一种人参挥发油及其制备方法及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种人参挥发油及其制备方法及其应用，属于制药开发应用领域。人参挥发油是分别从人参的主根、须根、茎叶或花蕾中提取的人参主根挥发油、人参须根挥发油、人参茎叶挥发油、人参花蕾挥发油，以其为原料制得造内热模型工具药及制作中医内热模型试剂的应用。本发明的有益效果是填补了中药有效成分对中医“上火”的生物学基础研究的空白并扩展了其在医药领域的应用范围。
【专利说明】一种人参挥发油及其制备方法及其应用
【技术领域】
[0001]本发明属于制药开发应用领域，涉及人参挥发油提取分离制备方法，以其为原料制得造内热模型工具药及制作中医内热模型试剂的应用，及其在中医预防和有效治疗“上火”提供科学依据。
【背景技术】[0002]“上火”一词是民间对身体出现较轻的异常热象的俗称，是一个常见的中医学术语，意为人体阴阳失衡，内火旺盛。通常在出现口干渴、口舌生疮、牙龈肿痛、便秘等症状时，老百姓便称为上火。但是检索现代文献，研究上火者寥寥无几，在中医古籍中亦少有明确的记载。“上火”，“上火”在日常生活中并不罕见，是一种亚健康状态的表现。明确“上火”的辨证标准，研究“上火”的现代表征方法，揭示“上火”的生物学基础，阐明清热泻火、滋阴降火等防治方法的作用机理，为提高中医预防和有效治疗“上火”提供科学依据。
[0003]人参为五加科Araliaceae植物Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根,性甘、微温，味微苦，根、茎、叶、花、果全都可以入药，药用历史悠久，2010版药典收录含有人参的方剂成药30余个。人参中所含化学成分很多，主要活性成分是人参皂苷，还包括多糖、酚性化合物，挥发性倍半萜及聚乙炔醇类化合物、多肽及氨基酸、木脂素、生物碱、维生素、特殊氨基酸、微量元素、有机酸及其酯类、留醇类及酶等。具有抑制肿瘤，增强免疫力，益智，抗衰老，强心，降血压和抗血栓血脂动脉硬化等药理活性。但是人参是否具有俗称“上火”的“热症”问题，始终是中医药界争论的问题，也阻碍了人参的广泛应用。人体里本身是有火的，如果没有火那么生命也就停止了，也就是所谓的生命之火。“上火”属中医的理论范畴，“火”为外感六淫之一，火为阳邪，临床表现除热象外，口渴喜饮，咽干舌燥，大便秘结、小便短赤等津液伤耗的症状。因此，究竟人参是否具有“热症”作用，在多少服用剂量以内是安全的，是急待解决的科学问题。但是，目前“热症”作用尚没有直观、灵敏、可靠的化学数据支持和监测。代谢组学(metabonomics)是关于生物体系受刺激或扰动后其代谢产物-内源性代谢物质种类、数量及其变化规律的科学，它研究的是生物整体、系统或器官的内源性代谢物质的代谢途径及其所受内在或外在因素的影响。
【发明内容】
[0004]本发明提供一种人参挥发油及其制备方法及其应用，目的是提供人参挥发油提取分离制备方法，和以人参挥发油为原料制得造内热模型工具药和制作中医内热模型试剂的应用。
[0005]本发明采取的技术方案是，人参挥发油是分别从人参的主根、须根、茎叶或花蕾中提取的人参主根挥发油、人参须根挥发油、人参茎叶挥发油、人参花蕾挥发油。
[0006]所述的人参主根挥发油是由下列步骤得到的:
[0007](I)提取方法:将人参的主根粉碎至10~80目，加入该人参主根重量5~15倍的水，浸泡6~24h，之后进行第一次回流提取，时间为4~6h ;第二次将人参主根加入重量5~15倍的水中进行回流提取，时间为2~4h，合并提取液，滤过，滤液回收溶剂后浓缩；
[0008](2)纯化:将该浓缩液装于已预先处理好的100~400目硅胶柱中，按照石油醚与乙酸乙酯比例为15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脱，收集洗脱液，置于旋转蒸发仪上低温蒸循，使溶剂完全挥发；
