具有群体感应系统抑制作用的短小芽孢杆菌突变菌株的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种具有对群体感应系统高效抑制作用的短小芽孢杆菌的突变菌株，其保藏编号为CCTCC?NO.2013534。本发明优点在于：本发明以F3-1菌株为出发菌株，首次通过诱变育种的方法筛选出能够稳定遗传的对QS信号分子高效敏感的突变菌株菌株FF1-2，该发明用于制备高效防治水产细菌性病害的微生物制剂，为进一步从干扰细菌群体感应系统的角度研究防治水产细菌性病害的新方法奠定了基础。
【专利说明】具有群体感应系统抑制作用的短小芽孢杆菌突变菌株
【【技术领域】】
[0001]本发明涉及微生物领域，具体地说，是一种具有群体感应系统抑制作用的短小芽孢杆菌微生物制剂。
【【背景技术】】
[0002]细菌性疾病一直是困扰水产养殖业发展的重要原因之一。近年来，高密度集约化的生产模式在促进水产业提高产量的同时，也使得细菌疾病发生的机会增大、频率增加、危害加大；此外，抗生素使用导致的耐药性、药物残留以及对生态环境的破坏也成为社会关注的焦点。因此，寻找抗生素的替代药物、探索新的防治方式已经成为水产病害防治研究重要方向之一。群体感应(Quorum sensing,简称QS)是指细菌能自发产生并释放一些特定的信号分子，感知自身浓度的变化，进而调控相关基因的表达。目前，调节细菌群体感应的信号分子主要有三种，(a) N-酰基高丝氨酸内酯(AHLs)，是广泛存在于革兰氏阴性细菌中的群体感应的信号分子；(b)自体诱导肽(Autoinducing peptides, AIP), AIP是一类短肽分子，是革兰氏阳性细菌中常见的信号分子；(c)自体诱导物II类分子(Auto inducing II，AI2)，是以费氏弧菌(Vibrio fischeri)为代表的由IuxS酶催化的AI2系统的信号分子。研究表明，在革兰氏 阴性细菌中，如铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)等，其生物被膜形成、有害毒素产生、致病因子释放等行为均受到AHLs类信号分子的调节。Dong (2000)等人在腊样芽孢杆菌(Bacillus cereus)中发现了 aiiA基因，能够合成AHLs信号分子降解酶，阻断QS信号分子在细菌间的传递；尹守亮等(2009)从胶州湾海域筛选出一株能够降解AHLs信号分子的真菌，表明海洋微生物也可以作为QS抑制剂的潜在研究对象；Bhavanath等(2013)发现紫杉状海门冬(Asparagopsistaxiformis)的粗提物能够降解AHLs信号分子，并且对铜绿假单胞菌生物膜有一定的抑制作用。Defoirdt等(2011)首次从南美白对虾和海水鲈鱼等水产动物的肠道中分离出了能够抑制哈氏弧菌(Vibrio harveyi) QS信号分子传递的芽孢杆菌，Natrah等(2011)分离出一株能够抑制AHLs信号分子的微藻，该微藻能够阻断哈氏弧菌QS系统，降低其致病力。这些研究为探讨从群体感应角度防控水产细菌性疾病提供了理论依据和科学数据的支撑。芽孢杆菌(Bcaillus sp)具有易生产、便运输、耐储藏等特点，在水产养殖上可以起到净化水质、防治疾病和促进生长等作用，是常用的益生微生物菌株。因此，筛选能够抑制AHLs信号分子的芽孢杆菌，并应用于水产养殖业上，必将有着广阔的前景。
[0003]紫色杆菌(Chromobacteria violaceum)是一种革兰氏阴性菌,其色素的表达受群体感应AHLs信号分子严格调控，一旦信号分子被抑制，紫色便会褪去。因此，紫色杆菌常用作群体信号分子降解物质筛选的指示菌株。但是关于一种具有群体感应系统抑制作用的短小芽孢杆菌微生物制剂目前还未见报道。
【
【发明内容】
】
[0004]本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种具有群体感应系统高效抑制作用的短小芽孢杆菌。
[0005]本发明的第二个目的是，提供一种具有群体感应系统高效抑制作用的短小芽孢杆菌的应用。
[0006]本发明的第三个目的是，提供一种具有群体感应系统高效抑制作用的短小芽孢杆菌微生物制剂。
