治疗奶牛子宫内膜炎中草药生物合元制剂及其制备方法

治疗奶牛子宫内膜炎中草药生物合元制剂及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种治疗奶牛子宫内膜炎中草药生物合元制剂及其制备方法，中草药按质量份数计算，包括当归、川芎、桃仁、栀子、益母草、车前子、牛膝、干姜以及甘草；生物菌按中草药总质量每克含菌量计算。本发明运用选择性优势生物复合菌，在一定条件下对奶牛子宫内膜炎常用中草药药物进行生物发酵、降解，提高其组方药物的溶出率和增强其药物的生物活性，在使用过程中，将改善奶牛消化系统微生态环境，进一步增强对药物纤维的降解能力，从而促进中草药的消化吸收。利用中草药药物方剂活血化瘀、防腐生肌等功效，改善炎性子宫的局部血液循环和促进损伤粘膜组织的修复，从而达到对奶牛子宫内膜炎进行“无抗”防治之目的。
【专利说明】治疗奶牛子宫内膜炎中草药生物合元制剂及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种畜牧【技术领域】，尤其是一种治疗奶牛子宫内膜炎中草药生物合元制剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002]随着我国畜禽产品及食品安全标准化生产体系的建立与实施，我们在努力提高畜禽生产水平的同时，如何生产出合格的肉、蛋、奶等主要畜禽产品，提高和保障人们的食品安全及生命健康，是亟待努力解决的重要课题。其中，如何在畜禽产品生产环节杜绝和减少生物污染，化学药物、抗生素的残留等问题，都为当前在畜禽的饲养和疫病防控的手段以及相关产品的研发及应用提出了更高的要求。在相关畜产品安全生产标准中，都明确了在一定范围内限制了化药、抗生素等产品的广泛使用。现代生产实践研究表明，在当前的畜禽疫病防控方面，生物技术、中兽医医药技术拟将成为当前乃至今后解决畜禽养殖生态环境净化，动物健康保健，化药、抗生素残留等方面不可缺少的重要科学技术手段。
[0003]奶牛子宫内膜炎是奶牛生产中最为常见的一种主要产科疾病，是引起奶牛不孕、习惯性流产、奶生产水平下降的主要原因之一。多年来，我国绝大部份地区对奶牛子宫内膜炎的治疗，仍以传统的子宫清洗、利凡诺、金霉素、庆大霉素等化药宫内消炎治疗方法为主，虽然具有较好的治疗效果，但易导致抗药性和奶中药物残留，形成“抗生奶”危害人类健康。自从我国对奶制品相关药残标准强制执行以来，抗生素治疗方法的使用受到了严格限制，同时，改用中草药等其他“无抗”方法治疗虽然具有一定的效果，但其使用面仍较狭窄。目前，奶牛子宫内膜炎抗生素防治方法的应用与奶产品抗生素残留问题，形成了一个矛盾的生产共同体，使该病的防治处于两难的尴尬境地。据我省近几年奶牛生产常见疾病调查显示，目前奶牛子宫内膜炎的发病占奶牛常见疾病30%，占产科疾病的80%，对奶牛繁殖的影响占60-65%，按原有传统方法治疗后，奶牛繁殖率可达80-90%，目前仅为70-80%，其繁殖率下降了 10%左右(该数据为贵州某奶牛公司提供)，由此表明奶牛子宫内膜炎已成为严重制约当前提高奶牛综合生产水平的主要疾病。有关奶牛子宫内膜炎“无抗”疗法近年来在中草药治疗方面取得了一定的经验，也产生了不少的经验药方，由于受剂型的限制，有效成份吸收不彻底，利用率低，疗效不确切，投药量大，药物自身的毒性经机体带来的副用难以消除等因素的影响。导致对炎症消除慢且不彻底，治疗时间长，用药成本明显增高，延长了配种受孕时间和受胎率下降。

【发明内容】

[0004]本发明的目的是:提供一种治疗奶牛子宫内膜炎中草药生物合元制剂，它达到对奶牛子宫内膜炎进行“无抗”防治的目的，对奶牛子宫内膜炎具有显著的防治效果。
[0005]本发明是这样实现的:治疗奶牛子宫内膜炎中草药生物合元制剂，按质量份数计算，包括当归80-90份、川芎25-35份、桃仁30-40份、桅子25-35份、益母草110-140份、车前子40-50份、牛膝20-30份、干姜25-35份以及甘草12-17份；生物菌按中草药总质量每克含菌量计算，包括嗜酸乳酸杆菌IOX IO9-1OX 101°个/g、枯草芽孢杆菌IOX IO9-1OX 101°个/g。
[0006]按质量份数计算，包括当归85份、川芎30份、桃仁35份、桅子30份、益母草125份、车前子45份、牛膝25份、干姜30份以及甘草15份；生物菌按中草药总质量每克含菌量计算，包括嗜酸乳酸杆菌IOX IO9个/g、枯草芽孢杆菌IOX IO9个/g。