[0009](3)挥发油进行分子蒸馏分离:将步骤(2)所得送入蒸发器中，蒸馆柱内温度分别调至50°c、60°c、7(rc、8(rc、10(rc、ll(rc，真空泵抽真空，使真空度达到2~8Pa ;制冷装置，使冷井温度降到-10°C~-30°C、-100°C~-130°c，刮膜的转速为180~300r/min，收集馏出物及蒸出物，精制。
[0010]所述的人参须根挥发油是由下列步骤得到的:
[0011](I)提取方法:将人参的须根粉碎至10~80目，加入该人参须根重量5~15倍的水，浸泡6~24h，之后进行第一次回流提取，时间为4~6h ;第二次将人参须根加入重量5~15倍的水中进行回流提取，时间为2~4h，合并提取液，滤过，滤液回收溶剂后浓缩；
[0012](2)纯化:将该浓缩液装于已预先处理好的100~400目硅胶柱中，按照石油醚与乙酸乙酯比例为15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脱，收集洗脱液，置于旋转蒸发仪上低温蒸循，使溶剂完全挥发；
[0013](3)挥发油 进行分子蒸馏分离:将步骤(2)所得送入蒸发器中，蒸馆柱内温度分别调至50°c、60°c、7(rc、8(rc、10(rc、ll(rc，真空泵抽真空，使真空度达到2~8Pa ;制冷装置，使冷井温度降到-10°C~-30°C、-100°C~-130°c，刮膜的转速为180~300r/min，收集馏出物及蒸出物，精制。
[0014]所述的人参茎叶挥发油是由下列步骤得到的:
[0015](I)提取方法:将人参的茎叶粉碎至10~80目，加入该人参茎叶重量5~15倍的水，浸泡6~24h,之后进行第一次回流提取，时间为4~6h ;第二次将人参莖叶加入重量5~15倍的水中进行回流提取，时间为2~4h，合并提取液，滤过，滤液回收溶剂后浓缩；
[0016](2)纯化:将该浓缩液装于已预先处理好的100~400目硅胶柱中，按照石油醚与乙酸乙酯比例为15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脱，收集洗脱液，置于旋转蒸发仪上低温蒸循，使溶剂完全挥发；
[0017](3)挥发油进行分子蒸馏分离:将步骤(2)所得送入蒸发器中，蒸馆柱内温度分别调至50°c、60°c、7(rc、8(rc、10(rc、ll(rc，真空泵抽真空，使真空度达到2~8Pa ;制冷装置，使冷井温度降到-10°C~-30°C、-100°C~-130°c，刮膜的转速为180~300r/min，收集馏出物及蒸出物，精制。
[0018]所述的人参花蕾挥发油是由下列步骤得到的:
[0019](I)提取方法:将人参的花蕾粉碎至10~80目，加入该人参花蕾重量5~15倍的水，浸泡6~24h,之后进行第一次回流提取，时间为4~6h ;第二次将人参花蕾加入重量5~15倍的水中进行回流提取，时间为2~4h，合并提取液，滤过，滤液回收溶剂后浓缩；
[0020](2)纯化:将该浓缩液装于已预先处理好的100~400目硅胶柱中，按照石油醚与乙酸乙酯比例为15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脱，收集洗脱液，置于旋转蒸发仪上低温蒸循，使溶剂完全挥发；
[0021](3)挥发油进行分子蒸馏分离:将步骤(2)所得送入蒸发器中，蒸馆柱内温度分别调至50°c、60°c、7(rc、8(rc、10(rc、ll(rc，真空泵抽真空，使真空度达到2~8Pa ;制冷装置，使冷井温度降到-10°C~-30°C、-100°C~-130°c，刮膜的转速为180~300r/min，收集馏出物及蒸出物，精制。
[0022]本发明还包括人参主根挥发油、人参须根挥发油、人参茎叶挥发油或人参花蕾挥发油的制备方法。
[0023]本发明以所述人参挥发油为原料制得造内热模型工具药和制作中医内热模型试剂的应用。
[0024]本发明以所述人参主根挥发油为原料制得造内热模型工具药和制作中医内热模型试剂的应用。