[0007]本发明的第四个目的是，提供一种具有群体感应系统高效抑制作用的短小芽孢杆菌微生物制剂。
[0008]为实现上述目的，本发明采取的技术方案是:一种具有群体感应系统抑制作用的短小芽孢杆菌，所述的具有群体感应系统抑制作用的短小芽孢杆菌的保藏编号为CCTCCM2013534。
[0009]为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是:所述的具有群体感应系统抑制作用的短小芽孢杆菌在防治水产细菌性病害中的应用。
[0010]所述的具有群体感应系统抑制作用的短小芽孢杆菌用于制备防治水产细菌性病害的微生物制剂。 [0011]所述的具有群体感应系统抑制作用的短小芽孢杆菌抑制细菌群体感应。
[0012]为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是:一种具有群体感应系统抑制作用的短小芽孢杆菌微生物制剂，所述的微生物制剂以所述的具有群体感应系统抑制作用的短小芽孢杆菌为活性成分。
[0013]为实现上述第四个目的，本发明采取的技术方案是:一种具有群体感应系统抑制作用的短小芽孢杆菌微生物制剂，所述的微生物制剂以权利要求1所述的具有群体感应系统抑制作用的短小芽孢杆菌的发酵液为活性成分。
[0014]本发明优点在于:
[0015]本发明以紫色杆菌为筛选模型，利用“T”型划线法和滤纸片法筛选出一株能够抑制紫色杆菌紫色色素产生的菌株F3-1，具有抑制细菌群体感应的作用，该发明以F3-1菌株为出发菌株，首次通过诱变育种的方法筛选出能够稳定遗传的对QS信号分子高效敏感的突变菌株菌株FF1-2，用于制备高效防治水产细菌性病害的微生物制剂，为进一步从干扰细菌群体感应系统的角度研究防治水产细菌性病害的新方法奠定了基础。
[0016]【微生物信息】
[0017]本发明的一个优选实施方式以及【具体实施方式】中所使用的具有群体感应系统抑制作用的短小芽孢杆菌FF1-2 (Bacillus pumilus FF1-2)已经保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC N0.2013534，保藏地址为:中国武汉市武汉大学，保藏日期为2013年11月03日。
【【专利附图】
【附图说明】】
[0018]图1.“T” 型划线培养；注:1(X93) ；2(F3-1) ；3(X77) ;4 (F6-5)，5 (X3914)；6 (F6-4) ;7(F3-2)。
[0019]图2.滤纸片扩散法；注:1(F3-1) ；2(X77) ；3(X3914) ;4(F6_4) ;5(F6_5)；6 (F3-2) ；7(x93)。
[0020]图3.菌株F3-1蛋白粗提液对紫色色素产生的抑制；注:1 (蛋白酶K) ；2 (青霉素)；3 (蒸馏水)；4 (粗提蛋白)。[0021]图4.菌株F3-1粗提物对紫色色素的抑制作用。
[0022]图5.不同浓度的菌株F3-1粗提物对紫色色素作用的OD585值。
[0023]图6.菌株F3-1的16S rDNA电泳图。
[0024]图7.F3-1 16Sr DNA序列的系统发育树。
[0025]图8.菌株F3-1扫描电镜图片4000倍。
[0026]图9.变异后不同菌株对紫色色素的影响。
[0027]图10.菌株F3-1和FFl_2aiiA基因电泳图。
[0028]图11.菌株 F3-1 和菌株 FF1-2SDS-PAGE 结果:注:1:菌株 F3-l、2:菌株 FF1-2。【【具体实施方式】】
[0029]下面结合实施例对本发明提供的【具体实施方式】作详细说明。
[0030]实施例
[0031]1.材料与 方法
[0032]1.1 材料
[0033]1.1.1菌种与活化
[0034]紫色杆菌(Chromobacteriym violaceum)购买自美国ATCC ;芽抱杆菌菌株X77、X93、X3914为本实验室保存。
[0035]将冻干粉保藏的紫色杆菌转接于5ml的LB液体培养基中，26°C培养24h ;再取ImL菌液转移到5mLLB液体培养基中26°C培养24h;用接种环占取菌液在LB平板中划线分离，挑取单个紫色菌落在LB斜面上划线保存以备用。
[0036]1.1.2培养基与试剂
