粒的方法，所述方法包括下述步骤: (1)精密称取处方量的乳清蛋白，溶解于溶剂中； (2)精密称取EGF加入步骤⑴获得的乳清蛋白溶液中，室温搅拌下以0.5ml/min的速率持续加入脱水剂，再加入交联剂，25°C交联固化12h ； (3)减压浓缩除去乙醇，得到乳清蛋白纳米粒-EGF胶体溶液； (4)将步骤(3)得到的乳清蛋白纳米粒-EGF胶体溶液经超速冷冻离心I~3h，得到的沉淀物即为所述负载有EGF的乳清蛋白纳米粒组合物。
10.一种制备权利要求5的负载有EGF的乳清蛋白纳米粒的方法，所述方法包括下述步骤: (1)将EGF母液与预热到40°C的乳清蛋白溶液混合后，快速加入I~50U/g转谷氨酰胺酶并漩涡震荡使其分散均匀， (2)将步骤(1)的混合液加入到盛有预热到40°C的大豆油的锥形瓶中，然后在40°C在搅拌下反应60~240min，待混合物液滴在酶的作用下转化为凝胶颗粒后离心，收集微胶囊颗粒形式的沉淀物并用林格氏试剂清洗两次，再次离心，重新收集胶体颗粒形式的沉淀物，得到所述负载有EGF的乳清蛋白纳米粒。
11.一种抗衰嫩肤系列化妆品，其包含权利要求1-8中任一项所述的组合物。
【文档编号】A61K8/64GK103705395SQ201410004016
【公开日】2014年4月9日 申请日期:2014年1月3日 优先权日:2014年1月3日
【发明者】黄亚东, 王丽杰, 项琪, 贝煜 申请人:广州瑾洋化妆品有限公司, 广州暨南大学医药生物技术研究开发中心