[0025]本发明以所述人参须根挥发油为原料制得造内热模型工具药和制作中医内热模型试剂的应用。
[0026]本发明以所述人参茎叶挥发油为原料制得造内热模型工具药和制作中医内热模型试剂的应用。
[0027]本发明以所述人参花蕾挥发油为原料制得造内热模型工具药和制作中医内热模型试剂的应用。
[0028]人参挥发油是分别从植物人参的主根、须根、茎叶、花蕾中提取获得的，挥发油中各种成分之间的含量比例可以与天然植物中的含量比例一致，也可以与天然植物中的含量比例不尽一致。 [0029]本发明用代谢组学的研究方法，为最终阐明人参挥发性部分是否具有“热症”的作用，寻找热证真正的机制，奠定一定的生物学基础。
[0030]本发明还提供人参挥发油为中医预防和有效治疗“上火”提供了科学依据。
[0031 ] 本发明的有益效果是:以人参挥发油为原料制得造内热模型工具药和制作中医内热模型试剂的应用。填补了中药有效成分对中医“上火”的生物学基础研究的空白并扩展了其在医药领域的应用范围。
【专利附图】
【附图说明】
[0032]图1是正常对照组的大鼠外观图；
[0033]图2是人参主根挥发油鼻饲组的大鼠外观图；
[0034]图3是人参须根挥发油鼻饲组的大鼠外观图；
[0035]图4是人参茎叶挥发油鼻饲组的大鼠外观图；
[0036]图5是人参花蕾挥发油鼻饲组的大鼠外观图。
【具体实施方式】
[0037]实施例1:人参主根挥发油及其提取分离制备
[0038](I)提取方法:将人参的主根Ikg粉碎至10目，加入该人参主根重量5倍的水，浸泡6h，之后进行第一次回流提取，时间为4h ;第二次将人参主根加入重量5倍的水中进行回流提取，时间为2h，合并提取液，滤过，滤液回收溶剂后浓缩，得浓缩液体积IL ；
[0039](2)纯化:将该浓缩液装于已预先处理好的100目硅胶柱中，按照石油醚与乙酸乙酯比例为15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脱，收集洗脱液，置于旋转蒸发仪上低温蒸循，使溶剂完全挥发；[0040](3)挥发油进行分子蒸馏分离:将步骤(2)所得送入蒸发器中，蒸馆柱内温度分别调至50°C、60°C、70°C、80°C、100°C、110°C，真空泵抽真空，使真空度达到2Pa ；制冷装置，使冷井温度降到-10°C、-100°C，刮膜的转速为180r/min，收集馏出物及蒸出物，精制。
[0041]实施例2人参主根挥发油及其提取分离制备
[0042](I)提取方法:将人参的主根2kg粉碎至40目，加入该人参主根重量10倍的水，浸泡15h，之后进行第一次回流提取，时间为5h ;第二次将人参主根加入重量10倍的水中进行回流提取，时间为3h，合并提取液，滤过，滤液回收溶剂后浓缩，得浓缩液体积2L ；
[0043](2)纯化:将该浓缩液装于已预先处理好的200目硅胶柱中，按照石油醚与乙酸乙酯比例为15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脱，收集洗脱液，置于旋转蒸发仪上低温蒸循，使溶剂完全挥发；[0044](3)挥发油进行分子蒸馏分离:将步骤(2)所得送入蒸发器中，蒸馆柱内温度分别调至50°C、60°C、70°C、80°C、100°C、110°C，真空泵抽真空，使真空度达到5Pa ；制冷装置，使冷井温度降到-20°C、_115°C，刮膜的转速为240r/min，收集馏出物及蒸出物，精制。
[0045]实施例3人参主根挥发油及其提取分离制备
[0046](I)提取方法:将人参的主根3kg粉碎至80目，加入该人参主根重量15倍的水，浸泡24h，之后进行第一次回流提取，时间为6h ;第二次将人参主根加入重量15倍的水中进行回流提取，时间为4h，合并提取液，滤过，滤液回收溶剂后浓缩，得浓缩液体积3L ；
[0047](2)纯化:将该浓缩液装于已预先处理好的400目硅胶柱中，按照石油醚与乙酸乙酯比例为15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脱，收集洗脱液，置于旋转蒸发仪上低温蒸循，使溶剂完全挥发；