[0037]营养琼脂培养基(购买自上海鼎国)，LB培养基(购买于上海生工)；细菌基因组抽提试剂盒(购买于上海生工)；PCR试剂:Master Mix2x，通用引物1492r、27f，(上海美吉生物技术公司)，D2000marker (购买于北京天根),亚硝酸钠(NaNO2)15
[0038]1.1.3主要仪器设备
[0039]超净工作台(SW-CJ-1F型，苏州净化设备有限公司)；高压灭菌(YXQ-LS-18SI，上海博讯实业有限公司)；生化培养箱(SPX-100B-Z型，上海博讯实业有限公司)；离心机(TDL80-2B型，上海安亭科学仪器有限公司)；电泳仪(DYY-6C型，北京市六一仪器厂)，电泳槽(DYCP-32B，北京市六一仪器厂);凝胶成像仪(GEL DOC XR型，Bio-Rad)，分光光度计(722型，上海精密仪器仪表有限公司)。
[0040]1.2 方法
[0041]1.2.1芽孢杆菌分离纯化
[0042]参照Olsson 等的方法(详见:01ssonC, WesterdahlA, ConwayPL.1ntestinalcolonization potential of turbot(Scophthalmus maximus L.) and dab (Iimanda)associated bacteria with inhibition effects against Vibrio anguillarum[J].Appl.Environ.Micro, 1992, 58 (2):551-556.)。鲫鱼首先用75%的酒精进行体表消毒；解剖，取出肠道，75%酒精棉球擦拭肠管外壁，无菌生理盐水冲洗。称重后按1: 10(w/v)的比例加入灭菌生理盐水混合，用灭菌匀浆器充分研磨均匀，研磨的样品设为10_\再用灭菌生理盐水对KT1样品进行梯度稀释至10_6，各稀释度样品均置于漩涡混合仪上振荡均匀并置于水浴锅中，80°C水浴lOmin，分别取各稀释度菌液0.1mL涂布于营养琼脂培养基平板，28°C培养24~48h。挑出单菌落，分离纯化，经革兰氏染色挑选革兰氏阳性菌。
[0043]1.2.2筛选群体感应抑制活性芽孢杆菌
[0044]1.2.2.1 “T” 型划线法
[0045]参照Chu 等方法(详见:Chu ff, Lu F, Zhu W and Kang C.1solation andcharacterization of new potential probiotic bacteria based on quorum-sensingsystem.J Appl Microbiol [J].2011,110(1):202-208.)用无菌棉签挑取少量紫色杆菌(Chromobacteria violaceum)菌液在LB平板上连续涂抹,旋转90度后继续用无菌棉签占取一定量的待测芽孢杆菌菌液在平板上涂抹，两菌株划线垂直成“T”型。若靠近芽孢杆菌附近的紫色杆菌的紫色褪去，则表明待测菌株具有抑制AHLs信号分子的作用。
[0046]1.2.2.2 滤纸片法
[0047]参照单文荣等方法(详见:单文荣，李俊霞，刘花粉.滤纸片法筛选不同活性物对棉花黄萎病菌抑制效果研究.中国农学通报，2010，26 (19):285-289.)将待测菌株置于营养肉汤液体培养基28°C培养24h后，测定菌液浓度为4.2X108cfu/mL，取15mL10 OOOr/min离心15min，并取上清液通过0.22 μ m滤膜，保留滤液；取0.1mL培养24h的紫色杆菌(Chromobacteria violaceum)菌液(菌液浓度为 3.1 X 108cfu/mL),涂布 LB 平板上；吸取IOuL待测菌株滤液滴到滤纸片上，吹 干后反扣在涂有紫色杆菌菌液的平板上，将培养皿于26°C恒温培养箱中倒置培养48h，每个样品做3组平行。如果滤纸片周围出现不透明的白色浑浊圈，则表明筛选样品中含有QS抑制物。
[0048]1.3芽孢杆菌菌株F3-1 (保藏编号CCTCC N0.2013240)的粗提物对紫色菌素产量的影响
[0049]1.3.1芽孢杆菌菌株F3-1的粗提物的制备
