基质金属蛋白酶9的抗体的制作方法
【专利说明】
[0001] 本申请是申请日为2011年8月26日、申请号为201180041422. 8、发明名称为"基 质金属蛋白酶9的抗体"的发明专利申请的分案申请。
[0002] 相关申请案的夺叉参考
[0003] 本申请案主张2010年8月27日申请的美国临时申请案第61/377, 886号的优先 权，所述申请案以全文引用的方式并入本文中。
技术领域
[0004] 本发明是在细胞外酶、细胞外基质酶、蛋白酶和免疫学的领域内。
【背景技术】
[0005] 基质金属蛋白酶（MMP)是参与形成和重塑细胞外基质的细胞外酶家族。这些酶含 有保守催化域，在所述保守催化域中，锌原子由三个组氨酸残基配位。当前，已知这一家族 的超过20名成员，所述成员被组织成包括胶原酶、明胶酶、溶基质素（stromelysin)、基质 溶素（matrilysin)、釉质溶素（enamelysin)和膜MMP在内的若干群组。
[0006] MMP2和MMP9属于基质金属蛋白酶的明胶酶群组。除了含有大多数MMP所共有的 信号肽、前肽、催化、锌结合和血液结合素样域以外，明胶酶还含有多个纤维结合蛋白样域 和〇-糖基化域。
[0007] 异常活性的某些MMP已显示在肿瘤生长、癌转移、发炎和血管疾病中起作 用。参见，例如胡（Hu)等人（2007)自然评论：药物发现（Nature Reviews:Drug Discovery) 6:480-498。因此，在特定治疗环境中会需要抑制一种或一种以上MMP的活性。 然而，某些其它MMP的活性常为正常功能所必需。由于大多数MMP抑制剂靶向保守催化域， 且因此抑制许多不同的MMP，故其治疗性使用已引起因为必需的非致病相关MMP受到抑制 而导致的副作用。
[0008] 纵使有这一问题，已证明还是难以开发对特定MMP具有特异性的抑制剂，因为酶 促活性的抑制通常需要抑制剂靶向催化域。因此，基质金属蛋白酶酶促活性的大多数抑制 剂很可能与一种以上MMP反应，归因于所述一种以上MMP的催化域中的同源性。因而，仍然 存在对特异性抑制单个MMP的催化活性且不与其它MMP反应的治疗试剂的需求。
【发明内容】
[0009] 本发明提供了涉及结合到基质金属蛋白酶-9 (MMP9)蛋白质（MMP9也称为明胶 酶-B)上的结合蛋白（例如抗体和其抗原结合片段）的组合物和使用方法，其中所述结合 蛋白包含免疫球蛋白（Ig)重链（或其功能片段）和Ig轻链（或其功能片段）。本发明另 外提供特异性结合到MMP9上且不结合到其它相关基质金属蛋白酶上的MMP9结合蛋白。所 述MMP9结合蛋白应用于有必要或需要获得MMP9的特异性调节（例如抑制）（例如不直接 影响其它基质金属蛋白酶的活性）的应用中。因此，在本发明的某些实施例中，抗MMP9抗 体是MMP9的活性的特异性抑制剂。具体地说，本文所公开的MMP9结合蛋白将适用于抑制 MMP9,同时允许其它相关基质金属蛋白酶的正常功能。
[0010] 因此，本发明尤其提供：
[0011] 1. 一种MMP9结合蛋白，其包含免疫球蛋白重链或其功能片段和免疫球蛋白轻链 或其功能片段，其中所述蛋白不结合到除MMP9以外的基质金属蛋白酶上。
[0012] 2.根据实施例1所述的蛋白质，其中所述重链包含选自SEQ ID NO: 13到SEQ ID NO: 15中的一者或一者以上的互补决定区（⑶R)，且所述轻链包含选自SEQ ID NO: 16到SEQ ID NO: 18中的一者或一者以上的⑶R。
[0013] 3.根据实施例2所述的蛋白质，其中所述重链包含选自由SEQ ID NO: 3或SEQ ID N0:5到SEQ ID N0:8组成的群组的可变区，且所述轻链包含选自由SEQ ID N0:4或SEQ ID N0:9到SEQ ID NO: 12组成的群组的可变区。
[0014] 4.根据实施例1所述的蛋白质，其中所述重链是IgG。
[0015] 5.根据实施例1所述的蛋白质，其中所述轻链是K链。
[0016] 6.根据实施例1所述的蛋白质，其中所述蛋白质对MMP9的结合抑制了 MMP9的酶 促活性。
[0017] 7.根据实施例6所述的蛋白质，其中所述抑制是非竞争性的。