[0048](3)挥发油进行分子蒸馏分离:将步骤(2)所得送入蒸发器中，蒸馆柱内温度分别调至50°C、60°C、70°C、80°C、100°C、110°C，真空泵抽真空，使真空度达到8Pa ；制冷装置，使冷井温度降到-30°C、-130°C，刮膜的转速为300r/min，收集馏出物及蒸出物，精制。
[0049]气-质联用(GC-MS)检测,其中Ct _人参稀、Ct _蛇麻稀、β _薇稀含量较闻，Ct _人参烯在人参主根挥发油中为6.5~6.9% ; α -蛇麻烯在人参主根挥发油中含量为3.7~
4.1% 菔烯在人参主根挥发油中含量为1.9~2.3%。
[0050]实施例4:人参须根挥发油及其提取分离制备
[0051](I)提取方法:将人参的须根Ikg粉碎至10目，加入该人参须根重量5倍的水，浸泡6h，之后进行第一次回流提取，时间为4h ;第二次将人参须根加入重量5倍的水中进行回流提取，时间为2h，合并提取液，滤过，滤液回收溶剂后浓缩，得浓缩液体积IL ；
[0052](2)纯化:将该浓缩液装于已预先处理好的100目硅胶柱中，按照石油醚与乙酸乙酯比例为15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脱，收集洗脱液，置于旋转蒸发仪上低温蒸循，使溶剂完全挥发；
[0053](3)挥发油进行分子蒸馏分离:将步骤(2)所得送入蒸发器中，蒸馆柱内温度分别调至50°C、60°C、70°C、80°C、100°C、110°C，真空泵抽真空，使真空度达到2Pa ；制冷装置，使冷井温度降到-10°C、-100°C，刮膜的转速为180r/min，收集馏出物及蒸出物，精制。
[0054]实施例5人参须根挥发油及其提取分离制备
[0055](I)提取方法:将人参的须根2kg粉碎至40目，加入该人参须根重量10倍的水，浸泡15h，之后进行第一次回流提取，时间为5h ;第二次将人参须根加入重量10倍的水中进行回流提取，时间为3h，合并提取液，滤过，滤液回收溶剂后浓缩，得浓缩液体积2L ；
[0056](2)纯化:将该浓缩液装于已预先处理好的200目硅胶柱中，按照石油醚与乙酸乙酯比例为15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脱，收集洗脱液，置于旋转蒸发仪上低温蒸循，使溶剂完全挥发；
[0057](3)挥发油进行分子蒸馏分离:将步骤(2)所得送入蒸发器中，蒸馆柱内温度分别调至50°C、60°C、70°C、80°C、100°C、110°C，真空泵抽真空，使真空度达到5Pa ；制冷装置，使冷井温度降到-20°C、_115°C，刮膜的转速为240r/min，收集馏出物及蒸出物，精制。
[0058]实施例6人参须根挥发油及其提取分离制备
[0059](I)提取方法:将人参的须根3kg粉碎至80目，加入该人参须根重量15倍的水，浸泡24h，之后进行第一次回流提取，时间为6h ;第二次将人参须根加入重量15倍的水中进行回流提取，时间为4h，合并提取液，滤过，滤液回收溶剂后浓缩，得浓缩液体积3L ；
[0060](2)纯化:将该浓缩液装于已预先处理好的400目硅胶柱中，按照石油醚与乙酸乙酯比例为15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脱，收集洗脱液，置于旋转蒸发仪上低温蒸循，使溶剂完全挥发；
[0061](3)挥发油进行分子蒸馏分离:将步骤(2)所得送入蒸发器中，蒸馆柱内温度分别调至50°C、60°C、70°C、80°C、100°C、110°C，真空泵抽真空，使真空度达到8Pa ；制冷装置，使冷井温度降到-30°C、-130°C，刮膜的转速为300r/min，收集馏出物及蒸出物，精制。