[0050]将分离纯化好的芽孢杆菌分别接种到含有15mL发酵培养基的50mL螺口管中，28°C、120r/min振荡培养6~10h。将菌体及上清发酵液超声破碎，加入15mL乙酸乙酯萃取，充分振荡后，静置萃取过夜，8 000r/min离心，取上层有机相，用旋转蒸发仪40°C浓缩至干，干燥物用甲醇溶解至100g/L。
[0051]1.3.2紫色杆菌紫(Chromobacteria violaceum)紫色菌素的提取
[0052]将过夜培养的紫色杆菌用新鲜的LB培养基稀释到0D600~0.05，分别分装到5组试管中，每管2mL，每组3个平行，每组分别加入终浓度0、50、100、200、300mg/L的粗提物，30°C、120r/min振荡培养24h。然后提取紫色菌素。
[0053]紫色菌素提取方法:吸取ImL上述培养好的菌液于1.5mL离心管中，12000r/min离心10min，使紫色菌素和菌体充分沉淀。弃上清液，加ImL 二甲基亚砜(DMSO)于1.5mL离心管中，涡旋，充分振荡使紫色菌素溶解于DMSO中。12 OOOr/min再次离心10min，沉淀菌体及碎屑，测定上清585nm处的光吸收值。
[0054]1.4硫酸铵沉淀法分离蛋白
[0055]参考宋福平的方法(详见:宋福平，刘邮洲.枯草芽孢杆菌Bs-916的抑菌活性及其抑菌物质初探.农药学学报2007，9 (I):92-95.)，过夜培养的芽孢杆菌菌液50mL，离心机40C，10 000r/min离心15min，取上清液，然后分别通过0.22 μ m滤膜，然后向其中加入固体硫酸铵至80%饱和度，用磁力搅拌器搅匀，静置过夜(4°C )后，10 000r/min离心20min，弃上清液，收集沉淀，沉淀分别用5mL (PH值7.4)的PBS溶解后，置于分子量8000至10 000道尔顿的透析袋4°C过夜透析，产物即为分离蛋白的粗提产物。
[0056]1.5粗提蛋白QS抑制效果试验
[0057]吸取10 μ L粗提蛋白溶液滴到滤纸片上，置于涂有紫色杆菌(Chromobacteriaviolaceum)菌液的平板上，将培养皿置于26°C恒温培养箱中倒置培养48h，每个样品做3组平行，并做蒸懼水、青霉素(0.lmg/L)蛋白酶K (20mg/mL)抑制试验。如果滤纸片周围将出现不透明的白色浑浊圈，则表明筛选样品中含有AHLs信号分子抑制因子。
[0058]1.6菌种鉴定
[0059]1.6.1 16Sr DNA 鉴定
[0060]16Sr DNA扩增用通用引物，正向引物为27f，反向引物为1492r。引物的序列为:27f:5 ' -AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3 ' (SEQ ID N0.1) ；1492r:5 ' -TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3 ' (SEQ ID N0.2)。50 μ L 的 PCR 反应体系:MasterMix25 μ L，引物 27fl μ L，引物 1492rl μ L，模板 DNAl μ L, ddH2022 μ L。PCR 反应条件为:95°C预变性5min，95°C变性lmin，55°C复性lmin，72°C延伸1.5min,30个循环；最后72°C延伸IOmin0 PCR扩增产物用1.7%琼脂糖凝胶电泳进行检测，用DNA Marker (D2000，购买自上海生工)作为参照。
[0061]1.6.2序列分析与系统发育进化树的构建
[0062]所测序列在NCBI 网站(http://www.ncb1.nlm.nih.gov)的 BLAST 程序在线比对测序结果。根据比对的结果，从数据库选取与所分析的细菌基因序列同源性较高的已知相关序列，利用软件Clustalx和Mega4.0进行多重比较后通过最大简约法构建系统发育树。
[0063]1.6.3电镜样品制备
[0064]挑取单菌落置于营养肉汤液体培养基中过夜24h，取ImL于1.5ml离心管中，8，000r/min离心lmin，使菌体贴壁，然后用超纯水润洗两次后，4°C下置于2.5%的戊二醛中过夜固定后，用5%、25%、50%、80%、95%酒精脱水，每次间隔15至20min、干燥，喷金后用扫描电镜观察。
[0065]1.7诱变育种
[0066]1.7.1短小芽孢杆菌F3-1生长曲线的绘制