[0007]治疗奶牛子宫内膜炎中草药生物合元制剂的制备方法，按上述质量份数取各组份，将当归、川芎、桃仁、桅子、益母草、车前子、牛膝、干姜以及甘草混合后粉碎，获得混合药粉；向混合药粉中，加入混合药粉总质量15%的水，并充分拌匀，获得润湿药粉；向润湿药粉中分别加入嗜酸乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌，然后在37°C下密闭发酵48h，然后在65-80°C下干燥至水分含量11-14%，获得干燥药粉；对干燥药粉中的枯草芽孢杆菌进行活性检验，添加嗜酸乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌；嗜酸乳酸杆菌按IOX IO9个/g (指每克药物中活菌数量)添加，枯草芽孢杆菌根据活性检验计数结果添加，使活菌量不低于IOXlO9个/g ;最后将产品分装后即可。
[0008]混合药粉的粉碎粒度为过80目筛。
[0009]治疗奶牛子宫内膜炎中草药生物合元制剂的制备方法，按上述质量份数取各组份，将当归、川芎、桃仁、桅子、益母草、车前子、牛膝、干姜以及甘草混合，将混合物中按1:3的质量比加水浸泡，浸泡3-5小时后，将浸泡后混合药物与水加热进行三次煎煮，每次1.5-2小时，将三次煎煮后的药夜混合过滤，在100°C条件下浓缩至2g生药/IOml ;向浓缩液中加入占浓缩液总质量0.05%的冰片，待冰片充分溶化后，将浓缩液按100目标准过滤备用；将过滤后的浓缩液在压力为15磅，温度为121°C下高压灭菌20分钟；然后在无菌条件下，在经灭菌冷确浓缩 过滤液中按10X IO9个/ml (此处为每ml灭菌浓缩过滤液中含有IOXlO9个活菌)标准分别添加嗜酸乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌；最后进行分装即可。
[0010]本发明中所采用的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为ACCC01854株，嗜酸乳酸杆菌(Lactobacillus acidophilus)为CICC23119株,均可购自中国微生物菌种资源库；均为我国目前微生态制剂研发、生产中首选的优势菌株，对多数致病性菌在动物体内的生长繁殖都具有显著的抑制作用，利用其生物活性对中草药进行发酵、降解，可提高中草药的生物利用度，使用时亦能改善动物机体的微生态环境，将有利益药物的消化吸收，对中草药的功能发挥具有良好的协同作用。
[0011]为了验证本发明的技术效果，进行了以下实验:
本发明的配方具有活血化瘀、清热燥湿，生肌腐蚀，收敛之功效。
[0012]一、选择性益生菌对配方主药的发酵作用试验研究 1、实验建立:
1、实验材料:选择性益生菌优势菌株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为ACCCO1854株，嗜酸乳酸杆菌(Lactobaci I Ius acidophi Ius )为CICC23119株购自中国微生物菌种资源库；含量测定用益母草、当归、川芎、桃仁等标准品购自中国中国药品生物制剂检定所；实验用益母草、当归、川芎、桃仁等药材购自贵阳三桥中草药批发市场；选择性培
养基由实验室制备。
[0013]实验仪器:高效液相色谱系统仪为LC一20A，恒温培养箱、干燥箱、发酵袋等由实验室制备。[0014]2、实验方法:
2.1发酵实验:将益母草、当归、川芎、桃仁等药材分别粉碎，80目过筛。实验共设三个组，每组分别取350g原药，按原药总质量的15%加入无菌水拌润用发酵袋分装密闭；第一组为实验对照，第二、三组分别按10 X 109/g、10 X IOltVg同时加入实验用枯草芽孢杆菌和嗜酸乳酸杆菌，放入恒温箱37°C发酵48h，然后在80°C烘箱中干燥至水分含量13%左右后取出，密闭备用。
[0015]2.2药物主要成分渗出率的测定:
2.2.1药物标准曲线普的建立:称取益母草、当归、川芎、桃仁标准对照品各3mg，分别置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制成每Iml含30ug的标准品溶液，各自分别取标准品溶液lul、5ul、8ul、10ul、12ul进样，记录色谱峰峰面积，以各标准对照品进样量为横坐标，以色谱峰峰面积为纵坐标做标准曲线，得出各标准对照品的回归方程，以此表明对照品进样量范围与峰面积的良好线性关系。即:益母草碱:回归方程A=7.4X106C+5982.6,相关系数R=0.9995，进样量范围0.16-1.92 ;当归多糖:回归方程A=4.85X 106C+1063.6，相关系数R=0.9997，进样量范围0.0368-0.32ug ;川芎脂溶本内脂:回归方程A=3.8X106C-7312.5，相关系数R=0.9997，进样量范围0.018-0.235ug ;桃仁杏仁甙:回归方程A=1.4X106C+1095.8，相关系数R=0.9999，进样量范围0.03-0.36 ug.2.2.2色谱条件:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙晴-水(15:85)为流动相；检测波长为238nm。