[0062]经气-质联用(GC-MS)检测，其中Ct _人参稀、ct_蛇麻稀、β_薇稀含量较闻，α -人参烯在人参须根挥发油中含量为7.5~8.1% ; α -蛇麻烯在人参须根挥发油中含量为4.0~4.5% ; β -菔烯在人参须根挥发油中含量为2.4~2.8%。
[0063]实施例7:人参茎叶挥发油及其提取分离制备
[0064](I)提取方法:将人参的茎叶Ikg粉碎至10目，加入该人参茎叶重量5倍的水，浸泡6h，之后进行第一次回流提取，时间为4h ;第二次将人参茎叶加入重量5倍的水中进行回流提取，时间为2h，合并提取液，滤过，滤液回收溶剂后浓缩，得浓缩液体积IL ；
[0065](2)纯化:将该浓缩液装于已预先处理好的100目硅胶柱中，按照石油醚与乙酸乙酯比例为15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脱，收集洗脱液，置于旋转蒸发仪上低温蒸循，使溶剂完全挥发；
[0066](3)挥发油进行分子蒸馏分离:将步骤(2)所得送入蒸发器中，蒸馆柱内温度分别调至50°C、60°C、70°C、80°C、100°C、11 (TC，真空泵抽真空，使真空度达到2Pa ；制冷装置，使冷井温度降到-10°C、-100°C，刮膜的转速为180r/min，收集馏出物及蒸出物，精制。
[0067]实施例8人参茎叶挥发油及其提取分离制备
[0068](I)提取方法:将人参的茎叶2kg粉碎至40目，加入该人参茎叶重量10倍的水，浸泡15h，之后进行第一次回流提取，时间为5h ;第二次将人参茎叶加入重量10倍的水中进行回流提取，时间为3h，合并提取液，滤过，滤液回收溶剂后浓缩，得浓缩液体积2L ；
[0069](2)纯化:将该浓缩液装于已预先处理好的200目硅胶柱中，按照石油醚与乙酸乙酯比例为15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脱，收集洗脱液，置于旋转蒸发仪上低温蒸循，使溶剂完全挥发；
[0070] (3)挥发油进行分子蒸馏分离:将步骤(2)所得送入蒸发器中，蒸馆柱内温度分别调至50°C、60°C、70°C、80°C、100°C、11 (TC，真空泵抽真空，使真空度达到5Pa ；制冷装置，使冷井温度降到-20°C、-115°C，刮膜的转速为240r/min，收集馏出物及蒸出物，精制。
[0071]实施例9人参茎叶挥发油及其提取分离制备
[0072](I)提取方法:将人参的茎叶3kg粉碎至80目，加入该人参茎叶重量15倍的水，浸泡24h，之后进行第一次回流提取，时间为6h ;第二次将人参茎叶加入重量15倍的水中进行回流提取，时间为4h，合并提取液，滤过，滤液回收溶剂后浓缩，得浓缩液体积3L ；
[0073](2)纯化:将该浓缩液装于已预先处理好的400目硅胶柱中，按照石油醚与乙酸乙酯比例为15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脱，收集洗脱液，置于旋转蒸发仪上低温蒸循，使溶剂完全挥发；
[0074](3)挥发油进行分子蒸馏分离:将步骤(2)所得送入蒸发器中，蒸馆柱内温度分别调至50°C、60°C、70°C、80°C、100°C、11 (TC，真空泵抽真空，使真空度达到8Pa ；制冷装置，使冷井温度降到-30°C、-130°C，刮膜的转速为300r/min，收集馏出物及蒸出物，精制。
[0075]经气-质联用(GC-MS)检测，其中ct _人参稀、ct_蛇麻稀、β_薇稀含量较闻，α -人参烯在人参茎叶挥发油中含量为8.8~9.3% ; α -蛇麻烯在人参茎叶挥发油中含量为4.8~5.3% ; β -菔烯在人参茎叶挥发油中含量为3.8~4.3%。
[0076]实施例10:人参花蕾挥发油及其提取分离制备
[0077](I)提取方法:将人参的花蕾Ikg粉碎至10目，加入该人参花蕾重量5倍的水，浸泡6h，之后进行第一次回流提取，时间为4h ;第二次将人参花蕾加入重量5倍的水中进行回流提取，时间为2h，合并提取液，滤过，滤液回收溶剂后浓缩，得浓缩液体积IL ；