[0067]将筛选出的短小芽孢杆菌F3-1在营养琼脂斜面上转接两次，用接种环接种于装有5mL营养肉汤液体培养基的试管中，28°C、160r/min培养24h后，以1%接种量接种至装有IOOmL营养肉汤液体培养基的250ml三角瓶中。每隔2小时测定600nm波长处测定OD值，绘制芽孢杆菌生长曲线。
[0068]1.7.2诱变育种
[0069]紫外线(UV)诱变:取0.1mL培养24h对数期，密度为1.7 X 108CFU/mL的菌液涂布于营养琼脂平板上。实验前20min打开紫外灯使光波稳定，把涂布菌液的平板置于紫外灯下30cm处分别照射5min、lOmin、15min、20min、25min,照射完毕后置于28°C恒温培养箱中过夜24h。挑取单菌落，分离培养。
[0070]亚硝酸钠(NaNO2)诱变:取IOml培养24h的短小芽孢杆菌F3_l菌液，按照浓度为5g/L、10g/L、15g/L、20g/L、25g/L亚硝酸钠溶液分别加入lmL，28°C过夜培养24h后，涂布于营养琼脂平板上，28 0C，24h后，挑取单菌落，分离培养。[0071]1.7.3突变株的筛选
[0072]将上述诱变育种得到的菌株，在营养琼脂上培养后获得单菌落转接到斜面上，在28°C条件下,培养24h后再转接到IOmL营养肉汤培养基中过夜培养,然后将菌液置于离心机10,000r/min,然后透过0.22um针头滤器,获得不含菌体的粗提液,在半径为5mm的滤纸片上吸取20uL的粗提液，置于涂布紫色杆菌菌液的LB平板上，根据褪色圈的大小来确定突变效果。
[0073]1.7.4蛋白产量测定
[0074]参考利用Bradford?3]法测定菌株蛋白产量
[0075](1)取12支1.5ml离心管，按照下表的比例分别加入个溶液。
[0076](2)取一定量的BSA蛋白质标准液(5mg/ml)，用IxPBS稀释为终浓度200ug/ml
[0077](3)将样品用IxPBS适当稀释
[0078](4)取若干只1.5ml离心管分别加入上表中0_7号管中各浓度的蛋白质溶液和样品稀释液个IOOul。
[0079](5)再在各管中加入1mlBradford试剂,迅速混匀。 [0080](6) 5min后，以O号管为空白对照,在分光光度计上册各管的A595值。
[0081](7)重复步骤4-6，分别甲酸各族编号的A595平均值
[0082](8)根据A595平均值为纵坐标，对应蛋白浓度为横坐标，利用EXCEL绘制标准曲线
[0083]1.7.5芽孢杆菌F3-1突变菌株对紫色杆菌生长的影响
[0084]用新鲜LB将培养至对数期的紫色杆菌菌液稀释至0D_ ^0.05,每组3个平行；每组试管中加入突变菌株粗提物至终浓度100mg/L，粗提物制备方法:将分离纯化好的芽孢杆菌分别接种到含有50mL发酵培养基的250mL三角烧瓶中，28°C、120r/min振荡培养6~IOh0将菌体及上清发酵液超声破碎，加入15mL乙酸乙酯萃取，充分振荡后，静置萃取过夜，8000r/min离心，取上层有机相，用旋转蒸发仪40°C浓缩至干，干燥物用甲醇溶解至100g/L0
[0085]每隔2h测定OD6tltl吸光值，检测粗突变菌株菌提物对于紫色杆菌生长的影响。26°C、120r/min摇床培养；每隔2h分别测定各管OD6tltl吸光值，直至对数后期；以培养时间为横坐标，600nm处的吸光值为纵坐标。
[0086]1.7.6芽孢杆菌F3-1突变菌株对紫色菌素的抑制作用
[0087]将过夜培养的紫色杆菌用新鲜的LB培养基稀释到0D_ ^0.05,分别分装到试管中，每管2mL，每组3个平行，每组分别加入终浓度100mg/L的粗提物，26 °C、120r/min振荡培养16h。然后提取紫色菌素方法，提取方法:吸取ImL上述培养好的菌液于1.5mL离心管中，12,000r/min离心10min,使紫色菌素和菌体充分沉淀。弃上清液，加ImL 二甲基亚砜(DMSO)于1.5mL离心管中，涡旋，充分振荡使紫色菌素溶解于DMSO中。12，000r/min再次离心10min，沉淀菌体及碎屑，测定上清585nm处的光吸收值。
[0088]1.8不同环境因子条件下突变菌株对紫色色素抑制能力作用
[0089]1.8.1不同培养时间条件下突变菌株对紫色色素抑制能力作用
