一种聚乙二醇修饰的基质金属蛋白酶-2抑制剂多肽及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及药物领域，具体涉及具有抑制基质金属蛋白酶-2活性，治疗急性淋巴细胞性白血病的多肽。此多肽经过了聚乙二醇修饰，其序列为mPEG-SC10k-PRO-THR-THR-ASN-ARG是全新的序列，它们可以在体外抑制基质金属蛋白酶-2活性，并在体内试验中提高荷瘤小鼠生存率，具有潜在的新药开发价值。
【专利说明】—种聚乙二醇修饰的基质金属蛋白酶-2抑制剂多肽及其应用
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及聚乙二醇修饰的基质金属蛋白酶-2抑制剂及其应用，具体涉及具有抑制基质金属蛋白酶-2活性、可治疗实体肿瘤的的多肽。
【背景技术】
[0002]近年来随着医学研究的深入，发现基质金属蛋白酶在实体肿瘤生长中扮演着重要角色。基质金属蛋白酶是一组由20几种结构相似和功能相关的蛋白内切酶组成。它们可以发挥正常的生理功能，例如卵细胞着床，骨骼生长和器官发育等；这些酶还可以在诸如炎症，伤口愈合和肿瘤细胞转移中发挥病理作用。基质金属蛋白酶被更多的看作是这些病理过程的调节因子。在基质金属蛋白酶家族中，MMP-2和MMP-9，是MMP家族的重要成员，分别编码72kDa和92kDa的明胶酶A和明胶酶B。正常稳定状态下，组织较少合成、分泌MMP-2，在炎症、肠化、增生和损伤等刺激下，细胞内部调控平衡机制紊乱，合成、分泌MMP-2
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[0003]PRO-THR-THR-ASN-ARG是一个全新的序列，前期的研究表明，该多肽经反复体内外活性评价证实具有较好的抑瘤效果，能够显著抑制基质金属蛋白酶-2活性。然而上述多肽的半衰期短，拟用临床人的给药是每天静脉滴注，这给患者带来了一定的痛苦。 [0004]文献报道中，对分子结构进行修饰或改造是解决半衰期较短、需连续给药问题的常用方法，其中以化学修饰应用最为广泛，常用的化学修饰剂有聚乙二醇(polye thyleneglycol, PEG)、葡聚糖、聚氨基酸、聚酸酐等。PEG具有无毒、无免疫原性、水溶性好的特点，被美国食品与药物管理局(FDA)认可作为药品的辅助原料和修饰剂。蛋白质类药物经PEG修饰后，分子量增加，肾小球的滤过率减少，PEG的屏障作用保护了蛋白质不易被蛋白水解酶水解，同时减少了中和抗体的产生，这些均有助于蛋白质类药物生物半衰期的延长。目前已有多种PEG修饰的蛋白质类药物上市销售。但PEG修饰同时也可能影响蛋白质的生物学活性，其影响大小与修饰剂、修饰条件及蛋白质本身的性质有关。对于具体的蛋白质，其最佳修饰需通过制备PEG修饰的蛋白质及生物活性研究来决定。合成小分子多肽的PEG修饰研究起步较晚，但已引起不少研究者的关注。
【发明内容】
[0005]发明目的
本发明针对mPEG-SC-PRO-THR-THR-ASN-ARG做了进一步研究，发现其在降低给药频率的情况下对多种肿瘤有治疗作用。
[0006]技术方案
一种聚乙二醇修饰的基质金属蛋白酶-2抑制剂多肽，其特征在于其序列为mPEG-SC1(lk-PRO-THR-THR-ASN-ARG。mPEG-SC 的分子量为 5000-20000。一种聚乙二醇修饰的基质金属蛋白酶-2抑制剂多肽在制备治疗肿瘤药物中的应用，其特征在于所述的肿瘤为起源于人的胃部、皮肤、头颈部、甲状腺、胰腺、肺脏、食管、乳腺、肾脏、胆囊、结肠/直肠、卵巢、子宫、子宫颈、前列腺、膀胱、睾丸的原发/继发的癌或肉瘤。
[0007]有益效果
为了延长多肽PRO-THR-THR-ASN-ARG的半衰期，我们采用不同分子量的聚乙二醇(PEG)对此多肽进行了修饰，发现mPEG-SC1(lk-PRO-THR-THR-ASN-ARG具有延长半衰期，但又不影响其体内外活性的特点。一个多肽的修饰产物属于一个新型分子，往往与修饰前的分子在活性上产生不同的效果。本发明针对上述聚乙二醇修饰的基质金属蛋白酶-2抑制剂mPEG-SClok-PRO-THR-THR-ASN-ARG对多种肿瘤有治疗作用进行了大量的体内外活性研究，发现给药频率降低的情况下，mPEG-SC1Qk-PRO-THR-THR-ASN-ARG对抑制多种肿瘤生长保持了很好的活性，拓展了其社会价值和经济价值。
【具体实施方式】
[0008]实施例1
聚乙二醇修饰的基质金属蛋白酶-2抑制剂对体外培养肿瘤细胞的生长和存活IC50。
[0009]采用MTT比色法。将对数生长的U937细胞，以1.0X 105加入96孔培养板中，培养24h，实验孔、阳性药物对照孔分别加入不同浓度的实验药物聚乙二醇修饰的基质金属蛋白酶-2抑制剂和阳性对照药物紫杉醇；空白组加入相同体积的溶剂。每孔设五个复孔，培养4811，分别在他、211、811、1411、2011、2411、3611、，4811每孔加入MTT，作用4h后，加入DMS0，孵育30min，在酶标仪620nm处测定吸光度A值，按公式肿瘤细胞生长抑制率=(1-实验组吸光值/对照组吸光值)X 100%。计算出实验药物的IC50为7.64 μ Μ。
[0010]实施例2
用肿瘤模型检测聚乙二醇修饰的基质金属蛋白酶-2抑制剂的体内活力。
[0011]建立U937肿瘤模型，阳性对照药物紫杉醇；空白组加入相同体积的溶剂，实验组设3个剂量:0.75、1.5μΜ、3μΜ mg/Kg。21天后，观察小鼠存活数量，计算存活率。结果显示，聚乙二醇修饰的基质金属蛋白酶-2抑制剂可有效地保护小白鼠，提高荷瘤小鼠的生存率，生存率达到76.09%ο
【权利要求】
1.一种聚乙二醇修饰的基质金属蛋白酶-2抑制剂多肽，其特征在于其序列为mPEG-SClok-PRO-THR-THR-ASN-ARG。
2.根据权利要求1所述的一种聚乙二醇修饰的基质金属蛋白酶-2抑制剂多肽，其特征在于所述的mPEG-SC的分子量为10000。
3.根据权利要求1所述的一种聚乙二醇修饰的基质金属蛋白酶-2抑制剂多肽在制备治疗肿瘤药物中的应用，其特征在于所述的肿瘤为起源于人的胃部、皮肤、头颈部、甲状腺、胰腺、肺脏、食管、乳腺、肾 脏、胆囊、结肠/直肠、卵巢、子宫、子宫颈、前列腺、膀胱、睾丸的原发/继发的癌或肉瘤。
【文档编号】A61K38/08GK103923171SQ201410020872
【公开日】2014年7月16日 申请日期:2014年1月17日 优先权日:2014年1月17日
【发明者】邢将军, 许刘华, 彭立军, 任世阔, 华俊国, 曹铭, 刘加根, 刘明明, 汪士金, 施新华, 刘伟峰, 严明 申请人:南通诚信氨基酸有限公司