[0078](2)纯化:将该浓缩液装于已预先处理好的100目硅胶柱中，按照石油醚与乙酸乙酯比例为15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脱，收集洗脱液，置于旋转蒸发仪上低温蒸循，使溶剂完全挥发；
[0079](3)挥发油进行分子蒸馏分离:将步骤(2)所得送入蒸发器中，蒸馆柱内温度分别调至50°C、60°C、70°C、80°C、100°C、110°C，真空泵抽真空，使真空度达到2Pa ；制冷装置，使冷井温度降到-10°C、-100°C，刮膜的转速为180r/min，收集馏出物及蒸出物，精制。
[0080]实施例11人参花蕾挥发油及其提取分离制备
[0081](I)提取方法:将人参的花蕾2kg粉碎至40目，加入该人参花蕾重量10倍的水，浸泡15h，之后进行第一次回流提取，时间为5h ;第二次将人参花蕾加入重量10倍的水中进行回流提取，时间为3h，合并提取液，滤过，滤液回收溶剂后浓缩，得浓缩液体积2L ；
[0082](2)纯化:将该浓缩液装于已预先处理好的200目硅胶柱中，按照石油醚与乙酸乙酯比例为15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脱，收集洗脱液，置于旋转蒸发仪上低温蒸循，使溶剂完全挥发；
[0083](3)挥发油进行分子蒸馏分离:将步骤(2)所得送入蒸发器中，蒸馆柱内温度分别调至50°C、60°C、70°C、80°C、100°C、110°C，真空泵抽真空，使真空度达到5Pa ；制冷装置，使冷井温度降到-20°C、_115°C，刮膜的转速为240r/min，收集馏出物及蒸出物，精制。
[0084]实施例12人参花蕾挥发油及其提取分离制备
[0085](I)提取方法:将人参的花蕾3kg粉碎至80目，加入该人参花蕾重量15倍的水，浸泡24h，之后进行第一次回流提取，时间为6h ;第二次将人参花蕾加入重量15倍的水中进行回流提取，时间为4h，合并提取液，滤过，滤液回收溶剂后浓缩，得浓缩液体积3L ；
[0086](2)纯化:将该浓缩液装于已预先处理好的400目硅胶柱中，按照石油醚与乙酸乙酯比例为15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脱，收集洗脱液，置于旋转蒸
发仪上低温蒸循，使溶剂完全挥发；
[0087](3)挥发油进行分子蒸馏分离:将步骤(2)所得送入蒸发器中，蒸馆柱内温度分别调至50°C、60°C、70°C、80°C、100°C、110°C，真空泵抽真空，使真空度达到8Pa ；制冷装置，使冷井温度降到-30°C、-130°C，刮膜的转速为300r/min，收集馏出物及蒸出物，精制。
[0088]经气-质联用(GC-MS)检测，其中Ct _人参稀、ct_蛇麻稀、β_薇稀含量较闻，α -人参烯在人参花蕾挥发油中含量为8.2~8.7% ; α -蛇麻烯在人参花蕾挥发油中含量为4.0~4.6%;β -菔烯在人参花蕾挥发油中含量为3.3~3.8 %。
[0089]本发明提供的人参挥发油中3种含量较高的化合物，不论各成分之间的含量如何，只要是从植物人参中提取，并且含量在上述定义范围内，则该有效部位就在本发明范围内。
[0090]实验例人参挥发油制作内热模型大鼠试验的研究
[0091]I 材料
[0092]1.1动物Wistar大鼠，雌性，180~220g ;购自吉林大学实验动物中心；动物等级:II级；合格证编号为SCXK-(吉)2008-0005。
[0093]1.2饲料实验动物配合颗粒饲料，原料组成:玉米、鱼粉、豆柏、碳酸氢钙、面粉、石粉等组成。生产商:长春市亿斯实验动物技术有限责任公司。生产许可证:SCXK-(吉)2003-0008。
[0094]1.3实验环境清洁级动物室，许可证号:SYXK(吉)2010-0006，动物室温度:19~23 °C，相对湿度45~65%。
