木犀草素在抑制细菌群体感应系统中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及医药技术领域。更具体地说，本发明设及木犀草素在抑制细菌群体感 应系统中的应用。
【背景技术】
[0002] 细菌生物膜度acterialBiofilm)是细菌在受到环境压力时（如抗生素）而形成 的具有特殊微环境的一种细菌群落，该群落可粘附于组织细胞或植入的器械上，形成临床 难W治愈的感染，同时生物膜内细菌较其浮游状态细菌对抗生素的耐药性提高10~1000 倍。生物膜是造成慢性感染及感染复发，并导致疾病迁延不愈的主要原因；也可导致细菌在 环境与宿主之间传播、并在宿主体内感染扩散及恶化。细菌生物膜的形成常发生于在临床 抗感染治疗中，抗生素给细菌施加的外部压力，成为目前临床抗感染治疗中所要面对的主 要挑战之一。因此，W细菌生物膜为祀点，研究预防、干预、治疗细菌生物膜相关感染的新药 成为抗菌感染研究的热点。
[0003] 金黄色葡萄球菌在浮游状态可被现有的多种抗生素所抑制（如万古霉素等），但 一旦形成显著的细菌生物膜，便呈现出极高的耐药性，具有较高的临床致死率。金黄色葡萄 球菌在生物膜的形成过程中，胞外蛋白、毒力因子的改变和调控是影响生物膜形成的重要 因素，同时也是金黄色葡萄球菌对宿主呈现毒力的主要原因。目前能够调控金黄色葡萄球 菌生物膜形成的药物非常缺乏。
[0004] 近些年来，我国科研工作者从中药、天然药物中分离、筛选获得了一些细菌生物膜 抑制分子化合物，比如金丝桃巧、黄琴巧、绿原酸、穿屯、莲内醋等。木犀草素是天然黄酬类化 合物，广泛存在于金银花、菊花、紫苏、荆芥等传统中草药中。研究表明木犀草素虽然对浮 游状态的金黄色葡萄球菌生长有抑制作用，但比较微弱。但是，我们发现木犀草素具有抑制 细菌生物膜形成的作用，使其有望成为一种特异的生物膜形成抑制剂而得到应用，该方面 的作用尚未见报道。
【发明内容】
阳〇化]作为各种广泛且细致的研究和实验的结果，本发明的发明人已经发现，在抑制金 黄色葡萄球菌的药物中适量添加木犀草素，可W有效抑制金黄色葡萄球菌的致病性，可有 效防止其在抗菌药物的压力下，向生物膜形成的耐药表型转归。基于运种发现，完成了本发 明。
[0006] 本发明的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优 点。
[0007] 本发明还有一个目的是提供木犀草素在制备抑制金黄色葡萄球菌生物膜形成的 药物中的应用，并为该应用提供具有应用价值的最小有效浓度。
[0008] 本发明还有一个目的是提供木犀草素在制备降低金黄色葡萄球菌毒力因子致病 性的药物中的应用。
[0009] 本发明还有一个目的是提供木犀草素在制备抑制金黄色葡萄球菌hi。和agrA基 因转录的药物中的应用。
[0010] 本发明还有一个目的是提供一种抑制金黄色葡萄球菌生物膜形成的药物组合物， 所述药物组合物中含有木犀草素。 W11] 为了实现根据本发明的运些目的和其它优点，本发明提供的技术方案为：
[0012] 木犀草素在制备抑制金黄色葡萄球菌生物膜形成的药物中的应用。
[0013] 优选的是，其中，木犀草素在抑制金黄色葡萄球菌生物膜形成中的最小有效浓度 为8yg/血。
[0014] 木犀草素在制备降低金黄色葡萄球菌毒力因子致病性的药物中的应用。
[0015] 优选的是，其中，所述金黄色葡萄球菌毒力因子为a-溶血素、凝固酶和肠毒素 A、B。
[0016] 优选的是，其中，木犀草素在降低金黄色葡萄球菌中凝固酶产生的最低有效浓度 为16yg/mL;木犀草素在降低金黄色葡萄球菌中a-溶血素产生的最低有效浓度为8yg/ mL，木犀草素在降低金黄色葡萄球菌中肠毒素A、B产生的最低有效浓度为8yg/mL。
[0017] 木犀草素在制备抑制金黄色葡萄球菌hla和agrA基因转录的药物中的应用。
[0018] 一种抑制金黄色葡萄球菌生物膜形成的药物组合物，所述药物组合物中含有木犀 草素。
[0019] 优选的是，其中，还包括：酸不溜根和蒲公英。