[0016]2.2.2色谱条件:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙晴-水(15:85)为流动相；检测波长为238nm。
[0017]2.2.3对照品溶液的制备:称取益母草、当归、川芎、桃仁标准对照品各3mg，分别置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制成每Iml含30ug的标准品溶液即可。
`[0018]2.2.3供试品溶液的制备:称取各实验组益母草、当归、川芎、桃仁供试样品粉末各IOmg,分别置锥容量瓶中，加甲醇25ml称重，超声处理5分钟，冷却，补重，滤过，量取续滤液10ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度摇匀即可。
[0019]2.2.4测定:分别吸取各对照品溶液与供试品溶液10ul，进入液相色谱系统仪进行测定。
[0020]3、实验结果:
选择性生物菌对中药发酵主要成分溢出率结果:从表中测定结果显示，选择性优势益生菌群在一定条件下对中草药当归、川芎、桃仁等中药进行发酵，能显著提高其主要成分的溢出率，与益生菌群添加量呈正相关。但对益母草碱的溢出率无明显作用。
【权利要求】
1.一种治疗奶牛子宫内膜炎中草药生物合元制剂，其特征在于:按质量份数计算，包括当归80-90份、川芎25-35份、桃仁30-40份、桅子25-35份、益母草110-140份、车前子40-50份、牛膝20-30份、干姜25-35份以及甘草12-17份；生物菌按中草药总质量每克含菌量计算，包括嗜酸乳酸杆菌IOX IO9-1OX 101°个/g、枯草芽孢杆菌IOX IO9-1OX 101°个/g O
2.根据权利要求1所述的治疗奶牛子宫内膜炎中草药生物合元制剂，其特征在于:按质量份数计算，包括当归85份、川芎30份、桃仁35份、桅子30份、益母草125份、车前子45份、牛膝25份、干姜30份以及甘草15份；生物菌按中草药总质量每克含菌量计算，包括嗜酸乳酸杆菌10 X IO9个/g、枯草芽孢杆菌10 X IO9个/g。
3.—种如权利要求1所述的治疗奶牛子宫内膜炎中草药生物合元制剂的制备方法，其特征在于:按上述质量份数取各组份，将当归、川芎、桃仁、桅子、益母草、车前子、牛膝、干姜以及甘草混合后粉碎，获得混合药粉；向混合药粉中，加入混合药粉总质量15%的水，并充分拌匀，获得润湿药粉；向润湿药粉中分别加入嗜酸乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌，然后在37°C下密闭发酵48h，然后在65-80°C下干燥至水分含量11_14%，获得干燥药粉；对干燥药粉中的枯草芽孢杆菌进行活性检验，添加嗜酸乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌；嗜酸乳酸杆菌按10 X IO9个/g添加，枯草芽孢杆菌根据活性检验计数结果添加，使活菌量不低于10 X IO9个/g;最后将产品分装后即可。
4.根据权利要求1所述的治疗奶牛子宫内膜炎中草药生物合元制剂的制备方法，其特征在于:混合药粉的粉碎粒 度为过80目筛。
5.一种如权利要求1所述的治疗奶牛子宫内膜炎中草药生物合元制剂的制备方法，其特征在于:按上述质量份数取各组份，将当归、川芎、桃仁、桅子、益母草、车前子、牛膝、干姜以及甘草混合，将混合物中按1:3的质量比加水浸泡，浸泡3-5小时后，将浸泡后混合药物与水加热进行三次煎煮，每次1.5-2小时，将三次煎煮后的药夜混合过滤，在100°C条件下浓缩至2g生药/IOml ;向浓缩液中加入占浓缩液总质量0.05%的冰片，待冰片充分溶化后，将浓缩液按100目标准过滤备用；将过滤后的浓缩液在压力为15磅，温度为121°C下高压灭菌20分钟；然后在无菌条件下，在经灭菌冷确浓缩过滤液中按IOX IO9个/ml标准分别添加嗜酸乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌；最后进行分装即可。
【文档编号】A61K36/9068GK103751755SQ201410043280
【公开日】2014年4月30日 申请日期:2014年1月29日 优先权日:2014年1月29日
【发明者】文正常, 潘淑惠, 王璇 申请人:贵州省畜牧兽医研究所