[0095]1.4药物人参挥发油混悬液:取Iml人参主根挥发油，加入30ml纯净水，超声10分钟混悬均匀，批号:20121116。同样方法制得人参须根挥发油混悬液、人参茎叶挥发油混悬液、人参花蕾挥发油混悬液，批号分别为20121117、20121118、20121119。以上受试药物均由
吉林省中医药科学院新药中心提供。
[0096]1.5仪器JJ200型精密电子天平，T-2000型电子天平，均为常熟双杰测试仪器厂制造。血常规仪器厂家:迪瑞CS-600B。
[0097]2方法和结果
[0098]2.1试验方法
[0099]雌性大鼠50只，随机分成五组，第一组给正常对照组，第二组~第五组分别为人参主根挥发油鼻饲组、人参须根挥发油鼻饲组、人参茎叶挥发油鼻饲组、人参花蕾挥发油鼻饲组。对照组大鼠灌胃给予10ml/kg蒸馏水，每天一次。第二组~第五组鼻饲大鼠分别鼻滴给予相对应的人参挥发油混悬液0.2ml/只，一天鼻滴给予10次，每次鼻滴给药间隔时间为30分钟。每日观察大鼠外观状态、粪便等情况。连续给药五天，末次给药后大鼠禁食不禁水，35%戊巴比妥钠麻醉大鼠，腹主动脉采血，取血分别放入蓝色血凝检查采血管、粉色血常规检查采血管做相关指标的检查。同时摘取大鼠唾液腺、口腔黏膜、鼻粘膜，做病理组织学检查。
[0100]2.2实验结果
[0101]2.2.1对大鼠一般外观的影响
[0102]各人参挥发油鼻饲大鼠在鼻滴给药过程中，各组中均有8~9只大鼠鼻子出现了血性分泌物的情况及流鼻血现象。各组大鼠外观变化，见图1~图5。
[0103]结论:人参挥发油能引起大鼠流鼻血，但是并未造成大鼠外观损伤死亡，可以用其为原料制得造内热模型工具药以及制作中医内热模型试剂。
[0104]2.2.2对大鼠血常规的影响
[0105]结果表明:挥发油鼻饲组大鼠白细胞总数(WBC)稍高于对照组，与对照组比较有明显差异；挥发油鼻饲组大鼠红细胞平均体积(MCV)高于对照组，与对照组比较有显著差异；挥发油鼻饲组血红蛋白浓度(MCHC)稍高于对照组，与对照组比较有明显差异；挥发油鼻饲组大鼠红细胞分布宽度变异系数(RDW-CV)高于对照组，与对照组比较有明显差异；挥发油鼻饲组大鼠血小板平均体积(MPV)高于对照组，与对照组比较有明显差异；挥发油鼻饲组大鼠血小板压(PCT)、血小板大细胞比率(P-LCR)稍高于对照组，与对照组比较有明显差异。对大鼠血常规的影响见表1_1，1_2，1_3。
[0106]表1-1人参挥发油及提取物对大鼠血常规的影响
【权利要求】
1.一种人参挥发油，其特征在于所述人参挥发油是分别从人参的主根、须根、茎叶或花蕾中提取的人参主根挥发油、人参须根挥发油、人参茎叶挥发油、人参花蕾挥发油。
2.根据权利要求1所述的人参挥发油，其特征在于所述人参主根挥发油是由下列步骤得到的: (1)提取方法:将人参的主根粉碎至10~80目，加入该人参主根重量5~15倍的水，浸泡6~24h,之后进行第一次回流提取，时间为4~6h ;第二次将人参主根加入重量5~.15倍的水中进行回流提取，时间为2~4h，合并提取液，滤过，滤液回收溶剂后浓缩； (2)纯化:将该浓缩液装于已预先处理好的100~400目硅胶柱中，按照石油醚与乙酸乙酯比例为15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脱，收集洗脱液，置于旋转蒸发仪上低温蒸循，使溶剂完全挥发； (3)挥发油进行分子蒸馏分离:将步骤(2)所得送入蒸发器中，蒸馆柱内温度分别调至.50°c、60°c、70°c、8(rc、10(rc、ll(rc，真空泵抽真空，使真空度达至Ij 2~8Pa ;制冷装置，使冷井温度降到-10°C~-30°C、-100°C~_130°C，刮膜的转速为180~300r/min，收集馏出物及蒸出物，精制。