[0018] 8.根据实施例1所述的蛋白质，其中所述重链由具有选自由SEQ ID N0:19到 SEQ ID N0:22组成的群组的核苷酸序列的聚核苷酸编码，且所述轻链由具有选自由SEQ ID N0:23到SEQ ID N0:26组成的群组的核苷酸序列的聚核苷酸编码。
[0019] 9. -种载体，其包含一种或一种以上聚核苷酸，所述聚核苷酸具有选自由SEQ ID NO: 19到SEQ ID NO:26组成的群组的核苷酸序列。
[0020] 10. -种细胞，其包含根据实施例9所述的载体。
[0021] 11. 一种医药组合物，其包含根据实施例1所述的蛋白质。
[0022] 12. -种医药组合物，其包含根据实施例9所述的载体。
[0023] 13. -种医药组合物，其包含根据实施例10所述的细胞。
【附图说明】
[0024] 图1展示小鼠单克隆抗MMP9抗体（AB0041)的重链可变区的氨基酸序列，以及重 链的人类化变异体的氨基酸序列（VH1-VH4)，所述氨基酸序列经比对以展示由人类化得到 的构架氨基酸序列中的差异。CDR以斜体形式展示，且人类化变异体中与亲本小鼠单克隆相 比不同的氨基酸加下划线。
[0025] 图2展示小鼠单克隆抗MMP9抗体（AB0041)的轻链可变区的氨基酸序列，以及这 一轻链的人类化变异体的氨基酸序列（VL1-VL4)，所述氨基酸序列经比对以展示由人类化 得到的构架氨基酸序列中的差异。CDR以斜体形式展示，且人类化变异体中与亲本小鼠单克 隆相比不同的氨基酸加下划线。
[0026] 图3展示MMP9蛋白质的示意图。
【具体实施方式】
[0027] 除非另外指明，否则本发明的实践采用细胞生物学、毒理学、分子生物学、生物化 学、细胞培养、免疫学、肿瘤学、重组DNA和相关领域中的标准方法和常规技术，这是处于 此项技术的技能范围内的。所述技术描述于文献中，且从而可供所属领域的技术人员使 用。参见，例如阿尔贝茨B.(Alberts，B.)等人，"细胞分子生物学（Molecular Biology of the Cell) "，第5版，加兰科学出版公司（Garland Science)，纽约州纽约（New York, NY), 2008 ;富特D. (Voet, D.)等人"基础生物化学：分子水平下的生命（Fundamentals of Biochemistry:Life at the Molecular Level)"，第3版，约翰威立父子出版公司（John Wiley&Sons)，新泽西州霍伯肯（Hoboken, NJ)，2008 ;萨姆布鲁克 J. (Sambrook, J.)等 人，"分子克隆：实验室手册（Molecular Cloning:A Laboratory Manual)",第3版，冷泉港 实验室出版社（Cold Spring Harbor Laboratory Press)，2001 ;奥苏贝尔F. (Ausubel，F.) 等人，"分子生物学实验指南（Current Protocols in Molecular Biology)"，约翰威立 父子出版公司，纽约，1987和定期更新；弗莱士尼R. I. (Freshney，R. I.)，"动物细胞培养： 基础技术手册（Culture of Animal Cells:A Manual of Basic Technique)"，第 4版， 约翰威立父子出版公司，新泽西州萨默塞特（Somerset, NJ), 2000 ;和"酶学方法（Methods in Enzymology) "丛书，学术出版社（Academic Press),加利福尼亚州圣地亚哥（San Diego, CA)〇
[0028] 此外，参见例如"免疫学实验指南（Current Protocols in Immunology) "，（R科 伊科（R.Coico)丛书编辑），威立出版公司（Wiley)，2010年8月最新更新。
[0029] MMP9结合蛋白
[0030] 本发明提供结合到基质金属蛋白酶-9 (MMP9)蛋白质（MMP9也称为明胶酶-B)上 的结合蛋白（例如抗体和其抗原结合片段）。本发明的结合蛋白通常包含免疫球蛋白（Ig) 重链（或其功能片段）和Ig轻链（或其功能片段）。
[0031] 本发明另外提供特异性结合到MMP9上且不结合到其它基质金属蛋白