[0090]菌株恒温振荡培养，每隔2h取样，参照1.7.5方法测定对紫色色素的抑制作用。
[0091]1.8.2不同pH条件下突变菌株对紫色色素抑制能力的影响
[0092]菌株培养24h后制备粗提物，用0.lm/L的HCL或0.lm/L的NaOH调节粗提物的pH值分别为3、5、7、9、11，作用Ih后将pH回调至7，按1.7.5方法测定对紫色色素的抑制作用。
[0093]1.8.3不同盐度条件下突变菌株对紫色色素抑制能力的作用
[0094]用氯化钠调节盐度，配制盐度分别0%、0.5%、1%、2%、5%、10%的使用培养基，将F3-1和FF1-2别接种于上述培养基中，28°C恒温振荡培养一定时间，按照1.7.5方法测定盐度变化对紫色色素抑制能力的影响
[0095]1.8.4不同温度条件下突变菌株对紫色色素抑制能力的作用
[0096]按照1.7.5方法制备粗提物后，分别在20°C处理24h，30°C，处理24h，40°C处理12h，50°C处理lh，60°C处理30mins，后加入到紫色杆菌菌液中过夜培养24测定紫色菌素OD585 值。
[0097]1.8.5突变菌株稳定性测定
[0098]将筛选出的效果最好的诱变菌株在固定培养基上连续培养转接25次，利用滤纸片法，每转接5次测定其褪色能力，另外按照1.7.5中提到的方法检测对紫色色素的抑制作用。
[0099]1.9aiiA基因片段检测
[0100]根据NCBI公布的aiiA基因序列，利用Primer Premier5.0设计引物正向引物为aiiA f，反向引物为aiiA r。引物的序列为:
[0101 ] F(5-ATGGGATCCATGACAGTAAAGAAGCTTTAT-3)andaiiAR(5-GTCGAA—TTCCTCAACAAGATACTCCTAATG-3)。50uL 的 PCR 反应体系=Master Mix25uL，引物 aiiA Flum/L，引物 aiiARlum/L，模板DNAlum/L，ddH2022uL。PCR 反应条件为:94°C预变性 lOmin，94°C变性 30S，52°C复性30s，72°C延伸1.0min, 30个循环；最后72°C延伸5min。PCR扩增产物用1.7%琼脂糖凝胶电泳进行检测，用DNA Marker (DL2000，上海生工)作为参照。
[0102]突变菌株蛋白粗提液SDS-PAGE分析:参考赵永方等对突变菌株粗蛋白粗体液SDS-PAGE凝胶电泳，并于凝胶分析仪上成像分析。
[0103]2结果与分析
[0104]2.1筛选结果
[0105]从鲫鱼肠道中分离出10株在80°C水浴中仍能存活的细菌，结果见表1。其中菌株F3-1、F3-2、F6-4、F6-5革兰氏染色为阳性，其余六株细菌染色为阴性。
[0106]表1鲫鱼肠道芽孢杆菌分离结果 [0107]
【权利要求】
1.一种具有群体感应系统抑制作用的短小芽孢杆菌，其特征在于，所述的具有群体感应系统抑制作用的短小芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC N0.2013534或其直接传代物。
2.根据权利要求1所述的具有群体感应系统抑制作用的短小芽孢杆菌在防治水产细菌性病害中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的具有群体感应系统抑制作用的短小芽孢杆菌用于制备防治水产细菌性病害的微生物制剂。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的具有群体感应系统抑制作用的短小芽孢杆菌抑制细菌群体感应。
5.一种具有群体感应系统抑制作用的短小芽孢杆菌微生物制剂，其特征在于，所述的微生物制剂以权利要求1所述的具有群体感应系统抑制作用的短小芽孢杆菌为活性成分。
6.一种具有群体感应系统抑制作用的短小芽孢杆菌微生物制剂，其特征在于，所述的微生物制剂以权利要求1所述的具有群体感应系统抑制作用的短小芽孢杆菌的发酵液为活性成分。
【文档编号】A61P31/04GK103937698SQ201410030459
【公开日】2014年7月23日 申请日期:2014年1月23日 优先权日:2014年1月23日
【发明者】宋增福, 范斌, 陈彪, 张庆华 申请人:上海海洋大学