3.根据权利要求1所述的人参挥发油，其特征在于所述的人参须根挥发油是由下列步骤得到的: (1)提取方法:将人参的须根粉碎至10~80目，加入该人参须根重量5~15倍的水，浸泡6~24h,之后进行第一次回流提取，时间为4~6h ;第二次将人参须根加入重量5~.15倍的水中进行回流提取，时间为2~4h，合并提取液，滤过，滤液回收溶剂后浓缩； (2)纯化:将该浓缩液装于已预先处理好的100~400目硅胶柱中，按照石油醚与乙酸乙酯比例为15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脱，收集洗脱液，置于旋转蒸发仪上低温蒸循，使溶剂完全挥发； (3)挥发油进行分子蒸馏分离:将步骤(2)所得送入蒸发器中，蒸馆柱内温度分别调至.50°c、60°c、7(rc、8(rc、10(rc、ll(rc，真空泵抽真空，使真空度达至Ij 2~8Pa ;制冷装置，使冷井温度降到-10°C~-30°C、-100°C~_130°C，刮膜的转速为180~300r/min，收集馏出物及蒸出物，精制。
4.根据权利要求1所述的人参挥发油，其特征在于所述的人参茎叶挥发油是由下列步骤得到的: (1)提取方法:将人参的茎叶粉碎至10~80目，加入该人参茎叶重量5~15倍的水，浸泡6~24h,之后进行第一次回流提取，时间为4~6h ;第二次将人参莖叶加入重量5~.15倍的水中进行回流提取，时间为2~4h，合并提取液，滤过，滤液回收溶剂后浓缩； (2)纯化:将该浓缩液装于已预先处理好的100~400目硅胶柱中，按照石油醚与乙酸乙酯比例为15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脱，收集洗脱液，置于旋转蒸发仪上低温蒸循，使溶剂完全挥发； (3)挥发油进行分子蒸馏分离:将步骤(2)所得送入蒸发器中，蒸馆柱内温度分别调至.50°c、60°c、7(rc、8(rc、10(rc、ll(rc，真空泵抽真空，使真空度达至Ij 2~8Pa ;制冷装置，使冷井温度降到-10°C~-30°C、-100°C~_130°C，刮膜的转速为180~300r/min，收集馏出物及蒸出物，精制。
5.根据权利要求1所述的人参挥发油，其特征在于所述的人参花蕾挥发油是由下列步骤得到的: (1)提取方法:将人参的花蕾粉碎至10~80目，加入该人参花蕾重量5~15倍的水，浸泡6~24h,之后进行第一次回流提取，时间为4~6h ;第二次将人参花蕾加入重量5~15倍的水中进行回流提取，时间为2~4h，合并提取液，滤过，滤液回收溶剂后浓缩； (2)纯化:将该浓缩液装于已预先处理好的100~400目硅胶柱中，按照石油醚与乙酸乙酯比例为15:1，13:1，11:1，9:1，7:1，5:1，3:1，1:1，1:3依次洗脱，收集洗脱液，置于旋转蒸发仪上低温蒸循，使溶剂完全挥发； (3)挥发油进行分子蒸馏分离:将步骤(2)所得送入蒸发器中，蒸馆柱内温度分别调至50°c、60°c、7(rc、8(rc、10(rc、ll(rc，真空泵抽真空，使真空度达至Ij 2~8Pa ;制冷装置，使冷井温度降到-10°C~-30°C、-100°C~_130°C，刮膜的转速为180~300r/min，收集馏出物及蒸出物，精制。
6.如权利要求1所述的人参挥发油的制备方法，分别包括人参主根挥发油、人参须根挥发油、人参茎叶挥发油或人参花蕾挥发油的制备方法。
7.如权利要求1所述的人参挥发油在制备造内热模型工具药中的应用。
8.如权利要求1所述的人参挥发油在制备中医内热模型试剂中的应用。
9.如权利要求1所述的人参挥发油在制备造内热模型工具药中的应用，所述人参挥发油分别包括:人参主根挥发油、人参须根挥发油、人参茎叶挥发油或人参花蕾挥发油。
10.如权利要求1所述 的人参挥发油在制备中医内热模型试剂中的应用，所述人参挥发油分别包括:人参主根挥发油、人参须根挥发油、人参茎叶挥发油或人参花蕾挥发油。
【文档编号】A61K133/00GK103893231SQ201410166364
【公开日】2014年7月2日 申请日期:2014年4月20日 优先权日:2014年4月20日
【发明者】王隶书, 陈昕, 赵大庆, 程东岩, 高军, 邸琳, 王超楠 申请人:王隶书