[0020] 优选的是，其中，W重量份计，所述药物组合物由W下组分组成：木犀草素7~9 ; 酸不溜根100~230和蒲公英1300~1800。
[0021] 优选的是，其中，所述组合物的应用条件为：抑值为5. 2-6. 9、溫度25-38°C。
[0022] 本发明从生物膜形成、毒力因子和基因转录水平=个方面考察了木犀草素抑制细 菌生物膜形成的生物活性，结果显示木犀草素可W抑制细菌生物膜的形成，降低细菌毒力 因子a-溶血素、凝固酶、肠毒素A、B的表达，并且抑制细菌hla和agrA基因转录，从而降 低葡萄球菌的耐药性及致病能力，因此，木犀草素可用于制备抑制细菌生物膜形成的药物。
[0023] 本发明中木犀草素的结构式为：
[0024]
[0025] 本发明中，木犀草素为有效成分可W直接使用，为了方便给药，可W加入药学上可 接受的常规辅料，通过常规制药方法制成片剂、胶囊剂、注射剂、散剂、颗粒剂。
[00%] 本发明至少包括W下有益效果：
[0027] 本发明提供的木犀草素在制备抑制金黄色葡萄球菌生物膜形成的药物中的应用， 并为该应用提供具有应用价值的最小有效浓度，为医学上制备特异的生物膜形成抑制剂提 供参考；
[0028] 本发明提供的木犀草素在制备降低金黄色葡萄球菌毒力因子致病性的药物中的 应用，并为该应用提供具有应用价值的最小有效浓度，为医学上制备特异的抑制金黄色葡 萄球菌毒力因子致病性的制剂提供参考；
[0029] 本发明提供的木犀草素在制备抑制金黄色葡萄球菌hla和agrA基因转录的药物 中的应用；为医学上制备特异的抑制金黄色葡萄球菌hla和agrA基因转录的制剂提供参 考；
[0030] 本发明提供的抑制金黄色葡萄球菌生物膜形成的药物组合物，所述药物组合物中 含有木犀草素，还包括酸不溜根和蒲公英，并且提供了一个比较优选的配比，其中，只需要 极少量的木犀草素就能够有效抑制金黄色葡萄球菌生物膜形成，降低其耐药性，同时应用 合适比例的酸不溜根和蒲公英能够对游离的金黄色葡萄球菌进行有效抑制甚至杀死菌体， 总体上有效抑制金黄色葡萄救球群体感应系统，有效减少其向耐药的生物膜表型转归，为 医学上制备特异的抑制金黄色葡萄球菌生物膜形成的制剂提供有价值的参考。
[0031] 本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本 发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
【附图说明】
[0032] 图1为本发明的一个实施例中对木犀草素不同亚抑菌浓度对S.aureusN315生物 膜的抑制作用的试验结果；
[0033] 图2为本发明的一个实施例中木犀草素对金黄色葡萄球菌仅aureusN315)生物 膜的抑制作用的显微观察；
[0034] 图3为本发明的一个实施例中木犀草素对S.aureusN315a-溶血素蛋白表达的 抑制作用中的溶血活性分析；
[0035] 图4为本发明的一个实施例中木犀草素对金黄色葡萄球菌仅aureusN315)肠毒 素A、BWesternBlot分析；
[0036] 图5为本发明的一个实施例中S.aureusN315在木犀草素亚抑菌浓度下hla相对 表达量；
[0037] 图6为本发明的一个实施例中S.aureusN315在木犀草素亚抑菌浓度下agrA相 对表达量。
【具体实施方式】
[0038] 下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，W令本领域技术人员参照说明书文 字能够据W实施。
[0039] 应当理解，本文所使用的诸如"具有"、"包含及"包括"术语并不配出一个或多 个其它元件或其组合的存在或添加。
[0040] < 实例 1〉 阳041] 木犀草素对金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度（MIC)测定
[0042] 取浓度为512yg/mL的木犀草素进行倍比稀释，然后加入96孔圆底培养板中，使 板中的金黄色葡萄球菌仅日脚6113肥15)浓度为00日。。=0.05。将96孔板置于37°(：条件 下培养24小时，然后每孔取菌液，